Разработка и валидация методик количественного определения ацикловира и бутаминофена в комбинированной противогерпетической мази Актовир® Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ ХИМИЯ

Л.В. Дьячкова1, Ю.Г. Белковская1, Т.В. Трухачева1, А.И. Жебентяев2 РАЗРАБОТКА И ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИК КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЦИКЛОВИРА И БУТАМИНОФЕНА В КОМБИНИРОВАННОЙ ПРОТИВОГЕРПЕТИЧЕСКОЙ МАЗИ АКТОВИР®

1РУП «Белмедпрепараты», г. Минск 2Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет

Разработаны методики количественного определения ацикловира и бутами-нофена в комбинированной противогерпетической мази методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Определены условия подготовки пробы для хроматографирования: выбраны экстрагенты (0,1 Мраствор натрия гидроксида для ацикловира и метанол для бу-таминофена); установлены временной и температурный режимы извлечения и количество проводимых экстракций.

Методики определения ацикловира и бутаминофена в мази Актовир® методом ВЭЖХ были валидированы. В результате проведенных валидационных испытаний доказана пригодность хроматографической системы, исследованы и подтверждены избирательность, линейность, сходимость, воспроизводимость и правильность методик.

Изложенные методики стандартизации включены в фармакопейную статью и используются для контроля качества промышленных серий лекарственного средства на РУП «Белмедпрепараты».

Ключевые слова: высокоэффективная жидкостная хроматография, ацикловир, бутаминофен, сопутствующие примеси, мазь, пробоподготовка, валидация.

ВВЕДЕНИЕ

Мазь Актовир® - новое комбинированное противовирусное лекарственное средство (ЛС) для наружного и местного применения. Активными веществами мази Актовир® являются ацикловир и бутаминофен. Ацикловир - синтетический аналог пуринового нуклеозида дезоксигуанидина (компонента ДНК). Бутаминофен является антиоксидантом фенольной природы и обладает противовирусной активностью. В экспериментальных исследованиях был установлен синергизм противовирусной активности ацикловира и бутаминофена при их совместном использовании [1].

Мазь Актовир® предназначена для применения при герпетических заболеваниях кожи и слизистых оболочек, в особенности у пациентов с хроническим рецидивирующим течением герпесвирусной инфекции, при резистентности к монотерапии ацикловиром [2].

Показатели качества ЛС регламентирует Государственная фармакопея Республики Беларусь [3] и ТКП 123-2008

(02040) [4]. Подлинность, количественное определение и сопутствующие примеси - разделы, необходимые для включения в фармакопейные статьи на мягкие лекарственные средства для наружного применения.

В настоящее время существуют утвержденные фармакопейные статьи на мазь ацикловира 5% и мазь бутаминофена 2% для наружного применения. Для количественного определения действующих веществ в этих мазях применяют методики, предусматривающие использование хроматографических и спектрофотометрических методов испытаний [3].

Для анализа 5%-ой мази ацикловира разработана методика определения действующего вещества методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Для экстракции ацикловира из мази навеску ЛС выдерживают на водяной бане при температуре 60°С в растворе натрия гидроксида в течение 15 мин до растворения, далее раствор разводят водой до необходимой концентрации. Затем проводят хроматографирование на жидкостном

хроматографе со спектрофотометрическим детектором.

При количественном определении бутаминофена в монопрепарате (мазь бута-минофена 2%) применяют метод абсорбционной спектрофотометрии в ультрафиолетовой (УФ) области. Действующее вещество экстрагируют, нагревая навеску мази с 96% спиртом этиловым. Затем измеряют оптическую плотность при длине волны 28G нм в кювете с толщиной слоя 1G мм, используя в качестве раствора сравнения 96% спирт этиловый. Аналогичным образом проводят пробоподготовку для определения суммы сопутствующих примесей бутаминофена методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) с применением пластинки со слоем силикагеля (Kieselgel 6G фирмы «Merk», Германия, кат. №1.G5553) [5]. Для количественного определения бутаминофена и его примесей в монопрепарате возможно также использование метода ВЭЖХ [6].

Целью настоящей работы являлась разработка и валидация методик количественного определения ацикловира и бу-таминофена в комбинированной противо-герпетической мази методом ВЭЖХ.

При разработке методик количественного определения действующих веществ (ДВ) было необходимо разработать процедуру пробоподготовки, обеспечивающую их полное извлечение из пробы и позволяющую надежно разделить активные компоненты мази Актовир® (ацикловир и бу-таминофен) в ходе количественной оценки их содержания в ЛС.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Объекты исследования. Опытные образцы комбинированной мази были наработаны согласно технологической схеме, описанной ранее [7]. При производстве опытных образцов мази использовали следующие компоненты: в качестве ДВ -ацикловир (НД РБ 0357С-2010) и бутаминофен (ФСП РБ G595-1G); в качестве компонентов мазевой основы - вазелин белый (ГФ РБ, том 3, С. 2G4), парафин жидкий (ГФ РБ, том 2, С. 229), парафин твердый (ГФ РБ, том 3, С. 472).

Оборудование. Спектральные свойства растворов бутаминофена (G,G2 мг/ мл в пробе) изучали с использованием спектрофотометра Lambda 25 UV/VIS

Spectrometer (фирма «Perkin Elmer», Германия) в области от 23G нм до 32G нм.

Для количественного определения ДВ в мази методом ВЭЖХ применяли:

1. Жидкостный хроматограф «Agilent 12GG Series» со спектрофотометрическим детектором «Agilent Gl314В» с диапазоном длин волн от 19G до 7GG нм; с четырехканальным насосом «Agilent G1311A» и автосамплером «Agilent G1367В». Диапазон объема ввода образца от 5 до 1GG мкм с погрешностью G,2%;

2. Жидкостный хроматограф «Shimadzu UFLC» (Япония) со спектрофотометрическим детектором на диодной матрице модели SPD - M2GA с диапазоном длин волн от 19G до 8GG нм. Система оснащена двумя двухплунжерными насосами «LC - 2GAD XR» и автосамплером «SIL - 2GAC XR». Диапазон объема ввода образца от G,1 до 5G мкм с погрешностью G,3%.

Пробоподготовка испытуемых растворов. Для экстрагирования ДВ из мази использовали G,1 М раствор натрия гидроксида, 96% спирт этиловый, гексан, ацетонитрил для хроматографии, метанол [8].

Приготовление стандартных растворов. Для приготовления рабочего стандартного образца (РСО) ацикловира фармацевтическую субстанцию ацикловира (НД РБ 0357С-2010) растворяли в G,G2 М растворе натрия гидроксида (концентрация G,1 мг/мл).

Для подтверждения пригодности хроматографической системы и определения сопутствующих примесей ацикловира готовили раствор РСО ацикловира и гуанина в G,G2 М растворе натрия гидроксида. Концентрация ацикловира в растворе - 1,G мкг/ мл, гуанина - G,7 мкг/мл.

Для приготовления РСО бутаминофе-на расчетное количество субстанции бута-минофена (ФСП РБ 0595-10) растворяли в соответствующем растворителе (96% спирт этиловый, гексан или метанол) до конечной концентрации G,G2 мг/мл для спектрофотометрического анализа и до G,1 мг/мл для анализа методом ВЭЖХ.

Для определения сопутствующих примесей бутаминофена готовили раствор сравнения. Субстанцию бутаминофена растворяли в метаноле (концентрация

0,001 мг/мл).

Валидация. Методики количественного определения содержания ацикловира

и бутаминофена в мази Актовир® методом ВЭЖХ были исследованы по следующим валидационным характеристикам: избирательность, линейность, прецизионность (сходимость и внутрилабораторная воспроизводимость) и правильность [3, 8-10]. Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием программы Microsoft Office Excel.

Для исследования избирательности (влияния плацебо) анализировали испытуемый раствор ЛС и раствор, приготовленный из вспомогательных веществ мази без субстанции ацикловира («плацебо 1») или без субстанции бутаминофена («плацебо 2»). Критерий приемлемости: на хроматограммах раствора «плацебо» должны отсутствовать пики со временем удерживания, совпадающим со временами удерживания пиков ацикловира или бутами-нофена на хроматограммах испытуемого раствора.

Определение линейности проводили на 7 уровнях концентрации: 7G%, 8G%, 90%, 100%, 110%, 120%, 130% от количества ДВ в испытуемом растворе (согласно методике количественного определения), принятого за 100% (0,1 мг/мл в пробе). Для оценки линейности методики строили график зависимости площади пика ацикловира или бутаминофена от содержания анализируемого вещества. Выполняли статистическую обработку результатов испытаний методом наименьших квадратов. Критерием приемлемости полученной линейной зависимости являются коэффициент корреляции (не менее G,99) и точка пересечения с осью ординат (не более 2,0% отклика номинальной концентрации).

Прецизионность методики оценивали по характеристикам сходимости и внутри-лабораторной воспроизводимости. Сходимость оценивали по результатам 6 параллельных анализов одной серии ЛС Акто-вир®, мазь для наружного и местного применения, выполненных одним аналитиком в один день. Внутрилабораторную воспроизводимость оценивали по результатам 12 параллельных анализов одной серии ЛС, проводимых двумя аналитиками в разные дни, на различных хроматографических колонках. В качестве результатов испытаний, выполненных одним из аналитиков, использовали результаты, полученные при определении сходимости. Критерий приемлемости прецизионности выражали

величиной относительного стандартного отклонения среднего значения (Я^Б, %): при оценке сходимости для 6 определений

- не более 2,0%; при оценке внутрилабо-раторной прецизионности для 12 определений, выполненных двумя химиками за 2 дня, - не более 3,0%.

Для исследования правильности готовили, согласно методике, испытуемые растворы из модельных образцов мазей, содержащих 70%, 100% и 130% номинального содержания ацикловира или бутами-нофена (0,1 мг/мл в пробе). Рассчитывали процент восстановления как отношение полученного по данной методике количества ДВ к известному добавленному значению. Процент восстановления, полученный при анализе растворов заданных концентраций, скорректированный на 100%, должен находиться в пределах от 98,0% до 102%.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Определение ацикловира. При разработке методики количественного определения ацикловира методом ВЭЖХ, прежде всего, было необходимо разработать процедуру пробоподготовки, позволяющую максимально извлечь ДВ из навески мази. Углеводородная мазевая основа комбинированного мягкого ЛС, в отличие от гидрофильной основы мази ацикловира 5%, затрудняет экстракцию действующих веществ из мази. Поэтому важно подобрать экстрагент, его количество, температурный и временной режимы извлечения. Субстанция ацикловира хорошо растворима в растворах минеральных щелочей. В связи с этим экстракцию ацикловира из мази проводили 0,1 М раствором натрия гидроксида. С этой целью 1,0 г ЛС помещали в коническую колбу вместимостью 50 мл, прибавляли 20 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида и выдерживали в водяной бане с температурой (60 ± 5)°С в течение 20 мин при перемешивании. Содержимое колбы охлаждали на льду до температуры (20 ± 5)°С и декантировали в мерную колбу вместимостью 250 мл через двойной бумажный складчатый фильтр. Извлечение описанным выше способом повторяли еще два раза, используя в каждой экстракции 15 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида. Доводили объем раствора в мерной колбе до метки водой для хроматографии.

Трехкратная экстракция с расплавлением и перемешиванием углеводородной мазевой основы в течение общего времени 60 минут обеспечила полное извлечение ацикловира из мази. Это было подтверждено при валидации методики.

Хроматографирование проводили в следующих условиях: колонка из нержавеющей стали размером 250 х 4,6 мм,

1.Т. Вакег С18, заполненная силикагелем октадецилсилильным эндкепированным для хроматографии, с размером частиц 5 мкм; подвижная фаза: кислота уксусная ледяная - триэтиламин - вода для хроматографии (0,25 : 0,25 : 99,5); скорость подвижной фазы: 1,5 мл/мин; детектирование при длине волны: 254 нм; температура колонки: 35°С; время хроматографирования: в течение 1,5 времени удерживания пика ацикловира. Методика проведения испытания основана на методике, описанной в монографии Фармакопеи США “Мазь ацикловира”. С целью улучшения формы пика ацикловира (уменьшение фактора асимметрии) в подвижную фазу дополнительно ввели триэтиламин.

В ходе исследования доказана пригодность хроматографической системы: эффективность хроматографической колон-

ки, рассчитанная по пику ацикловира из хроматограмм раствора РСО ацикловира, составляла не менее 2000 теоретических тарелок; ЯББ, %, рассчитанное для пика ацикловира из хроматограмм раствора РСО ацикловира, - не более 2,0%; фактор асимметрии пика, рассчитанный по пику ацикловира из хроматограмм раствора РСО ацикловира, - не более 2,0; разрешение пиков ацикловира и гуанина, рассчитанное из хроматограмм раствора РСО ацикловира и гуанина, - не менее 5,0 (рисунки 1, 3).

На рисунке 2 представлена типичная хроматограмма испытуемого раствора, полученного из навески мази по описанной выше методике. На хроматограмме испытуемого раствора время удерживания основного пика (рисунок 2) соответствует времени удерживания пика ацикловира на хроматограмме РСО ацикловира (рисунок 1). Данные условия были включены в фармакопейную статью (ФСП) для идентификации ацикловира в мази (показатель качества «Подлинность»).

Содержание примеси гуанина в ЛС не превышало 0,7%, суммы прочих примесей ацикловира (кроме гуанина) - не более 1,0%.

Рисунок 1 - Типичная хроматограмма раствора РСО ацикловира (время удерживания ацикловира - 8,91 мин)

Рисунок 2 - Типичная хроматограмма испытуемого раствора (время удерживания ацикловира - 8,83 мин)

Рисунок 3 - Типичная хроматограмма раствора РСО ацикловира и гуанина

При исследовании избирательности методики количественного определения ацикловира установлено, что на хроматограммах раствора «плацебо 1» отсутствуют пики со временем удерживания, совпадающим со временем удерживания пика ацикловира на хроматограмме испытуемого раствора (рисунок 2).

Была подтверждена линейность разрабатываемой методики. Линейная зависимость площади пика ацикловира от концентрации ацикловира в испытуемых растворах описывается следующим уравнением: у = 34977х - 60. Коэффициент корреляции составил 0,9997, точка пересечения с осью ординат - 1,8% отклика номинальной концентрации

ЯБО, при оценке сходимости для 6 определений, составляет 1,75%, при оценке внутрилабораторной воспроизводимости для 12 определений, - 1,76%. Результаты статистической обработки данных анализа приведены в таблице 1.

При исследовании правильности методики количественного определения ацикловира в ЛС установлен процент восстановления, который находится в пределах 99,1% - 99,4% (таблица 2).

Определение бутаминофена. При

разработке теста «Количественное определение. Бутаминофен» в качестве экстрагентов для извлечения бутаминофена из мази были исследованы 96% спирт этиловый, гексан, ацетонитрил для хроматографии, метанол.

Первоначально для определения количественного содержания бутаминофена в комбинированной мази планировали применять метод спектрофотометрии в УФ-области, а для определения его сопутствующих примесей - метод ТСХ. Однако для определения бутаминофена в мази Акто-вир® 96% спирт этиловый как растворитель оказался неподходящим, так как ацикловир в спирте (концентрация 0,05 мг/мл в пробе) поглощает в том же диапазоне длин волн, в котором проводится определение содержания бутаминофена в ЛС (рисунок 4). Поэтому для извлечения бутаминофена из мази было предложено использовать гексан. Экстрагент был выбран с целью разделения ацикловира и бутаминофена с учетом различия их растворимости: бутаминофен умеренно растворим в гексане, ацикловир

- практически нерастворим (что наглядно видно из спектра плацебо мази) (рисунок 5).

Таблица 1 - Статистическая обработка результатов анализа ацикловира в условиях

воспроизводимости (Р = 0,95; п = 12)

Х ср 82 8 Я8Б, %

23,66 0,1732 0,4162 1,76

Таблица 2 - Исследование правильности методики количественного определения ацикловира

Модельные раство] ры мази Раствор РСО

70% 100% 130%

Средняя масса навески ацикловира ш. (т0), мг 17,58 25,07 32,89 50,21

Средняя площадь пика ацикловира на хроматограммах испытуемого раствора (раствора РСО) 8. (80) 2348,4 3352,0 4385,4 3376,4

Процент восстановления, (98,0 - 102,0) 99,3 99,4 99,1

Метод ТСХ для определения сопутствующих примесей бутаминофена в комбинированной мази также оказался неприемлем.

В связи с этим, для контроля качества мази Актовир® было необходимо разработать методику, позволяющую определять не только количественное содержание бу-таминофена в комбинированной мази, но и его сопутствующие примеси. Для этого использовали метод обращенно-фазовой ВЭЖХ. Подготовка пробы ЛС для проведения испытания заключалась в экстракции бутаминофена из навески мази гексаном. Для удаления осадка ацикловира из испытуемой пробы полученное гексановое извлечение фильтровали через бумажный складчатый фильтр. Фильтрат упаривали под вакуумом при остаточном давлении 2040 мм рт. ст. до полного удаления гексана. Далее остаток растворяли в подвижной фазе (смесь ацетонитрила и воды в соотношении 4:1) и хроматографировали на жидкостном хроматографе со спектрофотометрическим детектором в следующих условиях: колонка из нержавеющей стали размером 250 х 4,6 мм, 1.Т. Вакег С18, заполненная силикагелем октадецилсилильным эндкепиро-ванным для хроматографии, с размером частиц 5 мкм; скорость подвижной фазы: 1,5 мл/мин; детектирование при длине волны:

1 - УФ-спектр поглощения бутаминофена 2 - УФ-спектр поглощения ацикловира

Рисунок 4 - УФ-спектры поглощения бутаминофена и ацикловира в 96 % спирте этиловом

280 нм; время хроматографирования: в течение двух времен удерживания пика бута-минофена. Условия хроматографирования аналогичны условиям, применяемым для определения содержания сопутствующих примесей в субстанции бутаминофена [1].

Данная методика позволила разделить активные вещества и определить содержание бутаминофена в ЛС. Основными недостатками описанной методики являлись сложность пробоподготовки и длительные временные затраты.

С целью снижения трудоемкости процедуры подготовки пробы для хроматографирования, в качестве экстрагента бутаминофена использовали метанол. Его применение позволило исключить из пробоподготовки стадии фильтрования и упаривания под вакуумом, что значительно упростило методику количественной оценки активного вещества и повысило воспроизводимость результатов. Для извлечения бутаминофена из мази около

0,5 г ЛС помещали в коническую колбу вместимостью 50 мл и прибавляли 15 мл метанола. Колбу помещали в водяную баню с температурой (60 ± 1)°С, нагревали и перемешивали в течение 10 мин, после чего охлаждали содержимое при комнатной температуре до полного за-

1 - УФ-спектр поглощения РСО бутаминофена

2 - УФ-спектр поглощения испытуемого раствора

3 - УФ-спектр поглощения раствора плацебо 2 (мазевая основа + ацикловир 2,5%)

Рисунок 5 - УФ-спектры поглощения РСО бутаминофена, испытуемого раствора и раствора «плацебо 2» в гексане

стывания мазевой основы. Надосадочную жидкость декантировали в мерную колбу вместимостью 50 мл. Извлечение описанным выше способом проводили еще два раза, используя в каждом извлечении по 15 мл метанола. Доводили объем объединенных извлечений в мерной колбе метанолом. Далее проводили хроматографирование проб в описанных выше условиях. В ходе работы были установлены параметры пригодности хроматографической системы: эффективность хроматографической колонки, рассчитанная по пику бутаминофена из хроматограмм раствора РСО бутаминофена, составляла не менее 2000 теоретических тарелок; Я8Б,%, рассчитанное для площади пика бутаминофена из хроматограмм раствора РСО бутаминофена, - не более 2,0%; фактор асимметрии пика, рассчитанный по пику бутаминофена из хроматограмм раствора РСО бутаминофена, - не менее

0,7 и не более 1,5 (рисунок 6).

Пик ацикловира, элюирующегося в не-удерживаемом объеме колонки, при проведении дальнейших расчетов не учитывали (рисунок 7). Содержание любой индивидуальной примеси бутаминофена в ЛС не превышало 3,5%, суммы примесей - не более 5,0%.

Идентификацию бутаминофена в мази проводили по совпадению времен удерживания основного пика на хроматограмме

испытуемого раствора (рисунок 7) и пика бутаминофена на хроматограмме раствора РСО бутаминофена (рисунок 6).

Разработанную методику количественного определения бутаминофена в мази валидировали. Избирательность методики доказана соответствием критерию приемлемости (рисунки 7, 8).

Линейная зависимость площади пика бутаминофена от его концентрации в испытуемых пробах описывается уравнением у = 16924х - 29. Коэффциент корреляции составил 0,9994, точка пересечения с осью ординат - 1,7% отклика номинальной концентрации, что подтверждает линейность методики.

Методика исследована в условиях сходимости и внутрилабораторной воспроизводимости. Полученные результаты удовлетворяют критериям приемлемости для данных тестов. ЯББ, рассчитанное для 6 определений количественного содержания бутаминофена в ЛС, составляет 1,85% для 12 определений, выполненных двумя аналитиками за 2 дня - 1,76%. Результаты статистической обработки данных анализа приведены в таблице 3.

Правильность методики подтверждена соответствующими испытаниями. Средний процент восстановления находится в пределах от 98,2 до 101,9 % (таблица 4).

На основании полученных результатов по проведенным тестам подтвержден диа-

тАи 200 ■

175 ' 150 ■ 125 ■ 100 ■ 75 ■ 50 ■ 25 ■ 0 ■

Рисунок 6 - Типичная хроматограмма раствора РСО бутаминофена

Бутаминофен

2,5 5,0 7,5 10,0 12,5 15,0 17,5 20,0

Ш1П

Рисунок 7 - Типичная хроматограмма испытуемого раствора

28

0

Рисунок 8 - Типичная хроматограмма раствора «плацебо 2» (мазевая основа + ацикловир 2,5%)

Таблица 3 - Статистическая обработка результатов анализа бутаминофена в условиях воспроизводимости (Р = 0,95; п = 12)

Х ср S2 S RSD, %

9,35 0,027 0,1642 1,76

Таблица 4 - Исследование правильности методики количественного определения бутаминофена

Модельные растворы мази Раствор РСО

70% 100% 130%

Средняя масса навески бутаминофена ш. (т0), мг 6,46 11,21 12,89 49,81

Средняя площадь пика бутаминофена на хроматограммах испытуемого раствора (раствора РСО) 8. (80) 1144,9 2061,7 2272,1 1798,0

Процент восстановления, % (98,0 - 102,0) 98,2 101,9 98,3

пазон применения валидированных методик количественного определения ацикловира и бутаминофена в мази Актовир®.

Разработанные методики стандартизации включены в ФСП РБ 1520 - 10 Актовир®, мазь для наружного и местного применения, и используются в настоящее время для контроля качества промышленных серий ЛС.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

1. Разработаны методики определения количественного содержания ацикловира, бутаминофена и их сопутствующих примесей в комбинированной противогерпе-тической мази методом ВЭЖХ.

2. Определены условия извлечения ЛВ из мази: выбраны экстрагенты (0,1 М раствор натрия гидроксида для ацикловира и метанол для бутаминофена); установлены временной и температурный режимы извлечения (около 60 °С), позволяющие расплавить углеводородную мазевую основу и экстрагировать ЛВ, а также количество проводимых экстракций (три).

3. Методики количественного опреде-

ления ацикловира и бутаминофена в мази Актовир® методом ВЭЖХ валидированы. В результате проведенных валидационных процедур доказана пригодность хроматографической системы, исследованы избирательность, линейность (коэффициент корреляции - более 0,99 %), сходимость (RSD, % - менее 2%), воспроизводимость (RSD, % - менее 2%) и правильность (98 -102 %) методик.

4. Методики определения ацикловира, бутаминофена и их сопутствующих примесей включены в ФСП РБ 1520 - 10 Актовир®, мазь для наружного и местного применения (разделы «Подлинность», «Количественное определение» и «Сопутствующие примеси»).

SUMMARY

L.V. Diyachkova, Y.H. Belkovskaya, T.V. Trukhachova, A.I. Zhebentyaev DEVELOPMENT AND VALIDATION OF THE METHODS OF ACICLOVIR AND BUTAMINOFEN ASSAY IN COMBINED ANTIHERPETIC OINTMENT ACTOVIR® Convenient HPLC methods of aciclovir

and butaminofen assay in combined antiher-petic ointment are developed.

Sample preparation conditions were determined: extraction reagents (0,1 М solution of sodium hydroxide for aciclovir and methanol for butaminofen); time and temperature regimes of extraction and number of extractions are estimated.

HPLC methods of aciclovir and butaminofen assay in combined antiherpetic ointment are validated. As results of validation experiments the chromatographic system is considered to be suitable, selective, linear, repeatable, reproducible, and accurate.

Analytical methods are included into pharmacopoeia monograph and are used in routine quality control of manufacturing batches of medicinal product on RUE «Belmedpreparaty».

Keywords: HPLC, aciclovir, bu-

taminofen, related impurities, ointment, sample preparation, validation.

ЛИТЕРАТУРА

1. Изучение противовирусной активности сочетаний ацикловира, циклоцити-динмонофосфата и бутаминофена / Т.В. Трухачева [и др.] // Вестник фармации. -2011. - №3 (53). - С. 66 - 72.

2. Лекарственные средства РУП «Бел-медпрепараты»: Справочник / С.В. Шлях-тин [и др.]; под ред. Т.В. Трухачевой. -5-ое изд. - Минск, 2011. - С. 40 - 41.

3. Государственная фармакопея Республики Беларусь: офиц. изд-ние: в 3 т. / Центр экспертиз и испытаний в здравоохранении; под общей ред. Г.В. Годовальни-кова. - Минск: МГПТК полиграфии, 2006.

- Т.1: Общие методы контроля качества лекарственных средств. - 656 с.

4. Фармакопейные статьи. Порядок разработки и утверждения = Фармака-пейныя артыкулы. Парадак распрацоую i зацвярджэння: ТКП 123-2008 (02040) -Введ. 18.02.08. - Минск: Министерство

здравоохранения Республики Беларусь, 2008. - С. 23.

5. Современные отечественные лекарственные средства для этиотропной терапии герпесвирусной инфекции. Сообщение 1. Ацикловир и бутаминофен / Т.В. Трухачева [и др.] // Вестник фармации. -2007. - №1 (35). - С. 53 - 66.

6. Моисеев, Д.В. Жидкостная хроматография производных пиримидина и стандартизация лекарственных средств на их основе: автореф. дис. ... канд. фарм. наук : 15.00.02 / Д.В. Моисеев; Витебский гос. ордена Дружбы народов мед. ун-т. - Витебск, 2007. - 22 с.

7. Состав и технология получения комбинированных мазей противогерпети-ческого действия / Л.В. Дьячкова [и др.] // Вестник фармации. - 2012. - №1 (55). - С. 35-44.

8. Производство лекарственных средств. Валидация методик испытания = Вытвор-часць лекавых сродкау. Валщацыя методык выпрабаванняу: СТБ 1436-2004. - Введ. 01.07.04. - Минск: Госстандарт РБ, 2004. -22 с.

9. Руководство для предприятий фармацевтической промышленности: методические рекомендации / Н.В. Юргель [и др.]

- М.: Изд-во «Спорт и культура - 2000», 2007. - 192 с.

10. Валидация аналитических методик для производителей лекарств: типовое руководство предприятия по производству лек. средств / под ред. В.В. Береговых. -М.: Литтерра, 2008. - 132 с.

Адрес для корреспонденции:

220007, Республика Беларусь,

РУП «Белмедпрепараты», г. Минск, ул. Фабрициуса, 30,

Тел. (017)2203927, факс (017)2203142, e-mail: gls@belmedpreparaty.com.

Дьячкова Л. В.

Поступила 30.05.2012 г.