CC BY
77
Эпизоотология, эпидемиология и мониторинг паразитарных болезней
УДК 619:616.995.132
РАСПРОСТРАНЕНИЕ ТОКСОКАРОЗА СОБАК И КОШЕК В г. РЯЗАНИ, ИММУНОДИАГНОСТИКА И ТЕРАПИЯ
П.А. СОЛОПОВ аспирант
Рязанский государственный агротехнологическийуниеерситет им. П.А. Костычееа, 390044, г. Рязань, ул. Костычееа, 1, e-mail: peace100@mail.ru
Изучены особенности эпизоотологии токсокароза собак и кошек в г. Рязани. Разработаны методы получения экскреторно-секреторных антигенов Toxocara canis и T. cati для проведения иммунодиагностических тестов ИФА и РИГА. Проведено испытание антигельминтного препарата «Барс спот-он» и установлена его 100%-ная эффективность.
Ключевые слова: собаки, Toxocara canis, антиген, ИФА, терапия.
Численность собак и кошек в крупных городах, мегаполисах и населенных пунктах Российской Федерации постоянно увеличивается. Такая тенденция способствует повышению уровня эпизоотического процесса при гель-минтозах плотоядных городской и сельской популяций. Наиболее распространенный гельминтозооноз - токсокароз, вызывается нематодами Toxocara canis и T. cati.
Выделяемые токсокарами метаболиты могут вызывать судороги и парезы [4]. При высокой интенсивности инвазии у собак отмечают угнетение, анорексию, снижение работоспособности. Инвазированные собаки и кошки представляют эпидемическую опасность. T. canis и T. cati в равной степени патогенны для человека и обусловливают различную органопатологию [1, 3, 5]. Гельминты могут вызывать иммунодефицитные состояния, сопровождающиеся дисбалансом и нарушением клеточных и гуморальных факторов иммунитета и структурно-функционального состояния различных органов.
Некоторые антигельминтные препараты, применяемые в настоящее время, также могут обусловливать иммуносупрессию и усугублять патологические процессы в органах больных токсокарозом животных [2]. У взрослых собак и кошек наблюдают преимущественно ларвальную форму токсокароза, которую диагностировать трудно. Мигрирующие в организме неспецифического хозяина личинки и вызываемые ими патологические процессы известны как «larva migrans».
Материалы и методы
Копроовоскопические исследования собак и кошек на токсокароз проводили в 2006-2009 гг. в г. Рязани и нескольких населенных пунктах Рязанской области. Для обследования животных использовали методы Фюллеборна, Щербовича и Дарлинга.
С целью получения экскреторно-секреторных антигенов для иммунодиагностических тестов (РНГА, ИФА) проведены две серии опытов по культивированию личинок T. canis. Материалом служили половозрелые самки ток-сокар, полученные при вскрытии трупов щенков 1-3 мес в муниципальном предприятии «Лайка». Половозрелые токсокары длиной 4-12,5 см локализо-
_59
Российский паразитологический журнал, 2009, № 4
вались в тонкой кишке щенков. Яйца, полученные при препарировании и вскрытии матки самок токсокар, культивировали в специальной среде из 1%-ного раствора глютамина на фосфатно-солевом буферном растворе (рН=7,2).
Суспензию яиц выдерживали в помещении при средней суточной температуре +23 °С, относительной влажности воздуха 85 % и естественном освещении. Наблюдение за развитием личинок осуществляли через каждые 24 ч.
В течение 7 сут фракцию личинок 2-й стадии токсокар культивировали в питательной среде с целью получения экскреторно-секреторных антигенов (ESAg), после чего суспензию центрифугировали при частоте вращения 6000 мин-1. В качестве первичного антигена для ИФА использовали супернатант (очищенные экскреторно-секреторные компоненты личинок T. canis). Вещества небелковой природы удаляли путем высаливания насыщенным раствором сульфата аммония с последующим диализом против дистиллированной воды на холоде (при +4 °С).
Результаты и обсуждение
Экстенсивность инвазии при токсокарозе собак в г. Рязани составила 67 % (106 из 158), кошек - 58 % (34 из 59). Уровень инвазии плотоядных животных сельской популяции был несколько выше, чем городской, что объясняется их беспривязным содержанием, свободным перемещением, частыми контактами между собой и высокой вероятностью заражения через резервуарных хозяев - мышевидных грызунов. У собак, содержащихся в питомниках и кинологических центрах, яйца токсокар не обнаружены.
Интенсивность инвазии у кошек составила в среднем 360 яиц в 1 г фекалий, тогда как у собак этот показатель ниже - 120 яиц.
С целью сероэпизоотологического мониторинга в РНГА и ИФА на ток-сокароз собак и кошек выполнены экспериментальные работы по культивированию яиц T. canis и T. cati. Через сутки после постановки опыта в глюта-мин содержащей среде в 15 из 100 яиц отмечен бластогенез - с одной стороны бластомера видно просветление. Через 3 сут в бластомерах 9 из 100 яиц образовалась перетяжка в центре, а в 2 яйцах бластомеры поделились на два. Через 7 сут по 2 бластомера установлено у 27,3 % яиц в препарате, ау 9 % их число достигает 4-5. На 11-е сутки бластогенез наблюдали у 50 % яиц. В 16,7 % случаев число бластомеров составляло 8-10. К 17-м суткам их количество у большинства яиц достигало 16, а на 19-е сутки у 26 % яиц отмечен переход к гистогенезу. Формирование личинки началось на 21-е сутки, что определили по контурам клеточной массы. В этот же период общее число развивающихся яиц достигало 98 %, оставшиеся 2 % яиц разрушились. Спустя еще 3 суток в 3 % случаев личинки полностью сформировались и проявляли двигательную активность внутри яйца.
Через 30 сут с начала опыта 31 % яиц содержали жизнеспособные личинки 1-й стадии. Такое несинхронное развитие яиц и личинок связано с тем, что не все яйца, находящиеся в матке нематоды, одинаково зрелые.
При снижении температуры в помещении и солнечной активности развитие личинок существенно замедлялось.
Для разрушения оболочек яиц на них воздействовали раствором, состоящим из комплекса пищеварительных ферментов в 1%-ном растворе соляной кислоты (для моделирования естественной среды тонкой кишки). Спустя двое суток более 70 % инвазионных личинок второй стадии освободились из яйцевых оболочек.
При исследовании сывороток крови экспериментально зараженных ток-сокарами щенков установлены положительные результаты РНГА и ИФА с ESAg и соматическим антигеном личинок 2-й стадии T. canis: ИФА - 1 : 320 - 1 : 5120 и 1 : 160, РНГА - 1 : 160 - 1 : 1280 и 1 : 80 соответственно. Апробацию антигенных диагностикумов проводили с использованием положитель-
60_
Российский паразитологический журнал, 2009, № 4
ных и отрицательных контрольных диагностических образцов из набора для ИФА «Тиаскар», разработанного в НПО «Вектор-Бест» (г. Новосибирск).
С целью объективного представления об эффективности диагностики токсокароза собак в ИФА сопоставляли показатели серологического и копро -овоскопического исследований 12 щенков 1,5-2,5 мес, рожденных от двух из пяти серопозитивных на токсокароз собак. Во всех случаях получены положительные результаты на токсокароз в РНГА (1 : 320 - 1 : 1280) и в ИФА (1 : 320 -1 : 10240). Яйца T. canis (от 840 до 3725 экз. в 1 г фекалий) обнаружены у всех щенков из двух пометов от серопозитивных на токсокароз собак.
Иммунодиагностические исследования с помощью ИФА экспериментально зараженных инвазионными яйцами токсокар (от 80 до 200) девяти щенков 2,5-3-месячного возраста позволили установить значительное повышение уровня специфических антител на 14, 25 и 37-е сутки инвазии - 1 : 320, 1 : 5120 и 1 : 2560 соответственно. В последующие сутки после заражения титры антител к T. canis у подопытных животных оставались на уровне 1 : 640 - 1 : 1280. Отмечена более высокая чувствительность ИФА и РНГА при использовании ESAg личиночных стадий T. canis.
В опытах на 52 собаках от 4 до 18 мес изучена диагностическая эффективность ИФА. С помощью ИФА установлено 46,2 % серопозитивных животных (24 из 52).
РНГА менее чувствительна по сравнению с ИФА. В ИФА антиген личинок 2-й T. canis является более специфичным по сравнению с соматическим личиночным.
Результаты изучения специфичности, чувствительности, информативности ИФА и РНГА по общепринятой схеме позволили определить высокую диагностическую эффективность двух методов.
В трех ветеринарных клиниках Рязанской области проведены исследования по изучению эффективности противопаразитарного препарата «Барс спот-он» (ивермектин + празиквантел).
Испытания выполнены в летний и осенний сезоны года на собаках и кошках, зараженных гельминтами и паразитическими членистоногими. Препарат «Барс спот-он» применяли в дозе 5 мг/кг по празиквантелу и 0,2 мг/кг по ивермектину. По результатам наблюдений и исследований установлена 100%-ная эффективность «Барс спот-он» при токсокарозе собак и кошек.
Копроовоскопические исследования 9 спонтанно зараженных токсока-рами беспородных щенков 3-4 мес показали, что на 7-8-е сутки после дегельминтизации животные полностью освободились от половозрелых токсокар. В фекалиях щенков на 2-3-и сутки после обработки обнаружено от 3 до 10 половозрелых особей T. canis.
При применении «Барс спот-он» 7 котятам 2-5-месячного возраста половозрелые токсокары обнаружены в фекалиях трех котят на 3 и 4-е сутки после дегельминтизации.
Таким образом, установлено широкое распространение токсокароза у собак и кошек в г. Рязани, разработаны иммунореагенты для ИФА и РИГА на основе экскреторно-секреторных антигенов личинок T. canis и проведен се-роэпизоотологический мониторинг на токсокароз; изучена эффективность препарата «Барс спот-он» при токсокарозе. Исходя из вышеперечисленных данных, можно сделать вывод о необходимости постоянного сероэпизоотоло-гического мониторинга по токсокарозу.
Литература
1. Березанцее Ю.А., Криеенко В.В. Эпидемиологические особенности токсокароза человека в условиях Ленинграда // Тез. докл. 9 съезда Всес. об-ва гельминтол. - М., 1986. - С. 41-46.
2. Беспалова Н.С., Алтухов A.M. Изучение структурно-функционального состояния почек собак при токсокарозе // Мелкие домашние и дикие животные. - 2005. - № 4. - С. 25-30.
3. Котельников Г.А. Гельминтологические исследования животных и окружающей среды. Справочник. - М.: Колос, 1984. - С. 21-35.
4. Сазончик В. Toxocara canis и методы борьбы с токсокарозом // Зообум. - 1995. - № 6. - С. 18-19.
5. Тумолъская Н.И. Токсокароз человека // М.: Врач, 1997. - № 9. - С. 1112.
Distribution of toxocarosis of dogs and cats in Ryazan, immunodiagnostic and
treatment
P.A. Solopov
Features of epizootology of toxocarosis of dogs and cats in Ryazan are investigated. Methods of reception of excretory-secretory antigens of Toxocara canis and T. cati for immunodiagnostic tests are developed. Anthelmintic efficiency of «Bars spot-on» is studied and 100 % efficiency is received.
Keywords: dogs, Toxocara canis, antigene, ELISA, therapy.
