CC BY
20
Материалы научно-практической конференции «От эпидемиологии к диагностике актуальных инфекций...»
Инфекция и иммунитет
Нуклеотидная последовательность вируса Кокса-ки В5 (КВ5) входит в кластер с изолятами из Китая, выделенными в 2009 г., идентичность составляет 95%. Филогенетический анализ позволяет предположить занос данного типа вируса из Китая.
Молекулярно-эпидемиологический мониторинг энтеровирусов, изолированных в 2011 г. в Иркутской области, позволил получить генетическую характеристику штаммов с их территориальной приуроченностью и повысить эффективность эпидемиологического анализа заболеваемости ЭВИ в регионе. Высокая частота выявления вирусов ECHO 6 показала значительную роль этого варианта в возникновении спорадической заболеваемости в 2011 г. среди населения Иркутской области.
Проведенный молекулярно-генетический анализ свидетельствует, что на территории Иркутской области циркулируют варианты энтеровирусов, как эндемичные для нашей территории (ECHO 6), так и те, происхождение которых связано с заносом из Европы и Азии в разные годы (КВ4, КВ5).
ОЦЕНКАУСТОЙЧИВОСТИ КЛЕТОЧНОЙ АССОЦИАЦИИ ESCHERICHIA COLI КХЛОРИДУ БЕНЗАЛКОНИЯ
П.В. Слукин12, В.Б. Родин1, В.А. Чугунов12, Е.В. Детушева1, Е.Н. Кобзев12
1ФБУН ГНЦприкладной микробиологии и биотехнологии Роспотребнадзора, п. Оболенск, Московская область 2Пущинский государственный естественно-научный институт, г. Пущино, Московская область
В настоящее время существует значительное количество методов оценки чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам (АМП). Большинство из этих методов оценивают действие АМП на планктонные (свободно живущие) клетки. В естественных условиях микроорганизмы чаще всего существуют в форме клеточных ассоциаций (КА), в том числе биопленок (БП). Поэтому в практике необходимы методы оценки действия АМП на КА микроорганизмов различных типов.
В связи с этим целью данного исследования была разработка метода оценки действия АМП на КА, пригодного для практического применения.
Суть предлагаемого метода заключается в том, что КА формируется на плотной питательной среде (ППС) без АМП, при этом возможно получение КА с требуемыми параметрами: количество клеток, поверхностная плотность микроорганизмов, возраст и даже видовой состав. Далее часть выращенной КА переносится на ППС с АМП, путем аппликации бумажным купоном. Использование аппликатора позволяет стандартизовать посевную дозу КА и избежать нарушения пространственной структуры КА. По окончании культивирования проводят визуальную оценку наличия роста микроорганизмов вокруг аппликатора, в случае отсутствия роста делается высев из его смыва на ППС без АМП. Минимальная концентрация, при которой не отмечается видимый рост, считается минимальной подавляющей концентрацией АМП. Минимальная концентрация, при которой отсутствуют микроорганизмы на аппликаторе при смыве, считается минимальной бактерицидной концентрацией АМП.
Данный метод был апробирован при оценке чувствительности КА и планктонных клеток
Escherichia coli АТСС 25922 к широко используемому в практике АМП — бензалкония хлориду (БКХ). Оценка чувствительности планктонных клеток проводилась на ППС стандартным методом (МУК 4.2.1890-04), оценка чувствительности КА — методом, описанным выше. Были подобраны условия, при которых количество и поверхностная плотность микроорганизмов для КА и планктонной формы были равны. При этом устойчивость КА E. coli к БКХ оказалась в три раза выше, чем планктонных клеток.
Таким образом, предложенный нами метод позволил выявить более высокую устойчивость ассоциации клеток E. coli к БКХ.
РАЗРАБОТКА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ СИСТЕМЫ ДЛЯ АНАЛИЗА РОЛИ ЗАМЕН В ПРИРОДНЫХ ВАРИАНТАХ ФАКТОРОВ ПАТОГЕННОСТИ И ВИРУЛЕНТНОСТИ L. MONOCYTOGENES
К.А. Собянин, Р.Р. Адгамов, С.А. Ермолаева
ФГБУ НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи МЗ РФ, Москва
Факультативный внутриклеточный паразит Listeria monocytogenes вызывает листериоз — сапро-нозное инфекционное заболевание человека и животных. Критическим этапом развития инфекции является активная инвазия возбудителя в нормально нефагоцитирующие эукариотические клетки, прежде всего, эпителиальные клетки и гепатоциты. Активная инвазия осуществляется за счет взаимодействия факторов патогенности L. monocytogenes, белков InlA и InlB, с поверхностными эукариотиче-скими рецепторами Е-кадхерином и фактором роста гепатоцитов Met соответственно. Е-кадхерин и Met являются консервативными белками, присутствующими у всех видов млекопитающих, хотя для этих белков наблюдается определенная межвидовая дивергенция. Бактериальные белки InlA и InlB характеризуются природными вариантами, найденными у штаммов L. monocytogenes, выделенных из разных источников. Выявленные замены могут влиять на эффективность взаимодействия InlA и InlB с эу-кариотическими рецепторами.
До настоящего времени исследований по изучению влияния замен в последовательности InlA и InlB на взаимодействие L. monocytogenes с видовыми вариантами рецепторов и, соответственно, на эффективность инвазии возбудителя в клетки разных видов млекопитающих, не проводилось.
Целью данной работы являлась разработка системы, которая позволила бы оценить различия в эффективности инвазии L. monocytogenes в эука-риотические клетки различного происхождения в зависимости от замен в последовательностях ин-терналинов. Для объективной оценки эффективности влияния аминокислотных замен в природных последовательностях inlA и inlB необходимо было получить изогенные варианты L. monocytogenes для каждого варианта. Двенадцать аллельных вариантов интерналина В, и 4 аллельных варианта интер-налина А, отличающихся аминокислотными заменами, были получены в ПЦР на матрице различных штаммов L. monocytogenes. ПЦР-продукты были клонированы в шаттл-вектор вектор pTRKH2, уже содержащий промоторную область, что позволи ло устранить эффекты от различий в уровне экспрес-
2014, Т. 4, № 1
Материалы научно-практической конференции «От эпидемиологии к диагностике актуальных инфекций...»
сии генов. Полученные плазмиды были трансформированы в штаммы L. monocytogenes EGDeAinlA и EGDeAinlB с делециями соотвествующих хромосомных генов. Изогенные рекомбинантные штаммы были использованы для инфекции эпителиальных клеток человека HEK293. Разработанная система позволяет оценить различия в эффективности инвазии, связанные с вариантами в последовательности бактериальных факторов патогенности InlA и InlB.
ГЕНОМНЫЙ ПОЛИМОРФИЗМ ШТАММОВ MYCOBACTERIUM AVIUM SUBSP. HOMINISSUIS
Д.А. Старкова1, А.А. Вязовая1, И.В. Мокроусов1, Т.Ф. Оттен2, Б.И. Вишневский2, О.В. Нарвская1
1ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Санкт-Петербург
2ФГБУСанкт-Петербургский НИИфтизиопульмонологии МЗ РФ
Нетуберкулезные микобактерии вида Mycobacterium avium — типичные обитатели окружающей среды. M. avium subsp. hominissuis (MAH) способны вызывать микобактериоз у человека. За последние десять лет в Санкт-Петербурге и Ленинградской области наблюдается рост числа случаев микобактериоза легких у иммунокомпетентных лиц и диссеминиро-ванных форм у ВИЧ-инфицированных (Оттен Т.Ф., 2005).
Целью исследования явилось изучение геномного полиморфизма клинических изолятов MAH с использованием VNTR- и IS1245-RFLP-типирования.
Изучены 90 штаммов M. avium, выделенных в 2008— 2011 гг. от жителей Санкт-Петербурга и Ленинградской области. Аллельный полиморфизм штаммов MAH оценивали методом VNTR-типирования по 8 вариабельным локусам (TR292, X3, 25, 47, 3, 7, 10 и 32) (Thibault et al., 2007). Прямое секвенирование (по Сенгеру) амплифицированного фрагмента ло-куса TR10 осуществляли c использованием анализатора «ABI Prism» 3130. Генотипирование штаммов MAH с помощью метода IS1245-RFLP проводили согласно D. van Soolingen (1998), C. Guerrero (1995).
В результате 8-локусного VNTR-типирования у 90 штаммов МАН было выявлено 17 вариантов профилей VNTR. Индивидуальные восьмизначные числовые профили VNTR имели 9 штаммов. Остальные 81 штамм входили в состав девяти кластеров. Наиболее крупный кластер с числовым профилем 22221128 включал 46 (51,1%) штаммов; кластеры — 24221128 и 2533112'8 — 13 и 7 штаммов соответственно; остальные кластеры содержали 2—4 штамма. Штаммы кластера 2533112'8 отличались от остальных «усеченным» локусом TR10 за счет внутренней делеции 15 п.н. (обозначен 2') (GenBank accession no. JQ918769.1). Наибольшим полиморфизмом отличались локусы TRX3 и TR25 (HGDI 0,624 и 0,392 соответственно).
В результате IS1245-RFLP-типирования выявлен 51 тип профилей. Из них, 47 профилей были индивидуальны, а остальные были представлены кластерами Mav1-Mav4, в состав которых входили от двух до трех штаммов с идентичными профилями IS1245.
Полученные данные согласуются с общепринятым мнением о роли объектов окружающей среды в качестве источника инфицирования (в том числе внутрибольничного) человека MAH.
ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ЗАБОЛЕВАЕМОСТИ АНОГЕНИТАЛЬНЫМИ (ВЕНЕРИЧЕСКИМИ) БОРОДАВКАМИ В ОТДЕЛЬНЫХ РЕГИОНАХ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
О.Ю. Стебелько1, Н.Ю. Гульцева2, О.В. Гайворонская2, Е.В. Каткявичене3, Ю.С. Егорова4
1 ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Санкт-Петербург
2Санкт-Петербургское ГБУЗ Городской кожно-венерологический диспансер
3ГБУЗ Республики Карелия Республиканский кожно-венерологический диспансер, г. Петрозаводск 4ГБУЗ Ленинградский областной центр, Санкт-Петербург
Важность эпидемиологической оценки заболеваемости аногенитальными бородавками обусловлена внедрением и расширением объемов специфической профилактики данной патологии во многих регионах РФ, что требует развития системы эпидемиологического надзора за папилломавирусной инфекцией в условиях вакцинопрофилактики и оценки эффективности проводимых мероприятий. Этиологическим фактором развития аногенитальных бородавок в 90% случаев является вирус папилломы человека 6 и 11 генотипов. Данная нозологическая форма составляет одну их многих клинических проявлений папилломавирусной инфекции. В связи с изложенным целью исследования явилось изучение особенностей заболеваемости данной патологией на территориях Санкт-Петербурга, Ленинградской области и Республики Карелия.
Анализ данных федерального государственного статистического наблюдения по формам № 9 и № 34 по указанным территориям показал снижение уровней заболеваемости населения аногенитальными бородавками в 2013 г. относительно 2011 г. Показатели инцидентности за рассматриваемый период в Республике Карелия и Санкт-Петербурге, в отличие от Ленинградской области, достоверно превышали среднестатистические показатели по РФ в целом (р < 0,001). Наиболее высокие показатели заболеваемости аногенитальными бородавками в 2011—2013 гг. отмечались в Республике Карелия (средний уровень заболеваемости за 3 года составил 62,5 на 100 000 населения). В Санкт-Петербурге и Ленинградской области средние показатели за 2011—2013 гг. оказались равными 52,7 и 12,9 на 100 000 населения соответственно.
Результаты исследования свидетельствуют о наличии территориальных особенностей развития эпидемического процесса данной патологией на территории РФ и необходимости дальнейшего изучения проблемы.
ОСОБЕННОСТИ НАДЗОРА ЗА ГРИППОМ В РОССИИ И ЗА РУБЕЖОМ
Т.И. Сысоева, Л.С. Карпова
ФГБУ НИИ гриппа МЗ РФ, Санкт-Петербург
На базе Всемирной организации здравоохранения с 1952 г. работает глобальная сеть по надзору за гриппом Она включает 6 сотрудничающих референс-исследовательских центров ВОЗ по гриппу в Атланте и Мемфисе (США), Лондоне (Великобритания), Токио (Япония), Мельбурне (Австралия) и Пекине (Китай) и 141 национальный центр по гриппу в 118 странах.
