CC BY
19
(25 ^ 60°С) находится а переделах 28,5^ 47,8 кДж/моль.
Проведенные исследования по коррозии Ст.3 в кислых и сероводо-родные растворах в присутствии ингибиторов, содержащих амино- и фосфат-ные группы, показали их высокую эффективность. Лучшим ингибитором коррозии Ст.3 в изученных условиях признан, в ряду алкиламинов, фосфат диэтиламиноэтилметакрилат, по-видимому, из-за большого числа радикалов в его молекуле и их размера, благодаря чему требуемая защитная концентрация этой ингибирующей системы минимальна, по сравнению с другими изучен-ными аминами.
Литература
1.Улиг Г.Г. Коррозия и борьба с ней. Введение в коррозионную науку и техники/, Л.Химия, 1989.-456с.
2. Кузнецов Ю.И. Защита металлов/Ю.И. Кузнецов, Р.К.Вагаров. 2000.Т.36 №5.- С.520.
УДК 543.053, 543.062
ГРНТИ 31.23.25
3.Волошин В.Ф.Исследование влияния на электродные процессы четвертичных солей 2-алкилимидазолинов//Вопросы химии и химической технологии.-2003.№5.- С.105-108.
4. Осербаева А.К., Ш.П.Нуруллаев., Гуро.В.П. Термодинамика ингибирования коррозии сталей в присутствии азот и фосфорсодержащих соединений Международный Научно-исследовательский журнал "Евразийский Союз Ученых", №5(62) 2019,ч.3,С.61-65.(Glabal Impact Factor).
5.Oserbaeva A.K. Protective properties of amino-and phosphate containing inhibitors. XXXIX Международная научно-практическая
конференция "Естественные и технические науки в современном мире" Научный журнал «Chronos», г.Москва, 2019, С.63-66.
6. А.К.Осербаева., Нуруллаев Ш.П. XXXIII Международная научная конфе-ренция «Техноконгресс» Кемерово 2018.С.3-7.
РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА И СТАНДАРТИЗАЦИЯ СУБСТАНЦИИ _МЕГАФЕРОНА_
DOI: 10.31618/ESU.2413-9335.2020.3.70.543 Хаитбаев Алишер Хамидович
док. хим. наук,
доцент кафедры химия природных соединений, Национальный университет Узбекистана, г.Ташкент, Узбекистан Тошов Хамза Сайидмуродович Докторант
Национальный университет Узбекистана Назирова Яйра Касимовна
Доцент
Ташкентский фармацевтический институт
АННОТАЦИЯ
Разработан новый, селективный, унифицированный и усовершенствованный метод анализа субстанции мегаферона. Проведен стандартизация и валидация для последующего использования в контроле качестве лекарственных форм. На основании исследований разработаны, стандартизированы, усовершенствованы существующие методы контроля (подлинность, чистота, количественное определение) исследуемого вещества, с использованием современных, высокочувствительных и селективных методов анализа (ТСХ, хромато-спектрофотометрия, ВЭЖХ).
ANNOTATION
A new, selective, unified and improved method for analyzing the substance of megaphone has been developed. Standardization and validation was carried out for subsequent use in the control of the quality of dosage forms. Based on the studies, existing control methods (authenticity, purity, quantitative determination) of the test substance were developed, standardized, and improved using modern, highly sensitive and selective methods of analysis (TLC, chromate- spectrophotometry, HPLC).
Ключевые слова: субстанция, мегосин, мегаферон, супрамолекулярный комплекс, ТСХ, хромато-спектрофотометрия, ВЭЖХ, валидация.
Keywords: substance, megosin, megaferon, supramolecular complex, TLC, chromato- spectrophotometry, HPLC, validation.
Растительные вещества являются источником для получения большого спектра
фармакологических средств, активность которых направлена на восстановление функций различных систем организма при разных патологических
состояниях инфекционной и неинфекционной природы [1].
В настоящее время актуальным является создание высокоэффективных антибактериальных, противовирусных препаратов для лечения и
профилактики болезней соответствующей этиологии. Анализ литературных данных показал, что на сегодняшний день существует тенденция роста бактериальных и вирусных заболеваний среди населения [2,3].
В классификации высокоэффективных антибактериальных и противовирусных лекарственных средств на сегодняшний день почти не значатся средства растительного происхождения или других природных соединений. Однако, многими ученными отмечается проявления биологической активности веществами извлекаемыми из солодки [4-10].
В настоящее время солодка среди лекарственных растений вышла на первое место по числу предлагаемых и используемых лекарственных средств. Одним из основных действующих веществ корня солодки определена глицирризиновая кислота. Глицирризиновая кислота - (ГК) тритерпеновый гликозид - составная часть целого ряда комбинированных готовых лекарственных средств [11-15].
Экспериментальными исследованиями
доказаны антитоксические свойства
глицирризиновой кислоты против токсинов дифтерии и столбняка, а также против летальных доз таких лекарственных средств, как стрихнин, шикимин, токсопиримидин, никотин, кофеин, арсенобензол, ацетилхолин, гистамин и т.д. [16,17].
Учитывая вышеизложенное, целью работы заключалась в создании водорастворимого супрамолекулярного комплекса лекарственного препарата мегосина с МАСГК (моноаммониевой солью глицирризиновой кислоты) мегаферона. Клиническое изучение данного препарата свидетельствуют об противогерпетическом свойстве [18].
Было определено что эффективность лекарственного средства зависела от уровня стандартизации, методов анализа включенных в нормативно-техническую документацию, а также от уровня функционирования системы контроля за
Разработка методов идентификации и количественного определения субстанцию мегаферона.
Идентификацию мегаферона проводили методом тонкослойной хроматографии. Изучение хроматографических свойств мегаферона проводили на пластинке «БИиМ иУ-254» (Чехия). Все пластинки (готовые и приготовленные в лабораторных условиях) перед анализами активировали при 1050С в течении 30 минут.
производством и качеством лекарственных средств.
Объектом исследования служила субстанция мегаферона, синтезированной в химическом факультете НУУз. Для идентификации и количественного определения мегаферона были использованы хроматографические (ТСХ, ВЭЖХ) и хромато- спектрофотометрические методы. Для метода ТСХ и хромато- спектрофотометрического метода были использованы пластинки марок «Silufol UV-254» (Чехия), «Kieselgel 60 F 254». В качестве ПФ использовали различные органические растворители: хлороформ, ацетон, этилацетат, гексан и др. в различных вариациях и соотношениях.
Методику хромато- спектрофотометрического анализа мегаферона осуществляли на спектрофотометре фирмы «Agilent Technologies» Spectroscopy System в кювете с толщиной слоя 10 мм.
Экспериментальные работы по разработке методик анализа исследуемой субстанции методом ВЭЖХ проводили в НИИ Фармацевтики. В работе использовали жидкостной хроматограф фирмы «Agilent technologies 1200» с программным обеспечением «Chemstation A.09.03». Прибор снабжен четырехканальным градиентным насосом, дегазатором и спектрофотометрическим детектором. В качестве органических растворителей использовали смесь метанола, воды и ледяной уксусной кислоты (55:44:1), ацетонитрил, метанол, а также 1% раствор уксуной кислоты и буферные растворы с различной рН.
Определение фармакопейных показателей «Описание» и «Растворимость».
Описание. Аморфный порошок однородной структуры от светло кремового до желтого цвета, сильно сладкого вкуса, со специфическим запахом.
Растворимость. Определение растворимости проводили согласно требованиям ГФ XI. Полученные данные представлены на таблице 1.
Таблица 1
Для выбора оптимального состава подвижной фазы, для разделения мегосина и ГК в тонком слое сорбента, нами экспериментальным путем найдено несколько систем растворителей:
ацетонитрил:метанол:вода (1:1:1),
хлороформ:этанол (1:9), эфир:гексан:вода (1:1:1), эфир:гексан:спирт (1:1:1), хлороформ:ацетон (5:2). Полученные результаты представлены в таблице 2.
РАСТВОРИТЕЛЬ УСЛОВНЫЕ ТЕРМИНЫ
Вода Легко растворим
50% этиловый спирт Мало растворим
5% раствор карбонат натрия Легко растворим
Ацетонитрил Очень мало растворим
95% этиловый спирт Практически не растворим
Хлороформ Практически не растворим
Бензол Практически не растворим
Таблица 2
Значение Rf мегосина и глицирризиновой кислоты при использовании различных систем растворителей.
Система растворителей Rf H Rf
М ГК М ГК
Ацетонитрил: метанол: вода (1:1:1) 0.68±0,02 0.58±0,01 68±2 58±1
Хлороформ:этанол (1:9) 0.87±0,01 0.78±0,01 87±1 78±1
Эфир:гексан:вода (1:1:1) 0,85±0,03 0,9±0,02 85±3 90±2
Эфир:гексан:спирт (1:1:1) 0,88±0,02 0,86±0,01 88±2 86±1
Хлороформ:ацетон (5:2) 0,1±0,03 0,6±0,02 10±3 60±2
Проведенные нами исследования показали, что из перечисленных систем растворителей, оптимальными условиями для обнаружения мегаферона были достигнуты на пластинках «Silufol-UV-254»; система растворителей : ацетонитрил: метанол: вода (1:1:1)
Разработка методики количественного определения субстанцию мегаферон методом хромато-спектрофотометрия
Мегаферон является супромолекулярным соединением мегосина и аммониевой соли ГК. Изучение УФ-спектрофотометрических свойств стандартних образцов мегосина и аммониевой соли ГК показали, что данные вещества в диапазоне от 200 и до 300 нм имеют максимум поглащения при длине волны 249 и 253 нм, соответственно.
35 35 Зо 35 35 35 Ш 35 35 з5о~
Рис 1. УФ- спектр водно-спиртового раствора мегосина
зЛо tà» Ш Ш ШГ
Рис 2. УФ- спектр ГК.
Так как длины волны изучаемых веществ находится в очень близком расстоянии, то мы сочли нужным разработать новую методику путем сочетания методов ТСХ и УФ-спектрофотометрии.
Приготовление испытуемого раствора А мегаферона: 0,15 г мегаферона помещали в мерную колбу емкостью 100 мл, добавляли 25 мл этанолом, подкисляли и нагревали на водяной бане до полного растворения вещества. Затем раствор доводили до метки очищенной водой.
Приготовление стандартного раствора мегосина: 0,025 г мегосин стандарт поместили в мерную колбу 100 мл добавили этанол в объеме 25 мл. После полного растворения мегосина, раствор довели до метки очищенной водой.
Приготовление стандартного раствора ГК: 0,12 г ГК стандарт поместили в мерную колбу 100 мл добавили этанол в объеме 25 мл. После полного
раствор довели до метки
растворения ГК, очищенной водой.
Оптическую плотность полученных элюатов измеряли на спектрофотометре «Agilent 8453E» при длине волны 253 нм для ГК и 249 нм для ГК соответственно. Параллельно измеряли оптическую плотность стандартных растворов мегосина и ГК.
Количественное содержание мегаферона рассчитывали по следующей формуле:
Х% =
Д0 * С * V^1 * И,2 * 100
Дс
* а * ИаЛк
Полученные таблице 3:
результаты представлены в
Таблица 3
Количественное определение мегаферона с использованием хроматоспектрофотометрического
№ Навеска Мегаферона, гр Х, г Метрологические характеристики
ГК
1 0,1511 0,1249 Хср=0,1256; f=4; t(P;f)=2,78; S2=0,0000016; S=0,0012649; ^=0,00157; £ср=1,25%
2 0,1497 0,1239
3 0,1503 0,1254
4 0,1528 0,1272
5 0,1537 0,1266
Мегосин
1 0,1511 0,0262 Хср=0,02592; f=4; t(P;f)=2,78; S2=0,0000005; S=0,0007071; ^=0,001965; £ср=3,3%
2 0,1497 0,0258
3 0,1503 0,0249
4 0,1528 0,0256
5 0,1537 0,0271
Разработка методики количественного определения субстанцию мегаферон методом ВЭЖХ.
Выбор условий хроматографирования субстанции проводили на основании предварительно полученных данных о спектральных и хроматографических свойствах определяемого вещества. Для разработки условий
разделения и обнаружения мегаферона методом ВЭЖХ были приготовлены растворы стандартных образцов и исследуемой модельной смеси в соответствующих подвижных фазах.
В качестве подвижной фазы применяли несколько систем органических растворителей в различных соотношениях, представленных в таблице 4.
Таблица 4
Подвижные фазы использованные для разделения и
№ Система Соотношения
1 Метанол : 1% СН3 СООН : ацетонирил : вода 20 : 1 : 35 : 44
2 Вода (рН 3,0) : метанол 15 : 85
3 1% СН3 СООН : метанол : вода 1 : 60 : 39
4 Метанол : вода : ледяная уксусная кислота 55 :44 : 1
По полученным данным было определено что, по симметричности и площади полученных пиков наиболее оптимальной системой для
контроля качества мегаферона является система: метанол:вода:ледяная уксусная кислота (рис.3.).
Рис.3. Хроматограмма в системе: метанол:вода:ледяная уксусная кислота (55:44:1)
На этом хроматограмме видно, что время удерживания лекарственных веществ, площадь пиков и их высота оказались наиболее оптимальными для обоих компонентов.
Условия хроматографирования следующее:
- жидкостной хроматограф, снабженный изократным насосом и спектрофотометрическим детектором с переменной длиной волной типа Agilent Technologies 1200 series или аналогичный;
- хроматографическая колонка - размером 3,0 х 150 мм, упакованная сорбентом Zorbax Eclipse XDB C-18, с размером частиц 3,5 мкм, или аналогичная;
- длина волны детектора - 254 нм;
- подвижная фаза - смесь метанола, воды и ледяной уксусной кислоты (55 : 44 : 1), предварительно дегазированная и фильтрованная
через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм;
- скорость потока подвижной фазы - 0,5 мл/мин.
- объем вводимой пробы - 20 мкл.
- время анализа - 15 минут.
По полученным хроматограммам выявлено, что при температуре колонки 300С время для удерживания ГК составляло=3,2 мин, мегосина=7,2 мин.
По полученных площадям пиков определяли количественное содержание мегаферона в субстанциях, результаты которых были подвергнуты статической обработке.
Содержание глицирризиновой кислоты или мегосина (Х), в граммах рассчитывают по следующей формуле:
5исп • аст -100 • Р • 100 • 100 5исп ■ аст ■ Р ■ 100 = 5ст • аисп • 100 • 100 • (100 - W) = SCT • аисп • (100 - W)
где: Бст - площадь основного пика на хроматограмме раствора рабочего стандартного образца глицирризиновой кислоты или мегосина;
8исл - площадь пика глицирризиновой кислоты или мегосина на хроматограмме раствора испытуемого образца;
аст - навеска рабочего стандартного образца,
мг;
аШп - навеска испытуемого образца, мг; Ж - потеря в массе при высушивании, %; Р - содержание глицирризиновой кислоты или мегосина в рабочем стандартном образце, г.
Таблица 5
Количественное содержание мегосина и ГК в субстанции методом
ВЭЖХ и метрологические характеристики определения._
№ Навеска мегаферона,г Х,г Метрологические характеристики
Глицирризиновая кислота
1 0,2501 0,2062 Хср= 0,2059; f=4; t(P;f)=2,78; S^0,0000005; S=0,0007071; ^=0,0008775; еф=0,43
2 0,2499 0,2057
3 0,2502 0,2058
4 0,2500 0,2049
5 0,2501 0,2069
Мегосин
1 0,2501 0,0439 Хср=0,0442; f=4; t(P;f)=2,78; S2=0,0000004; S=0,0000004; ^=0,0007848; £ср=1,7%
2 0,2499 0,0442
3 0,2502 0,0444
4 0,2500 0,0451
5 0,2501 0,0432
Выводы:
1. На основании исследований разработан метод ТСХ для нового лекарственного вещества и выбран оптимальная система органических растворителей для разделения составных частей субстанции, которой явилась - ацетонитрил : ацетон (6:4). Результаты проведенных опытов показали, что при анализе мегаферона предел обнаружения при УФ ламп 254 нм составило 4 мкг;
2. Разработаны методы количественного определения мегосина и ГК в субстанции с использованием методов хромато-спектрофотометрия. Относительная средняя ошибка: хромато- спектрофотометрического метода для мегосина составило 3,3%, для ГК 1,25%.
3. Впервые разработана методика ВЭЖХ для идентификации, разделения и определения количественного содержания мегосина и ГК в мегафероне. Оптимальная система разделения -смесь метанола, воды и ледяной уксусной кислоты (55 : 44 : 1). При этом время удерживания мегосина равна - 7,2 мин, ГК - 3,2 мин. Результаты количественного определения подвергались к статистической обработке данных, при этом относительная ошибка метода ВЭЖХ для мегосина составило 1,7%, для ГК 1,25%.
Список литературы:
1. Самбукова Т.В., Овчинников Б.В., Ганапольский В.П., и др. Перспективы использования фитопрепаратов в современной фармакологии// Обзоры по клинической фармакологии и лекарственной терапии. -2017. -Т.15. -№2. -С.56-63. doi: 10.17816/RCF15256-63
2. Савенкова М.С. Лечение вирусных инфекций: проблема выбора эффективных противовирусных препаратов// Педиатрия. -2012. -Т.91. -№6. -С.70-77.
3. Егоров А.Ю. Проблема бактериальных осложнений при респираторных вирусных инфекциях// Microbiology Independent Research Journal. -2018. -Number 1. -Volume 5. -p 1-11. doi: 10.18527/2500-2236-2018-5-1-1-11
4. Алешинская Э.Е., Алешкина Я.А., Бережинская В.В. и др. Противоаллергические и гормональные свойства глицирризиновой и глицерретиновой кислот, выделенных из солодки голой// Труды и Всесоюзного съезда фармацевтов, М.,1970,-С.466.
5. Алешинская Э.Е., Алешкина Я.А., Брежинская В.В., Трутнева Е.А. Фармакологии препаратов солодки голой// Фармакология и токсикология,1964,27,Ш,-С.217.
6. Алешинская Э.Е. Применение глицирама в медицинской практике// В сб. материалы Всесоюзной научной конференции по фармакологии и клиническому изучению лекарственных препаратов из растений, М., 1972-С. 168.
7. Khaitbaev A.Kh., Nazirova Y.K. Toshov Kh.S. Medical implementation practice of supramolecular complex of megosin with MASGA// Journal of Medicinal and Chemical Sciences. -2020. -3. -p.48-54.
8. Раджабова Г.Г., Рахматулина Н.Ш., Умарова Ф.Т., Хаитбаев А.Х. и др. Изучение цитотоксического действия некоторых комплексов глицирризиновой кислоты с производными госсипола// Вестник НУУз. -2015. -№3/1. -с.8-10.
9. Далимов Д.Н., Хаитбаев А.Х., Мухамедов И.М., Гафуров М.Б. и др. Антибактериальная активность композиций мегаферона с антибиотиками пеницилинового и цефалоспоринового рядов// ДАН Республики Узбекистан. - 2016. - №6. с.71-73.
10. Балтина Л.А., Давыдова В.А., Чикаева И.Г. и др. Синтез и противовоспалительная активность защищенных гликопептидов глицирризиновой кислоты// Хим.-фарм.-журнал, 1988, №6, с.694-697.
11. Балтина Л.А., Давыдова В.А., Толстикова Т.Г., Зарудий Ф.С. и др. Новые амиды пентаацетилглицирризиновой кислоты и их противовоспалительная активность// Хим.-фарм.-журнал, 1989, №9, с.1067 -1070.
12. Балтина Л.А., Васильева Е.В., Давыдова В.А., Исмагилова А.Ф., Зарудий Ф.С., Толстиков Г.А. Синтез и фармакологические свойства ряда
новых гетероциклических и ароматических амидов глицирризиновой кислоты// Хим.-фарм.-журнал, 1996, №8, с.14-16.
13. Выпова Н.Л., Далимов Д.Н., Юлдашев Х.А. и др. Сравнительное исследование противовоспалительного действия препарата ГЛАС, АСК, и МАСГК на модели экссудативного воспаления, вызванного различными флогогенами// Фармацевтика журнали, 2004, №1, с.63 -66.
14. Давыдова В.А., Балтина Л.А., Сердюк Н.Г. и др. Противовоспалительные и проивоязвенные свойства новых эфиров глицирризиновой кислоты// Хим. фарм.журнал, 1997, №8, с.23 -25.
15. Далимов Д.Н., Выпова Н.Л., Гафуров М.Б. и др. Влияние препарата ГЛАС на альтернативное воспаление в сравнении с ацетилсалициловой кислотой и моноаммониевой солью
глицирризиновой кислоты// Фармацевтический журнал. -2009. -№1. -с.56-59.
16. Орманов Н.Ж., Пернебекова Р.К., Орманова Л.Н., Жолымбекова Л.Д., Киргизбаева А.А. Биологическая активность и фармакологические свойства препаратов из корня солодки// KazNU Bulletin. -Biology series. -2013. -№2. -с.58.
17. Зарубаев В.В., Аникин В.Б., Смирнов В.С. Противовирусная активность глицерретовой и глицирризиновой кислот// Russian Journal of Infection and Immunity. -2016. -vol.6. -no.3. -p.199-206.
18. Далимов Д.Н., Матчонов А.Д., Хаитбаев Х., Хаитбаев А.Х. Антигерпетическое средство и способ его получения// Патент на изобретение №IAP 05978. Зарегистрирован в государственном реестре изобретений Республики Узбекистан, в г.Ташкент 20.09.2019.
