CC BY
9
RESEARCH ARTICLE 3. Medical sciences
УДК 615.322; 615.074
Corresponding Author: Kasyanov Zakhar, Ph.D., Associate Professor of Pharmacology and Pharmacy Department, Perm State National Research University, Perm, Russia
E-mail: zaharyuga@gmail.com
© Kasyanov Z.V., Nepogodina E.A., Mashchenko P.S. - 2022
| Accepted: 30.12.2022
http ://dx. doi.org//10.26787/nydha-2686-6838-2022-24-12-78-83
РАЗРАБОТКА И ВАЛИДАЦИЯ СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОЙ МЕТОДИКИ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ФЛАВОНОИДОВ В ПУПАВКИ КРАСИЛЬНОЙ ТРАВЕ
Касьянов1 З.В., Непогодина2 Е.А., Мащенко1'2 П.С.
ФГАОУ ВО «Пермский государственный национальный исследовательский университет», г. Пермь, Российская Федерация
2ФГБОУ ВО «Пермская государственная фармацевтическая академия», г. Пермь, Российская Федерация
Аннотация. Целью настоящей работы является разработка и валидация спектрофотометрической методики количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин в траве пупавки красильной, потенциально лекарственного растения. Согласно литературе, пупавка красильная применяется в народной медицине в качестве гепатопротекторного, кровоостанавливающего и средств, а ее извлечения эксперименте проявляют противомикробную, цитостатическую и антиоксидантную активности. В настоящей работе использовали образец пупавки красильной травы, заготовленный летом 2021 г. в период массового цветения в окрестностях г. Перми (долина р. Васильевка, ж/д станция «Адищево»). Сырье было высушено при комнатной температуре, при достаточном проветривании, без прямого воздействия солнечных лучей, хранилось отдельно от других видов сырья. Оптимальные условия для определения суммы флавоноидов, согласно проведенным экспериментам получились следующие: измельчение сырья до размеров, проходящих сквозь сито, диаметром 1 мм, оптимальная концентрация экстрагента спирта этилового - 50%, рабочая длина волны - 410 нм, время извлечения на кипящей водяной бане - 45 минут, соотношение извлечения и комплексообразователя - 2% спиртового раствора алюминия хлорида -2:5. Методика валидирована согласно требований ГФ 14, относительная ошибка определения с достоверной вероятностью 95% составила 4,00%. Методика может быть использована в дальнейшей работе для проведения исследований биологической активности.
Ключевые слова: Пупавка красильная, Anthemis tinctoria, рутин, дифференциальная спектрофотометрия.
ELABORATION AND VALIDATION OF A SPECTROPHOTOMETRY TECHNIQUE FOR ESTIMATION OF THE TOTAL FLAVONOIDS IN ANTHEMIS TINCTORIA HERB
Kasyanov1 Z.V., Nepogodina2 E.A., Mashchenko1'2 P.S.
1Perm State National Research University, Perm, Russian Federation 2Perm State Pharmaceutical Academy, Perm, Russian Federation
Abstract. The aim of this work is development and validation of a spectrophotometric technique for quantification of total flavonoids in terms of rutin in potentially medicinal plant Anthemis tinctoria herb. According to the literature, Anthemis tinctoria is used in folk medicine as a hepatoprotective, hemostatic and means, and its extracts in the experiment exhibit antimicrobial, cytostatic and antioxidant activities. In this work, we used sample of Anthemis tinctoria herb harvested in the summer of2021 during the period of mass flowering in vicinity of Perm city (valley of the Vasilievka river, Adishchevo railway station). The raw materials were dried at room temperature, with sufficient ventilation, without direct exposure to sunlight, stored separately from other types of raw materials. According to the experiments the optimal conditions for determining of total flavonoids: grinding the raw material to a size passing through a sieve with a diameter of 1 mm, the optimal concentration of ethyl alcohol extractant is 50%, the analytical wavelength is 410 nm, the extraction time in a boiling water bath is 45 minutes, the ratio of extraction and complexing agent - 2% alcohol solution of aluminum chloride - 2:5. The technique was validated in accordance with the requirements of State Pharmacopeia of Russia 14th edition, the relative error of determination with a reliable probability of 95% was 4.00%. The technique can be used in further work to conduct studies of biological activity.
Keywords: Cota tinctoria, Anthemis tinctoria, rutin, differential spectrophotometry.
Введение. Пупавка красильная (Cota tinctoria (L.) J. Gay syn. Anthemis tinctoria L., Asteraceae) -многолетнее травянистое растение, широко распространенное в Европе, Передней Азии и Сибири [1, 2].
В народной медицине пупавка красильная используется в качестве гепатопротекторного, желчегонного, противолихорадочного,
инсектицидного и кровоостанавливающего и других средств, применяемых в виде настоев и отваров [3,
4].
Извлечения из пупавки красильной в эксперименте оказывают противомикробную, цитостатическую, антиоксидантную и другие виды активностей [5, 6, 7]
В подобные виды активностей, скорее всего, вносят фенольные соединения, в частности, флавоноиды, среди которых в траве пупавки красильной идентифицированы: рутин,
никотифлорин, апигенин, кверцетин и другие [7, 8,
9].
Для планомерного изучения
фармакологической активности, оценки
выраженности эффекта необходима оценка извлечений сырья по содержанию основных действующих веществ, для чего требуются разработанная и валидированная методика количественного определения, которая
впоследствии может войти в соответствующую фармакопейную статью.
Материалы и методы. В настоящей работе использовали образец пупавки красильной травы, заготовленный летом 2021 г. в период массового цветения в окрестностях г. Перми (долина р. Васильевка, ж/д станция «Адищево»). Сырье было высушено при комнатной температуре, при достаточном проветривании, без прямого воздействия солнечных лучей, хранилось отдельно от других видов сырья.
Для подтверждения наличия рутина в водно-спиртовом извлечении из анализируемого образца травы пупавки красильной использования методы тонкослойной хроматографии и ВЭЖХ в различным условиях со стандартным образцом (СО) рутина.
Для создания методики количественного определения суммы флавоноидов использовали метод дифференциальной спектрофотометрии [10].
При выборе размера частиц сырья мы руководствовались тем, что высокая степень измельчения даёт хороший выход действующих веществ. При измельчении сырья менее 0,5 мм наблюдали комкование опушённых частиц и затруднение их прохождения через сито, вследствие чего взятие навески было необъективным. Размер частиц> 0,5 мм и < 1 мм позволяет взять навеску с максимальным выходом действующих веществ.
Также был произведён подбор оптимальных условий экстрагирования флавоноидов (выбор концентрации спирта, выбор времени экстрагирования). Результаты представлены в таблицах ниже
Таблица 1
Влияние концентрации спирта (1 = 410 нм; l = 1,0 см; t = 45 мин)
Table 1
Effect of ethyl alcohol concentration (1 = 410 нм; l = 1,0 см; t = 45 мин)
Концентрация спирта этилового, % Оптическая плотность Содержание флавоноидов %
40 G,G68 G,113
50 G,241 G,4G7
60 G,1GG G,169
70 G,G24 G,G4G
90 G,197 G,329
95 G,1G5 G,177
Таблица 2
Влияние времени экстрагирования (X = 410 нм; l = 1,0 см; t = 45 мин)
Table 2
Effect of extraction time (X = 410 nm; l = 1,0 cm; t = 45 min)
Время Оптическая Содержание
экстрагирования, плотность флавоноидов
мин. %
Extraction time, Optical Total
minutes density flavonoids, %
15 0,210 G,352
30 0,157 G,266
45 0,318 0,537
60 0,206 G,349
75 0,174 G,29G
9G 0,194 G,328
В результате исследования было установлено, что наиболее полное извлечение происходит при экстрагировании 50% спиртом этиловым в течение 45 минут. Дальнейшее нагревание сопровождается снижением показателя суммы флавоноидов, что, возможно, связано с химической деструкцией веществ, образованием комплексов и др.
Аналитическая длина волны была подобрана экспериментально, с помощью анализа спектров комплекса спиртового извлечения травы пупавки красильной с алюминия хлоридом. Критерием выбора являлась длина волны с максимальным поглощением монохроматического света.
В качестве стандартного вещества выбран рутин, дифференциальный спектр поглощения, которого с алюминия хлоридом совпадает с
дифференциальным спектром поглощения флавоноидов травы пупавки красильной (рис. 1).
Рис.1. Спектры поглощения рутина, извлечения и его комплекса с алюминия хлоридом, где A - оптическая плотность, X - длина волны, нм: 1 - спектр комплекса рутина с A1C13; 2 - спектр извлечения в присутствии A1C13; 3 - спектр извлечения (1 = 1,0 см; прибор СФ-2000)
Fig.1. Absorption spectra of rutin, extract and its complex with aluminum chloride, where A - optical density, X -wavelengh, nm: 1 - spectrum of the rutin complex with AlCl3; 2 - extraction spectrum in the presence of AlCl3; 3 - extraction spectrum (l = 1,0 cm; analytical device SF-2000)
Полученные данные позволили нам использовать длину волны Х=410нм в качестве аналитической.
Для выбора оптимальных условий комплексообразования был изучен такой параметр как соотношение объема извлечения и комплексообразователя (2% спиртового раствора алюминия хлорида). Для создания подходящей среды комплексообразования использовали 10% уксусную кислоту, т.к. при добавлении концентрированной уксусной кислоты наблюдалась относительно малая устойчивость комплекса (не более 1 часа), и он обесцвечивался.
Таблица 3
Соотношение извлечения и комплексообразователя (V извлечения=2,00 мл)
Ratio of extract and complexing agent (V extract=2,00 мл)
2% спиртовой Оптическая Содержание
раствора алюминия плотность флавоноидов,
хлорида, мл %
2% ethyl alcohol solution of aluminum Optical density Total flavonoids, %
chloride, ml
3 0,166 0,28
4 0,170 0,29
5 0,182 0,31
6 0,182 0,31
7 0,182 0,31
По результатам исследования при соотношении объемов 2 мл извлечения и 5 мл комплексообразователя наблюдали максимальное
образование комплекса флавоноидов с алюминия хлоридом, которое сохранялось при дальнейшем увеличении объемов хромогенного реактива.
Валидирование методики было проведено согласно ГФ XIV издания по следующим характеристикам: специфичность, аналитическая область, правильность, устойчивость, линейность, прецизионность [11].
Для определения установления
специфичности был выбран способ спектрофотометрии, в основе которого лежит реакция комплексообразования флавоноидов с алюминия хлоридом и использование в качестве раствора сравнения извлечение из травы пупавки красильной в отсутствии комплексообразователя. Комплекс флавоноидов с А1С13 смещает область поглощения в видимую часть спектра, относительно извлечения. Использование в качестве раствора сравнения извлечения позволяет устранить влияние сопутствующих веществ на поглощение монохроматического света при аналитической длине волны 410 нм.
Наличие линейной зависимости было определено зависимостью оптической плотности от массы навески, взятой для извлечения. Исследование проводили на одиннадцати образцах (рис. 2).
Из графика видно, что зависимость оптической плотности от массы навески имеет линейный характер, то есть оптическая плотность прямо пропорциональна концентрации
светопоглощающего вещества, что подтверждает подчинение закону Бугера-Ламберта-Бера.
A 0.350 0.300 0.250 0.200 0.150 0,100 0,050
0.000 0,0000
у = 0.2785\ +0.0382 R! = 0.98 JO
0,2000 0,4000 0,6000 0,8000
1,0000
1,2000
Рис 2. Градуировочный график для определения флавоноидов с A1C13, где A - оптическая плотность, m - масса образца, г (X = 410 нм; l = 1,0 см) Fig 2. Calibration curve for quantification of flavonoids with A1C13, where A - optical density, m - sample mass, г (X = 410 nm; l = 1,0 cm)
Коэффициент корреляции составил 0,98403, а чем ближе значение R к единице, тем менее наблюдаемая линейная зависимость между переменными х и у может рассматриваться как случайная.
Аналитическая область варьируется в пределах оптической плотности от 0,07 до 0,32 и массы навесок от 0,2 до 1,00г.
При оценке правильности производилось рассмотрение результатов изучения линейности валидируемой методики. Свободный член в уравнении линейности, приведенном выше, статистически достоверно не отличается от нуля [12].
Повторяемость методик определяли на одном образце извлечения в 10 повторностях в течение короткого промежутка времени с использованием одних и тех же реактивов и оборудования. Проверка повторяемости (сходимости) результатов методики показала, что относительная ошибка определения с достоверной вероятностью 95% составила 4,00%.
Таблица 4
Метрологические характеристики методики определения суммы флавоноидов в траве пупавки красильной
Table 4
Metrological characteristics of the technique for estimation of the total flavonoids in Anthemis tinctoria herb
f х S2 S P, % t (P, f) Ax £, %
9 0,252 5 0,000 2 0,014 2 95 2,2 6 0,010 1 4,00 %
Внутрилабораторная (промежуточная)
прецизионность. Внутрилабораторная
прецизионность валидируемой методики была проведена в условиях работы одной лаборатории на разных оборудованиях разными исполнителями. Определяли на трёх образцах сырья в трёхкратной повторности.
Таблица 5 Внутрилабораторная прецизионность Intralab Precision
Исполнитель Содержание суммы флавоноидов, %
Образец №1 Образец №2 Образец №3
Performer Total flavonoids, %
Sample №1 Sample №2 Sample №3
1 0,27 0,24 0,24
2 0,26 0,22 0,25
3 0,27 0,23 0,25
Полученные данные не превышали ошибки единичного определения.
В результате проведенного подбора оптимальных параметров разработана методика.
Растворы СО рутина. Около 0,025 г СО рутина (рутина тригидрата) растворяют в 25,00мл 95% спирта и перемешивают (раствор А СО рутина). Затем 2,00 мл раствора рутина А перемещают в колбу на 25,00 мл и добавляют 5,00 мл 2% спиртового раствора А1С13, 1,00 мл 10% уксусной кислоты, доводят спиртом до метки (раствор Б СО рутина).
Около 0,5 г травы пупавки красильной, измельченной до размера частиц 1мм, помещают в коническую колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 100,00 мл 50% спирта, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 45 минут. Горячее извлечение охлаждают до комнатной температуры, затем фильтруют через фильтр в мерную колбу объемом 100 мл. Доводят до метки спиртом 50% и перемешивают (раствор А испытуемого раствора).
К 2 мл раствора А в колбе на 25,00 мл прибавляют 5,00 мл 2% раствора А1С13 и 1,00 мл 10% уксусной кислоты, доводят объем до метки 95% спиртом, перемешивают и оставляют на 45 минут (раствор Б испытуемого раствора).
В качестве раствора сравнения используют смесь 2,00 мл раствора А, помещенного в мерную колбу вместимостью 25,00 мл, 1,00 мл 10% уксусной кислоты, доведенной 95% спиртом до метки.
Оптическую плотность полученных растворов измеряют через 45 минут на
x =
спектрофотометре в кювете с толщиной слоя 10 мм в области максимума при длине волны 410 нм.
Параллельно измеряют оптическую плотность раствора Б СО рутина, для сравнения используют смесь 2,00 мл 50% этанола, 1,00 мл 10% уксусной кислоты, помещенные в мерную колбу вместимостью 25,00 мл, доведенную 95% спиртом до метки.
Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин в процентах (Х) вычисляют по формуле (1):
А * а0 * 2 * 25 * 100 * 100 * 100 * Р
Л0 *а * 2 *2$* 25* (100 -IV)* 100
Где:
А - оптическая плотность раствора Б испытуемого раствора;
А0 - оптическая плотность раствора Б СО рутина;
а - навеска сырья, г;
ао - навеска СО рутина, г;
Р - содержание основного вещества в СО рутина,
%;
W - влажность сырья, %.
Содержания суммы флавоноидов в пересчете на рутин можно также вычислить с использованием удельного показателя поглощения комплекса рутина с алюминия хлоридом по формуле (2):
Где:
А - оптическая плотность раствора Б испытуемого раствора;
А- удельный показатель поглощения СО
1см
рутина с 2% раствором алюминия хлорида при длине волны 410нм, равный 1633,75; а - навеска сырья, г; W - влажность сырья, %.
В результате количественного определения было установлено, что содержание флавоноидов в образце травы пупавки красильной, используемом в работе, в пересчете на рутин составило 0,25±0,01%.
Выводы. Разработана методика и определены параметры количественного определения суммы флавоноидов в пупавки красильной траве в пересчете на рутин с использованием дифференциальной спектрофотометрии: длина волны - 410 нм, экстрагент - 70% спирт, время экстракции - 45 минут, измельченность сырья - 1 мм, оптимальное соотношение объема извлечения и алюминия хлорида раствора 2% в спирте 96% - 2:5, время образования устойчивого комплекса - 45
минут.
REFERENCES
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИМ СПИСОК
[1]. The plantlist.org [Internet]. A working list of all plant species; c2022 [cited 2022 Nov 23]. Available from: http://www.theplantlist.org/
[2]. Ovesnov S.A. et al. Illustrated guide to plants of the Perm region. Perm: Book. mir, 2007; 743. (in Russ.)
[3]. Kolosova V., Pashkova T., Muslimov M., Soukand R. Historical Review of Ethnopharmacology in Karelia (1850s-2020s): Herbs and healers. Journal of Ethnopharmacology. Vol. 282. 2022. 114565. https://doi.org/10.1016/jjep.2021.n4565.
[4]. Ruyvaran M. et al. Traditional and complementary medicines usage and associated factors in gastrointestinal outpatients in Shiraz, Iran: a cross-sectional survey. Advances in Integrative Medicine. Vol. 8, Issue 4. 2021. pp. 285-291. https://doi.org/10.1016/j.aimed.2020.09.004.
[5]. Erik I. et al. Antimicrobial and lipase inhibition of essential oil and solvent extracts of Cota tinctoria var. tinctoria and characterization of the essential oil. (2022) Turkish Journal of Chemistry, 46 (4), pp. 1234 - 1244. DOI: 10.55730/13000527.3430
[6]. Shamloo S. et al. Cytotoxic effect of hydroalcoholic extract of Cota tinctoria (L.) j .gay on AGS and Hep-G2 cancer cell lines [Efecto citotóxico del extracto hidroalcohólico de Cota tinctoria (L.) j. gay sobre líneas celulares de cáncer AGS y Hep-G2] (2022) Boletin Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales y Aromaticas, 21 (1), pp. 108 - 122. DOI: 10.37360/BLACPMA.22.21.1.07.
[7]. Bahadori M.B. et al. Determination of phenolics composition, antioxidant activity, and therapeutic potential of Golden marguerite (Cota tinctoria). (2021) Journal of Food Measurement and Characterization, 15 (4), pp. 3314 -3322. DOI: 10.1007/s11694-021-00886-x
[1]. The Plantlist. A working list of all plant species. [Электронный ресурс]. Режим доступа: http://www.theplantlist.org (дата обращения: 23.11.2022).
[2]. Овеснов С.А. и др. Иллюстрированный определитель растений Пермского края. Пермь.: Кн. мир, 2007. 743 с.
[3]. Kolosova V., Pashkova T., Muslimov M., Soukand R. Historical Review of Ethnopharmacology in Karelia (1850s-2020s): Herbs and healers // Journal of Ethnopharmacology. 2022. Volume 282. 114565. https://doi.org/10.1016/j.jep.2021.114565.
[4]. Ruyvaran M. et al. Traditional and complementary medicines usage and associated factors in gastrointestinal outpatients in Shiraz, Iran: a cross-sectional survey // Advances in Integrative Medicine. 2021.Volume 8, Issue 4. P. 285-291. https://doi.org/10.1016/j.aimed.2020.09.004.
[5]. Erik I. et al. Antimicrobial and lipase inhibition of essential oil and solvent extracts of Cota tinctoria var. tinctoria and characterization of the essential oil // Turkish Journal of Chemistry, 2022. Volume 46 (4). P. 1234-1244. DOI: 10.55730/1300-0527.3430
[6]. Shamloo S. et al. Cytotoxic effect of hydroalcoholic extract of cota tinctoria (L.) j.gay on AGS and Hep-G2 cancer cell lines [Efecto citotóxico del extracto hidroalcohólico de cota tinctoria (L.) j. gay sobre líneas celulares de cáncer AGS y Hep-G2] // Boletin Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales y Aromaticas, 2022. Volume 21 (1). P. 108-122. DOI: 10.37360/BLACPMA.22.21.1.07.
[7]. Bahadori M.B. et al. Determination of phenolics composition, antioxidant activity, and therapeutic
E-ISSN 2686-6838
[8]. Kasyanov Z.V., Nepogodina E.A., Bukanova E.V., Starikova A.N. Phytochemical analysis of Anthemis tinctoria's herb. Journal of scientific articles "Health and education in the XXI century." 2018. Volume 20. №3. 102106. doi: http://dx.doi.org/10.26787/nydha-2226-7425-2018-20-3. (in Russ.)
[9]. Papaioannou P. et al. Phenolic compounds with antioxidant activity from Anthemis tinctoria L. (Asteraceae). (2007) Zeitschrift fur Naturforschung - Section C Journal of Biosciences, 62 (5-6), pp. 326 - 330. DOI: 10.1515/znc-2007-5-603
[10]. Blinova O.L., Gileva A.A., Hlebnikov A.V., Belonogova V.D., Turyshev A.Y. Bevelopment of a method for quantitative determination of the amount of flavonoids in Tripleurospermum inodorum's flowers. Medical & pharmaceutical journal "Pulse". 2021. Vol.23(6). pp. 157166. https://doi: 10.26787/nydha-2686-6838-2021-23-6-157-166. (in Russ.)
[11]. State Pharmacopeia of Russian Federation 14th edition. Volume 1. Moscow, 2018. pp. 276-288. (in Russ.)
[12]. Sannikova E.G., Popova O.I., Frolova O.O., Airapetova A.U. Determination of flavonoids of willow triandra (Salix triandra l.), growing in the North Caucasus. Pharmacy & Pharmacology. 2016. Volume 3. pp. 56-67. DOI: 10.19163/2307-9266-2016-4-3-56-67
potential of Golden marguerite (Cota tinctoria) // Journal of Food Measurement and Characterization, 2021. Volume 15 (4). P. 3314 - 3322. DOI: 10.1007/s11694-021 -00886-x
[8]. Касьянов З.В., Непогодина Е.А., Буканова Е.В., Старикова А.Н. Фитохимический анализ травы пупавки красильной // Журнал научных статей «Здоровье и образование в XXI веке». 2018. Т.20, №3. С. 102-106.
[9]. Papaioannou P. et al. Phenolic compounds with antioxidant activity from Anthemis tinctoria L. (Asteraceae) // Zeitschrift fur Naturforschung - Section C Journal of Biosciences. 2007. Volume 62 (5-6), P. 326-330. DOI: 10.1515/znc-2007-5-603
[10]. Блинова О.Л., Гилева А.А., Хлебников A.B., Белоногова В.Д., Турышев А.Ю. Разработка методики количественного определения суммы флавоноидов в трехребернике непахучем цветках // Медико-фармацевтический журнал «Пульс». 2021. Т. 23, №6. С. 157-166. https://doi: 10.26787/nydha-2686-6838-2021-23-6-157-166.
[11]. Государственная фармакопея Российской Федерации. Том 1. М., 2018. С. 276-288.
[12]. Санникова Е.Г., Попова О.И., Фролова О.О., Айрапетова А.Ю. Изучение флавоноидов ивы трехтычинковой (Salix triandra l.), произрастающей на Северном Кавказе // Фармакология и фармация. 2016. № 3. С. 56-67. DOI: 10.19163/2307-9266-20164-3-56-67
Contribution of authors. Kasyanov Z.V. - material collection, phytochemical analysis, literature review, text writing, Nepogodina E.A. - data collection, phytochemical analysis, Mashchenko P.S. - data collection
Conflict of Interest Statement. The authors declare no conflict of interest.
Kasyanov Z.V. - SPIN ID: 3227-8183; ORCID ID: 0000-0002-9758-3649
Nepogodina E.A. - SPIN ID: 4132-6721; ORCID ID: 0000-0002-0572-8215
Mashchenko P.S. - SPIN ID: 2785-9183; ORCID ID: 0000-0002-2259-7659
For citation: Kasyanov Z.V., Nepogodina E.A., Mashchenko P.S. ELABORATION AND VALIDATION OF A SPECTROPHOTOMETRY TECHNIQUE FOR ESTIMATION OF THE TOTAL FLAVONOIDS IN ANTHEMIS TINCTORIA HERB. // Medical & pharmaceutical journal "Pulse". - 2022;24(12):78-83. http://dx.doi.org//10.26787/nydha-2686-6838-2022-24-12-78-83.
Вклад авторов. Касьянов З.В. - сбор материала, фитохимический анализ, обзор литературы, написание текста,
Непогодина Е.А. - сбор данных, фитохимический анализ, Мащенко П.С. - сбор данных
Заявление о конфликте интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Касьянов З.В. - SPIN ID: 3227-8183; ORCID ID: 0000-0002-9758-3649
Непогодина Е.А. - SPIN ID: 4132-6721; ORCID ID: 0000-0002-0572-8215
Мащенко П.С. - SPIN ID: 2785-9183; ORCID ID: 0000-0002-2259-7659
Для цитирования: Касьянов З.В., Непогодина Е.А., Мащенко П.С. РАЗРАБОТКА И ВАЛИДАЦИЯ СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОЙ МЕТОДИКИ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ФЛАВОНОИДОВ В ПУПАВКИ КРАСИЛЬНОЙ ТРАВЕ // Медико-фармацевтический журнал "Пульс". 2022;24(12):78-83. http://dx.doi.org//10.26787/nydha-2686-6838-2022-24-12-78-83.
