CC BY
18
ИССЛРЛОНАНИТ
Разработка методологического подхода для оценки специфической активности вакцин против клещевого энцефалита на примере вакцины Энцепур®
I®
Г.Н. Леонова*, Е.В. Павленко*, О.С. Майстровская*, Н.В. Крылова*, Н.В. Ковальчук**, К.С. Мизеров**, Дитер Гниель *ГУ «НИИ эпилемиологии и микробиологии» СО РАМН, г. Влаливосток,
**
**
хКаирон Беринг Гмбх и Ко», Марбург
Провелено исслелование иммунологической эффективности вакцины Эниепур® произволства компании «Кайрон Беринг Гмбх и Ко» (Марбург, Германия). В исслеловании приняли участие 145 жителей Приморского края в возрасте от 17 ло 68 лет. Применяли лвукратную иммунизацию с интервалом в 28 лней. Аля оценки иммуногенности пробы сыворотки крови, взятые у лиц ло вакцинации и месяц спустя после 1-й и 2-й вакцинации, тестировали в четырех иммунологических реакциях (ИФА, РТГА, НМФА и РН) с четырьмя региональными штаммами вируса клещевого энцефалита (КЭ), а также с вирусом Повассан. Результаты тестирования показали высокую степень иммуногенной активности ланного препарата. Иммунологическая активность вакцины по результатам комплексного исслелования составляет 98%. Мы полагаем, что лля всех энлемичных территорий России необхолимо применение высокоочищенных концентрированных вакцин, облагающих способностью стимулировать выработку антител, широкого спектра лействия к различным штаммам вируса КЭ. Всем этим требованиям полностью соответствует концентрированная высокоочищенная вакцина Энцепур, которая может быть рекоменлована как эффективное срелство лля провеления вакцинопрофилактики КЭ на территории Российской Фелерации.
Ключевые слова: клещевой энцефалит, иммуноспецифические реакции, вакцина, Энцепур.
Введение
Повышение показателей заболеваемости КЭ в 90-х годах прошлого века на территории всех очаговых регионов Евразийского континента вновь усилило внимание медицинской общественности к этой проблеме [5, 6, 13]. В первую очередь необходимо было решать вопросы специфической зашиты населения. На российский рынок устремились более качественные, но относительно дорогие зарубежные вакцины австрийского и немецкого производства. Такая ситуация потребовала от отечественных производителей улучшения качества выпускаемых вакцин против КЭ. Присутствие в настоящий момент на рынке четырех КЭ вакцин постоянно вызывает вопросы, какие из них лучше, более специфичны для того или иного региона, где штаммовый пейзаж вирусной популяции может различаться.
В этой связи целью данной работы являлась разработка методологического подхода к оценке специфической активности вакцин для населения юга
Дальнего Востока на примере немецкой вакцины Энцепур®.
Материалы и методы
На контингенте жителей Приморского края изучена клинико-иммунологическая эффективность вакцины Энцепур против клещевого энцефалита (КЭ), производимой компанией «Кайрон Беринг Гмбх и Ко», (Марбург, Германия). Немецкая концентрированная инактивированная вакцина, приготовленная из западного варианта вируса (штамм К-23), содержит 1,5 мкг специфического антигена, адъю-вант (А1(ОН)3), свободна от протеиновых стабилизаторов и консервантов. Для испытания использована серия<018021 вакцины Энцепур. Проведена двукратная вакцинация людей с интервалом 0 - 28 дней. Всего вакцинировано 145 человек в возрасте от 17 до 68 лет.
Изучение иммунного ответа проводили в динамике: до вакцинации, месяц спустя после 1-й и 2-й вак-
ИССЛРЛОВАНИР
Таблица 1.
Результаты реакции нейтрализации после лвукратной иммунизации немецкой вакциной Энцепур® со штаммом Рптогуе-73 вируса КЭ (прогретые и непрогретые сыворотки)
< п/п < сыворотки ^С (К) Титры антител (АТ) Кратность увеличения титров А
прогретая сыворотка непрогретая сыворотка
1 10 0,5 (-) 0 0 0
2 79 8,1 0 0 0
3 75 0,7 (-) 0 20 2
4 78 5,9 0 20 2
5 83 3 0 40 4
6 89 5,8 0 40 4
7 80 5,1 0 80 8
8 16 5,7 0 80 8
9 109 6,9 0 80 8
10 115 3,8 0 320 32
11 118 5,2 0 40 4
12 76 8,3 20 160 8
13 54 5 20 160 8
14 84 6,4 20 80 4
15 48 11,4 20 80 4
16 50 6,4 20 160 8
Среднее значение (Мх ) = 5,51±0,65 6,25±2,3 85±19,9 17,1±4,9
цинации. Пробы крови больных исследованы в имму-ноферментном анализе (ИФА), а также в реакции торможения гемагглютинации (РТГА), в непрямом методе иммунофлуоресценции (НМФА) и в реакции нейтрализации (РН).
Лля постановки ИФА использовали тест-системы !§С КЭ, выпускаемые НПО «Вектор» (г. Новосибирск). Лля анализа применен коэффициент (К), который высчитывали по формуле:
К =
ОП опытная ОП контрольная'
гле ОП - это оптическая плотность, которая опреле-ляется на ллине волны 450 нм спектрофотометра.
Коэффициент (К) определяет тенденцию увеличения или снижения интенсивности образования специфических антител.
РТГА проводили общепринятым макрометодом с четырьмя дальневосточными штаммами: штамм 139, изолированный из клешей I. регзи1са^з в Хабаровском крае (коммерческий диагностический препарат), штаммы Рг1тогуе-69 (Р-69) и Рптогуе-202 (Р-202), изолированные из крови лиц с укусом клеша (инаппарантная форма) в Уссурийском и Надежден-ском районах соответственно. Штамм Рптогуе-73 (Р-73) выделен из мозга умершего больного очаговой формой КЭ, заражение которого произошло в Лаль-нереченском районе. Кроме того, в работе использован штамм 555 вируса Повассан, выделенный в 1978 году в Приморском крае из крови больной [7]. Антиген готовили боратно-солевым методом с последующей обработкой протеин-сульфатом [3].
НМФА проводили с тремя региональными штаммами (Р-69, Р-202, Р-73), которыми заражали монослой культуры клеток СПЭВ, затем спустя 2 суток снимали клеточный монослой и на весь опыт одно-
временно готовили слайды со специфическим антигеном в этих клетках. Лля постановки реакции использовали флуоресцирующие сыворотки против глобулинов человека производства НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН.
Аля проведения РН использовали перевиваемую культуру клеток СПЭВ, штаммы Р-73 и Р-202 вируса КЭ. Все исследования проведены с использованием 24-луночных пластиковых панелей на 1-суточном монослое клеточной культуры СПЭВ. Аля всего опыта была приготовлена рабочая доза, содержащая 2 !§ ТЦЛ50, вирусных суспензий. Титр вирус-нейтрализуюших антител определяли с помощью двукратного разведения сывороток крови, начиная с разведения 1:20.
Напряженность иммунного ответа высчитывали путем определения показателя средней геометрического титра антител (СГТА) [1].
Результаты и обсуждение
В настоящее время с целью изучения эффективности той или иной вакцины против КЭ применяют, как правило, высокочувствительный ИФА для выявления специфических иммуноглобулинов класса С. Этот метод стал доступным практически для любой лаборатории и широко используется в диагностике КЭ. Чаще всего исследователи определяют процент сероконверсии, который выявляется у вакцинированных лиц с помощью ИФА в скрининге при начальном разведении антител 1:100. Так, при изучении этого показателя нами установлена динамика накопления антител !§С до вакцинации (19,3±3,2%), после 1-й вакцинации (63,4±4,0%) и после 2-й вакцинации (91,7±2,3%).
Напряженность иммунного ответа в ИФА можно определять путем титрования сывороток крови. Однако происходит резкое удорожание исследований,
ИССЛЕДОВАНИЕ
Таблица 2.
Вируснейтрализуюшие антитела к штаммам Рптогуе-73 и Рптогуе-202 вируса клещевого энцефалита у лиц, лвукратно привитых немецкой вакциной Энцепур®
< п/п < сыворотки ^С антитела Рптогуе-73 Рптогуе-202
1 10 0 0 0
2 46 + 0 0
3 47 0 0 0
4 33 0 0 80
5 72 0 0 40
6 79 + 0 20
7 96 + 0 40
8 97 0 0 20
9 99 + 0 20
10 11 + 20 80
11 45 0 20 0
12 59 + 20 40
13 44 + 20 160
14 78 + 20 80
15 75 0 20 40
16 36 + 20 20
17 35 0 20 40
18 40 + 20 160
19 39 + 20 40
20 2 + 20 160
21 56 + 40 80
22 70 + 40 80
23 112 + 40 40
24 114 + 40 80
25 82 + 40 80
26 26 + 40 160
27 60 + 40 0
Доля полож. рез-тов 70,3±8,7% 66,5±9,0% 81,5±7,4%
СГТА для всей выборки 1:08 1:26
Среднее значение(М) 18,5±2,9 57,7±9,79; 1=3,8
что не всегда возможно применить при массовых обследованиях большого числа людей. В этой связи сделана попытка проведения анализа, используя коэффициент (К), полученный по данным показателей оптической плотности. Исследуя первую пробу (кровь до вакцинации), среди привитых против КЭ удалось выявить в 28 случаях антитела !§С (19,3±3,2%). Из числа этих случаев во второй пробе крови (после 1-й вакцинации) в 21% отмечено снижение показателей оптической плотности (К). Хотя в 104 из 145 случаев (73,8%) в третьей пробе наблюдалось динамическое нарастание коэффициента К от первой к третьей пробе, в 20,7% также выявлено некоторое снижение показателей К. Такую динамику иммунологических показателей, вероятно, можно объяснить незавершенностью переключения иммуноглобулинов класса М на выработку антител !§С. Значит, в этих случаях в более поздние сроки, скорее всего, ожидается увеличение титров специфических антител. В пяти случаях показатель К антител !§С был без динамики, что можно связать с индивидуальными особенностями иммунологической реактивности организма привитого и, возможно, с активизацией выработки антител в более поздние сроки наблюдения.
РТГА, НМФА и РН до настоящего времени остаются ведущими иммунологическими реакциями не
только для диагностики КЭ, но и для оценки специфической активности применяемых вакцин. Диапазон этих реакций можно расширить, изучая иммунологическую эффективность вакцины по отношению к нескольким региональным штаммам вируса КЭ.
С этой целью для постановки реакции торможения гемагглютинации были использованы три региональных штамма (Р-73, Р-69, Р-202), выделенные от больных с различной клиникой течения КЭ, штамм 139 (стандартный препарат), а также штамм Повассан. Проведены наблюдения за динамикой накопления ге-магглютинирующих антител к этим штаммам в двух группах лиц: в серонегативной группе до вакцинации - 117 человек и в серопозитивной - 28 человек.
Как видно на рисунке 1, показатели антител ко всем штаммам были выше во второй группе, достигая 100%-ной величины к штаммам Р-73 и Р-202. В первой группе вакцинированных лиц накопление антител происходило медленнее. Максимальное их значение в третьей пробе достигло 91±2,6 и 94±2,1%. Полученные результаты дают нам основание считать, что у вакцинированных лиц обеих групп при помощи РТГА можно наблюдать накопление антител высокой специфической активности к разным региональным штаммам вируса КЭ, в числе которых был высоковирулентный для человека штамм Р-73.
ИССЛ1-Л()ВАНИТ
Рисунок 1.
Накопление антител к вирусу КЭ в ИФА и в РТГА в группах
лиц, вакцинированных вакциной Энцепур®
(I - серонегативная группа и II - серопозитивная группа)
Рисунок 2.
Учет результатов реакции нейтрализации сывороток крови вакцинированных лиц. 1-й рял и 2-й рял - титр антител 1: 160, 3-й рял - титр антител 1:40, 4-й рял - титр штамма Р-73 вируса КЭ (рабочая лоза вируса 2 ТЫЛ)
■ I сыв-ка □ II сыв-ка □ III сыв-ка
IgG КЭ Р-69 Р-202 Р-73 Повас- IgG КЭ Р-69 Р-202 Р-73 Пояао-
еганд. сан стенд. сан
••••••
• •t 4
Непрямой метод флуоресцирующих антител в диагностике КЭ применяется не часто. С помощью этой реакции нами проведено изучение специфического иммунитета к тем же трем региональным штаммам вируса КЭ (Р-69, Р-202 и Р-73), а также к вирусу По-вассан. В третьих пробах крови, взятых спустя 1 мес после 2-й вакцинации, показатели накопления антител ко всем штаммам вируса КЭ были сходными (93±2,1, 96±1,6, 96±1,6% соответственно; р>0,01), к вирусу Повассан - значительно ниже (67±3,9%, Р<0,001). Показатели СГТА, отражающие напряженность специфического иммунитета, были равны: к штамму Р-69 - 1:49, к Р-202 - 1:56, к Р-73 - 1:60, а к вирусу Повассан он был также ниже и достиг всего 1:26.
РН используют как наиболее чувствительный индикатор взаимодействия вируса с антителами, поэтому ее результаты считают наиболее достоверным показателем не только в диагностике инфекционных заболеваний, но и в изучении иммунологической эффективности вакцин. Способность специфических антител вступать во взаимодействие с антигенными детерминантами белков оболочки вириона и нейтрализовать инфекционную активность вируса является главным свойством этой реакции. Учет РН продемонстрирован на рисунке 2, где в нижнем ряду показан контроль вируса (2 lg ТЦЛ50), в 3-м - титр сыворотки составил 1:40, в 1-м и 2-м ряду - 1:160.
В РН были применены некоторые особенности ее постановки. Так, в работе корейского исследователя Ho Wang Lee [12], изучавшего иммунологическую эффективность вакцины против хантавирусов, нами было обращено внимание, что автор не рекомендовал проводить прогревание сывороток крови привитых лиц, как это принято в классической методике постановки РН (прогревание сывороток крови при температуре 560С в течение 30 мин). Видимо, это связано с тем, что вырабатываемые на убитую вакцину антитела менее стойкие по сравнению с антителами у переболевших лиц и прогревание сывороток крови ведет к занижению истинных показателей образовавшихся антител. Известно, что прогревание сывороток крови при постановке иммунологических ре-
акций необходимо для удаления неспецифических ингибиторов, которые также принимают участие в антивирусной защите. Неспецифическим ингибиторам, присутствующим в сыворотках крови, посвящено огромное число научных публикаций, подробно изложенных в монографии П.Н. Косякова и З.И. Ровновой [4]. Однако ингибиторы, обладающие неспецифическим защитным действием, способны влиять на исход реакции при использовании только неразведенных сывороток или их низких разведений (1:2, 1:4, 1:8) [8]. Чтобы убедиться в достоверности вышеизложенного, на примере 16 образцов было проведено сравнительное изучение прогретых и не-прогретых сывороток крови, взятых у людей спустя 1 мес после 2-й вакцинации. Титрование сывороток начинали с разведения 1:20, а не 1:10, как это делали корейские исследователи [12]. Несмотря на то, что из 16 обследованных в ИФА образцов крови антитела класса !§С были выявлены в 14 случаях, прогретые образцы давали либо отрицательные, либо низкие титры антител (табл. 1).
В то же время в непрогретых сыворотках крови титры антител были выше в 2 - 32 раза. Эти результаты убедительно демонстрируют важную особенность постановки РН, которая заключается в исключении подготовительного этапа реакции - прогревания сывороток крови. Принимая во внимание начальное разведение сывороток крови 1:20, этот этап постановки РН можно опускать не только при изучении иммунного ответа у привитых лиц, но и при обследовании людей, переболевших КЭ.
С учетом этой выявленной особенности в постановке РН исследовано 130 сывороток крови людей после двукратной вакцинации. Результаты сравнительного анализа (рис. 3) количественного накопления нейтрализующих антител в серопозитивных (100%, п = 28) и серонегативных (96,1%, п = 103) группах вакцинированных лиц, так же как и в РТГА, мало различаются между собой, только у 4-х человек такие антитела не обнаружены во второй группе. В то же время напряженность иммунного ответа в первой группе была значительно выше (1:104), чем во второй (1:64). Подобный характер выработки анти-
ИССЛЕДОВАНИЕ
Рисунок 3.
Сравнительная оценка накопления вируснейтрализующих антител в серопозитивных и серонегативных группах лиц, привитых вакциной Энцепур®
□ Сер|
опозитивная группа
П Серо
негативная группа
тел при изучении вакцины Энцепур на контингенте жителей Западно-Европейского региона был подробно описан в работе О. [16].
В то же время, сравнивая показатели гемагглюти-нирующих и нейтрализующих антител к наиболее вирулентному для человека штамму Рптогуе-73, как видно на рисунке 4, можно отметить более высокие титры антител в РН по сравнению с РТГА. Об этом свидетельствуют также показатели СГТА, которые в РН составили 1:84, а в РТГА - 1:45.
Обращает на себя внимание и тот факт, что у 7,7% вакцинированных лиц в РН не обнаружены антитела к штамму Р-73. Это побудило нас провести повторное титрование серонегативных сывороток крови, а также сывороток с низкими титрами антител с другим высо-коиммуногенным штаммом Р-202. Результаты сравнительного изучения 27 сывороток крови в ИФА и в РН к двум региональным штаммам представлены в таблице 2. В этой преднамеренно сделанной выборке проб крови доля положительных результатов в ИФА составила 70,3±8,7%. Вируснейтрализующие антитела к штамму Р-73 обнаружены в 66,5±9,0%, СГТА составила 1:8. Процент положительных результатов к штамму Р-202 выявляли чаще (81,5±7,4%; Р<0,01), и СГТА была выше, она достигла 1:26. Эти данные свидетельствуют о том, что отрицательные результаты в РН еще не свидетельствуют об отсутствии специфического ответа у вакцинированных лиц. Изучение иммунологической эффективности применяемых вакцин к несколь-
Рисунок 4.
Показатели гемагглютинирующих (ГА) и вируснейтрализующих (НА) антител к штамму (Ргутогуе-73) вируса КЭ в крови люлей спустя олин месяц после 2-го ввеления вакцины Энцепур®
35 30 25 20 15 10 5 0
□ ГА □ НА
1;20 1;40 1 ;80 1;160 1;320 1;640 Титры антител
ким региональным штаммам дополняет и уточняет особенности иммунного ответа вакцинированных.
Анализ напряженности иммунного ответа важно проводить с учетом возрастного состава вакцинированных лиц. На рисунке 5 видно, что чем старше возраст, тем ниже доля положительных результатов в ИФА и в реакции нейтрализации.
Показатели напряженности иммунитета более убедительно свидетельствовали о возрастных особенностях иммунного ответа на вакцинацию. Так, СГТА в РН у лиц молодого возраста составила 1:84, среднего - 1:64, а и у лиц старшего возраста этот показатель был самым низким - 1:32. Полученные данные могут свидетельствовать о том, что при заражении вирусом КЭ лица старшей возрастной группы значительно чаще рискуют заболеть, чем люди молодого возраста.
Таким образом, проведенные комплексные исследования сывороток крови лиц, вакцинированных против КЭ, на примере вакцины Энцепур полностью отражают иммуноспецифическую активность данного препарата. Известно, что эта вакцина, приготовленная из западного варианта (штамм К-23) вируса КЭ, обладает высокой иммуногенностью по отношению к данному штамму. Результаты таких исследований представлены в многочисленных публикациях [15, 16 и др.]. Дальневосточный регион, где циркулирует другой антигенный вариант (! субтип вируса КЭ, прототипный штамм Софьин), который, по сравнению с западным антигенным вариантом (!! субтип вируса КЭ, прототипный штамм Найдорфл), вызывает более тяжелое течение инфекции с летальностью от 7 до 39% в отдельные годы [5, 6], всегда привлекает исследователей в плане проверки здесь эффективности специфической профилактики против КЭ. Имеются все основания использовать этот регион как индикаторный для решения главного вопроса - пригодности применения вакцин, приготовленных из штаммов не только !, но и !! субтипа вируса КЭ.
Ранее в работе и. К1осктапп и сооавт. [11], Х. Холдмана и сооавт. [10] и в эксперименте на лабораторных животных была продемонстрирована перекрестная защита между штаммами европейского и дальневосточного субтипов вируса КЭ. Настоящая
Рисунок 5.
Зависимость показателей гуморального иммунитета от возраста люлей, привитых вакциной Энцепур®
ИССЛРЛОВЛНИР
же работа по испытанию иммунологической эффективности вакцины, приготовленной из западного варианта вируса КЭ, на территории, где циркулируют штаммы ! субтипа, проведена впервые.
Анализ полученных результатов исследования сывороток крови жителей Приморского края, привитых вакциной производства «Кайрон Беринг Гмбх и Ко», в четырех иммунологических реакциях (ИФА, РТГА, НМФА и РН) с четырьмя региональными штаммами вируса КЭ, а также с вирусом Повассан свидетельствует о высокой степени иммуногенной активности этого препарата. Результативность комплексного исследования иммунологической активности вакцины достигла 98%.
Проводя оценку использованных в работе серологических реакций, можно выделить их положительные и некоторые отрицательные качества. Так, при проведении скрининга для выявления антител класса С в сыворотках крови ИФА имеет преимущество перед остальными реакциями, которое заключается в быстроте и доступности этих исследований. Однако, судя по результатам (92%), полученным с помощью этого теста, в некоторых случаях специфические антитела можно не выявить. Этот момент следует учитывать и в диагностике КЭ, если она проводится с помощью только одной этой реакции. Из данных литературы [14] также известно, что различные тест-системы для выявления !§С-антител КЭ по-разному могут детектировать эти антитела: у больных КЭ - от 86 до 98%, у лиц, вакцинированных против КЭ, - от 21 до 100%. Следует еще раз отметить, что исследование напряженности иммунного ответа с помощью ИФА является дорогостоящей реакцией. Нельзя также определить штаммовую специфичность выработанных антител к вакцинному препарату.
Лругие реакции - РТГА, НМФА и РН - имеют преимущества перед ИФА, так как позволяют детально изучить иммунный ответ у вакцинированных лиц к различным штаммам, циркулирующим в любом регионе. Так, с помощью этих реакций получены результаты, свидетельствующие в пользу возможности применения вакцины Энцепур не только в Лальневосточ-ном районе, но и, конечно, в других эндемичных по КЭ регионах России. Наиболее убедительные данные, на наш взгляд, получены с помощью модифицированной РН. Исключен этап прогревания, который занижал количественные и качественные показатели РН. Кроме того, в работе дополнительно использован другой штамм вируса КЭ (Р-202), позволивший повысить показатели реакции нейтрализации. Комплекс проведенных исследований убеждает нас в том, что последующее изучение эффективности ревакцинации этой вакциной можно ограничить двумя реакциями: проведением скрининга по выявлению !§С в ИФА, а также исследований в РН с несколькими региональными штаммами вируса КЭ.
Полученные нами результаты принципиально отвечают на главный вопрос: какие вакцины следует применять на высокоэндемичных по КЭ территориях? Ответ на этот вопрос совпадает с мнением
М.С. Воробьевой [2]. Мы полагаем, что для всех эндемичных территорий России нужны высокоочищен-ные концентрированные вакцины, обладающие способностью стимулировать выработку антител широкого спектра действия не только к разным штаммам вируса КЭ, но и к другим вирусам из комплекса клещевого энцефалита (например, к вирусу Повассан). Такими качествами обладает концентрированная вы-сокоочищенная вакцина Энцепур производства «Кайрон Беринг Гмбх и Ко» (Марбург, Германия).
Выводы
1. Впервые проведено исследование иммунологической эффективности противоклещевой вакцины, приготовленной на основе западного варианта вируса КЭ, на территории, где циркулируют штаммы ! дальневосточного субтипа вируса КЭ.
2. При оценке иммуногенности вакцины с использованием ИФА, РТГА, НМФА и РН наиболее информативным и целесообразным тестом в эпидемиологическом и экономическом аспекте является проведение скрининга по выявлению антител !§С в ИФА, а также вируснейтрализующих антител к нескольким региональным штаммам вируса КЭ.
3. Изученная в исследовании противоклещевая вы-сокоочищенная концентрированная вакцина Энцепур производства «Кайрон Беринг Гмбх и Ко» (Марбург, Германия) обладает высокой иммуно-генностью: иммунологическая активность по отношению к региональным штаммам Приморья составляет 98%. Вакцина может быть рекомендована как эффективное средство для проведения вакцинопрофилактики КЭ на территории Российской Федерации.
Литература
1. Ворошилова, М.К. Методы лабораторной диагностики эн-теровирусных инфекций / М.К. Ворошилова, В.И. Жеванд-рова, М.С. Балаян. М., 1964.
2. Воробьева, М.С. Современное состояние вакцинопрофилактики клещевого энцефалита. Клещевой энцефалит (к 65-летию открытия). Владивосток, 2002. С. 166-169.
3. Гайдамович, С.Я. Методические рекомендации. Итоги науки и техники // Серия Вирусология Т. 25. 1991. 113 с.
4. Косяков, П.Н. Противовирусный иммунитет./ П.Н. Косяков, З.И. Ровнова // М.: Медицина, 1972.
5. Леонова, Г.Н. Современное состояние проблемы клещевого энцефалита на юге Лальневосточного региона России / Г.Н. Леонова, Н.А. Белоголовкина, В.Г. Борисевич и др. /Мат. расширенного пленума Пробл. комиссии «Клещевой и другие вирусные энцефалиты» РАМН. М., 2003. С.21-22.
6. Леонова, Г.Н. Клещевой энцефалит в Приморском крае. // Лальнаука Владивосток, 1997.
7. Леонова, Г.Н. Изучение роли Повассан в этиологической структуре клещевых энцефалитов в Приморском крае. / Г.Н. Леонова, Л.М. Исачкова, Н.И. Баранов и др. // Вопр.вирусол. 1980. <2. С. 173-176.
8. Львов, Л.К. Методические рекомендации. Итоги науки и техники // Серия «Вирусология». 1991. Т. 25 113 с.
9. Онищенко, Г.Г. Заболеваемость клещевым энцефалитом в Российской федерации //Мат. расширенного пленума пробл. комиссии «Клещевой и другие вирусные энцефалиты» РАМН. М., 2003. С. 5-6.
10. Холдман, Х. Молекулярная эпидемиология вируса клещевого энцефалита: перекрестная защита между европейскими
I IPOhAEMA
и дальневосточными субтипами / X. Холдман, М.С. Воробьева, И.П. Ладыженская и др. // Эпимедиология и вакцино-профилактика. 2003. < 2 (9). С. 37-41.
11. Klockmann, U. Protection against European isolates of tickborne encephalitis virus after vaccination with a new tickborne encephalitis vaccine./ U. Klockmann, U K. Krivanec, J.R. Stephenson, J. Hilfenhaus // Vaccine. 9(1991). P. 210-212.
12. Lee Ho Wang. Manual of Hemorrhagic fever With Renal Syndrome and Hantavirus Pulmonary Syndrome. / Lee Ho Wang, C. Calisher, C. Schmalijohn. Seoul. 1998.
13. Broker M. Diter Gniel New foci of tick-borne encephalitis virus in Europe: consequences for travelers from abroad //Travel Medicine and Infectious Disease. 2003. V. 1. P. 181-184.
14. Niedrig, M. Comparison of six different commercial IgG-ELISA kits for the detection of TBEV-antibodies. / M. Niedrig, D. Vaisviliene, A. Teichmann, U. Klockmann, S.S. Biel // J.Clin.Virol. 20(2001). P. 179-182.
15. Zent O. Clinical evaluation of a polygeline-free encephalitis vaccine for adolescents and adults. / Olaf Zent, Jiri Beran, Wolfgang Jilg, Tomasz Mach, Angelika Banzhoff // Vaccine. 2003. V. 21. P. 738-746.
16. Zent O. Kinetics of the immune response after primary and booster immunization against tick-borne encephalitis (TBE) in adults using the rapid immunization schedule. / O. Zent, W. Jilg, A. Plentz, T. F. Schwarz, N. Fruhwein, H. B. Kuhr, A. Banzhoff //Vaccine. 21(2003). P. 4655-4660.
Opisthorchis felineus в составе
биоценоза бассейна рек урал и
Сакмара Оренбургской области
Г.Н. Соловых, M.B. Скачков, A.M. Никитина, E.A. Кануникова Оренбургская госуларственная мелииинская акалемия, г. Оренбург
Ао 60-х голов XX столетия считалось, что в волоемах бассейна р. Урал, описторхоза нет и не может быть: по мнению большинства ученых, в них отсутствует первый промежуточный хозяин описторха (сибирского или кошачьего сосальшика) - моллюск Битиния личи (Bithinia leachi). И в целом Южный Урал, ло нелавнего времени считался благополучным по описторхозу.
Введение
Кошачий сосальщик (Opisthorchis £еНпеив), относящийся к триксенным гельминтам, в ходе своего биоцикла включается в симбиоценотические (паразитоценотические) отношения с обитателями своих хозяев - моллюсков, карповых рыб и плотоядных млекопитающих. Биоценотические отношения описторхоза еще очень мало изучены, при том, что они определяют зараженность моллюсков, карповых рыб и дефинитивных хозяев. В очагах (смешанного типа и формирующихся ан-тропурических) важными показателями служат экстенсивность и интенсивность зараженности промежуточного и основного хозяев.
Целью работы было изучение описторхоза в окрестностях населенных пунктов по рекам Урал и Сакмара, а также всех звеньев природного очага этого заболевания.
Материалы и методы
Исследования проводились общепринятыми методами. Рыба изучалась на зараженность мета-церкариями описторха компрессионным методом с помощью микроскопа МБС-1 (ув. 12.5x2), просматривались все группы мышц. Кошки обследо-
вались методом неполного гельминтологического вскрытия по К.И. Скрябину, P.C. Шульцу (1940). Пробы моллюсков собирались ковшовым дночер-пателем Петерсена с площадью облова 1/140 м2, а также вручную у берегов и с поверхности прибрежной растительности. Паразитологическое исследование моллюсков Bithinia leachi осуществлялось по методике Т.А. Гинецинской (1957), определение видовой принадлежности церкариев - по М.А. Чернигоренко (1983), Т.И. Поповой, Т.А. Гинецинской, А.А. Добровольскому (1978).
До 1966 года в Оренбургской области ежегодно отмечалось не более трех случаев описторхоза у людей. В 1967 году число больных выросло в 12 раз (36 человек) и оставалось на таком уровне до 1980 года, а в 1970 было выявлено 58 заболевших. За 15 лет зарегистрировано 260 случаев описторхоза, из них за 1970 - 1977 годы - 177. В 2000 году по области выявлено 88 больных, в том числе городских жителей - 39, проживающих в сельской местности - 49. Таким образом, заболеваемость описторхозом в Оренбургской области имеет тенденцию к росту (рис. 1). Анализ помесячной заболеваемости выявил два ее подъема (рис. 2): первый - ноябрь-февраль, второй - июнь-август, что поз-
