Научная статья на тему 'РАСПРОСТРАНЁННОСТЬ МОБИЛЬНЫХ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ЭЛЕМЕНТОВ SCCmec-ТИПА У ШТАММОВ STAPHYLOCOCCUS AUREUS, ИЗОЛИРОВАННЫХ С КОЖИ И СЛИЗИСТЫХ ПАЦИЕНТОВ С АЛЛЕРГИЧЕСКОЙ ПАТОЛОГИЕЙ'

РАСПРОСТРАНЁННОСТЬ МОБИЛЬНЫХ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ЭЛЕМЕНТОВ SCCmec-ТИПА У ШТАММОВ STAPHYLOCOCCUS AUREUS, ИЗОЛИРОВАННЫХ С КОЖИ И СЛИЗИСТЫХ ПАЦИЕНТОВ С АЛЛЕРГИЧЕСКОЙ ПАТОЛОГИЕЙ Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

CC BY
663
184
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
золотистый стафиллокок / штаммы MRSA / стафилококковые хромосомные кассеты / staphylococcal chromosomal cassette. / staphylococcus aureus / MRSA strains

Аннотация научной статьи по фундаментальной медицине, автор научной работы — Шамсутдинов А.Ф., Тойменцева А.А., Тюрин Ю.А., Баязитова Л.Т.

Золотистый стафилококк – повсеместно распространенный микроорганизм, вызывающий инфекционные заболевания у человека и животных. В настоящее время наблюдается рост встречаемости метициллин-резистентных штаммов Staphylococcus aureus. Устойчивость штаммов Staphylococcus aureus к метициллину определяется присутствием в геноме стафилококковых хромосомных кассет SCCmec типа. В работе были исследованы 60 клинических штаммов MRSA, выделенных с кожи и слизистых пациентов с аллергической патологией. Изучение штаммов Staphylococcus aureus было проведено на дифференциальных средах. Дополнительно видовая идентификация была проведена с помощью MALDI-TOF. Специфические участки генов генного комплекса mec были выявлены с помощью метода ПЦР. В результате типирования было установлено, что 47% исследованных штаммов фенотипически характеризовались устойчивостью к оксациллину, но не содержали праймер-специфических участков относящихся к mecгенному комплексу I–IV типов. В остальных 53% штаммов были выявлены праймер-специфические ампликоны. Фенотипически эти штаммы также обладали устойчивостью к оксациллину. Проведенное исследование показало, что MRSA штаммы в составе своего генетического аппарата несут несколько различных типов SCCmec кассет. Это свойство позволяет им проявлять полирезистентность к нескольким антибактериальным препаратам.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по фундаментальной медицине , автор научной работы — Шамсутдинов А.Ф., Тойменцева А.А., Тюрин Ю.А., Баязитова Л.Т.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

The spread of mobile genetic elements SCCmec-type strains staphylococcus aureus, isolated with skin and mucous of patients with allergic pathology

Staphylococcus aureus is widespread bacterium that causes inflectional diseases of humans and animals. Currently, there is growing incidence of methicillinresistant strains of Staphylococcus aureus. Resistance of Staphylococcus aureus strains to methicillin is detected by the presence in the genome of staphylococcal chromosomal cassette of SCCmec type. In this work 60 clinical strains of MRSA isolated from the skin and mucous of patients with allergic pathology were examined. The analysis of Staphylococcus aureus strains was performed in differential mediums. Additionally, specific identification was carried out by MALDI-TOF. Specific regions of the genes of mec gene complex were identified by PCR. As a result of typing we determined that 47% of tested strains were resistant to oxacillin phenotypically, but did not contain the specific primer sites related to mecgene complex types I–IV. The remaining 53% of the strains were contained primer-specific amplicons. These strains were also phenotypically resistant to oxacillin. This study showed that MRSA strains as part of its genetic apparatus are several different types of SCCmec cassettes. This property allows them to express multidrug resistance.

Текст научной работы на тему «РАСПРОСТРАНЁННОСТЬ МОБИЛЬНЫХ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ЭЛЕМЕНТОВ SCCmec-ТИПА У ШТАММОВ STAPHYLOCOCCUS AUREUS, ИЗОЛИРОВАННЫХ С КОЖИ И СЛИЗИСТЫХ ПАЦИЕНТОВ С АЛЛЕРГИЧЕСКОЙ ПАТОЛОГИЕЙ»

284

Оригинальные исследования

РАСПРОСТРАНЁННОСТЬ МОБИЛЬНЫХ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ЭЛЕМЕНТОВ SCCmec-ТИПА У ШТАММОВ STAPHYLOCOCCUS AUREUS, ИЗОЛИРОВАННЫХ С КОЖИ И СЛИЗИСТЫХ ПАЦИЕНТОВ С АЛЛЕРГИЧЕСКОЙ ПАТОЛОГИЕЙ

А.Ф. Шамсутдинов 12, А.А. Тойменцева 1, Ю.А. Тюрин 23, Л.Т. Баязитова 2 1 Казанский (Приволжский) федеральный университет, Казань, Россия 2Казанский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии,

Казань, Россия

3 Казанский государственный медицинский университет, Казань, Россия

The spread of mobile genetic elements SCCmec-type strains Staphylococcus Aureus, isolated with skin and mucous of patients with allergic pathology

A.F. Shamsutdinov12, AA. Toymentseva 1, YuA. Tyurin 23, L.T. Bayazitova 2

1 Kazan (Volga region) Federal University, Kazan, Russia

2 Research Institute of Epidemiology and Microbiology, Kazan, Russia

3 Kazan State Medical University, Kazan, Russia

Золотистый стафилококк — повсеместно распространенный микроорганизм, вызывающий инфекционные заболевания у человека и животных. В настоящее время наблюдается рост встречаемости метициллин-резистентных штаммов Staphylococcus aureus. Устойчивость штаммов Staphylococcus aureus к метициллину определяется присутствием в геноме стафилококковых хромосомных кассет SCCmec типа.

В работе были исследованы 60 клинических штаммов MRSA, выделенных с кожи и слизистых пациентов с аллергической патологией. Изучение штаммов Staphylococcus aureus было проведено на дифференциальных средах. Дополнительно видовая идентификация была проведена с помощью MALDI-TOF. Специфические участки генов генного комплекса mec были выявлены с помощью метода ПЦР. В результате типирования было установлено, что 47% исследованных штаммов фенотипически характеризовались устойчивостью к оксациллину, но не содержали праймер-специфических участков относящихся к mec-генному комплексу I—IV типов. В остальных 53% штаммов были выявлены праймер-специфические ампликоны. Фенотипически эти штаммы также обладали устойчивостью к оксациллину. Проведенное исследование показало, что MRSA штаммы в составе своего генетического аппарата несут несколько различных типов SCCmec кассет. Это свойство позволяет им проявлять полирезистентность к нескольким антибактериальным препаратам.

Ключевые слова: золотистый стафиллокок, штаммы MRSA, стафилококковые хромосомные кассеты.

Staphylococcus aureus is widespread bacterium that causes inflectional diseases of humans and animals. Currently, there is growing incidence of methicillin-resistant strains of Staphylococcus aureus. Resistance of Staphylococcus aureus strains to methicillin is detected by the presence in the genome of staphylococcal chromosomal cassette of SCCmec type.

In this work 60 clinical strains of MRSA isolated from the skin and mucous of patients with allergic pathology were examined. The analysis of Staphylococcus aureus strains was performed in differential mediums. Additionally, specific identification was carried out by MALDI-TOF.

Specific regions of the genes of mec gene complex were identified by PCR. As a result of typing we determined that 47% of tested strains were resistant to oxacillin phenotypically, but did not contain the specific primer sites related to mec- gene complex types I—IV. The remaining 53% of the strains were contained primer-specific amplicons. These strains were also phenotypically resistant to oxacillin. This study showed that MRSA strains as part of its genetic apparatus are several different types of SCCmec cassettes. This property allows them to express multidrug resistance.

Key words: staphylococcus aureus, MRSA strains, staphylococcal chromosomal cassette.

Золотистый стафилококк (Staphylococcus aureus) является повсеместно распространенным микроорганизмом, вызывающим широкий спектр инфекционных заболеваний человека и животных. Наряду с инфекционной патологией, вызванной данным микроорганизмом, достаточно широко распространено бессимптомное носительство этого таксона у здоровых лиц (15—20% населения являются колонизированными этим микроорганизмом), а у лиц с различной патологией верхних дыхательных путей и кожи распространённость носительства ещё выше (до 30%) [1—3]. На современном этапе наблюдается неуклонный рост встречаемости метициллин-резистентных штаммов золотистого стафилококка (methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA). Так, согласно установленным особенностям, наличие у штаммов SCCmec I, IV и V типов формирует устойчивость исключительно к р-лактамным антибиотикам, наличие SCCmec II и III типов обуслав-

е-mail: shamsutdinov2006@yandex.ru

ливают множественную устойчивость, так как эти кассеты содержат дополнительные детерминанты устойчивости, расположенные на интегрированных плазмидах. Необходимо отметить, что до конца 90-х годов MRSA был исключительно внутрибольничной проблемой. В последующие десятилетия, благодаря внедрению программ инфекционного контроля в больницах и домах престарелых, уровень заболеваемости внутрибольничной MRSA-инфекцией существенно снизился. В то же время были обнаружены другие, внебольничные резервуары MRSA, которые поддерживают циркуляцию мультирезистентного возбудителя и труднее поддаются контролю. Речь идет о внебольничном MRSA, о котором заговорили в начале 2000-х годов, и стафилококке зоонозного происхождения, который оказался в центре внимания всего несколько лет назад. Внегоспитальные штаммы MRSA способны вызывать некротизирующую форму пневмонии, характеризующуюся крайне

Гены & Клетки Том IX, № 3, 2014

Оригинальные исследования

285

тяжелым течением и требующей госпитализации пациента, в связи с чем возникает угроза заноса и распространения таких штаммов в стационарах.

Мировое распространение MRSA, как считается, обусловлено диссеминацией нескольких клональных линий со специфической генетикой [4]. Согласно данным В. Воробьевой с соавт. (2008), каждая клональная линия имеет особенности патогенности и устойчивости к лекарственным препаратам, причем распространение некоторых из них принимает эпидемический характер [5]. Устойчивость штаммов S. aureus к метициллину определяется присутствием в них стафилококковых хромосомных кассет SCCmec типа. SCCmec — это мобильный генетический элемент, который несет основной детерминант устойчивости к р-лактамным антибиотикам широкого спектра действия с помощью гена mecA, который кодирует пенициллин-связывающий белок-2 (ПСБ-2) и расположен на мобильном генетическом элементе — SCCmec [6].

Метициллин и другие р-лактамные антибиотики являются структурными аналогами D-аланил-аланина, и поэтому ингибируют фермент транспептидазу. Как известно, р-лактамные антибиотики являются субстратными аналогами и ковалентны се-рин-активному центру ПСБ, которые необходимы для построения клеточной стенки стафилококка. Связь ПСБ с р-лактамами необратима и приводит к гибели стафилококков.

При подавлении р-лактамным антибиотиком активности основных пенициллинсвязывающих белков, ПСБ-2, кодируемый mecA геном, в силу своего более низкого сродства к препаратам данной группы, продолжает функционировать и сохраняет микробной клетке жизнеспособность. Однако фенотипическая экспрессия гена mecA очень вариабельна и зависит от многих факторов, например, от питательной среды, температуры и т.д.

Вскоре после первого упоминания о SCCmec, были описаны несколько других, структурно отличающихся между собой SCCmec [7]. Их разделили по нескольким характеристикам: 1) наличие гена mecA в генном комплексе mec; 2) наличие гена реком-биназы ccr (ccrA, B и/или ccrC) в комплексе генов ccr; 3) способность внедрения в определенный сайт стафилококковой хромосомы, который называется последовательностью сайта интеграции (integration site sequence, ISS) и служит мишенью для ccr-опосредованной рекомбинации; 4) наличие примыкающих прямых повторяющихся последовательностей, содержащих ISS [8]. Примыкающие гены рекомбиназ (ccrA/ccrB или ccrC) позволяют осуществлять внутри- и межвидовой горизонтальный перенос SCCmec. Происхождение SCCmec неясно, но, возможно, они берут начало из коагулаза-отри-цательных разновидностей стафилококка [9]. Также SCCmec были классифицированы на типы и подтипы. Типы определяются комбинацией разных типов генных комплексов ccr с генными комплексами mec (табл. 1). Это ключевые элементы кассеты, отвечающие за встраивание и вырезание SCCmec в геном и фенотипическую устойчивость к р-лактамным антибиотикам [10].

До недавнего времени существовали две альтернативные теории, объясняющие распространение SCCTec кассет у S.aureus. В то время как одноклональная теория предполагала, что все клоны MRSA имеют одного предка и что SCCmec кассета была

приобретена однократно, мультиклональная теория утверждает, что SCCTec кассета была независимо приобретена штаммами, относящимися к разным генетическим линиям золотистого стафилококка. Именно вторая теория в настоящее время подтверждена многочисленными исследованиями [11, 12].

Таблица 1. Типы SCCmec, показанные для S. aureus [10 с изменениями]

Тип SCCmec Тип генного комплекса ccr Тип генного комплекса mec

I 1 (A1B1) B

II 2 (A2B2) A

III 3 (A3B3) A

IV 2 (A2B2) B

V 5 (C) C2

VI 4 (A4B4) B

VII 5 (C) C1

VIII 4 (A4B4) A

Классификация SCCmec осуществляется по присутствию в ней некоторых генных комплексов, таких как ccr и mec. Генный комплекс ccr состоит из генов ccr, окруженных открытыми рамками считывания (open reading frames ORF), функции некоторых из них до сих пор остаются неизвестными. К настоящему времени для S. aureus были определены 3 типа генов комплекса ccr: ccrA, ccrB, и ccrC, — у которых совпадения в последовательности нуклеотидов ДНК ниже 50%. Гены ccrA и ccrB были классифицированы в четыре аллотипа, так как их генетические последовательности имеют совпадения 60—82%. А ccrC представлен только одним аллотипом, так как совпадения в последовательности ДНК у него составляет больше 85%. Генные комплексы ccr, присутствующие в клетках S. aureus, включают несколько типов: тип 1 (несет ген ccrA1B1), тип 2 (несет ccrA2B2), тип 3 (несет ccrA3B3), тип 4 (несет ccrA4B4) и тип 5 (несет ccrC), которые могут быть обнаружены с помощью обычного анализа ПЦР в присутствии пары необходимых праймеров [13]. Генный комплекс mec состоит из гена mecA, его регуляторных генов и соединенных с ними инсерци-онных последовательностей. Генный комплекс mec класса A представляет собой прототип, который содержит mecA, его регуляторные гены mecR1 и mecI, расположенные выше самого mecA, гипервариабельную область (hypervariable region, HVR) и инсер-ционную последовательность IS431, расположенную ниже гена mecA. Генный комплекс mec класса B состоит из гена mecA, гена mecR1, укороченного в результате вставки последовательности IS7272 и расположенного выше, чем ген mecA, а также HVR и инсерционной последовательности IS431 ниже гена mecA. Генный комплекс mec класса C включает в себя ген mecA, ген mecR1, укороченный в результате вставки последовательности IS431 и расположеный выше гена mecA, а также HVR и последовательность IS431 внизу по отношению к гену mecA [14]. Генный комплекс mec класса D состоит из гена mecA и гена

Гены & Клетки Том IX, № 3, 2014

286

Оригинальные исследования

AmecRI и имеет в своем составе вставку инсерци-онных последовательностей ниже гена AmecRI [15]. К настоящему времени для S. aureus описано 8 типов SCCmec. Первые три типа SCCmec именуются как типы I, II, и III, соответственно [6]. Последующие новые типы SCCmec пронумерованы от IV до VIII

[16]. Эта номенклатура была сохранена. Наряду с ней появилась новая, более информативная система обозначения типа SCCmec, основанная на типах ccr и классах mec. Например, тип I (1B) SCCmec указывает на то, что данная SCCmec имеет комплекс 1 типа ccr и генный комплекс mec класса B. Поэтому типы SCCmec обозначаются римскими цифрами, за которыми следует указывать тип генного комплекса ccr и генного комплекса mec вместе в круглых скобках, например, тип II (2A), тип III (3A), тип IV (2B), тип V (5C2), тип VI (4B), тип VII (5C1) и тип VIII (4A) [17]. В большинство SCCmec входит множество различных структур: помимо генных комплексов ccr и mec, включаются инсерционные последовательности (IS) и транспозоны (Tn). На основе данных о различиях внутри J-областей каждый тип SCCmec был разделен на подтипы, при наличии тех же самых генных комплексов ccr и mec [18].

Целью исследования являлось определение распространённости и типирование в геноме штаммов S. aureus, выделенных с кожи и слизистых оболочек групп риска с аллергической патологией, SCCmec-кассеты первых пяти типов.

Материал и методы

Используемые штаммы и среды

В работе были исследованы 60 клинических MRSA штаммов S. aureus, выделенных с кожи и слизистых пациентов с аллергической патологией (сезонный аллергический ринит, персистирующий аллергический ринит, атопическая экзема и дерматит (младенческая форма), предоставленные ФБУН «КНИИЭМ Роспотребнадзора» из коллекции лаборатории микробиологии (зав. лаб. к.м.н. Баязитова Л.Т.). В качестве контроля были использованы эта-

лонные штаммы S. aureus ATCC 38591 (является чувствительным к метициллину и не несет SCCmec) и ATCC 29213 (является MRSA, несет гены mecA, I, II, IVb, IVc и IVd типов [19]), предоставленные ГИСК им. Тарасевича.

Выделение бактерий с кожи и слизистых проводили в соответствии с регламентирующим документом [20] и требованиями, предъявляемыми к сбору и транспортировке биологического материала [21]. Идентификацию золотистого стафилококка начинали с изучения колоний на желточно-солевом агаре, обладающим дифференциально-диагностическим свойством к данному виду стафилококка. В качестве дополнительной среды была использована среда с кровяным агаром. На выбранных средах проводили учет наличия лецитиназы и пигмента (МЖСА) и способности к гемолизу (кровяной агар) и отбирали выпуклые, ровные непрозрачные колонии S. aureus средней величины белого, лимонно-желтого или золотистого цвета. Дополнительная видовая идентификация штаммов была проведена с применением матрично-активированной лазерной десорбции/ио-низации (matrix assisted laser desorbtion/ionization, MALDI-TOF).

Выделение бактериальной ДНК

Выделение ДНК из биомассы S. aureus было произведено с помощью стандартного набора реагентов компании ООО «Omnix» (Россия).

Детекция SCCmec и их типирование

Специфические участки генов генного комплекса mec были выявлены с помощью метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием 10 пар специфических праймеров (прямых и обратных), синтезированных и лиофилизированных ЗАО «Синтол» (Россия). Праймеры комплементарны концевым последовательностям ДНК-специфического фрагмента и ориентированы таким образом, что синтез ДНК протекает только между ними (табл. 2).

Таблица 2. Праймеры, используемые для типирование и детекции SCCmec кассет (по [22] с изменениями)

Праймер 5’-3’ последовательность Размер ампликона (п.о.) Детектируемый тип SCCmec

TypeI-F gct-tta-aag-agt-gtc-gtt-aca-gg 613 SCCmec I

TypeI-R gtt-ctc-tca-tag-tat-gac-gtc-c

TypeII-F cgt-tga-aga-tga-tga-agc-g 398 SCCmec II

TypeII-R cga-aat-caa-tgg-tta-atg-gac-c

TypeIII-F cca-tat-tgt-gta-cga-tgc-g 280 SCCmec III

TypeIII-R cct-tag-ttg-tcg-taa-cag-atc-g

TypelVa-F gccttattcgaagaaaccg 776 SCCmec IVa

TypelVa-R cta-ctc-ttc-tga-aaa-gcg-tcg

TypelVb-F tct-gga-att-act-tca-gct-gc 493 SCCmec IVb

TypelVb-R aaa-caa-tat-tgc-tct-ccc-tc

TypeIVc-F aca-ata-ttt-gta-tta-tcg-gag-agc 200 SCCmec IVc

TypeIVc-R ttg-gta-tga-ggt-att-gct-gg

Гены & Клетки Том IX, № 3, 2014

Оригинальные исследования

287

Окончание таблицы 2

Праймер 5’-3’ последовательность Размер ампликона (п.о.) Детектируемый тип SCCmec

TypeIVd-F5 ctc-aaa-ata-cgg-acc-cca-ata-ca 881 SCCmec IVd

TypeIVd-R6 tgc-tcc-agt-aat-tgc-taa-ag

TypeV-F gaa-cat-tgt-tac-tta-aat-gag-cg 325 SCCmec V

TypeV-R tga-aag-ttg-tac-cct-tga-cac-c

mecI-F ccc-ttt-tta-tac-aat-ctc-gtt 146 mec A генного комплекса

mecI-R ata-tca-tct-gca-gaa-tgg-g

IS1272-F mecR1-R tat-ttt-tgg-gtt-tca-ctc-gg ctc-cac-gtt-aat-tcc-att-aat-acc 1,305 mec B генного комплекса

F — прямой праймер; R — обратный праймер.

Амплификация была проведена с помощью термоциклера «Терцик» (Россия) по методике, предложенной Zhang K. et al. (2002) [22].

Анализ ампликонов был проведен методом горизонтального электрофореза в 2% агарозном геле с напряжоннестью электрического поля 5 В/см [23]. Для измерения размера ампликонов были использованы маркеры: 1Kb Ladder DNA marker (300— 10000 п.о.) и Ladder DNA marker (100—3000 п.о.) (Axygen, США).

Для визуализации был использован интеркали-рующий краситель этидиум бромид в концентрации 10 мг/мл (Helicon, Россия). Визуализация и фотосъёмка гелей были проведены с использованием трансиллюминатора Vilber Lourmat (Франция) и системы обработки изображений Биотест-1 (Россия).

Результаты и обсуждение

С помощью методов классической микробиологии идентификации бактерий по характерному росту колоний на двух различных дифференциальных средах и пигментации на ЖСА, а также по способности к гемолизу на кровяном агаре 60 отобранных изо-лятов принадлежали к виду S. aureus.

Идентификация 60 образцов стафилококка с помощью метода MALDI-TOF показала гомологию со штаммами S. aureus, входящими в базу данных NCBI.

Сравнение результатов, полученных с помощь классического микробиологического метода и методом биотипирования MALDI-TOF, показало, что все изоляты относились к золотистому стафилококку. Данные о наличии различных типов SCCmec-кассет были получены на основе информации о длине генспецифичных праймеров, по сравнению со специальными ДНК-маркерами (рис.).

В результате типирования нами было установлено, что 28 (47%) штаммов из 60 исследованных не содержали праймер-специфических участков, относящихся к пяти типам (I, II, III, IV a, b, d, V) SCCmec-кассет и mec-генным комплексам класса А и B. Фенотипически данные штаммы характеризовались устойчивостью к оксациллину на MRSA-агаре и были отнесены к метициллин-резистентной группе штаммов, 17 из них выделены со слизистой носа и 11 с кожи детей с атопическим дерматитом. Возможно устойчивость к антибиотикам связана с наличием в геноме этих штаммов других типов mec-кассет — Type VI—VIII, которые не были нами рассмотрены в данном исследовании.

Длина, п.о.

1500

1000 800 700 600 500 400

1 2 3 4 5 6

Продукты ДНК- амплификации mec-кассет

штаммов S. aureus:

1 — ДНК-маркер; 2, 3, 6 — образцы ДНК типа V;

4 — образец ДНК типа mecA;

5 — образец ДНК типа IVb

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

В других 32 (53%) из 60 штаммов, были выявлены праймер-специфические-ампликоны, характерные для SCCmec кассет и mec-генных комплексов класса А и B. Фенотипически данные штаммы обладали устойчивостью к оксациллину, и рост данных штаммов оксациллином не ингибировался. Все эти метициллин-резистентные штаммы, в зависимости от генетических особенностей, были разделены на две группы, представленные ниже.

Группа 1 (4 из 32): содержит в своем геноме генные комплексы mecA класса (2 штамма) и генные комплексы mecA и mecB классов (2 штамма). При этом праймер-специфических ампликонов, характерных для SCCmec кассет I-V типов в данных штаммах не выявлено. Можно предположить, что данные штаммы могут содержать SCCmec VI и VIII.

Группа 2 (28 из 32): штаммы, в геноме которых выявлены ампликон-специфические участки, характерные для SCCmec I-V типов. Данная группа является гетерогенной и состоит из 12 штаммов, которые содержат в геноме 2 и более типов различных SCCmec, и 16 штаммов, которые содержали только один тип SCCmec.

Таким образом, проведенное исследование по определению распространенности типовой структуры стафилококковых хромосомных кассет mec (SCCmec) показало, что штаммы, колонизирующие кожу и слизистые оболочки у пациентов с нарушением целостности этих органов в результате развития аллергического воспаления и проявляющие устойчивость к р-лактамным антибиотикам, в составе своего генетического аппарата несут несколько различных типов SCCmec кассет. Дан-

Гены & Клетки Том IX, № 3, 2014

288

Оригинальные исследования

ное приобретённое свойство позволяет штаммам S. aureus проявлять полирезистентность к нескольким антибактериальным препаратам благодаря дополнительным детерминантам, интегрированным в плазмидах, присутствующих в SCCmec II и III типов.

Благодарности

Работа частично была финансирована из средств субсидии, выделенной в рамках государственной поддержки Казанского (Приволжского) федерального университета в целях повышения его конкурентоспособности среди ведущих мировых научно-

ЛИТЕРАТУРА:

1. Wertheim H.F., Melles D.C., Vos M.C. et al. The role of nasal carriage in Staphylococcus aureus infections. Lancet Infect Dis. 2005; 5: 751-62.

2. von Eiff C., Becker K., Machka K. et al. Nasal carriage as a source of Staphylococcus aureus bacteremia. Study Group. N. Engl. J. Med. 2001; 344: 11-6.

3. Wertheim H.F., van Kleef M., Vos M.C. et al. Nose picking and nasal carriage of Staphylococcus aureus. Infect Control. Hosp. Epidemiol. 2006; 27: 863-7.

4. Дмитренко О.А. Молекулярно-генетические аспекты эпидемиологии внутрибольничных инфекций, вызванных представителями вида Staphylococcus aureus, устойчивыми к метициллину/ оксациллину [диссертация]. Москва: ГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН; 2008.

5. Vorobieva V., Bazhukova T., Hanssen A.M. et al. Clinical isolates of Staphylococcus aureus from the Arkhangelsk region, Russia: antimicrobial susceptibility, molecular epidemiology, and distribution of Panton-Valentine leukocidin genes. ApMiS 2008; 116(10): 877-87.

6. Ito T., Katayama Y., Hiramatsu K. Cloning and nucleotide sequence determination of the entire mec DNA of pre-methicillin-resistant Staphylococcus aureus N315. Antimicrob. Agents Chemother. 1999; 43(6):1449-58.

7. Ito T., Katayama Y., Asada K. et al. Structural comparison of three types of staphylococcal cassette chromosome mec integrated in the chromosome in methicillin- resistant Staphylococcus aureus. Antimicrob. Agents Chemother. 2001; 45: 1323-36.

8. Katayama Y., Ito T., Hiramatsu K. A new class of genetic element, staphylococcal cassette chromosome mec, encodes methicillin resistance in Staphylococcus aureus. Antimicrob. Agents Chemother. 2000; 44: 1549-55.

9. Hiramatsu K., Cui L., Kuroda M. et al. The emergence and evolution of methicillin-resistant Staphylococcus aureus. Trends Microbiol. 2001; 9: 486-93.

10. International Working Group on the Staphylococcal Cassette Chromosome elements. http://www.sccmec.org/Pages/SCC_HomeEN. html; 2010.

11. Shore A., Rossney A.S., Keane C.T. et al. Seven novel variants of the staphylococcal chromosomal cassette mec in methicillin-resistant Staphylococcus aureus isolates from Ireland. Antimicrob. Agents Chemother. 2005; 49: 2070-83.

12. Stephens A.J., Huygens F., Giffard P.M. Systematic derivation of marker sets for staphylococcal cassette chromosome mec typing. Antimicrob. Agents Chemother. 2007; 51: 2954-64.

образовательных центров. Работа по MALDI-TOF биотипированию выполнена на оборудовании междисциплинарного центра протеомных исследований Казанского (Приволжского) федерального университета (к.б.н. Тойменцева А.А.).

Авторы выражают благодарность: Альберту Анатольевичу Ризванову, д.б.н., г.н.с., профессору кафедры генетики Института фундаментальной медицины и биологии Казанского (Приволжского) федерального университета; Рустему Салаховичу Фассахову, д.м.н., профессору, директору Казанского научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии Роспотребнадзора.

13. Wisplinghoff H., Rosato A.E., Enright M.C. et al. Related clones containing SCCmec type IV predominate among clinically significant Staphylococcus epidermidis isolates. Antimicrob. Agents Chemother. 2003; 47: 3574-79.

14. Wu S., Piscitelli C., Tomasz A. Tracking the evolutionary origin of the methicillin resistance gene: cloning and sequencing of a homologue of mecA from a methicillin susceptible strain of Staphylococcus sciuri. Microb. Drug Resist. 1996; 2: 435-41.

15. Katayama Y., Ito T., Hiramatsu K. Genetic organization of the chromosome region surrounding mecA in clinical staphylococcal strains: role of IS431-mediated mecI deletion in expression of resistance in mecA-carrying, low-level methicillin-resistant Staphylococcus haemolyticus. Antimicrob. Agents Chemother. 2001; 45: 1955-63.

16. Berglund C., Ito T., Ikeda M. et al. Novel type of staphylococcal cassette chromosome mec in a methicillin-resistant Staphylococcus aureus strain isolated in Sweden. Antimicrob. Agents Chemother. 2008; 52(3): 512-6.

17. Zhang K. , McClure J. A., Elsayed S. et al. Novel staphylococcal cassette chromosome mec type, tentatively designated type VIII, harboring class A mec and type 4 ccr gene complexes in a Canadian epidemic strain of methicillin - resistant Staphylococcus aureus. Antimicrob. Agents Chemother. 2009; 53: 531-40.

18. Oliveira D.C., Milheirico C., de Lencastre H. Redefining a structural variant of staphylococcal cassette chromosome mec, SCCmec type VI. Antimicrob. Agents Chemother. 2006; 50: 3457-59.

19. Carson K.C., Bartlett J.G., Tan T.J. et al. In Vitro Susceptibility of Methicillin - Resistant Staphylococcus aureus and Methicillin -Susceptible Staphylococcus aureus to a New Antimicrobial, Copper Silicate. Antimicrob. Agents Chemother. 2007; 51(12): 4505-7.

20. Приказ Министерства Здравоохранения СССР №535 от 22 апреля 1985 г. Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений.

21. Зубков М.Н. Сбор, транспортировка биологического материала и трактовка результатов микробиологический исследований. Клин. Микробиол. Антимикроб. Химиотер. 2004; 6(2): 147-50.

22. Zhang K., McClure J.A., Elsayced S. et al. Novel multiplex PCR assay for characterisation and concomitant subtyping of staphylococcal cassette chromosome mec types I to V in methicillin-resistant Staphylococcus aureus. J Clin. Microbiol. 2005; 43: 5026-33.

23. Остерман Л.А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот: электрофорез и ультрацентрифугирование. Практическое пособие. М.: Наука; 1981.

Поступила: 15.09.2014

Гены & Клетки Том IX, № 3, 2014

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.