CC BY
38
Since 1999
Pharmacology and pharmacy
ISSN 2226-7425
—--—
РАЗРАБОТ КА МЕТОДОВ И ПОДХОДОВ К ИССЛЕДОВАНИЮ ВНУТРИБОЛЬНИЧНЫХ И ВНУТРИКОМНАТНЫХ ВИРУСНЫХ КОНТАМИНАЦИЙ
С.А. Эспер1'2, Т.В. Гребенникова1'2, Т.В. Плетенева1, А.М. Ходорович1
1 Российский университет дружбы народов, Москва
2
НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского, Минздрав России, Москва
В исследовании использованы чувствительные методики на основе ПЦР для выявления вирусов гепатита А и С в окружающей среде. Впервые проведено сравнение чувствительности методик с использованием наборов «Ам-плиСенс® HAV-FL», «АмплиСенс® HCV-FL» (Интерлабсервис) и гнездовой ПЦР. Произведена оценка стабильности вирусов гепатита А и С после аппликации на поверхностяхв течение нескольких суток и возможности последующего определения уровня внутрибольничной и внутрикомнатной контаминации.
Ключевые слова: гепатит А, гепатит С, внутрибольничоя контаминация, внутрикомнатноя контаминация, ПЦР.
Важнейшей проблемой сегодняшнего дня является внутрибольничная и внутрикомнатная вирусная контаминация [1; 2]. В работе были исследованы и сравнены молекулярные методы детекции вирусов после взятия проб с поверхностей внутри помещений. Отдельной задачей исследования являлось определениестабильности вирусов гепатита А и С в течение нескольких суток и возможности последующего определения уровня внутри-больничной и внутрикомнатной контаминации [1—4]. Продемонстрирована возможность использования вирусов гепатита в качестве биомаркеров контаминации окружающий среды
Методы. Вирусы: Положительный контроль вируса гепатита А — культуральный вирус, генотип 1А, разведен в инактивированной сыворотке крупного рогатого скота, концентрация 105 копий РНК/мл. Положительный контроль вируса гепатита С — сыворотка крови от пациентов с хроническим гепатитом С, 107 копий РНК/мл.
Наборы: «АмплиСенс® HAV-FL» и «АмплиСенс® HCV-FL» (Интерлабсервис), праймеры для «гнездовой» ПЦР были разработаны в лаборатории.
Результаты. Было произведено сравнение между тест-системой «АмплиСенс® HAV-FL» и «гнездовой» ПЦР с использованием праймеров, разработанных в лаборатории, для обнаружения гепатита А, а также между тест-системой «АмплиСенс® HCV-FL» и «гнездовой» ПЦР для обнаружения гепатита С. Обнаружено, что чувствительность наборов «АмплиСенс® HAV-FL» и «гнездовой» ПЦР для выявления гепатита А одинакова и со-
ставляет 1—10 копий РНК/мл. Тест-система «АмплиСенс® HCV-FL» определяет 103 копий РНК/мл и является менее чувствительной, чем «гнездовая» ПЦР, с использованием которой возможно детектировать 10 копий РНК/мл.
Оценка стабильности гепатита А и С на поверхностях была проведена методом разведения положительных контролей от 105 до 102 копий РНК/ мл для гепатита А, и разведения от 107 до 104 копий РНК/мл для гепатита С. Разное количество вируса были нанесены на поверхности, образцы были отобраны спустя 8, 12, 24, 32, 48 и 56 часов, затем РНК была выделена, и проанализирована методом ПЦР. Было выяснено что РНК гепатита А в концентрации 105 копий РНК/мл можно выявить спустя 56 часов после нанесения на поверхность, в концентрации 104 копий РНК/мл — спустя 24 часа, в концентрации 103 копий РНК/мл — через 12 часов. РНК вируса гепатита С в концентрации 107 копий РНК/мл определяли спустя 32 часов после нанесения на поверхность, в концентрации 106 копий РНК/мл — спустя 24 часа, в концентрации 105 копий РНК/мл — через 8 часов. Таким образом, вирусы гепатита А и С могут оставаться стабильными на поверхностях в течение нескольких суток, что позволяет исследовать их в оценке внутрибольничной и внутрикомнатной контаминации.
Заключение. Были установлены наиболее чувствительные методики детекции вирусов гепатита А и С. Для детекции РНК гепатита А следует использовать «АмплиСенс® HAV-FL» (Интерлабсервис) и метод «гнездовой» ПЦР. Для детекции
—--—
~ 83 ~
Издание зарегистрировано в Федеральной службе по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор). Свидетельство о регистрации СМИ ПИ № ФС77-49390 Журнал представлен в НАУЧНОЙ ЭЛЕКТРОННОЙ БИБЛИОТЕКЕ — головном исполнителе проекта по созданию Российского индекса научного цитирования (РИНЦ)
Since 1999 ISSN 2226-7425
The journal of scientific articles "Health & education millennium", 2015, volume 17, no. 2
РНК гепатита С рекомендуется использовать «гнездовую» ПЦР. Вирусы гепатита А и С были обнаружены в зависимости от концентрации от 12 до 5б часов после аппликации на поверхность. Таким образом, вирусы стабильны в течение указанных периодов времени и могут быть использованы как биомаркеры контаминации окружающий среды. В исследовании была разработана методика обнаружения генома вирусов гепатита А и С на поверхностях для оценки внутрибольнич-ной и внутрикомнатной контаминации.
ЛИТЕРАТУРА
1. Ganime A.C., GanimeC., Carvalho-Costa F.A., Cesar M.L., Mendonca M.C. L., Vieira C.B., Santos M., Filho R.C., Miagostovich M.H., Leite J.P. G. Group. A ro-
tavirus detection on environmental surfaces ina hospital intensive care unit // American Journal of Infection Control. 2012. 40(6). 544—547.
2. Carducci A., Verani M., Lombardi R., Casini B., PriviteraG. Environmental survey to assess viral contamination of air and surfaces in hospital settings // Journal of Hospital Infection. 2011. 77. 242—247.
3. Gupta A.K., Anand N.K., Manmohan N.K., Lamba L.M.S., Gupta R., Srivastava L. Role of bacteriological monitoring of the hospital environment and medical equipment in a neonatal intensive care unit // Journal of Hospital Infection. 1991. 19. 263—271.
4. Morter S., Bennet G., Fish, J., Richards J., Allen D.J., NawazS., Iturriza-Gomara M., Brolly S., Gray J. Norovirus in the the hospital setting: virus introduction and spread within the hospital environment // Journal of Hospital Infection. 2011. 77. 106—112.
DEVELOPMENT OF METHODS AND APPOROACHES FOR DETECTION OF INTRAHOSPITAL AND INDOOR VIRAL CONTAMINATION
S.A. Asper1'2, T. V. Grebennikova1'2, T. V. Pleteneva1, A.M. Hodorovich1
Peoples' Friendship University of Russia, Moscow, Russia 2
D.I. Ivanovsky Virology Institute, Ministry of Health Russian Federation, Moscow, Russia
There were several tasks in the research: choosing the most sensitive PCR kit for detection of the hepatitis A and C viruses (HAV and HCV), as well as understanding how long time these viruses can be stored on the surface. The comparison was between nested PCR with laboratory developed primers, "Amplicence HAV-FL" and "Amplicence HCV-Eph PCR" (Interlabservise, Russia), and the measurement for how long the hepatitis A and C could be stored on surface was produced in order to know if these viruses are stable and could be used inenvironmental monitoring in identification the level of intrahospital and indoor contamination.
Key words: hepatitis A, hepatitis C, intrahospital contamination, indoor contamination, PCR.
REFERENCES
1. Ganime A.C., GanimeC., Carvalho-Costa F.A., Cesar M.L., Mendonca M.C. L., Vieira C.B., Santos M., Filho R.C., Miagostovich M.H., Leite J.P. G. Group. A rotavirus detection on environmental surfaces ina hospital intensive care unit. American Journal of Infection Control, 2012. 40(6). 544—547.
2. Carducci A., Verani M., Lombardi R., Casini B., PriviteraG. Environmental survey to assess viral contamination of air and surfaces in hospital settings. Journal of Hospital Infection, 2011. 77. 242—247.
3. Gupta A.K., Anand N.K., Manmohan N.K., Lamba L.M.S., Gupta R., Srivastava L. Role of bacteriological monitoring of the hospital environment and medical equipment in a neonatal intensive care unit. Journal of Hospital Infection, 1991. 19. 263—271.
4. Morter S., Bennet G., Fish, J., Richards J., Allen D.J., NawazS., Iturriza-Gomara M., Brolly S., Gray J. Norovirus in the the hospital setting: virus introduction and spread within the hospital environment. Journal of Hospital Infection, 2011. 77. 106—112.
