CC BY
121
паразитарными болезнями».
Коллектив ВИГИС активно работает, твердо верит, научные разработки нужны для народного хозяйства страны
что новые
ВНИВИ ГЕЛЬМИНТОЛОГИИ ИМ. К.И. СКРЯБИНА - 80 ЛЕТ
Сафиуллин Р. Т.
Резюме
Изложены этапы развития гельминтологической науки в стране, роль института гельминтологии в совершенствовании борьбы с гельминтозами животных.
VNIVI HELMINTHOLOGY MI. KI SCRIABIN - 80 YEARS
Safiullin R.T.
Summary
The stages of development helminthological science in the country, the role of the Institute of Helminthology in improving the control of worm infections of animals.
УДК 619: 616.99.
РАСЦЕНКИ НА ПОСТАНОВКУ ПЦР ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ОПИСТОРХОЗА ПЛОТОЯДНЫХ ЖИВОТНЫХ
Сафиуллин Р.Т. - д.в.н., профессор, зав.лабораторией; Шибитов С.К. - н.с.
ВНИИ гельминтологии им.К.И.Скрябина, г.Москва
Ключевые слова :описторхоз, полимеразная цепная реакция, расценки.
Keywords: opisthorchiasis, polymerase chain reaction rates.
Описторхоз - биогельминтоз. Один из возбудителей - сибирский сосальщик, или кошачий сосальщик (Opisthorchis felineus), паразитирует у человека, кошек, собак, и др., в печени, желчном пузыре, поджелудочной железе. Основной источник инвазии - зараженное животное, которое употребило в пищу зараженную рыбу семейства карповых протоков.
Стандартным методом для диагностики описторхоза является копроовоскопия. Однако существующие методы не достаточно эффективны В настоящее время особо актуальным становится подход к диагностике описторхоза плотоядных с применением метода полимеразно-цепной реакции (ПЦР), в том числе для дифференциальной диагностики
между другими описторхидами. Следует отметить, что ПЦР-метод может использоваться для выявления метацеркариев Opisthorchis felineus в мышцах карповых рыб в лабораториях ветеринарно-санитарной экспертизы на рынках, для диагностики описторхоза у плотоядных животных в ветеринарных лабораториях, а также при детекции взрослых червей (марит) из печени зараженных лабораторных животных в научных целях.
Норму затрат времени на постановку ПЦР при описторхозе плотоядных животных устанавливали по данным хронометражных наблюдений за работой каждой категории исполнителей в условиях ПЦР лаборатории ВИГИС.
При проведении прижизненной диагностики описторхоза плотоядных животных путем постановки ПЦР подготовительное время состояло из следующих элементов:
- подготовка необходимой посуды и оборудования;
- взвешивания реактивов и приготовление буферных растворов;
- взвешивание материала и его гомогенизация при помощи керамической колонки.
Оперативное время работы включало следующие элементы:
1 .Выделение геномной ДНК
- внесение переваривающего геномного буфера и инкубирование в термостате при 56 0С, временами перемешивая;
- удаление частиц материала путем центрифугирования;
- внесение РНК-зы, перемешивание и инкубирование при комнатной температуре;
- внесение буфера, связывающего геномную ДНК, перемешивание в вортексе до получения гомогенного раствора;
- внесение 96-100%-ного этанола, перемешивание в вортексе до гомогенного раствора.
2. Очистка геномной ДНК с использованием специальных фильтр-колонок состояла из следующих операций:
- установление специальных фильтр-колонок;
- внесение буферного раствора, связывающего генную ДНК и добавление этанола;
- центрифугирование при комнатной температуре 3 раза при 10000 оборотов в течение минуты и 1 раз в течение 3 минут;
- внесение промывочного буфера;
- перемещение колонок в чистую пробирку, поставляемую с набором;
- внесение геномного элюирующего буфера;
- инкубирование при комнатной температуре.
3. Проведение ПЦР состояло из следующих элементов:
- маркировка необходимого количества пробирок и внесение
праймеров OfF и ITS2exR;
- внесение во все пробирки ПЦР растворителя GenePak ® PCR core;
- внесение в соответствующие пробирки Мастер Микса GenePak ® PCR core по 5 мкл (20-200 нг) исследуемого ДНК. В качестве контроля используют бидистиллированную воду или растворитель, в котором растворена исследуемая ДНК;
- передача материала в комнату для амплификации.
4. Процесс амплификации выполнялся следующим образом:
- выбор заранее подготовленной программы амплификации состоящая из денатурации ДНК при 950С - 2 мин - 1 цикл, затем 35 циклов, включающих денатурацию 10 секунд при 950C, отжиг праймеров 20 секунд при 560C, элонгацию 30 секунд при 720C;
- передача материала для проведения электрофореза.
5. Проведение электрофореза состояло из следующих этапов:
- заполнение устройства для электрофореза трис-ацетатный буфер (ТАЕ) (на 1л: трис - 242 г, ледяная уксусная кислота - 57 мл, 0,5 М ЭДТА, рН 8,0, 100 мл);
- приготовление 1,5%-ного агарозного геля с этидия бромидом (на 100 мл раствора добавить 1,0 мкл);
- нагревание раствора до кипения, затем остудить до 50-550C;
- заполнение раствором формы с установленной гребенкой для
лунок;
- удаление гребенки без повреждения целостности лунок, помещение геляв устройство для электрофореза;
- внесение в лунки по 5-20 мкл ПЦР продукта и внесение контроля;
- включение устройства для электрофореза в сеть и выбор режима 100 В на 30 минут;
- выключение аппарата по окончании электрофореза, промывание геля в дистиллированной воде и перенесение электрофореграммы в комнату для чтения;
- фотодокументирование, распечатка результатов и их анализ.
Заключительное время состояло из:
- уборки использованного оборудования, промывки посуды;
- оформления результатов проведенного исследования.
В структуре затрат времени на прижизненную диагностику описторхоза плотоядных животных с использованием ПЦР на подготовительные работы затрачивается 11,1%, оперативные - 80,65% и заключительные - 8,25%. Нормы времени на прижизненную диагностику описторхоза плотоядных животных путем постановки ПЦР с использованием насадки автоматической пипетки на 10 лунок у ветеринарного врача составили 25,2 минуты, лаборанта - 4,7, санитара -1,6 минуты, а общее время - 31,5 минуты.
При разработке расценки на диагностику описторхоза плотоядных
животных методом ПЦР исходили из того, что расценки на паразитологические исследования должны объективно отражать необходимые затраты на их выполнение, обеспечивая ветеринарным лабораториям безубыточную деятельность. В основе расчета расценок на постановку ПЦР при описторхозе плотоядных животных лежит калькуляция их себестоимости.
На приготовление и постановку ПЦР для диагностики описторхоза плотоядных животных затраты материалов на технологические цели в денежном выражении составили 359,9 руб. В прямых затратах доля материалов составила 80,8% и в полной себестоимости 77,7%.
При расчете затрат на оплату труда при постановке ПЦР для диагностики описторхоза плотоядных животных исходили из нормы времени и часовой тарифной ставки специалистов ветлаборатории, участвующих в проведении исследования (ветврач, лаборант, санитар). При этом затраты на оплату труда составили 65,94 руб. Доля затрат на оплату труда в прямых затратах на постановку ПЦР для диагностики плотоядных составила 14,8% и в полной себестоимости 14,2%.
Отчисления в фонды социального обеспечения, медицинского страхования и пенсионного обеспечения составили 30% от затрат на оплату труда по всем категориям работников.
По согласованию с Департаментом ветеринарии МСХ РФ общехозяйственные, накладные и прочие затраты определяли на базе фактических данных Рязанской областной ветлаборатории по отчету за год. Общехозяйственные расходы при этом распределяли между разными видами лабораторных исследований пропорционально годовым затратам на оплату труда разных категорий ветработников по соответствующим исследованиям, включая паразитологические.
В накладные расходы включали затраты по страхованию автотранспорта, гарантийный ремонт и обслуживание лабораторного оборудования, содержание зданий и сооружений, конторские расходы, услуги типографии, почтовые расходы, телефонные расходы, расходы на подготовку кадров, горюче-смазочные материалы, оплату электроэнергии, водоснабжения, теплоэнергии, газа, хозяйственные расходы, затраты на ремонт основных средств, амортизационные отчисления и земельный налог.
Отсюда, накладные расходы в расчете на одно паразитологическое исследование составили - 12,3 руб.
В прочие расходы включили затраты на организацию производства и управление. Это заработная плата директора, гл. бухгалтера, бухгалтера, бухгалтера-кассира, секретаря, водителей, слесаря-ремонтника, дезинфекторов-санитаров и командировочные расходы на проезд и проживание. Фактические прочие расходы в расчете на одно паразитологическое исследование составили 5,2 рубля.
В результате проведенной работы установлена себестоимость подготовки и постановки ПЦР для диагностики описторхоза плотоядных животных, и она составила 463,12 руб., при расценке на исследование одного образца 610 руб.
ЛИТЕРАТУРА: 1. Инструкция «Мероприятия по предупреждению и ликвидации заболеваний животных гельминтозами». - М., 1999 - 71 с. 2. Ветеринарные правила и нормы. Вет. ПиН. 13.7.1. 2000. 3. Федеральный закон «О техническом регулировании». - М., №184-ФЗ 27.12.2002. 4. Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации. СанПиН 3.2.1333-03. - М., 2003. - 68 с. 5. Сафиуллин Р.Т., Шеховцов Н.В. // Матер. докл. науч. конфер. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». - М., 2006. - Вып.7. - С. 353-354. 6. Сафиуллин Р.Т., Шибитов С.К. Описторхоз плотоядных животных // Ветеринария. - М., 2012. - №12. - С. 30-33.
РАСЦЕНКИ НА ПОСТАВКУ ПЦР ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ОПИСТОРХОЗА
ПЛОТОЯДНЫХ ЖИВОТНЫХ
Сафиуллин Р. Т., Шибитов С.К.
Резюме
Представлена методика постановки ПЦР, методика расчета расценки на это исследование.
PRICES FOR SUPPLY PCR DIAGNOSTIC OPISTHORCHIASIS CARNIVORES
Safiullin R.T., Shibitov S.K.
Summary
The technique of PCR, the method of calculation rates for this study.
УДК 636.5.034:612.1
ПРОДУКТИВНОСТИ КУР-НЕСУШЕК И АКТИВНОСТЬ
ФЕРМЕНТОВ КРОВИ
Середа Т.И. - к.б.н., доцент; Горелик Л.Ш. - аспирант; Дерхо М.А., д.б.н., профессор Уральская государственная академия ветеринарной медицины, e-mail: [email protected]
Ключевые слова: кровь, яйцо, ферменты. Keywords: blood, egg, enzims.
Кровь, как одна из важнейших физиологических систем организма,
