CC BY
32
УДК 577.125
РАСПРЕДЕЛЕНИЕ АТОРВАСТАТИНА В ЛИПОПРОТЕИНОВЫХ КОМПЛЕКСАХ КРОВИ БОЛЬНЫХ ИБС ЧЕРЕЗ 2 ЧАСА ПОСЛЕ ЕГО
ОДНОКРАТНОГО ПРИЕМА С. С. Осочук, д. м.н.; Г .Д. Коробов, к .м. н., доцент; С .В. Буянова
УО «Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет»
Установлено, что у больных ИБС людей не определяется половых различий в распределении аторвастатина и его дериватов в составе липопротеиновых комплексов. Наиболее значимым является содержание пара-гидро-ксиаторвастатина, который определяется в основном в составе ЛПОНПи ЛПНП, менее - в составе ЛПВП.
Ключевые слова: аторвастатин. пара-гидроксиаторвастатин, орто-гидроксиаторвастатин, ЛПОНП, ЛПНП, ЛПВП, ИБС.
It has been established that sexual differences in distribution of atorvastatin and its derivatives in lipoproteins of patients with ischemic heart disease are not detected. The most significant is p-hydroxyatorvastatin content which is defined basically in VLDL and LDL, less in HDL.
Key words: atorvastatin, p-hydroxyatorvastatin, o-hydroxyatorvastatin, VLDL, LDL, HDL, ischemic heart disease.
Введение
Согласно исследованиям с применением 14С(3Н)-аце-тил-КоА, у крыс от 60% до 80% холестерола (ХС) образуется в печени, у человека эта величина составляет менее 50% [8]. Остальной ХС продуцируется в периферических, в том числе и эндокринных клетках, обеспечивающих организм стероидными гормонами. Известно, что синтез ХС сопряжен с продукцией изопреновых блоков, необходимых для синтеза убихинона [7], являющегося одним из основных антиоксидантов липопротеинов низкой плотности [4]. Обмен ХС является одним из важнейших звеньев патогенеза атеросклероза, что обусловило разработку и применение в практике статинов - ингибиторов ключевого фермента синтеза ХС П-окси-П -метил-КоА-редуктазы (КФ 1.1.1.34). Наиболее распространенным препаратом этой группы является аторвастатин [5], обладающий выраженной липофильностью, транспортирующийся в составе липопротеиновых комплексов (ЛПК), проникающий через цитоплазматические мембраны [9] и способный действовать на продукцию ХС, в том числе в периферических клетках. Вышесказанное позволяет предположить, что вмешательство в продукцию ХС способно повлечь за собой изменения метаболизма, в том числе периферических тканей, последствия которого в настоящее время не оценены в полной мере. Для выяснения возможности воздействия на синтез ХС в периферических клетках необходимо оценить распределение аторвастатина и его метаболически активных дериватов в ЛПК крови.
Ранее нами было описано распределение аторвастатина в ЛПК здоровых волонтеров [4]. Целью настоящей работы было исследование распределения аторвастати-на и его активных дериватов в ЛПК больных ИБС людей.
Материал и методы
Для достижения поставленной цели были обследованы 29 больных ИБС (14 мужчин и 15 женщин) в возрасте 36-60 лет, отнесенные, согласно рекомендациям симпозиума по возрастной физиологии, ко второму периоду зрелого возраста [2]. Обследуемые принимали аторвас-татин перорально, однократно утром за 4 часа до завтрака в разовой дозе 80 мг. Аторвастатин предоставлен для работы фармацевтическим предприятием СООО «ЛЕК-ФАРМ» (Республика Беларусь). Учитывая, что максимальная концентрация аторвастатина в крови определя-
ется через 2-2,5 часа после приема препарата [1], кровь для исследований забирали из локтевой вены в гепари-низированные пробирки через 2 часа после приема препарата. Плазму получали центрифугированием в рефрижераторной центрифуге РС-6 при 3000 оборотах в минуту, расфасовывали в пластиковые пробирки и до обработки хранили в жидком азоте. Липопротеины высокой плотности (ЛПВП), низкой плотности (ЛПНП) и очень низкой плотности (ЛПОНП) выделяли методом ультрацентрифугирования [10]. Содержание аторваста-тина и его активных метаболитов пара-гидроксиаторвас-татина и орто-гидроксиаторвастатина в ЛПК определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Идентификацию проводили по времени удержива -ния стандартных образцов.
Сравнение распределения аторвастатина и его дериватов в ЛПК мужчин и женщин с использованием критерия Манна-Уитни не выявило достоверных различий, что позволило объединить выборки для последующего анализа. Для выбора метода статистической обработки была проведена проверка полученных данных на соответствие закону нормального распределения (таблица 1).
Таблица 1 - Проверка соответствия варьирования содержания дериватов аторвастатина закону нормального распределения
Критерий Колмогорова-Смирнова (К-С) Значимость (р) критерия Лилиефорса
Показатель Значение критерия К-С Значимость критерия К-С
пара- гидроксиаторвастатин 0,22976 <0,1 <0,01
С га орто- гидроксиаторвастатин 0,36189 <0,01 <0,01
и ч аторвастатин 0,28464 <0,05 <0,01
пара- гидроксиаторвастатин 0,14329 >0,2 >0,2
с га орто- гидроксиаторвастатин 0,31684 <0,05 <0,01
Li ч аторвастатин 0,21737 <0,2 <0,01
пара- гидро ксиатор вастатин 0,13436 >0,2 <0,2
с га о орто- гидроксиаторвастатин 0,38762 <0,01 <0,01
с ч аторвастатин 0,34051 <0,01 <0,01
Из 9 изученных параметров 5 имеют распределение, отличающееся от нормального, и у 7 параметров наблюдается асимметрия в сторону нулевых значений.
Учитывая сказанное, было принято решение использовать для сравнения содержания аторвастатина и его дериватов по фракциям ЛПК непараметрический критерий Краскела-Уоллиса.
Результаты и обсуждение
Сравнение содержания аторвастатина и его дериватов в составе ЛПК показало (рисунок 1), что в наибольшем количестве в ЛПК определяется пара-гидроксиатор-вастатин.
60 50 40 30 20 10 0
ж
пара-гидро- орто-гидро-
ксиаторвастатин ксиаторвастатин
аторвастатин
— ♦— ЛПВП
-ЛПНП ЛПОНП
аторвастатин С, нг/мл Н (2Д=77)=17,7777 р=0,0001
Допуст N Сумма Ряды
ЛПВП 28 705,000
ЛПНП 21 908,000
ЛПОНП 28 1390,000
Таблица 3 - Медианный тест, медиана общ. □ 2=17,46615 при р=0,002
28,5600;
Зависимые: пара-гидрокси-аторвастатин, нг/мл ЛПВП ЛПНП ЛПОНП Всего
Медиана: наблюдаемые 23,0000 7,00000 9,00000 39,00000
ожидаемые 14,18182 10,63636 14,18182
наблюд. - ожидаем. 8,81818 -3,63636 -5,18182
Медиана: наблюдаемые 5,00000 14,00000 19,00000 38,00000
ожидаемые 13,81818 10,3634 13,81818
наблюд. - ожидаем. -8,81818 3,6364 5,18182
Сумма: наблюдений 28,00000 21,00000 28,00000 77,00000
Сравнение различий в содержании пара-гидроксиа-торвастатина, проведенное по 2-значениям с использо-
ванием критерия Краскела-Уоллиса с учетом числа наблюдений показало, (таблица 4) что наиболее высокое количество пара-гидроксиаторвастатина определяется в составе ЛПОНП и ЛПНП. При этом различия в содержании пара-гидроксиаторвастатина в ЛПВП и ЛПНП, ЛПВП и ЛПОНП были высоко достоверны (р=0,015 и 0,0001, соответственно). Содержание пара-гидроксиаторвастати-на в составе ЛПОНП и ЛПНП не имело достоверных различий (р=0,963).
Таблица 4
Критерий Краскела-Уоллиса: Н ^,N=17,77777,
Зависим: пара-гидрокси-аторвастатин, нг/мл ЛПВП Я:25,179 ЛПНП Я: 43,238 ЛПОНП Я:49,63
ЛПВП ............................................. 2=2,79637 2=4,09161
ЛПНП р 0,1)|5 50.1 ............................................. 2=0,99172
ЛПОНП р=0,000129 р (¡,96399! ..............................................
Рисунок 1 - Распределение аторвастатина и его дериватов в ЛПК
Расчетное значение критерия Краскела-Уоллиса составило 17,777. Значимость критерия Краскела-Уоллиса (р) по всем трем фракциям составила 0,0001 (таблица 2).
Таблица 2 - Ранговый дисперсионный анализ Краскела-Уоллиса для группирующей переменной фракции ЛПК
Таким образом, можно заключить, что наиболее высокое содержание метаболически активного деривата пара-гидроксиаторвастатина определяется в составе ЛПОНП и ЛПНП, что предполагает возможность его поступления в клетки периферических тканей и снижения активности синтеза холестерола в них.
Исследование содержания пара-гидроксиаторваста-тина в ЛПК в пересчете на мг белка показало результаты, сопоставимые с результатами, полученными при расчете на мл ЛПК (рисунок 2). Как и в предыдущем случае, содержание пара-гидроксиаторвастатина не различалось между ЛПНП и ЛПОНП и достоверно различалось между ЛПНП и ЛПВП, ЛПОНП и ЛПВП (р=0,0011, 0,00048).
Для сравнения различий распределения пара-гидро-ксиаторвастатина в ЛПК был проведен медианный тест с использованием критерия □ Пирсона, результаты которого представлены в таблице 3. Выявлена высокая степень различий - □2=17,46615 при р=0,002, позволяющая заключить, что содержание пара-гидроксиаторвастати-на имеет достоверные различия в составе ЛПК.
4500 4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 0
Хк
=0-
пара-гидро-ксиаторвастатин
орто-гидро-ксиаторвастатин
аторвастатин
--Л— ЛПОНП
Рисунок 2 - Распределение аторвастатина и его дериватов (нг/мг белка) в ЛПК
Таким образом, исходя из представленных результатов исследований, можно заключить, что пара-гидрокси-аторвастатин в наибольшем, как при расчете на 1 мл ЛПК, так и при расчете на 1 мг белка, количестве определяется в составе ЛПОНП, в более высоком, чем ЛПВП, количестве определяется в составе ЛПНП. Такое распределение пара-гидроксиаторвастатина позволяет предположить возможность его воздействия на продукцию ХС во вне-печеночных клетках.
В составе ЛПВП также определяется достаточно высокое по сравнению с аторвастатином и орто-гидрокси-аторвастатином содержание пара-гидроксиаторвастати-на, что говорит о некоторой способности воздействовать и на синтез холестерола, в том числе в печени.
Исследование распределения содержания аторваста-тина и орто-гидро-ксиаторвастатина в составе ЛПК не выявило достоверных различий, что позволило не при-
водить в настоящей статье цифровой материал, а указать лишь графическое отражение полученных результатов (рисунки 1 и 2). Следует подчеркнуть, что содержание аторвастатина и орто-гидроксиаторвастатина было достоверно ниже, чем содержание пара-гидроксиаторвас-татина, что позволяет предположить, что основное воздействие на синтез холестерола в периферических клетках может быть оказано пара-гидроксиаторвастатином. Возможно, аторвастатин может оказать более значительное, чем его дериваты, действие на активность синтеза ХС в печени и легких, поскольку после всасывания в кишечнике может транспортироваться в составе хиломик-ронов (ХМ) в лимфатическую систему, затем, через грудной лимфатический проток, в малый круг кровообращения с последующим выходом в составе ремнатнов ХМ в большой круг кровообращения и печень. Однако для подтверждения данного предположения необходимо исследовать содержание аторвастатина после его приема в составе ХМ. Поскольку ХС необходим для регенерации поврежденных клеток и тканей [3], можно предположить, что прием аторвастатина в период реконвалесценции после травм, воспалительных и других заболеваний способен замедлить процесс восстановления повреждений ввиду снижения поставки ХС из печени и снижения его продукции в периферических клетках.
Выводы
1. У больных ИБС людей не определяется половых различий в распределении аторвастатина и его дериватов в составе ЛПК.
2. В липопротеиновых комплексах больных ИБ С людей наиболее значимым для диагностики является содержание пара-гидроксиаторвастатина.
3. Наиболее высокое содержание пара-гидроксиа-торвастатина определяется в составе ЛПОНП и ЛПНП, наиболее низкое - в составе ЛПВП.
Литература
1 . Буянова, С.В. Особенности распределения аторвастатина и его активных дериватов в липопротеиновых комплексах крови /
C.В. Буян ова , С .С.Осочук // Матери алы 65 научной сесси и сотрудников Витебского медицинского университета - Витебск 2010 -С. 464-467.
2 . Буна к, В.В. Выделен ие этап ов онтогенеза и хронологические границы возрастных пери одов / В.В. Бунак // Советская педагогика. - 1965. - № 11. - С. 105-119.
3. Зайчик, А.Ш. Основы патохимии / А.Ш. Зайчик, Ф.П. Чурилов. - СПб «ЭЛБИ», 2000 - 688 с.
4 . Буянова, С.В. Состав липопротеинов крови доноров через 2 часа после однократного приема аторвастатина / С.С. Буя-нова , С.С. О сочук, Г.Д . Коробов // Клин ич еска я ла бораторн ая диагностика. - 2011. - №8. - С. 18-21.
5. Ялымов, А. А. Влияние аторвастатина на показатели ли-пидного обмен а, микроциркуляц ии и суточного м ониторирова-ния ЭКГ у больных острым коронарным синдромом / А.А. Ялымов, Г.Г. Шехян, В.С. Задонченко // От диспансеризации к высоким технологиям: материалы конгресса кардиологов. - 2006. - С.
449.
6 . Alleva, R. Oxidation of LDL and their subfractions: kinetic aspects and CoQ1 0 content/ R. Alleva, M. Tomasetti, S. Bompadre, G.P. Littarru // Mol Aspects Med. - 1997. - Vol.18. - Р. 105-112.
7. Avanoor, M.D. Nambudiri The Role of 3-Hydroxy-3-methylglutaryl Coenzyme A Reductase Activity in the Regulation of Ubiquinone Synthesis in Human Fibroblasts / Nambudiri Avanoor M.
D., Subramanian Ranganathan, and Harry Rudney // The journal of biological chemistry. - 1980. - Vol. 255. - № 12. - P 5894-5899.
8 . D ietschy, J .M. T he role of the liver in lipid lipoprotein metabolism/ J.M.Dietschy, S.D.Turley, D.K.Sprady // Liver in Metabolic Diseases. Falk symposium 35 -1983. - P. 17-39.
9 . Fona row, G . Effective stra tegies for long-term statin u se / G.Fonarow, K.Watson // Am J. Cardiol. - 2002. - Vol. 92. - № 1А. -Р. 27-34.
1 0 . Lindgren, F.T. Ana lysis of low density lipoproteins by preparative ultracentrifugation and refractometry / F.T. Lindgren, A. Nicholos, N. Freedman // Journal of lipid research. - 1964. - Vol. 5. - P. 68-74.
Поступила 17.01.2012
