CC BY
58
OPИГИНAЛЬНЫE СТАТЬИ
в КАЛАШНИГОВ А.Е., УДИНА И.Г., 2017 УДК 578.84.083.2
Калашников А.Е., Удина И.Г.
РАСПРОСТРАНЕНИЕ РНК-СОДЕРжАщИх ВИРУСОВ ПчЕЛ У МЕДОНОСНОЙ ПчЕЛЫ (APIS MELLIFERA) В ОТДЕЛьНЫх РЕГИОНАх РОССИИ
ФГБУ «Институт общей генетики им. Н.И. Вавилова Российской академии наук», Москва, 119991
На пасеках в отдельных регионах России обнаружено широкое распространение РНК-содержащих вирусов пчел у медоносной пчелы Apis mellifera методом ОТ-ПЦР. Выявленные РНК-содержащие вирусы пчел распространяются одновременно с клещевой инвазией Varroa destructor и вызывают гибель пчел, что наносит пчеловодству экономический ущерб. В образцах Varroa destructor обнаружено присутствие вирусов пчел DWV и ABPV. Установлена высокая степень инфицирования РНК-содержащими вирусами (BQCV, DWV SBV, ABPV, CBPV и KBV) в среднем не менее 50% для семей пчел с клещевым поражением. В изученных семьях пчел обнаружена смешанная инфекция с присутствием от двух до шести вирусов одновременно. Полученные амплифицированные фрагменты вирусов BQCV, DWV и sBV с использованием ОТ-ПЦР секвенированы и зарегистрированы в Genbank.
Ключевые слова: РНК-содержащие вирусы пчел; медоносная пчела; Apis mellifera; Varroa destructor; ОТ-ПЦР.
Для цитирования: Калашников А.Е., Удина И.Г. Распространение РНК-содержащих вирусов пчел у медоносной пчелы (Apis mellifera) в отдельных регионах России. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2017; 35 (1): 31-35. DOI 10.18821/0208-0613-2017-35-1-31-35.
Для популяций пчел в настоящее время существуют факторы риска заболеваний (экологические и биогенные), которые одинаково влияют на все опыляющие виды насекомых, а не только на диких пчел [1]. Для отечественных популяций пчел данные о биогенных рисках и инфицировании вирусами немногочисленны. В нашей лаборатории впервые при помощи молекулярно-генетических методов (ОТ-ПЦР) подтверждено инфицирование пчел РНК-содержащими вирусами на территории России, а также впервые проведено секвенирование фрагмента нуклеотидной последовательности вируса деформации крыла (DWV) и проведен ее филогенетический анализ [2, 3]. На территории России изучен вирус мешотчатого расплода (SBV) [4]. Проведено изучение РНК-вирусной инфекции пчел на отдельных пасеках [5]. Целью данного исследования было изучение распространения РНК-содержащих вирусов пчел в некоторых регионах России с помощью молекулярно-генетических методов.
Материалы и методы
Живые пчелы для выделения РНК и проведения ОТ-ПЦР отобраны на пасеках (табл. 1, рис. 1) в 2009-2012 гг. из ульев, инфицированных клещом или с видимыми признаками инфекции или падежа пчел. Поражение варроатозом со степенью инвазии, начиная с 3%, определяли по модифицированной методике (снятие клеща горячим мыльным раствором вместо сахарной пудры) [6].
Тотальный пул РНК выделяли из 50 мкг грудного отдела пчелы при помощи набора Trizol DNA Prep, а обратную транскрипцию осуществляли при помощи набора GenPack RT-PCR Core («Izogen», Россия) с количеством фермента 50 ед/реакция. Для проведения ПЦР использовали набор GenePack RT PCR core («Izogen», Россия). ПЦР проводили по модифицированному
методу, предложенному ранее с использованием специфичных к вирусам праймеров: DWV (вирус деформации крыла), ABPV (вирус острого паралича), CBPV (вирус хронического паралича), KBV (кашмирский вирус), SBV (вирус мешотчатого расплода), BQCV (вирус черных маточников) [7, 8]. Для более надежного выявления вируса DWV и ABPV использовали дополнительные пары праймеров ABPV (вариант 2) [9] и DWV (вариант 2) [10]. Последовательности олигонуклеотидных праймеров синтезировали в фирме «Синтол» (Россия) (табл. 2).
Температура отжига праймеров снижена на 2-3 градуса из-за использования лиофилизированного набора для постановки ПЦР («Izogen», Россия). ПЦР проводили на термоциклере My-Cycler («Bio-Rad», США). Разделение продуктов амплификации проводили в 1,5-2% агарозном геле в электрофоретической камере SubCell GT System (Bio-Rad, США) с применением буфера TBE рН 8,0. Пробы в гель наносили с использованием красителя Orange («Fermentas», Латвия). В качестве маркера молекулярной массы использовали ДНК GeneRuler 50bp DNA Ladder («Fermentas», Латвия). Визуализацию ДНК осуществляли при помощи 0,5% раствора бромида этидия («Sigma», США). Полученные результаты фиксировали при помощи гельдокумен-тирующей системы Gel Pro 3.1 (http://gel-pro-analyzer.software. informer.com). Выделение ДНК амплификата из агарозного геля осуществляли в картридже DNA Gel Elution («Izogen», Россия) с дальнейшим осаждением 70% этиловым спиртом в присутствии 1М CH3COONa («Merck», Германия).
После высушивания полученный препарат растворяли в буфере ТЕ и в количестве 1-2 нг использовали для секвенирования. Секвенирование по методу Сэнгера осуществляли на автоматическом секвенаторе 3130xl Genetic Analyzer («Life tecnologies», США). Статистическая обработка результатов проведена при помощи компьютерных программ: «GenAlEx6» [11].
Результаты и обсуждение
Выборки пчел SK, MA, MIS, MDO и TU проведены из ослабленных семей, пораженных варроатозом. В период 2011-2012 гг. в Кизнерском, Вавожском, Юкаменском районах (UD3-UD5) Республики Удмуртия, согласно ветеринарным наблюдениям, не было клинических проявлений инфекций и не обнаружено инвазии клеща. В За-вьяловском районе выявлена высокая степень клещевой инвазии до 30%, в д. Люк степень поражения клещом составляла более 15%. В Якшур-Бодьинском районе наблюдали среднюю степень инвазии клеща (до 5%). Пчелы ползали по земле возле летка, имели переполненный кишечник, у многих пчел были атрофированы крылья. В Вавожском районе наблюдалось ослабление семей без клинических признаков заболевания.
Oбнаруженные фрагменты вирусов имели длину, соответствующую расчетной и литературным данным [7-9]. При помощи праймеров ABPV (2) [10] не было обнаружено инфицированных образцов. Соответствие амлифицированного фрагмента мишени подтверждено секвенированием амплификата. Полученные ну-клеотидные последовательности зарегистрированы в Genbank (http: //www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank): DWV (KF274666.1, GQ422786.1, JX993278.2, KC138852.2, KC138854.1), BQCV (KC138853.2) и SBV (KF274668.1, KF274667.1, KC020674.2, KC020673.2. Спектр обнаруженных вирусов в образцах пчел и клещей, а также частоты обнаруженных комбинаций при одновремен-
Для корреспонденции: Удина Ирина Геннадьевна, д.б.н., доцент, руководитель группы популяционной иммуногенетики, г.н.с., ИО-ГЕН РАН, Москва, 119991, ул. Губкина, д. 3; е-таП: irina_udina@ mail.ru 5)
Таблица 1
Выборки пчел и клещей для ОТ-ПЦР-анализа на присутствие РНК-содержащих вирусов
Позиция на иллюстрации Популяция, регион Предположительная порода пчелы Количество пчел
Выборки из семей представлены живыми рабочими пчелами
UD1 Удмуртия, Якшур-Бодьинский район, п/л «Березка», п. Позимь (2012 г.) A. m. mellifera L. 33
Удмуртия, Якшур-Бодьинский район, д. Кенервай (2012 г.) A. m. mellifera L. 18
Удмуртия, Якшур-Бодьинский район, Селычкинское лесничество (2012 г.) A. m. mellifera L. 1
Итого: 66
UD2 Удмуртия, Завьяловский район, г. Ижевск, 9 км. (2012 г.) A. m. mellifera L. 27
Удмуртия, Завьяловский район, д. Люк (2012 г.) A. m. mellifera L. 9
Удмуртия, Завьяловский район, д. Постол (2012 г.) A. m. mellifera L. 6
Итого: 42
UD3 Удмуртия, Юкаменский район, д. Малый Винеж (2012 г.) A. m. mellifera L. 15
UD4 Удмуртия, Кизнерский район, п. Кизнер (2012 г.) A. m. mellifera L. 6
UD5 Вавожский район, д. Гурезь-Пудга (2012 г.) A. m. mellifera L. 9
SK Ставропольский край (2010 г.) A. m. carpatica 45
MA Адыгея, Майкопский район (2010 г.) A. m. carpatica 42
MIS Московская область, Истринский район (2010 г.) A. m. carpatica 9
TU Тульская область (2010 г.) A. m. carpatica 21
AB Абхазия (2010 г.) A. m. carnica Pollm. 15
MDO Московская область, Домодедовский район (2010 г.) A. m. mellifera L. 12
Выборки клещей
UD-VD Удмуртия, Якшур-Бодьинский район, д. Кенервай, с личинки (2012 г.) Varroa destructor 10
Удмуртия, Якшур-Бодьинский район, д. Кенервай, с рамки улья (2012 г.) Varroa destructor 10
Удмуртия, Завьяловский район, с личинки (2012 г.) Varroa destructor 10
Итого: 30
Таблица 2
Последовательности праймеров и параметры амплификации
Наименование праймеров (прямого и обратного)
Название вируса, длина амплифициро-ванного продукта, позиции прямого и обратного праймеров в соответствующей последовательности из Генбанка (Genbank)
Последовательность праймеров, 5'—3',
Температура отжига праймеров, Та, oC
ABPV* (370 п.н.) [8] abpv-f 7928-7947 п.н. AF150629
abpv-r 8527-8546 п.н. AF150629
ABPV (900 п.н.) [9] аbpv (2)-f 8460-8484 п.н. AF150629 abpv (2)-r 9336-9360 п.н. AF150629
BQCV (472 п.н.) [8] bqcv-f 252-277 п.н. AF125252
bqcv-r 710-729 п.н. AF125252
CBPV (315 п.н.) [8] cbpv-f 111-130 п.н. AF375659
cbpv-r 407-426 п.н. AF375659
DWV (435 п.н.) [8] dwv-f 2345-2364 п.н. AJ489744
dwv-r 2760-2997 п.н. AJ489744
DWV (711 п.н.) [10] dwv (2)-f 6255-6274 п.н. NC004830.2 dwv (2)-r 6965-6946 п.н. C004830.2
KBV (395 п.н.) [8] kbv-f 5406-5425 п.н. AY275710
kbv-r 5781-5800 п.н. AY275710
SBV (487 п.н.) [8] sbv-f 221-240 п.н. AF092924
sbv-r 689-708 п.н. AF092924
gtgctatcttggaatactac 58
aaggtttaggttctactact
ttatgtgtccagagactgtatcca 60 gctcctattgctcggtttttcggt
agtagttgcgatgtacttcc 58
cttagtcttactcgccactt
tgtcgaactgaggatcttac 58
gacctgattaacgacgttag
attgtgccagattggactac 58
agatgcaatggaggatacag
atcagcgcttagtggaggaa 60
tcgacaattttcggacatca
gatgaacgtcgacctattga 58
tgtgggttggctatgagtca
accaaccgattcctcagtag 58
ccttggaactctgctgtgta
32
ном инфицировании приведены на рис. 2.
Установлено инфицирование отечественных популяций пчел РНК-содержащими вирусами DWV, SBV, BQCV, KBV, APBV и CBPV; наиболее часто распространены вирусы DWV и SBV. Из всех исследованных выборок лишь в одной - в Кизнерском районе (UD4) - не обнаружено вирусной инфекции. Во всех остальных выборках степень инфицирования составляла не менее 33,3% от общего числа исследованных семей на пасеке. При использовании для обнаружения ABPV праймеров ABPV (2) вирус не обнаружен ни в одной из выборок. В выборках MA, MDO, MIS, AB, MDO и SK вирус DWV обнаружен только при помощи первого варианта прайме-ров (см. табл. 2). Использование праймеров DWV (2) [9] не обеспечило более полного выявления DWV.
При анализе множественной вирусной инфекции обнаружено, что в выборке пчел MIS выявлены все 6 изученных РНК-содержащих вирусов пчел. В выборке MA установлено присутствие 5 вирусов одновременно, а в выборке SK 3 вирусов одновременно. В выборках пчел на тер-
Рис. 1. Схема пунктов сбора образцов медоносной пчелы в Удмуртии для выявления РНК-содержащих вирусов пчел.
ритории Удмуртии не обнаружено семей, где пчелы были инфицированы более чем 4 вирусами одновременно (рис. 3, табл. 3 и 4).
Наиболее часто встречаются комбинации вирусов DWV-ABPV-CBPV-SBV-BQCV, а также DWV-ABPV, АВРУ-СВРУ-КВУ, DWV-APBV-KBV и АРВ^СВР^ SBV. Учитывая тот факт, что перечисленные вирусы
Таблица 3
Комбинации РНК-содержащих вирусов пчел в изученных выборках при множественном инфицировании семей пчел
Комбинация вирусов Выборки
МА TU
DWV-ABPV-CBPV-KBV-SBV-BQCV 1х
DWV-ABPV-CBPV-KBV-BQCV 2х
DWV-ABPV-CBPV-SBV-BQCV 1х 2х
DWV-ABPV-KBV-SBV-BQCV 1х 1х
DWV-ABPV-CBPV-BQCV 1х 1х
DWV-ABPV-CBPV-KBV 1х
DWV-SBV-BQCV 2х
DWV-ABPV-KBV 1х
DWV-ABPV-SBV
ABPV-CBPV-SBV 1х
SK
имеют летальный эффект, очевидно, что множественные вирусные инфекции весьма опасны для жизни пчелиной семьи.
В клещах вирус DWV при использовании обоих вариантов прай-меров обнаруживается одинаково часто. Одновременно с DWV был выявлен вирус ABPV. При этом в выборке клещей UD-VD, которые собраны с рамки, вирус ABPV не обнаружен.
Наиболее часто встречаются вирусы DWV (средняя встречаемость по семьям пчел 45%) и SBV (43%), с меньшей частотой - вирусы ABPV (15%), BQCV (12%), CBPV (11%) и KBV (5,4%). Обнаружение DWV при помощи второго варианта прай-меров DWV (2) оказалось менее эффективным. В выборках MA, TU, MIS, AB, MDO, SK и в удмуртских выборках UD4 и UD5 вирус DWV при использовании второго варианта праймеров DWV (2) не был обнаружен (см. табл. 2), в то время как в выборках UD1, UD2 с его помощью вирус DWV был обнаружен. Однако в выборках UD1 он был обнаружен не во всех образцах, а в выборке UD2 - в той же степени.
Данные о распространении вирусных инфекций пчел в Европе свидетельствуют [8, 9, 12], что до 20% вирусных инфекций пчел были смешанными.
По результатам нашего исследования смешанные инфекции встречались несколько реже (обнаружение двух вирусов одновременно в семьях Московской области, заведомо пораженных клещом, в среднем достигало 33,6%, а на пасеках Австрии - 37%) [8].
Наиболее часто отмечено инфицирование двумя вирусами, реже 5 и 3 вирусами, а наиболее редко отмечено инфицирование 4 и 6 вирусами. Из полученных данных следует, что не все комбинации вирусов при одновременной комбинативной инфекции встречаются в семьях пчел с одинаковой частотой. Возможно, могут существовать причины, которые обусловливают преимущественное распространение определенных комбинаций, либо это случайные сочетания. По данным литературы
Таблица 4
частота множественных комбинаций РНК-содержащих вирусов пчел в изученных выборках при одновременном инфицировании семей пчел несколькими вирусами
1х 1х
Крат- Выборки
ность инфицирования UD1 UD2 UD5 SK MA MIS TU AB
2x 0,27 0,26 0,09 0,40 0,50 0,67 0,71 0,80
3x 0,13 0,14 0,67
4x 0,14 0,33
5x 0,21 1,00
6x 0,33
1,000-. 0,9000,8000,7000,6000,5000,4000,3000,2000,1000,000-
DWV ABPV CBPV KBV SBV BQCV
DWV ABPV CBPV KBV SBV BQCV
1,000 0,900 0,800 0,700 0,600 0,500 0,400 0,300 0,200 0,100 0,000
DWV ABPV CBPV KBV SBV BQCV
1,000 0,900 0,800 0,700 0,600 0,500 0,400 0,300 0,200 0,100 0,000
1,000 0,900 0,800 0,700 0,600 0,500 0,400 0,300 0,200 0,100 0,000
DWV ABPV CBPV KBV SBV BQCV
UD5
DWV ABPV CBPV KBV SBV BQCV
1,000-| 0,9000,8000,7000,6000,5000,4000,3000,2000,1000,000-
1,000-| 0,9000,8000,7000,6000,5000,4000,3000,2000,1000,000-
DWV ABPV CBPV KBV SBV BQCV
1,000 0,900 0,800 0,700 0,600 0,500 0,400 0,300 0,200 0,100 0,000
DWV ABPV CBPV KBV SBV BQCV
DWV ABPV CBPV KBV SBV BQCV
Рис. 2. Распределение РНК-содержащих вирусов пчел в изученных образцах пчел и клещей. На оси ординат показана частота выявления РНК-содержащих вирусов.
о вирусных инфекциях пчел в Европе, в нескольких исследованиях аналогично нашему исследованию установлено инфицирование пчел несколькими вирусами одновременно [8, 9, 13].
Ранее показано, что заражение V. destructor является предрасполагающим фактором для передачи вирусной инфекции [14]. По данным литературы, инфекция DWV может также распространяться через паразитирование клеща на куколке [15]. По нашим данным, также выявлено присутствие вирусной инфекции в семьях пчел, в которых присутствовала инвазия клещом V. destructor. Установлено присутствие инфекции РНК-содержащих вирусов (DVW и APBV) у клещей, что подтверждает возможность передачи вирусной инфекции пчелам от клещей. Остальной спектр вирусов у клещей не выявлен, что, возможно, обусловлено небольшой выборкой клещей Varroa destructor.
Таким образом, при помощи ОТ-ПЦР в выборках популяций пчел среднерусской породы (на территории Удмуртии, Ставропольского края, Московской, Тульской областей), карпатской породы (Адыгея и Московская область) и карники (Абхазия) выявлено присутствие РНК-содержащих вирусов пчел. Установлена инфекция пчел одновременно двумя вирусами (в среднем от 33,6%) и более двух вирусов (от 23,9%). Выявлено присутствие РНК-содержащих вирусов пчел (DWV и ABPV) в клещах Varroa destructor. Методы молекулярной диагности-
ки являются эффективным инструментом для ежегодной выбраковки семей пчел, инфицированных вирусами, в рамках ветеринарных мероприятий с целью предотвращения дальнейшего распространения вирусных заболеваний и гибели популяций пчел.
2х Зх 4х 5х 6х
1UD5 □ UD5 □ UD5 □ UD1 ■ UD2 ■ SK ■ МА ■ MIS BAB Е
TU
Рис. 3. Частоты выявленных комбинаций при одновременном инфицировании семьи пчел несколькими РНК-содержащими вирусами пчел.
По оси абсцисс указана кратность инфицирования вирусами, наблюдавшаяся при смешанной инфекции, по оси ординат - частота отдельных комбинаций.
Благодарности. Авторы благодарны Масленникову И.В. Колбиной Л.М., Королеву А.В., Масленниковой В.И., Клочко Р.Т. и другим пчеловодам за помощь в сборе образцов пчел и клещей. Работа выполнена в группе по-пуляционной иммуногенетики отдела популяционной генетики Института общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН.
Финансирование. Работа поддержана грантом РФФИ 08-04-13740-офи_ц «Разработка ДНК-технологий для паспортизации пород и породных линий медоносной пчелы Apis mellifera на территории России» и Госконтрактами Минобрнауки «Молекулярно-генетический анализ биоразнообразия растений, животных и человека» 14.740.12.0826 (2011-1.4-501-001) (2011 г.) и «Экспериментальный, биоинформационный и геногеографический анализ геномного разнообразия человека и животных» № 8088 (2012 г.).
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
ЛИТЕРАТУРА (пп. 1, 6-15 см. REFERENCES)
2. Удина И.Г., Гришечкин А.Е, Кунижева С.С., Калашников А.Е., Учаева В.С., Злобин В.И., Кривцов Н.И. Обнаружение вируса деформации крыла (DWV) у медоносной пчелы Apis mellifera L. на пасеках в Московской области методом ОТ-ПЦР. Вопр. виру-сол. 2010; 55 (5): 37-9.
3. Удина И.Г., Гришечкин А.Е., Калашников А.Е., Злобин В.И., Кривцов Н.И. Идентификация вируса деформации крыла (DWV) у медоносной пчелы. Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. 2010; (1): 69-71.
4. Ломакина Н.А., Батуев Ю.М. Новый генотип вируса мешотчато-го расплода у пчел Apis mellifera. Молекул. генетика, микробиол. и вирусол. 2012; (3): 34-40.
5. Калашников А.Е., Масленников И.В., Колбина Л.М., Удина И.Г. Генетическая дифференциация популяций медоносной пчелы (Apis mellifera L.) и распространение РНК-содержащих вирусов пчел на фоне эпизоотии клеща Varroa destructor на территории Удмуртии. Сельскохозяйственная биология. 2013; (4): 88-92.
REFERENCES
1. Roulston Т.Н., Guodell K. The role of resourses and rise in regulating of wild bee populations. Annu. Rev. Entomol. 2011; 56: 293-312. doi: 10.1146/annurev-ento-120709-144802
2. Udina I.G., Grishechkin A.E, Kunizheva S.S., Kalashnikov A.E., Uchaeva V.S., Zlobin V.I., Krivtsov N.I. Detection of deformed wing virus (DWV) in honey bee Apis mellifera L. in the apiary of Moscow region by RT-PCR method. Vopr virusol. 2010; 55 (5): 37-9. http:// www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21260995 (in Russian)
3. Udina I.G., Grishechkin A.E., Kalashnikov A.E., Zlobin V.I., Krivtsov N.I. Identification of deformed wing virus (DWV) in honey bee. Vestnik Rossiyskoy akademii sel 'skokhozyaystvennykh nauk. 2010; (1): 69-71. (in Russian)
4. Lomakina N.F., Batuev Yu.M. New genotype of the sacbrood virus of the honeybee Apis mellifera. Molekul. genetika, mikrobiol. i virusol. 2012; (3): 34-40. doi: 10.3103/S0891416812030068 (in Russian)
5. Kalashnikov A.E., Maslennikov I.V., Kolbina L.M., Udina I.G. Genetic differentiation of populations of honey bee (Apis mellifera L.) and distribution of RNA-containing viruses at the background of epizootia of Varroa destructor on the territory of Udmurtia. Sel'skokhozyaystvennaya biologiya. 2013; (4): 88-92. doi: 10.15389/ agrobiology.2013.4.88eng. doi: 10.15389/agrobiology.2013.4.88rus, http://www.agrobiology.ru/4-2013kalashnikov-eng.html (in Russian)
6. Dietemann V., Nazzi F., Martin S.J., Anderson D.L., Locke B., De-laplane K.S. et al. Standard methods for Varroa research. J. Apicult. Res. 2013; 52 (1): 1-54. http://dx.doi.org/10.3896/IBRA.1.52.1.09
7. Bereneyi O., Bakonyi Т., Derakhshifar I., Koglberger Н., Topolska G., Ritter W. et al. Phylogenetic analysis of deformed wing virus genotypes from diverse geographic origins indicates recent global distribution of the virus. Appl. Environ. Microbiol. 2007; 73 (11): 3605-11. doi: 10.1128/AEM.00696-07
8. Berenyi O., Bakonyi N., Derakhshifar I., Koglberger Н., Nowotny
N. occurrence of six honeybee viruses in diseased Austrian apiaries. Appl. Environ. Microbiol. 2006; 72 (4): 2414-20. doi: 10.1128/ AEM.72.4.2414-2420.2006 9. De Miranda J.R., Cordoni G., Budge G. The acute bee paralysis virus-Kashmir bee virus-Israeli acute paralysis virus complex. J. Inver-tebr. Pathol. 2010; 103 (1): 30-47. doi: 10.1016/j.jip.2009.06.014
10. Chen Y., Evans J., Feldlaunter K. Horizontal and vertical transmission of viruses in the honeybee Apis mellifera. J. Invertebr. Pathol. 2006; 92 (3): 152-4. doi: 10.1016/j.jip.2006.03.010
11. Peakall R., Smouse P.E. GenAlEx 6.5: genetic analysis in Excel. Population genetic software for teaching and research - an update. Bioinformatics. 2012; 28 (19): 2537-9. doi: 10.1093/bioinformatics/ bts460
12. Antunez K., Anido M., Garrido-Bailon E., Botias C., Zunino P., Martinez-Salvador A. et al. Low prevalence of honeybee viruses in Spain during 2006 and 2007. Res. Vet. Sci. 2012; 93 (3): 1441-5. doi: 10.1016/j.rvsc.2012.03.006
13. Antunez K., DeAlessandro B., Corbella E., Zunino P. Detection of chronic bee paralysis virus in Uruguayan honeybee. J. Invertebr. Pathol. 2005; 90: 69-72. doi: 10.1016/J.JIP.2005.07.001
14. Chen M., Cui L., Ostiguy N., Cox-Foster D. Intricate transmission routes and interactions between picorna-like viruses (Kashmir bee virus. Sacbrood virus) with the honeybee host and the parasitic Varroa mite. J. Virol. 2005; 86: 2281-9. doi: 10.1099/vir.0.80824-0
15. Gisder S., Genersch E. Deformed wing virus: replication and viral load in mites (Varroa destructor). J. Gen. Virol. 2009; 90: 463-7. doi: 10.1099/vir.0.005579-0
Поступила 08.07.16
Kalashnikov A.E., Udina I.G.
DISTRIBUTION OF RNA-CONTAINING BEE VIRUSES IN HONEY BEE (APIS MELLIFERA) IN SEVERAL REGIONS OF RUSSIA
N.I. Vavilov Institute of General Genetics, Russian Academy of Sciences, 119991, Moscow, Russian Federation
In several regions of Russia, broad distribution of RNA-containing bee viruses was found at apiaries of honey bee Apis mellifera using RT-PCR. Detected RNA-containing bee viruses are transferred simultaneously with invasion of mite Varroa destructor and lead to mass bee mortality that results in economic losses in bee breeding. In samples of Varroa destructor, bee viruses DWV and ABPV were found. High degree of RNA-containing virus (BQCV, DWV SBV, ABPV, CBPV and KBV) infection was revealed: in the average, at least 50% for bee families with mite infection. In the bee families studied in this work, mixed infection with 2-6 viruses simultaneously was detected. Amplified fragments of viruses BQCV, DWV and SBV obtained using RT-PCR were sequenced and registered in Genbank. Key words: RNA-containing bee viruses, honey bee, Apis mellifera, Varroa destructor, RT-PCR
For citation: Kalashnikov A.E., Udina I.G. Distribution of RNA-Containing Bee Viruses in Honey Bee (Apis mellifera) in Separate Regions of Russia. Molekulyarnaya Genetika, Mikrobiologiya i Vi-rusologiya (Molecular Genetics, Microbiology and Virology) 2017; 35(1):31-35. (Russian). DOI 10.18821/0208-0613-2017-35-1-31-35.
For correspondence: Irina Gennadyevna Udina, Doctor of Sciences, Head of the Group of population immunogenetics, Chief scientist, N.I. Vavilov Institute of General Genetics, Russian Academy of Sciences, 119991, Moscow, Russian Federation; E-mail: irina_udina@mail.ru
Acknowledgments. This work was supported by the Russian Foundation for Basic Research (Grant No. 08-04-13740-ofi_ts "Development of DNA technologies for certification of breeds and breeding lines of honey bee Apis mellifera in Russia") and the Ministry of Education and Science of the Russian Federation (State Contracts No. 14.740.12.0826 (20111.4-501-001) "Molecular-genetic analysis of the biological diversity of plants, animals, and humans" (2011) and No. 8088 "Experimental, bioinformation, and genogeographic analysis of the genome diversity of humans and animals" (2012)).
Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest. Information about authors:
Kalashnikov A.E., http://orcid.org/0000-0003-1600-7357 Udina I.G., http://orcid.org/0000-0002-0620-945X
