CC BY
51
58
Евразийский Союз Ученых (ЕСУ) # 8 (17), 2015 | ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ НАУКИ
ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ НАУКИ
РАЗРАБОТКА И ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИКИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОЛИФЕНОЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ В КОРИЧНИКЕ КИТАЙСКОМ
Ненелева Елена Викторовна
Соискатель ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М.Сеченова
Евдокимова Ольга Владимировна
Доктор фармацевтических наук, доцент ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет
имени И.М.Сеченова
DEVELOPMENT AND VALIDATION OF METHODS OF QUANTITATIVE DETERMINATION OF POLYPHENOLIC COMPOUNDS IN THE CHINESE CINNAMON TREE
Neneleva Elena, aspirant of I.M.Sechenov First Moscow State Medical University
Evdokimova Olga, doctor of pharmaceutical science, associate professor of I.M.Sechenov First Moscow State Medical University
АННОТАЦИЯ
Целью данной работы являлась разработка и валидация методики количественного определения полифенольных соединений в коре коричника китайского.
Материалы и методы исследования. Объектами исследования служили промышленные серии коры коричника (корицы). Определение количественного содержания биологически активных веществ проводили спектрофотометрическим методом.
Результаты. На основании полученных данных подобраны оптимальные условия и предложена методика определения суммы полифенольных соединений с использованием в качестве стандартного образца (+)-катехин. На основании полученных результатов данную методику можно считать прошедшей валидацию. Анализ предлагаемой методикой промышленных партий сырья показал, что содержание суммы полифенольных соединений в пересчете на (+)-катехин колеблется от 56,99 до 65,04%. Это позволило предложить норму содержания биологически активных веществ не менее 50%.
Выводы. Разработана и валидирована методика количественного содержания суммы полифенольных соединений в пересчете на (+)-катехин в Коричника китайского коре. Предложена норма содержания биологически активных веществ в Коричника китайского коре для включения в нормативную документацию на сырье.
ABSTRACT
The aim of this work was the development and validation of methods of quantitative determination of polyphenolic compounds in the bark of the Chinese cinnamon tree.
Materials and methods the study. The objects of study have served the industrial series of the bark of the cinnamon tree (cinnamon). Determination of quantitative content of biologically active substances was performed by a spectrophotometric method.
Results. On the basis of obtained results the optimal conditions and methods for determining the amount ofpolyphenolic compounds using as a standard sample of (+)-catechin. On the basis of the results, this method can be considered as a last validation. Analysis of the proposed methodology of industrial batches of raw materials showed that the total content of polyphenolic compounds in terms of (+)-catechin ranges from 56,99 to 65,04%. This allows to propose a rule the content of biologically active substances at least 50%.
^nclm^m. Developed and validated method for the quantitative content of the sum f of polyphenolic compounds in terms of (+)-catechin in the Chinese cinnamon tree bark. The proposed norm of the maintenance of biologically active substances in the Chinese cinnamon tree bark for inclusion in regulatory documentation for raw materials.
Ключевые слова: коричник китайский; кора корицы; количественное определение, полифенолы, (+)-катехин.
Keywords: Chinese cassia; cassia bark; quantification, polyphenols, (+)-catechin
Введение. Коричник китайский (Cinnamomum cassia (L.) C. Presl) широко используются в качестве пищевых растений (пряностей) в различных странах. Монографии на кору коричника китайского представлены в ведущих зарубежных фармакопеях [3, с.81]. Поиск новых источников лекарственного растительного сырья для расширения отечественной номенклатуры лекарственных средств продолжает быть актуальным. Ранее проведенные нами исследования позволили установить, что фенольные соединений коры C.cassia представляют значительный интерес для дальнейшего изучения и использования в отечественной медицине как источников ценных биологически активных веществ [4, с.19-21]. По литературным данным
кора коричника китайского содержит до 42% фенольных соединений [7, с.509-522]. Нами предлагается методика определения суммы полифенольных соединений методом спектрофотомерии с использованием в качестве стандартного образца (+)-катехин. Преимущество использования спектрофотометрического метода со стандартным образцом обусловлено возможностью оценить содержание полифенолов, обладающих максимумом поглощения при длине 270-280 нм [6, с.55-60].
Целью данной работы являлась разработка и валидация методики количественного содержания полифенольных соединений в Коричника китайского коре.
Евразийский Союз Ученых (ЕСУ) # 8 (17), 2015 | ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ НАУКИ
59
Материалы и методы исследования. Объекты исследования - промышленные серии коры коричника (корицы), соответствующие требованиям ГОСТ 29049-91 "Пряности. Корица. Технические условия".
В основу методики количественного определения положен метод прямой спектрофотометрии [6, с.55-60]. При разработке методики количественной оценки полифенольных соединений был изучен спектр поглощения спирто-водного извлечения из Коричника китайского коры в сравнении с УФ-спектром (+)-катехина. Согласно полученным данным, максимум поглощения исследуемого извлечения находится при длине волны 270-290 нм и практически совпадает с максимумом (+)-катехин. Это позволяет сделать вывод о том, что характер кривой поглощения извлечения из Коричника китайского коры определяется в основном полифенольными соединениями, и использовать при анализе длину волны 279 нм для спектрофотометрического определения суммы полифенольных соединений в пересчете на (+)-катехин.
Результаты. При разработке методики количественного определения суммы полифенольных соединений изучены следующие условия: измельченность сырья, характера экстрагента, соотношение сырья и экстрагента, продолжительности экстракции.
Спиртовой раствор (+)-катехина подкисляли для подавления ионизации фенольных гидроксилов [6, с.55-60].
На основании полученных результатов (Таблица 1) подобраны оптимальные условия: измельченность сырья - 1 мм; экстрагент - спирт этиловый 50 %; соотношение сырья и экстрагента - 1:100; время экстракции - 60 мин. Расчет содержания суммы полифенольных соединений проводили в пересчете на (+)-катехин по его удельному показателю поглощения, равному 144 [6, с.55-60]. Описанные выше условия позволили разработать методику количественного определения суммы полифенольных соединений.
Валидацию методики проводили по следующим показателям: линейность, повторяемость, внутрилабораторная воспроизводимость и правильность [1, с. 14-17; 2, с.50-53; 5, с.1-48].
Определение линейности проводили на 5 уровнях концентраций гиперозида - 20%, 60%, 100%, 140%, 200%, от нормируемого значения. Значение оптической плотности рассчитывалось как среднее из трех измерений. Критерием приемлемости линейности являлся коэффициент корреляции и если его величина близка единице, то совокупность данных можно описать прямой линией. Величина коэффициента корреляции должен быть не менее 0,995. Коэффициент корреляции в эксперименте составил 0,9973.
Таблица 1.
Результаты определения влияния условий экстракции на выход полифенольных соединений _________________________из Коричника китайского коры_______________________
Условия экстракции Содержание суммы полифенольных соединений в пересчете на (+)-катехин, %
Размер частиц сырья, мм
5-7 55,24
1-2 65,04
Концентрация этанола, %
40 63,13
50 65,04
70 64,59
96 54,87
Соотношение сырья и экстрагента
1:66 61,86
1:100 65,04
1:200 62,99
Время экстракции, мин
30 62,02
60 65,04
90 64,98
120 63,48
Повторяемость методики определяли на одном образце сырья в 6 повторностях в течение короткого промежутка времени с использованием одних и тех же реактивов, и оборудования. Критерий приемлемости выражался величиной относительного стандартного отклонения, которое не должно превышать 10 %. Он составил 1,05%, что свидетельствует о прецизионности методики в условиях повторяемости.
Определение внутрилабораторной воспроизводимости методики проводили 2 инженера-химика на 3 образцах в трех повторностях. Критерий приемлемости выражался величиной относительного стандартного отклонения, которое не должно было превышать 15 %. Он составил 1,62 %, что указывает на прецизионности методики в условиях воспроизводимости.
Правильность методики устанавливали путем измерения количественного содержания суммы полифе-
нольных соединений в пересчете на (+)-катехин в растворах, полученных путем добавления необходимого количества стандарта к исследуемому раствору для концентраций 120 %, 150 %, 175 %, 200 % (четыре уровня). Критерием приемлемости являлся средний % восстановления при использовании растворов концентраций 120 %, 150 %, 175 %, 200 % скорректированный на 100 % и его средняя величина должна находиться в следующих пределах 100+5 %. Показано, что % восстановления находился в пределах от 98,95% до 101,61%, и его средняя величина составила - 100,41%.
На основании полученных результатов данную методику можно считать прошедшей валидацию.
В ходе исследований установлено, что методика легко воспроизводима, доступна, занимает минимум рабочего времени, не требует дорогостоящих реактивов.
60
Евразийский Союз Ученых (ЕСУ) # 8 (17), 2015 | ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ НАУКИ
Она позволяет объективно оценивать качество лекарственного растительного сырья коричника китайского, используемое для получения лекарственных препаратов, содержащих водорастворимые вещества. Анализ предлагаемой методикой промышленных партий сырья показал, что содержание суммы полифенольных соединений в пересчете на (+)-катехин колеблется от 56,99 до 65,04% (Таблица 2). Это позволяет предложить норму содержания биологически активных веществ не менее 50%.
Выводы. Разработана методика количественного содержания суммы полифенольных соединений в пересчете на (+)-катехин в Коричника китайского коре. Установлены параметры линейности, повторяемости, воспроизводимости и правильности разработанной методики. Предложена норма содержания биологически активных веществ в Коричника китайского коре для включения в нормативную документацию на сырье.
Таблица 2
Результаты определения содержания полифенольных соединений в Коричника китайского коре ____________________________(среднее из 6 определений)_________________________
Образец Коричника китайского коры Содержание суммы полифенольных соединений в пересчете на (+)-катехин, %
Коричника кора цельная, ООО «ПК «МЭТР», 2012 г. 62,88
Коричника кора цельная, ООО «Здрава Краса», 2012 г. 58,25
Коричника кора цельная, ООО «Здрава Краса», 2013 г. 56,99
Коричника кора цельная, «Kota'nyi», 2014 г. 65,05
Среднее значение 60,79
Список литературы
1. Евдокимова О.В. Валидация методики количественного определения суммы флавоноидов в столбиках с рыльцами кукурузы. //Фармация. -2008. №7. -С. 14-17.
2. Евдокимова О.В. Разработка и валидация методики количественного определения суммы флавоноидов в траве пастушьей сумки// Журнал "Традиционная медицина". - 2011. - №1 (24). - С.50-53.
3. Ненелева Е.В. Представители рода Cinnamomum L. как источник лекарственного растительного сырья. // Сборник тезисов материалов Первой Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых «Проблемы разработки новых лекарственных средств», Москва, 2013. - С.81.
4. Ненелева Е.В., Евдокимова О.В. Кора корицы: анализ фенольных соединений// Фармация. - №7.2014. - С.19-21.
5. Руководство по валидации методик анализа лекарственных средств/ Под ред. Н.В.Юргеля, А.Л.Мла-денцева, А.В.Бурдейна и др. Разработчики: В.Л.Ба-гирова, А.И.Гризодуб, Т.Х.Чибиляев и др. - М., 2007. - 48 с.
6. Сокольская Т.А., Сайбель О.Л., Даргаева Т.Д. и др. Сабельник болотный - перспективный источник получения лекарственных средств, рекомендуемых при заболеваниях опорно-двигательного аппарата. - М.: Серебряные нити, 2008. - С.55-60.
7. Wang HF, Wang YK, Yih KH. DPPH free-radical scavenging ability, total phenolic content, and chemical composition analysis of forty-five kinds of essential oils.// J Cosmet Sci. - 2008. - 59. - Р. 509-522.
ИССЛЕДОВАНИЕ ЭЛЕМЕНТНОГО СОСТАВА ФЕРГАНСКОГО ВИДА HERBA ORIGANI VULGARIS (ДУШИЦА ОБЫКНОВЕННАЯ)
Игамбердиева Паризод Кадировна
Зав. кафедрой «Биофизики и биохимии» ФФТМА, Узбекистан, г. Фергана
Саидахмадова Наргиза Гайратжонкизи
Студентка Ферганского 2-медицинского коледжа, г. Фергана
THE ELEMENT COMPOSITION FERGHANA KIND HERBA ORIGANI VULGARIS (OREGANO)
Igamberdieva Parizod Kadirovna, Head of the Department "Biophysics and Biochemistry"of Ferghana branch of Tashkent medical academy, Uzbekistan, Fergana
Saidahmadova Nargiza Gayratzhonkizi, Student of Fergana 2- Medical koleg, Ferghana АННОТАЦИЯ
Нейтронно-активационным методом было определено 19 макро- и микроэлементов в органах душицы обыкновенной (Herba оrigani vulgaris). Отмечено, большее накопление таких макро- и микроэлементов, как K, Ca, Co, Fe, Cu, Zn, Mg, Mn и это позволяет рекомендовать Ферганские виды душицы к промышленной заготовке и медицинскому использованию сырья.
Ключевые слова: макро- и микроэлементы, душица обыкновенная АNNOTATЮN
Neutron activation analysis was determined 19 macro- and microelements in the organs of Origanum vulgare (Herba origani vulgaris). It is noted, greater accumulation of macro- and micronutrients such as K, Ca, Co, Fe, Cu, Zn, Mg, Mn and it allows to recommend Ferghana Herba origani vulgaris species to the industrial preparation and medicinal use materials. Keywords: macro- and microelements, Herba origani vulgaris
