CC BY
14
дований населения без контроля. Б этом случае скрининг-тесты должны иметь четкую биологическую норму или такому обследованию должен предшествовать аналогичный фоновый скрининг.
На втором этапе гигиенического контроля влияния водного фактора на здоровье населения формируются выборочные совокупности — группа риска и контроля. Для этого население районов условно подразделяется на 4 внутренне однородные возрастные группы: 1-я — дети дошкольного возраста, 2-я — дети школьного возраста и подростки, 3-я — юноши и работающие, 4-я — пенсионеры.
Особенности 1-й группы в общих чертах связаны с тем, что в раннем постнатальном периоде дети изолированы от прямого действия водного фактора. При оценке состояния их здоровья превалируют генетический аспект, индивидуальные особенности акушерского анамнеза и перкутан-ное действие водного фактора. У детей ясельного и детсадовского возраста длительность влияния водного фактора наименьшая. У них выражены инфекционные наслоения и последствия противоэпидемических прививок. Кроме того, некоторые биохимические и физиологические исследования у детей этой группы затруднены по этическим соображениям.
У детей 2-й группы к 7 годам жизни проявляется первичная стабилизация отдельных показателей зрелости организма. Однако в это же время у них продолжается формирование функции ЦНС, системы регуляции водно-солевого гомеостаза, эндокринного аппарата и ряда обменных процессов.
Население 3-й группы характеризуется функциональной зрелостью организма. Но среди этих лиц имеются существенные наслоения, связанные с производственными факторами, социальной разнородностью, наличием вредных привычек, особенно у лиц старшего возраста.
Последняя (4-я) группа населения неоднородна по предшествующему профессиональному маршруту, последствиям патологических процессов, уровню и характеру действия водного фактора в различные возрастные периоды жизни в связи с миграцией. Кроме того, с возрастом увеличивается число сочетанных вариантов дейст-
вия водного и других факторов на организм.
Учитывая специфику гигиены водопользования, связанную с затруднением выбора контроля и группы наблюдений в одном населенном пункте, для населения 3-й и 4-й групп весьма трудно выбрать контрольный контингент, так как в разных населенных пунктах часто бывают развиты неодинаковые отрасли промышленности и профессиональные факторы в группах наблюдения и контроля будут различными.
Лучшие характеристики для проведения скрининга имеет 2-я группа населения. Школьники и подростки — относительно однородные контин-генты во всех населенных пунктах. Среди них легко выделяются репрезентативные возрастные когорты, объединенные влиянием единого водного фактора. Дети раннего школьного возраста и подростки наиболее чувствительны к хроническому воздействию водного фактора. Только у этого контингента можно четко выявить влияние водного фактора на половой диморфизм, т.е. динамику формирования одних и тех же показателей у девочек и мальчиков. В связи с тем что у школьников идет процесс формирования органов и систем, а также полового созревания, они относятся к группам повышенного риска. Популяция школьников, как правило, социально однородна, имеет унифицированный режим обучения, практически изолирована от производственных факторов и в основном едина по длительности и специфике действия водного фактора.
Показатель динамической токсической нагрузки водного фактора Р и экспериментально установленные патогностические признаки хронической интоксикации при нормировании вредных веществ в воде водных объектов являются объективными качественным и количественным критериями для гигиенического скрининга.
Литература. Парк Д. В. Биохимия чужеродных соединений. М., 1973. Савелова В. А. — В кн.: Современные вопросы водопользования населения и санитарной охраны водоемов. М., 1976, с. 126—141. Трофимович Е. М. — Гиг. и сан., 1981, № 9, с. 45—47.
Поступила 09.02.83
УДК 614.7:679.841-1 IJ-078
Г. П. Калина
РАЦИОНАЛЬНАЯ СХЕМА ИДЕНТИФИКАЦИИ PSEUDOMONAS AERUGINOSA ПРИ МАССОВЫХ ИССЛЕДОВАНИЯХ ОБЪЕКТОВ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ
Московский НИИ гигиены им. Эрисмана
Целевые исследования объектов окружающей с эпидемиологической или гигиенической точки среды на присутствие и количественное содержа- зрения, обычно состоят из 3 этапов: первый — ние микроорганизмов, представляющих интерес накопление искомого микроорганизма в жидкой
селективной среде; - второй — выделение его на плотной селективно-дифференциальной среде (СДС) с ориентировочной (сигнальной) идентификацией, третий — окончательная идентификация выделенного патогена или индикатора с использованием необходимого минимального в условиях практической работы набора тестов.
В данном сообщении мы остановимся на третьем этапе — схеме идентификации, в которой при сохранении необходимого и надежного определения видовой принадлежности в то же время ставится задача возможного упрощения, ускорения процесса идентификации и облегчения труда исследователя, экономии посуды, материала, сред и даже места в термостате. Следует иметь в виду, что если при исследовании патологического материала основным часто является качественное определение патогена («да — нет»), то при изучении объектов окружающей среды обязательно установление степени обсемененности объекта — количественный учет, усложняющий работу и увеличивающий ее объем. Этот процесс может быть облегчен сокращением количества используемых тестов, однако какой-то необходимый минимум тестов должен быть сохранен для гарантии надежности получаемых результатов (см. схему).
В разработанной нами схеме идентификации мы ориентировались на схемы, рекомендованные для использования при исследованиях объектов окружающей среды (Schubert и соавт.; Kenner и Clark; Dutka и Kwan; Brodsky и Cie-bin; Brodsky и Nixon), внеся в технику проведения тестов коррективы, направленные на экономию сред, посуды, повышение производительности труда и сокращение времени исследования.
В схеме использованы тесты, определяющие принадлежность: 1) к группе грамотрицатель-ных бактерий (тест Грегерсона); 2) к группе оксидазоположительных (реакция цитохромо-ксидазы); 3) к неферментирующей группе (тест оксидации/ферментации); 4) к роду Pseudomonas (комбинация трех перечисленных выше и способность роста на пептонных средах); 5) к виду Pseudomonas aeruginosa (рост при 42 °С, продукция пиоцианина и флюоресцеина, а при отсутствии пигментации — оксидация ксилозы, отсутствие оксидации мальтозы, освобождение газообразного азота при редукции нитратов и нитритов; особенно специфичен для Ps. aeruginosa серебристый блеск, которому этот вид обязан своим названием, но он возникает не всегда). Перечисленные 10 тестов, совмещенные в 7 специализированных средах, позволяют четко идентифицировать Ps. aeruginosa. Используя тесты, относящиеся к пункту 5, можно при необходимости ориентировочно определить принадлежность штамма к некоторым другим, наиболее существенным видам псевдомонад (табл. 1), для окончательной идентификации которых потребуются лишь немногие дополни-
Таблица 1
Ориентировочная дифференциация разных видов псевдомонад
Признаки 3 о т <п о н и о т я X X 4> 3 о 2L X X X л X Шифр
ч в о * JO 5 (О 9 8 хл о X
£ с* S и е С
Код 2 4 8 16 32 64
Ps. aeruginosa + + о + + + 118
» » + + о + + 0 54
» » + + 0 + о о 22
Ps. fluorescens + о +-о О + 0 34-42
Ps. putida + О 0-+ О + О 34—42
Ps. pseudomallei + + + + о 0 30
Ps. stutzeri + + + + 0 О 30
Ps. cepacia + + + О о О 14
Ps. putrefaciens о—+ + Н--о О 0 О 4—6—14
Ps. maltophiüa Н--о О + 0 0 О 8—10
Ps. alcaligenes О + 0 о о о 4
Примечание. (+) — положительный результат; (о) — отрицательный результат; (Ч—о) — чаще положительный, реже отрицательный результат; (о—h) — чаще отрицательный, реже положительный результат.
тельные тесты. Для облегчения идентификации может быть привлечена система кодирования признаков (Г. П. Калина,1973).
Для окончательной идентификации видов, имеющих одинаковые шифры, можно использовать тесты, приведенные в табл. 2.
Приведенная выше последовательность использования признаков по принципу отбора от наиболее крупных к более мелким объединениям (грам- и оксидазоположительная группа — не-ферментирующая группа — род Pseudomonas — вид Pseudomonas aeruginosa) в схеме не соблюдена. Представлялось наиболее существенным на первом же этапе селекционировать штаммы по двум ведущим признакам — форме колонии и продукции пигмента на среде Кинг А, а также по способности развиваться при 42°С. Практически этот комплекс признаков позволяет с большой долей вероятности идентифицировать штамм как Ps. aeruginosa. Отсутствие роста при 42°С сразу исключает штамм из дальнейшей работы, и только атипичные и апигментные колонии на среде Кинг А требуют применения дополнительных тестов.
С СДС отбирают колонии, наиболее характерные для Ps. aeruginosa, — параллельно на мясо-пептонный агар (МПА) и среду Кинг А. Ориентиры на одних СДС более четкие, на других отбор производится наугад, но в обоих случаях снимать с каждой чашки следует не менее 6 колоний. При количественном учете традиционным методом (пока мембранный метод не дал еще достаточно удовлетворительных результатов) в работе может быть от 8 до 16 чашек СДС, в серии — несколько проб и количество
Таблица 2
Дополнительные тесты дифференциации псевдомонад
Pseudomonas
Тест и в 2 о — -о <у С! V N «# и в9 сл ¿1 — и
о С в ь 3 о. •У «J 2.Е "з "«Л О* <с ■и ёл и п _ V к ье
Гидролиз
желатина + О
Оксидация
10% лактоз-
ной среды + О + о
Оксидации/ +/о о/о
ферментации
Примечание. (+) положительный результат; (о) — отрицательный результат; (+/о) — оксидация положительна, ферментация отрицательна; (о/о) — оксидация и ферментация отрицательны.
колоний, снимаемых для последующей идентификации,— может достигать 60—96 и более. Для упрощения процедуры и повышения производительности труда исследователя вместо обычно применяемого отсева на скошенные среды в пробирках колонии отсевают на среды в чашках Петри в виде макроколоний («бляшек»). На одной чашке можно разместить от 12—16 до 20—24 макроколоний, что, следовательно, заменяет 12—24 пробирки. Посев колоний с СДС последовательно (одной петлей) засевают на среду Кинг А и МПА на участке 0,5 см2. На рисунке представлена удобная схема размещения 24 колоний, устраняющая необходимость частых вращений чашки, обеспечивающая удобство и равномерность распределения макроколоний.
После инкубации чашек с МПА при 42 °С в течение 18—20 ч учитывают выросшие колонии и сопоставляют их с характером роста соответствующих макроколоний на среде Кинг А. При наличии на последней пигментированных колоний типичной формы (см. ниже) с диффузией пигмента в толщу среды, а также не всегда появляющегося металлического блеска и хорошо выраженного роста на МПА при 42 °С данный шенным. При отсутствии роста на МПА при штамм может быть определен как. Ре аег^- 42°С штамм исключается из дальнейшей обратила, а исследование его можно считать завер- ботки. При наличии роста на МПА, но отсутст-
Таблица 3
Характеристика псевдомонад различного происхождения
Объект исследования Формы колоний на Кинг А
типичные атипичные
1 + —
Патологический материал и окружение больных (91) Объекты окружающей среды (вода, молоко, сточные жидкости — 278) 25 (27,4%) 243 (87,4%) 31 (34,1%) 21 (7,8%) 4 (4,4%) 3 (1.1%) 31 (34.1%) 11 (4,0%)
Примечание. (+) — наличие пиоционина; (—) — отсутствие пиоционина.
Реакция иито-хромоксидазы
Реакция Грегер сала
Мальтоза 37°С, 20-24 ч
Ксилоза 37° С, 20-24 V
Схема упрощенной ийентификации Ps. aeruginosa
\ Плотная СДС
| МПА 42°С, 16-20ч | | Среда Кинг-А 37°C,20-2ÜV
Среда Кинг - В 37°С. 24 V
Искл
Искл.
к [+]—щ
'иоциании
Рост I Макроколония
Макроколония
Искл.
Типич- Атипич-
ная ная
типич- Атипич-
ная ная
Ps aeruginosa
\<Рлюоресцеин |
Г+/+ или о/о | Искл. Искл.
Нитратный бульон 37'С. 24 ч
Искл.
Ps. aeruginosa (пиоцианин-. флюоресцеин *)
Ps. aeruginosa (апигментный)
Оксидация/ фермен та -ция 37°С, 24 ч
Чскл. - исключить ш дальнейшего изученияi -f - положительный результат; - - отрицательный результат
вии у соответствующей колонии на среде Кинг А типичной формы и (или) пигмента исследование продолжают. В макроколониях на МПА определяют тест Грегерсона и реакцию цитохро-моксидазы. При положительных результатах обоих тестов колонию со среды Кинг А отсевают на плотные среды с мальтозой и ксилозой также в виде макроколоний в чашках, но уже с несколько меньшим количеством (12—16) бляшек на каждой чашке. После инкубации при 37 °С в течение 20—24 ч определяют результаты оксидации обоих углеводов. При «ксилоза+ » и «мальтоза—» исследование продолжают. Макроколонии с мальтозной среды высевают также в виде макроколоний на среду Кинг В для определения наличия флюоресцеина и параллельно определяют показатель «оксидации/ферментации» по Хыо — Лейфсону. Отсутствие ферментации глюкозы и продукция флюоресцеина позволяют закончить исследование с определением «Ps. aeruginosa пиоцианинотрицательная, флюо-ресцеинположительная». При положительной реакции оксидации/ферментации, но при отсутствии продукции флюоресцеина дополнительно определяют редукцию нитрата с освобождением свободного азота. При положительном результате определяется апигментная Ps. aeruginosa.
В итоге типичные по форме колоний, пигменту и росту при 42 °С штаммы удается идентифицировать уже на 2-е сутки. Атипичные и апиг-ментные штаммы требуют более длительного исследования. В отличие от патологического материала в объектах окружающей среды типичные пигментные штаммы составляют преобладающее количество выделяемых псевдомонад. Изучение штаммов, выделенных из патологического материала и окружения больных и обнаруженных нами в воде, молоке и сточных жидкостях летом и осенью 1982 г. (табл. 3), показало, что среди последних преобладали типичные по форме колоний на среде Кинг А (94,9%) и по продукции пиоцианина (88,5%), в то время как штаммы, выделенные из патологического материала и окружения больных, составили соответственно 61,5 и 31,8 %•
Идентификация Ps. aeruginosa по трем признакам без таких общепринятых тестов, как ци-тохромоксидазный и оксидация/ферментация, может вызвать сомнение в достаточной ее надежности. Но подобные аналоги имеются и в других группах микробов: CI. perfringens (сульфит-молочная среда), протеолитический вариант энтерококка (молочно-теллуритная среда), Serratia marcescens (пигмент). Ту же Ps. aeruginosa стандарт США (1976) определяет только по изменению окраски подтверждающей ацет-амидной среды. Следует учесть, что в нашей схеме уже на первых этапах в среде накопления и на СДС имеется предварительный отбор, а с СДС снимают колонии, более (на одних СДС) или менее (на других) характерные для Ps.
9 гз
/ % у \\
/ N. / § Yi •SA с_л
\ ^ \ \л V ^ V ❖ у <ij у
\ ^ У > fib
/ \Ъ
Форма посева макроколоннй на среде в чашке Пет^и.
Цифры — последовательность посева макроколоннй.
aeruginosa. И, наконец, признаки микроорганизмов неравноценны. В данном конкретном случае форма колоний, пигментация и металлический блеск (при наличии) присущи только Ps. aeruginosa. Утрата их вызывает необходимость расширения набора тестов, а отдельные отклонения, варианты не могут влиять на общую оценку эпидемиологической и гигиенической обстановки. С использованием предлагаемой схемы нами проведены натурные исследования молока и сточных жидкостей. Штаммы, идентифицированные по трем признакам, впоследствии подвергались проверке традиционным набором тестов. За единичными исключениями, первоначальный и последующий диагнозы совпадали.
Среды и тесты, используемые в данной схеме, следующие.
Среда Кинг A (King и соавт.) имеет состав: пептона 2 г, агара 1,5 г, глицерина 1 г, K2SO4 1 г, MgCl2 0,14 г, воды до 100 мл, pH 7,2. При посеве «бляшками» через 18—24 ч инкубации при 37°С макроколонии в их типичной форме имеют уплощенную шероховатую поверхность с неровными краями и своеобразным «кружевным венчиком», образующимся в результате ограниченного роения. Аналогичную форму имеют изолированные колонии псевдомонад (Levin и Са-belli), но у макроколоний она выражена во много раз более четко. По мнению Veron и Berche, такая форма колоний чаще наблюдается у штаммов, выделенных от больных; по нашим данным (см. табл. 3), наоборот, подобные штаммы составляют подавляющее большинство выделяемых из окружающей среды, в то время как для штаммов из патологического материала характерны более мелкие, круглые, с ровными краями колонии, которые мы считаем нетипичными. Характерно, что даже при отсеве с СДС колонии с примесью посторонних микробов, в «венчике», как правило, псевдомонады находятся в «чистой» культуре и снимать для дальнейшего использования штамм следует из «венчика». Вы-
сокая ценность среды Кинг А состоит в повышенной стимуляции на ней продукции пиоциа-нина и других пигментов, чаще всего пиорубина, реже меланина. Сочетание пиоцианина и пиорубина (зеленого и красного) дает смесь буро-коричневого цвета, хотя оттенки могут колебаться от чистого сине-зеленого до коричнево-красного. Высокой интенсивности пигментообра-зование достигает после дополнительной инкубации в течение 1—2 сут при комнатной температуре.
Среда Кинг В. Это вариант, способствующий продукции второго по значению пигмента,— флюоресцеина. Ее состав: пептона 2 г, агара 1,5 г, глицерина 1 г, К2НР04 0,15 г, MgS04X Х7Н20 0,15 г, воды до 100 мл. Лишенные пиоцианина Ps. aeruginosa на этой среде после инкубации при 37 °С 20—24 ч дают светло-зеленый, иногда желто-зеленый пигмент. Полностью апигментные штаммы не продуцируют и этот пигмент. При необходимости выделить другие виды псевдомонад инкубацию данной среды проводят при 30 °С в течение 2—3 сут с последующей инкубацией при 22 °С.
Определение роста при 42 °С. Впервые на значение этого теста указали Seelen и Stark. Метод существует в двух вариантах — в жидкой и на плотной средах. В первом случае бульон до посева должен быть подогрет до 44—45 °С, после него помещен на водяную баню (температура до 45°С); все ставят в термостат при 42°С. Среду 2 % агаровую применяют в пробирках в скошенном виде. В обоих случаях нет четкой разницы между ростом и его отсутствием (Oberho-fer). Этот недостаток полностью исключается при посеве бляшками. Вырастающие макроколонии четко сохраняют признаки роста, при отсутствии которого на месте посева остаются только следы давления петли на агар. Вырастающие после 18—20-часовой инкубации при 42°С макроколонии плоские, шероховатые, иногда слегка выпуклые, без «венчика». На этих колониях удобно проводить цитохромоксидазный тест и тест Грегерсона.
Реакция цитохромоксидазы. Из двух методик определения оксидазы — реакции Ковача (Ко-vacs) и цитохромоксидазной реакции по Gaby и Hadley — в СССР распространен последний. В реакции цитохромоксидазы используют реактив диметилпарафенилендиамин, который в сочетании с а-нафтолом за счет цитохромоксидазы образует соединение индофеноловый синий. Реактив применяют в виде 1 % водного раствора, а-нафтол — 1 % спиртового. Хранить оба реактива обязательно отдельно, перед употреблением их смешивают в пропорции 2:1. В нашей схеме реактив наносят петлей (платиновой или нихромной) на макроколонию на МПА, на участок у края бляшки. Резкое посинение наступает через 20—40 с. Позднюю реакцию, как и посинение агаровой среды, не учитывают.
Тест Грегерсона (Gregerson) — это простой быстрый метод, не требующий оптики. В капле 3 % раствора КОН на предметном стекле эмульгируют бактериальную массу (в нашей схеме взятую с периферии макроколонии на МПА). На протяжении нескольких секунд масса ослиз-няется, и за петлей тянутся трудно отрывающиеся нити — положительный результат, указывающий на то, что испытываемая культура — грамотрицательный микроб. Реакция отрицательна у грамположительных микроорганизмов.
Оксидация углеводов. На протяжении многих лет считали, что Ps. aeruginosa гидролизуют только глюкозу. Elrod и Braun установили, что, помимо глюкозы, псевдомонады расщепляют также ксилозу и арабинозу, но образующаяся при этом кислая реакция нейтрализуется обильным щелочением среды за счет активной протео-литической деятельности псевдомонад. Liu подтвердил это и доказал, что основным источником как азотного, так и углеродного питания для псевдомонад служит пептон и пока этот источник не исчерпан, утилизация углевода не начинается. Было предложено использовать синтетические среды. Однако для некоторых углеводов необходимо хотя бы минимальное количество пептона для начала их окисления. Наиболее удовлетворительные результаты дает среда, предложенная Liu и близкая по составу к среде Hugh и Leifson: пептона 0,2 г, хлорида натрия 0,5 г, углевода 2 г, индикатора 1,6% раствора 1 мл, воды 100 мл. В качестве индикатора предпочтителен феноловый красный или бромрезол пурпурный. При посеве бляшками в чашках среда с ксилозой дает хорошие результаты, а среда с мальтозой при посеве Ps. aeruginosa остается неизменной.
Тест оксидации/ферментации (Hugh и Leifson). Первоначально тест состоял из посева в две пробирки со средой (пептона 0,2 г, хлорида натрия 0,5 г, К2НРО4 0,03 г, агара 0,3 г, бромтимолово-го синего 0,003 г, глюкозы 1 г, воды 100 мл, pH 7,1). После посева одну из пробирок для создания анаэробных условий заливают вазелином или жидким парафином. Для упрощения предложено много модификаций, объединяющих оксидацию и ферментацию в одной пробирке (Г. П. Калина, 1977; Brown; Sivendra). Недостатком этих модификаций при идентификации псевдомонад явилась продукция на поверхности среды пигмента, маскирующего изменение реакции, а также часто наступающее в силу ассимиляции азота и азосодержащих соединений из воздуха щелочение поверхности среды, что делает невозможным учет оксидации. Целесообразно заменить индикатор бромкрезолом пурпурным или феноловым красным, а поверхность среды в пробирке заливать тонким слоем 0,2 % «голодного» агара.
Нитратредуктазный тест. Применяют мясо-пеп-тонный бульон с 0,1 % KN03 в пробирках с бро-
дильными трубками. Псевдомонады редуцируют нитрат в нитрит, а последний редуцируется до освобождения азота, улавливаемого бродильными трубками.
Литература. Калина Г. П. — В кн.: Методы обнаружения и количественного учета возбудителей острых кишечных заболеваний во внешней среде, их поведение и выживаемость. М., 1973, с. 106. Калина Г. П. — В кн.: Проблемы санитарной микробиологии окружающей среды. М., 1977, с. 91. Brown W. — Appl. Microbiol., 1974, v. 27. p. 811. Brodsky M„ Ciebin B. — Appl. environm. Microbiol., 1978, v. 36, p. 36.
Brodsky M.. Nixon M. — Appl. Microbiol., 1973, v. 26, p. 219.
Dutka В.. Kwan K. — Appl. environm. Microbiol., 1977, v. 33, p. 240.
Elrod R.. Braun A. — }. Bact., 1942, v. 44, p. 633. Gaby W.. Had ley C. — Ibid., 1957, v. 74, p 356.
Gregerson T. — Europ. J. appl. Microbiol. Biotechnol., V978, v. 5, p. 123.
Hugh R.. Leifson E. — J. Bact., 1953, v. 66, p. 24.
Kenner В.. Clark H. — S. Water Pollut Contr. Fed., 1974, v. 46, p. 2163.
King E.. Ward M., Raney D. — J. lab. clin Med., 1954. v. 44, p. 301.
Kovacs N. — Nature, 1956, v. 178, p. 703.
Levin M.. Cabelli V. — Appl. Microbiol., 1972, v 24, p. 864.
Liu P. — J. Bact., 1952, v. 64, p. 773.
Oberhojer Th. — S. clin. Microbiol., 1979, v. 10, p. 800
Schubert R.. Easanu J., Easanu F.— Zbl. Bakt., I. Abt. Orig. B, 1973, Bd 158, S. 183.
Seelen W.. Stark C. — J. Bact., 1943, v. 46, p. 491.
Sivendra R. — Appl. Environm. Microbiol., 1976, v. 31, p. 778.
Standard Methods for the Examination of Water and Wast-waters. Washington. 1976.
Veron M.. Berche P. — Bull. Inst. Pasteur, 1976, v. 74, p. 295.
Поступила 13.04.83
УДК 615.9.015.36.07
М. Н. Коршун, Л. М. Брайчвнко (Киев)
О ВЕЛИЧИНЕ СИСТЕМАТИЧЕСКОЙ ПОГРЕШНОСТИ УСТАНОВЛЕНИЯ СРЕДНЕСМЕРТЕЛЬНОИ ДОЗЫ ВРЕДНЫХ ВЕЩЕСТВ
Необходимость анализа причины источников и величин погрешностей экспериментального обоснования санитарных стандартов обусловлена включением метрологических требований в действующую нормативно-техническую документацию. Поскольку контроль ПДК осуществляется с помощью химико-аналитических методов, погрешности измерений должны быть соизмеримы (меньше, но никак не больше) с погрешностями экспериментального установления величины стандарта (А. Б. Шаевич и X. М. Амусина).
В данной работе делается попытка оценить величину систематической погрешности экспериментального установления величины 1^О50 внутрь жидких и твердых вредных веществ разных классов опасности для мышей и крыс. Эта погрешность является одной из составляющих общей погрешности экспериментального установления Ь£>50-
В процессе экспериментального определения ЬСйо химических веществ можно выделить 3 эта-паг. подготовка животных, приготовление рабочих растворов или взвесей изучаемых веществ для введения их лабораторным животным, введение рабочих растворов (взвесей) изучаемых веществ в организм животных. Каждый из этих этапов включает ряд измерений, которые выполняются с помощью средств определения масел, объема, плотности (весов, ареометров, стеклянных мер вместимости). Как известно, любое измерение сопровождается погрешностью. Она состоит из случайной составляющей погрешности измерения и неисключенной систематической составляющей погрешности измерения (НСПИ).
В свою очередь НСПИ имеет ряд составляющих, которые зависят от метрологических характеристик используемых средств измерений и измеряемых величин.
Применительно к 3 этапам экспериментального установления ЬО50были выделены составляющие НСПИ обязательных измерений: измерение массы тела животных (81), измерение массы твердых изучаемых веществ (в2), измерение объема жидких изучаемых веществ (83), измерение плотности жидких измеряемых веществ (в4), измерение объема растворителей (85) и измерение объемов рабочих растворов (взвесей), вводимых в организм животных (86); проанализированы объекты измерений с учетом характеристик, подлежащих измерениям: диапазона измерений массы тела экспериментальных животных, диапазона измерений массы твердых веществ, необходимых для проведения развернутого эксперимента — при работе с чрезвычайно опасными (для мышей) и малоопасными (для крыс) веществами, диапазона измерений объемов жидкостей- растворителей, изучаемых жидких веществ и рабочих растворов, необходимых для развернутого эксперимента при условии введения мышам в среднем 0,4 мл (от 0,2 до 0,6 мл) и крысам 2 мл (от 0^5 мл до 5 мл) жидкости; оценены границы НСПИ. В качестве границ составляющих НСПИ приняты пределы допускаемых погрешностей используемых для выполнения измерений средств измерений (ГОСТ 8.207—76). Значения границ НСПИ (в») вычислены по формуле:
