CC BY
16
ИММУНОЛОГИЯ
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2021
Шершнева Н.Н.1, Марданлы С.С.1,2, Кленяев И.Н.1, Самосадова П.В.1.
РАЗРАБОТКА ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНТНЫХ ДИАГНОСТИКУМОВ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ГЕРПЕСВИРУСАМ 1 И 2 ТИПОВ
1ЗАО «ЭКОлаб»,142530, Московская область, г. Электрогорск, Россия;
2Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи Минздрава РФ, 123098, Москва, Россия
Разработан российский набор реагентов «ВПГ-1-Флюороген-скрин» и «ВПГ-2-Флюороген-скрин» для определения в реакции иммунофлюоресценции антител классов М и G к вирусам простого герпеса 1 и 2 типов. Исследование на сыворотках стандартной панели положительных и отрицательных образцов предприятия ЗАО «ЭКОлаб», показало 100% чувствительность и специфичность нового набора. 125 сывороток крови людей с клиническими диагнозами: герпетическая, цитомегаловирусная инфекции, пиелонефрит, конъюнктивит и поражение центральной нервной системы были параллельно протестированы в иммуноферментных тест-системах разных производителей и в разработанных наборах. При исследовании этих образцов наблюдалась высокая степень совпадения результатов с наборами сравнения. Разработанные диагностикумы могут успешно применяться в клинической практике как для скрининга, так и для верификации результатов в диагностике герпесвирусных инфекций, вызванных вирусами простого герпеса 1 и 2 типов.
Ключевые слова: ВПГ-1; ВПГ-2; разработка; иммунофлюоресцентная диагностика.
Для цитирования: Шершнева Н.Н., Марданлы С.С., Кленяев И.Н., Самосадова П.В. Разработка иммунофлюоресцент-ных диагностикумов для выявления антител к герпесвирусам 1и 2 типов. Клиническая лабораторная диагностика. 2021; 66 (5): 285-290. DOI: http://dx.doi.org/10.51620/0869-2084-2021-66-5-285-290
Shershneva N.N.J, Mardanly S.S.12, Klenyaev I.N.1 ,Samosadova P. V.1
DEVELOPMENT OF IMMUNOFLUORESCENT DIAGNOSTICS FOR THE DETERMINATION OF IGM AND IGG ANTIBODIES TO HERPES SIMPLEX VIRUS TYPES 1 AND 2
1EKOlab, 142530, Moscow Region, Elektrogorsk, Russia;
2National Research Center оf Epidemiology and Microbiology named after honorary academician N. F. Gamalei of the Ministry of Health of the Russian Federation, 123098, Moscow, Russia
The Russian kits «HSV-1-Fluorogen-screen» and «HSV-2-Fluorogen-screen» have been developed for the determination of antibodies M and G to herpes .simplex virus types 1 and 2 by the immunofluorescence reaction. The kits were used to examine the positive and negative standard «EKOlab» panels sera and showed 100% sensitivity and specificity of the developed tests. 125 samples of blood serum from people with clinical diagnoses such as herpetic, cytomegalovirus infections, pyelonephritis, conjunctivitis and central nervous system damage were tested in parallel with using the enzyme-linked immunosorbent assay systems from different manufacturers and the developed tests «HSV-1-Fluorogen-screen» and «HSV-2-Fluorogen-screen». A high degree of matching of results with comparison sets was observed in examined samples. The developed diagnostics can be successfully used in clinical practice both for screening and for verification of results of the diagnosis of herpesvirus infections caused by herpes simplex virus types 1 and 2.
Key words: HSV-1; HSV-2; development; diagnostics; immunofluorescence assay.
For citation: Shershneva N.N., Mardanly S.S., Klenyaev I.N., Samosadova P.V. Development of immunofluorescent diagnostics for the determination of IgM and IgG antibodies to herpes simplex virus types 1 and 2. Klinicheskaya Laboratornaya Diagnos-tika (Russian Clinical Laboratory Diagnostics). 2021; 66 (5): 285-290 (in Russ.). DOI: http://dx.doi.org/10.51620/0869-2084-2021-66-5-285-290
For correspondence: Shershneva N.N., Sc.Cand., Head of science and production department of ToRCH and IFA of «Ekolab»; e-mail: nata.sher@bk.ru Information about authors:
Shershneva N.N., https://orcid.org/0000-0002-9229-3765 ;
Samosadova P.V., https://orcid.org/0000-0003-0033-6754;
Mardanly S.S., https://orcid.org/0000-0002-4440-6075;
Klenyaev I.N., https://orcid.org/0000-0002-9612-4432.
Conflict of interests. The authors declare absence of conflict of interests.
Acknowledgment. The study had no sponsor support.
Received 08.04.2021 Accepted 19.04.2021
Введение. Одной из актуальных проблем современной мировой медицины является высокая заболеваемость герпесвирусной инфекцией (ГВИ). По дан-
ным ВОЗ, частота инфицирования населения мира герпесвирусами составляет 95-99% [1-3]. Для пациентов с иммунодефицитными состояниями (больных
Для корреспонденции: Шершнева Наталья Николаевна, канд. биол. наук, нач. научно-производственного отделения «ToRCH, РИФ» ЗАО «Эколаб»; e-mail: nata.sher@bk.ru
IMMUNOLOGY
СПИДом, пациентов после трансплантации, онкологических больных) эта инфекция представляет особую опасность, так как приводит к тяжелой болезни и в некоторых случаях к летальному исходу [4 - 6]. Отмечено также неблагоприятное, а порой и фатальное влияние герпесвирусов в перинатальной патологии, так как они нарушают эмбриогенез, вызывают спонтанные аборты и плацентарную недостаточность, что в свою очередь приводит к врождённым патологиям плода [7 - 9].
Современная эпидемиологическая и клиническая диагностика невозможна без применения комплекса современных лабораторных методов. В качестве скрининговых методов при диагностике ГВИ рекомендуется использовать ПЦР, ИФА и РИФ, а в качестве подтверждающего - метод выделения герпеса на чувствительных клеточных культурах [10]. Вирусологический метод недоступен большинству медицинских учреждений, так как культивирование с использованием клеточных культур является процессом трудоемким, дорогостоящим, а также требующим высокой квалификации персонала. К числу зарекомендовавших себя современных иммунохимических технологий относят ИФА и реакцию непрямой имму-нофлюоресценции (РИФ), позволяющих с высокой степенью клинической информативности определять в крови больного присутствие иммуноглобулинов (Ig), направленных против антигенов возбудителя заболеваний [11 - 13].
Различают две разновидности реакции иммуноф-люоресценции: прямой и непрямой. При прямом методе метят антитела, которые непосредственно взаимодействуют с исследуемым антигеном. В непрямом методе с исследуемым антигеном сначала взаимодействуют специфические к нему антитела, а уже с ними - антивидовые антитела, меченые флюорохро-мом. Учет результатов реакции осуществляется с помощью люминесцентного микроскопа, в оптическую систему которого устанавливается набор светофильтров, обеспечивающих освещение препарата ультрафиолетовым или сине-фиолетовым светом с заданной длинной волны. Исследователь оценивает интенсивность и характер свечения [14,15].
Достоинствами РИФ являются: высокая специфичность и чувствительность; простота техники постановки; минимальное количество компонентов и оборудования для проведения анализа. Это метод относится к экспресс-методам, так как в течение двух часов можно получить ответ.
Необходимо отметить, что в настоящее время отечественных коммерческих тест-систем для выявления антител к герпесвирусам методом РИФ не существует.
В связи с этим целью исследования было улучшить серодиагностику ГВИ и разработать иммуноф-люоресцентные диагностикумы для определения IgM и IgG антител к вирусу простого герпеса 1 и 2 типа. Оценить показатели чувствительности и специфичности на подтвержденном клиническом материале.
Для достижения поставленной цели представлялось необходимым решить следующие задачи: наработать инфицированную вирусами простого герпеса
1 и 2 типа культуру; подобрать условия сорбции и фиксации антигена на поверхности предметных стекол; приготовить готовые к применению лабораторные серии иммунофлюоресцентных диагностикумов и оценить их диагностические возможности.
Материал и методы. Вирус. Использовали штаммы «ВН» вируса простого герпеса 2 типа (ВПГ-2) и «УС» вируса простого герпеса 1 типа (ВПГ-1), полученные из лаборатории Государственной коллекции вирусов ФГБУ ФНИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи.
Клетки. Эпителиальные клетки почки африканской зеленой мартышки (линия Vero) фирмы АТСС (США) культивировали в среде RPMI-1640 фирмы «Биолот» (Россия), содержащей 10% сыворотки эмбрионов коров (Gibco, Великобритания).
Приготовление антигена ВПГ-1 и ВПГ-2. Клетки Vero заражали вирусами ВПГ-1 штамм «УС» и ВПГ-2 штамм «ВН» в разведении 1:400 и 1: 800. Культивировали в среде RPMI-1640 в культуральных флаконах с площадью рабочей поверхности 150 см2 при температуре 37°С. Когда цитопатическое действие вируса охватывало не более 60 % площади монослоя проводили трипсинизацию вируссодержащего инокулята. Вирусный материал инактивировали и наносили по 50 мкл в лунки обезжиренных предметных стекол. Предметные стекла с сорбированным антигеном инкубировали при температуре 37оС в течение 15-16 ч. По истечении этого времени фиксировали антиген на поверхности предметных стекол раствором, содержащим ацетон.
Приготовление коньюгатов. Поликлональные кроличьи антитела к IgG и IgM человека, метили в щелочной среде флюоресцеин-5-изотиоцианатом (ФИТЦ; «Sigma», США) согласно стандартной методике.
В качестве клинического материала использовали 125 сывороток крови людей проходящих обследование в лабораторно-диагностическом подразделении клинического центра при 1 МГМУ им. Сеченова с различными клиническими диагнозами (герпетическая, цитомегаловирусная инфекции, пиелонефрит, внутриутробные инфекции, конъюнктивит и поражение центральной нервной системы).
В качестве контрольной группы использовали сыворотки здоровых детей в возрасте от 1 до 14 лет из лаборатории «INVITRO».
Результаты и обсуждение. При разработке диа-гностикума принцип действия, которого основан на реакции непрямой иммунофлюоресценции, решили следующие задачи:
• определили оптимальные инфекционные дозы для вирусных штаммов при заражении клеток Vero.
• подобрали оптимальный состав остальных компонентов тест-системы (буферные растворы для разведения сывороток и коньюгата)
• отработали оптимальные условия проведения реакции (время инкубации, разведение клинического материала).
Нами были подобраны оптимальные разведения вирусных штаммов для заражения в течение 15-16 часов. Дело в том, что для удобства в учете результатов зараженность клеточного монослоя не долж-
ИММУНОЛОГИЯ
Результаты реакции иммунофлюоресценции в диагностикумах для выявления антител классов М и G
к вирусу простого герпеса 1 и 2 типов
Стандартная панель предприятия ВПГ-1-Флюороген ВПГ-2-Флюороген
- ДО | - ^М - ДО | - ^М
Положительная по ВПГ 1 4+ 4+ - -
(СОП+214)
Отрицательная по ВПГ 1 -- - -
(СОП-214)
Положительная по ВПГ 2 -- 4+ 4+
(СОП+202)
Отрицательная по ВПГ 2 -- - -
(СОП-202)
Примечание. Интенсивное желто-зеленое свечение на (4+) - положительный результат (+); полное отсутствие флюоресценции - отрицательный результат (-).
I
Рис. 1. Фотография положительного результата реакции на ВПГ-1-^О.
Рис. 2 Фотография отрицательного результата реакции на ВПГ-1-^О.
на превышать 60 % от площади лунки предметного стекла.
При постановке реакции иммунофлюоресценции, как и других иммунологических реакций широко используют буферные растворы, значение рН и солевой состав которых обеспечивает хорошую растворимость и подвижность молекул иммуноглобулинов, и их быструю диффузию через поры клеток. Кроме того, рН является важным фактором, влияющим на интенсивность специфической люминесценции изолированных клеток [16]. Учитывая это, были проведены специальные исследования с целью изучения состава и рН раствора для разведения сывороток на результаты РИФ. Обнаружено влияние рН растворов на интенсивность свечения клеток и фона. При инкубации сывороток, разведенных в фосфатном буферном растворе с рН 7,0, наблюдалась наибольшая яркость свечения. При разведении в ацетатном буфере интенсивность значительно снижалась из-за влияния на люминесценцию ацетат-иона. При разведении в дистиллированной воде тоже наблюдалась низкая интенсивность свечения. Слабая флюоресценция была также отмечена при использовании трисбуфера из-за способности его основного компонента тригидроси-метиламинометана гасить люминесценцию.
Взаимодействие антител с антигенами - это сложный абсорбционно-химический процесс, скорость которого зависит от воздействия температуры ин-кубаций [17]. Были отработаны режимы постанов-
ки реакции при 24°С и 37°С. При 24°С наблюдался рост люминесценции до определенного предела, достигнув которого, яркость становилась постоянной и не зависела от времени контакта с сыворотками и коньюгатом. При 24°С стабилизация интенсивности свечения отмечалась за более короткий промежуток времени, чего не скажешь о реакции при 37°С, которая шла значительно быстрее и не стабилизировалась в течение 30 минут. Наилучшие показатели чувствительности и специфичности были при инкубации сывороток и коньюгата в течение 30 мин при 24°С.
Для определения активности полученных конью-гатов подбирали рабочее разведение, дающее оптимальную люминесценцию комплекса антиген-антитело снижающую вероятность неспецифического окрашивания клеток. В лунки предметных стекол с сорбированными антигенами ВПГ-1 и ВПГ-2 добавляли двукратные разведения конъюгатов от 1/100 до 1/1200. Рабочие разведения конъюгатов составили -1/600 для ^й и 1/300 для ^М. Разведение сывороток (диагностический титр) составило 1:20.
Чувствительность и специфичность разработанных наборов вначале оценили на сыворотках стандартной панели положительных и отрицательных образцов предприятия ЗАО «ЭКОлаб», содержащих ^й и ^М к ВПГ-1 и ВПГ-2. Результаты данного исследования приведены в таблице.
Результаты, приведенные в таблице, показывают полное совпадение оценок сывороток панелей пред-
IMMUNOLOGY 100 80 60 40 20 0
■ HERPESS SIMPLEX 1 IgG ВПГ-1-Флюороген- IgG ИФА-ВПГ-1 IgG
100 80 60 40 20 0
■ HERPESS SIMPLEX 2 IgG ВПГ-2-Флюороген- IgG ИФА-ВПГ-2 IgG
Рис. 3. Выявление антител класса G к ВПГ-1 и ВПГ-2 в различных тест-системах.
100 80 60 40 20 0
С°
/
J
I HERPESS SIMPLEX 1 lgM ВПГ-1-Флюороген-1дМ ИФА-ВПГ-1 lgM
100 80
60 40
20
I HERPESS SIMPLEX 2 lgM ВПГ-2-Флюороген-1дМ ИФА-ВПГ-2 lgM
Рис. 4. Выявление антител класса М к ВПГ-1 и ВПГ-2 в различных тест-системах.
приятия с исходными характеристиками, что является свидетельством 100% аналитической чувствительности и специфичности. У положительных по ВПГ-1 и ВПГ-2 сывороток наблюдалось специфическое свечение цитоплазмы и ядра клеток интенсивностью от (2+) до (4+) в колониях из 1-3 клеток (рис. 1). Полное отсутствие свечения или едва различимое свечение цитоплазмы всех клеток (неспецифическая реакция с Fc-рецепторами) являлось показателем отрицательной реакции (рис. 2).
Для оценки диагностической (клинической) чувствительности и специфичности было исследовано 125 сывороток. Предварительно их протестировали на наличие антител классов M и G к ВПГ-1 и ВПГ-2 в иммуноферментных коммерческих тест-системах производства ЗАО «ЭКОлаб» (Россия) и «БиоХим-Мак».
Предварительное исследование на наличие IgG к ВПГ-1 и ВПГ-2 в скрининговых иммуноферментных тест-системах «HERPES SIMPLEX 1/2 IgG» фирмы «Биохиммак» показало наличие IgG к ВПГ-1 у 112(89,6%) образцов (из них 4(3,2%) образца содержали IgG к ВПГ-2). 2(1,6%) были сомнительными по ВПГ-1 и 6(4,8%) по ВПГ-2. Отсутствие IgG к ВПГ-1 и ВПГ-2 было у 11(8,8%) и 113(90,4%) образцов. В иммуноферментных тест-системах ЗАО «ЭКОлаб» антитела были обнаружены к ВПГ-1 у 110(88%), к ВПГ-2 у 4(3,2%), сомнительными к ВПГ-1 оказались
3(2,4%) образца, а к ВПГ-2 - 7(5,6%). Отрицательный результат был по ВПГ-1 у 12(9,6%), а по ВПГ-2 у 114(91,2%). При исследовании образцов в реакции иммунофлюоресценции наблюдалась различной степени интенсивность желто-зеленого свечения клеток, инфицированных ВПГ-1 и ВПГ-2 в поле зрения микроскопа, что свидетельствует о наличии антител класса G к ВПГ-1 у 110(87,2%), к ВПГ-2 у 4(3,2%). Образцы с очень слабым желто-зеленым свечением расценивались как сомнительные. Из 125 в РИФ у 2(1,6%) по ВПГ-1 и у 7(5,6%) по ВПГ-2 сомнительные результаты. Отрицательные результаты были получены в 13(10,4%) по ВПГ-1 и в 114(91,2%) по ВПГ-2 случаях (рис. 3).
Аналогичным образом была проведена оценка 125 сывороток на наличие антител классов М к ВПГ-1 и ВПГ-2. В наборах сравнения ^М к ВПГ-1 и ВПГ-2 было выявлено в 13(10,4%) и 1(0,8%) случае. Сомнительные результаты были в 10(8%) по ВПГ-1 и 7(5,6%) по ВПГ-2. Антитела класса М к ВПГ-1 отсутствовали у 102(81,6%), к ВПГ-2 у 117(93,6%). При исследовании этих образцов в тест-системах методом иммунофер-ментного анализа и в разработанных диагностикумах основанных на реакции иммунофлюоресценции наблюдалось 100-процентное совпадение результатов с наборами сравнения (рис. 4).
Специфичность разработанных тест-систем была оценена на 100 сыворотках здоровых детей, не содер-
жащих антител классов М и G вирусам простого герпеса 1 и 2 типов. При исследовании этих образцов в реакции иммунофлюоресценции наблюдалось 100% совпадение результатов. В поле зрения микроскопа наблюдалось едва различимое свечение или его полное отсутствие - результат отрицательный.
Выводы. При постановке непрямой реакции иммунофлюоресценции наилучшие показатели чувствительности и специфичности наблюдались при разведении сывороток в 20 раз в фосфатно-солевом буферном растворе с рН=7,2. Оптимальные рабочие разведения коньюгатов для IgG -1/600, а для IgM-1/300. Инкубация в течении 30 минут при температуре 24°С сводит к минимуму неспецифическое связывание флюоресцирующих антител.
Специфичность у разработанных иммунофлюо-ресцентных наборов для выявления специфических IgG к ВПГ-1 выше, чем в иммуноферментных тест-системах. Два образца положительных по результатам ИФА в наборах фирмы «Биохиммак» дали отрицательные результаты в аналогичных ИФА фирмы «ЭКОлаб». Эти же данные были подтверждены в реакции иммунофлюоресценции: в поле зрения микроскопа наблюдалось полное отсутствие специфического свечения - результат отрицательный. По остальным образцам было полное совпадение результатов во всех тест-системах.
При исследовании на наличие IgM к ВПГ-1 и ВПГ-2 методом иммуноферментного анализа и в разработанных диагностикумах основанных на реакции иммунофлюоресценции наблюдалось 100% совпадение результатов с наборами сравнения.
В связи с этим диагностикумы могут успешно применяться в клинической практике как для скрининга, так и для верификации результатов в диагностике этих герпесвирусных инфекций. Непрямая реакция иммунофлюоресценции обладает высокой диагностической эффективностью и наряду с иммунофер-ментным анализом может использоваться в практической медицине для серодиагностики герпесвирусов. Разработанные наборы успешно прошли регистрационные испытания и на сегодняшний день внедрены в широкую практику здравоохранения.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.
ЛИТЕРАТУРА (пп. 1, 14 см. REFERENCES)
1. Chayavichitsilp P., Buckwalter J.V., Krakowski A.C., Sheila F. Friedlander. HerpesSimplex. Pediatrics in Review. 2009; 30(4): 119-29.
2. Вирус простого герпеса. Всемирная организация здравоохранения Available at: https://www.who.int/ru/news-room/fact-sheets/ detail/herpes-simplex-virus. (дата обращения: 02.04.2021).
3. Марданлы С.Г. Герпесвирусные инфекции. Орехово-Зуево: ГГТУ: 2017.
4. Марданлы С.Г., Арсеньева В.А., Марданлы С.С., Ротанов С.В.. Распространенность вирусов герпеса человека среди континген-тов различного возраста. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2019; 2: 50.
5. Панченко Л.А., Кириченко И.И., Ходак Л.А.. Возбудители гер-песвирусных инфекций и наиболее важные клинические проявления у человека. Провизор. 1999; 10: 24-8.
ИММУНОЛОГИЯ
6. Богатырева Л.Н. Врожденная инфекция, вызванная вирусом простого герпеса (Herpes .simplex): этиология, патогенез, клиническая картина, диагностика, лечение, профилактика. Медицина. Социология. Философия. Прикладные исследования. 2019; 1: 46.
7. Марданлы С.Г., Кирпичникова Г.И., Неверов В.А., Амелина Е.А. Герпесвирусные инфекции: особенности патогенеза, диагностика, лечение. Медицинский алфавит. 2012; 4 (20): 48-50.
8. Марданлы С.Г., Кирпичникова Г.И., Неверов В.А. Герпетическая инфекция (простой герпес). Этиология, эпидемиология, патогенез, клиника, лабораторная диагностика, лечение. Электро-горск: ЗАО «ЭКОлаб»; 2011.
9. Рыбалкина Т.Н., Каражас Н.В., Савинков П.А., Бошьян Р.Е., Лы-сенкова М.Ю., Корниенко М.Н. и др. Значение герпесвирусов в этиологии ряда инфекционных и соматических заболеваний детей. Детские инфекции. 2017; 16(3):10—9.
10. Павлюк А.С. Методы лабораторной диагностики заболеваний, вызванных вирусом простого герпеса. Заболевания, передаваемые половым путем. 1994; 3: 3-7.
11. Марданлы С.Г., Симонова Е.Г., Симонов В.В. Инфекции ^RCH-группы: клиническая лабораторная диагностика, эпидемиологический надзор и контроль. Орехово-Зуево: Государственный гуманитарно-технологический университет; 2018.
12. Марданлы С.Г., Авдонина А.С., Марданлы С.С., Шершнева Н.Н. Разработка набора реагентов для выявления антител класса G к отдельным антигенам вирусов простого герпеса первого и второго типов методом иммунного блоттинга в формате Western-Line-Blot. Медицинский алфавит. 2017; 4 (38): 33-40.
13. Марданлы С.Г., Томашевская Н.А., Мухина А.И, Гвильдис И.Ю., Кириллова Л.Д, Хожаинова М.П. Опыт использования комплекса тест-систем для диагностики инфекций TORCH-группы. Эпидемиология и инфекционные болезни. Актуальные вопросы. 2014; 5: 65-9.
14. Michael R. Lewis, Jim Y. Kao, Anne-Line J. Anderson, John E. Shively and Andrew Raubitschek. An improved method for conjugating monoclonal antibodies with N-hydroxysulfosuccinimidyl DOTA. Bioconjugate chemistry. 2001; 12 (2): 320-4.
15. Марданлы С.Г. Иммуноферментные тест-системы ЗАО» ЭКОлаб» для диагностики простого герпеса. Клиническая лабораторная диагностика. 2008; 2: 35-8.
16. Алексеев Ю.Д., Савенкова Е.Н. Виды специфического свечения в реакции иммунофлюоресценции (риф). Проблемы экспертизы в медицине. 2013; 13(2): 25-6.
17. Марданлы С.Г. Задачи и перспективы совершенствования клинической лабораторной диагностики инфекций группы TORCH. Вестник службы крови России. 2013; 2: 54-60.
REFERENCES
1. Chayavichitsilp P., Buckwalter J.V., Krakowski A.C., Sheila F. Friedlander. HerpesSimplex. Pediatrics in Review. 2009; 30(4): 119-29.
2. Herpes simplex virus. World health organization. Available at: https://www.who.int/ru/news-room/fact-sheets/detail/herpes-sim-plex-virus. (accessed 02.04.2021).
3. Mardanly S. G. Herpessimplex infections. [Gerpesvirusnye infekt-sii]. Orekhovo-Zuevo: GGTU; 2017. (in Russian)
4. Mardanly S. G, Arsen'eva V.A., Mardanly S.S., Rotanov S.V.. The prevalence of human herpes viruses among contingents of different ages. Zhurnal mikrobiologii, epidemiologii i immunobiologii. 2019; 2: 50. (in Russian)
5. Panchenko L.A., Kirichenko I.I., Khodak L.A. The causative agents of herpesvirus infections and the most important clinical manifestations in humans. Provizor. 1999; 10: 24-8.
6. Bogatyreva L.N. Congenital infection caused by the herpes simplex virus (Herpes simplex): etiology, pathogenesis, clinical picture, diagnosis, treatment, prevention. Meditsina. Sotsiologiya. Filosofiya. Prikladnye issledovaniya. 2019; 1: 46. (in Russian)
IMMUNOLOGY
7. Mardanly S.G., Kirpichnikova G.I., Neverov V.A., Amelina E.A.. Herpesvirus infections: features of pathogenesis, diagnosis, treatment. Meditsinskiy alfavit. 2012; 4 (20): 48-50. (in Russian)
8. Mardanly S. G., Kirpichnikova G. I., Neverov V. A. Herpes infection (herpes simplex). Etiology, epidemiology, pathogenesis, clinic, laboratory diagnostics, treatment. Elektrogorsk: ZAO «EKOlab»; 2011. (in Russian)
9. Rybalkina T.N., Karazhas N.V., Savinkov P.A., Bosh'yan R.E., Ly-senkova M.Yu., Kornienko M.N. et al. The importance of herpes viruses in the etiology of a number of infectious and somatic diseases in children. Detskie infektsii. 2017; 16(3):10—9. (in Russian)
10. Pavlyuk A.S. Methods of laboratory diagnosis of diseases caused by the herpes simplex virus. Zabolevaniya, peredavaemye polovym putem. 1994; 3: 3-7. (in Russian)
11. Mardanly S.G., Simonova E.G., Simonov V.V. Infections of the TORCH group: clinical laboratory diagnostics, epidemiological surveillance and control. [Infekcii ToRCH-gruppy: klinicheskaya laboratornaya diagnostika, epidemiologicheskij nadzor i kontrol']. Orekhovo-Zuevo:Gosudarstvennyi gumanitarno-tekhnologicheskiy universitet; 2018. (in Russian)
12. Mardanly S.G., Avdonina A.S., Mardanly S.S., N. N. Shershneva N.N. Development of a set of reagents for the detection of class G antibodies to individual antigens of herpes simplex viruses of
the first and second types by immune blotting in the Western-Line-Blot format. Meditsinskiy alfavit. 2017; 38 (4): 33-40. (in Russian)
13. Mardanly S.G., Tomashevskaya N.A., Muhina A.I, Gvil'dis I.YU., Kirillova L.D, Hozhainova M.P.. Experience in using a complex of test systems for diagnosing infections of the TORCH group. Epidemiologiya i infektsionnye bolezni. Aktual'nye voprosy. 2014; 5: 65-9. (in Russian)
14. Michael R. Lewis, Jim Y. Kao, Anne-Line J. Anderson, John E. Shively and Andrew Raubitschek. An improved method for conjugating monoclonal antibodies with N-hydroxysulfosuccinimidyl DOTA. Bioconjugate chemistry. 2001; 12 (2): 320-4.
15. Mardanly S.G. Immunoassay test systems of CJSC «EKOlab» for the diagnosis of herpes simplex. Klinicheskaya laboratornaya diag-nostika. 2008; 2: 35-8. (in Russian)
16. Alekseev Yu.D., Savenkova E.N. Types of specific fluorescence in the reaction of immunofluorescence (IFA). Problemy ekspertizy v meditsine. 2013; 13 (2); 25-6. (in Russian)
17. Mardanly S.G. Tasks and prospects for improving the clinical laboratory diagnosis of infections of the TORCH group. Vestnik sluzhby kroviRossii. 2013; 2: 54-60. (in Russian)
Поступила 08.04.21 Принята к печати 19.04.21
