CC BY
20УДК 618.19-006.6-056:575.224
РАК МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ: ОСОБЕННОСТИ АНАМНЕЗА И СПЕКТРА ТЕРМИНАЛЬНЫХ МУТАЦИЙ ГЕНОВ BRCA
ВАСИЛЬКЕВИЧ МАРИЯ ИГОРЕВНА
Ассистент кафедры онкологии, УО Гродненский государственный медицинский университет, Гродно, Республика Беларусь
САВОНЕВИЧ ЕЛЕНА ЛЕОНТЬЕВНА
Доцент кафедры акушерства и гинекологии, УО Гродненский государственный медицинский университет, Гродно, Республика Беларусь
ХОМБАК АЛЕКСАНДР МИХАЙЛОВИЧ
Заведующий онкологическим отделением №2, УЗ Гродненская университетская клиника, Гродно, Республика Беларусь
Аннотация. Рак молочной железы (РМЖ) занимает лидирующую позицию по заболеваемости среди онкологической патологии у женщин. Ежегодно в мире регистрируется порядка 1,2 млн новых случаев РМЖ и по данным IARC к 2040 году эта цифра может вырасти до 3 млн, при этом смертность от РМЖ может достигнуть 1 млн женщин в год [1]. Учитывая актуальность данной проблемы необходимы: оптимизация факторов риска РМЖ, формирование собирательного портрета пациентки с учетом гинекологического анамнеза, развитие новых подходов к профилактике и ранней диагностике РМЖ, а также внедрение более совершенных алгоритмов обследования с целью снижения смертности от рака этого типа и повышения эффективности противоопухолевой терапии [2]. Целью настоящего исследования являлось изучение особенностей репродуктивной функции, гинекологической патологии, семейного анамнеза и генетического статуса для выявления факторов риска развития опухоли у женщин с косвенными признаками наследственного РМЖ. В исследование включены 100 пациенток с РМЖ и косвенными признаками наследственного рака, такими как: возраст до 50 лет (п=81) или наличие билатерального РМЖ (п=19). В ходе исследования были описаны основные анамнестические данные, влияющие на риск развития РМЖ, а также обнаружено 30 мутаций основателя и 20 новых патогенных мутаций.
Ключевые слова: рак молочной железы, герминальная мутация, BRCA1, BRCA2, гинекологическая патология, секвенирование нового поколения (NGS)
Введение. В настоящее время известно, что на развитие РМЖ оказывает влияние множество факторов, которые могут быть условно разделены на модифицируемые и немодифицируемые. К первой группе относятся: поздний возраст первых родов, длительная менопаузальная гормональная терапия, лучевая терапия на область грудной клетки в анамнезе, доброкачественные пролиферативные заболевания молочной железы. Вторую группу составляют: женский пол, возраст, раннее менархе и поздняя менопауза, семейный рак молочной железы в молодом возрасте, а также важным фактором риска является наличие терминальных мутаций в генах BRCA1/2 [3]. Семейный анамнез и наличие генетической предрасположенности относят к немодифицируемым факторам риска, поэтому необходимо серьезно относиться к пациенткам с отягощенным семейным онкоанамнезом и к женщинам-носителям герминальных мутаций, ассоциированных с высоким риском развития РМЖ. Характерными особенностями наследственных форм РМЖ являются ранняя манифестация РМЖ, более агрессивное течение, трижды-негативный фенотип, билатеральные формы рака, раннее метастазирование [4]. Спектр мутаций в генах BRCA1/2 имеет географические и
популяционные различия. Особую клиническую значимость в связи с этим приобретает разработка научно обоснованного алгоритма молекулярно-генетической диагностики для эффективного выявления носителей терминальных мутаций в генах BRCA1/2 в нашем регионе.
В исследование включены 100 пациенток с РМЖ и косвенными признаками наследственного рака такими как: возраст до 50 лет (n=81) или наличие билатерального РМЖ (n=19). Среди пациенток с ранним дебютом РМЖ (до 50 лет) средний возраст составил 41 год, а среди женщин с билатеральным РМЖ - 41,6 лет. Все женщины проходили лечение в Гродненской университетской клинике. Включение пациенток в исследование было проведено с соблюдением принципов добровольности и конфиденциальности с оформлением информированного согласия на участие в исследовании. Нами было проведено анкетирование, сбор семейного анамнеза, анализ медицинской документации, забор венозной крови в вакутайнеры с ЭДТА, выделение образцов ДНК из лейкоцитов периферической крови, далее выделенная ДНК подвергалась количественной и качественной оценке с помощью спектрофотометра NanoDrop 2000. Все женщины (n=100) были обследованы на наличие мутаций основателя в гене BRCA1: 5382insC и 4153delA самых распространенных в нашем регионе, методом аллель-специфической ПЦР в режиме реального времени. У 70 женщин без мутаций основателя по результатам ПЦР-тестирования было проведено полногеномное секвенирование следующего поколения (NGS) с использованием пользовательских биотинилированных зондов, охватывающих все экзоны BRCA1 и BRCA2 и границы экзон-интронных соединений, что позволило сформировать 2 группы пациенток для изучения особенностей репродуктивной функции, гинекологической патологии и семейного анамнеза. В первую группу включены 50 женщин с РМЖ и наличием герминальных мутаций в генах BRCA1/2. Вторую группу составили 50 женщин с диким типом генов BRCA1/2.
Результаты исследования. По результатам проведенных молекулярно-генетических исследований у женщин с BRCA-ассоциированным РМЖ было выявлено 30 мутаций основателя: 25 5382insC и 5 4153delA. С использованием NGS было обнаружено еще 20 патогенных мутаций, в том числе 3 уникальные - 1 в гене BRCA1 и 2 в гене BRCA2. Также выявлены 2 мутации неопределенного значения (VUS) - по одной в генах BRCA1 и BRCA2. Анализ полученных данных показал, что 81% герминальных мутаций приходится на ген BRCA1 и 15% на ген BRCA2, что свидетельствует о том, что BRCA1-ассоциированный РМЖ в Гродненской области встречается в 5 раз чаще (рисунок 1).
Рисунок 1 - Терминальные мутации в генах BRCA1 и BRCA2 у пациенток с РМЖ в
Гродненской области
Проведенное нами полногеномное секвенирование позволило установить полный спектр терминальных мутаций в генах BRCA1 и BRCA2 у пациенток с РМЖ. Обращает на себя внимание ярко выраженный эффект основателя в Западной Беларуси - у каждой второй пациентки с наследственным РМЖ обнаружена терминальная мутация 5382insC в гене BRCA1. Еще у 10% женщин была установлена 4153delA в гене BRCA1 (рисунок 2).
Рисунок 2 - Полный спектр терминальных мутаций в генах BRCA1 и BRCA2 у пациенток с РМЖ в Гродненской области.
Нами установлено, что в нашем регионе с использованием недорого и доступного метода ПЦР - диагностики может быть выявлено 60% от числа всех пациенток с BRCA-ассоциированным РМЖ.
Генетическая предрасположенность - основной фактор риска, но не единственный. Влияние других известных факторов риска на развитие РМЖ мы оценивали отдельно у пациенток с мутантным и диким статусом генов BRCA. Одним из значимых факторов риска развития РМЖ является возраст, с увеличением которого коррелирует рост заболеваемости. BRCA- ассоциированный РМЖ развивается раньше. Среди носителей мутаций в генах BRCA каждая вторая заболела в возрасте до 40 лет, тогда как 84% пациенток с диким типом генов BRCA на момент выявления опухоли были в возрасте 36 до 50 лет. Кадждая третья пациентка с диким типом генов BRCA заболела в возрасте 41-45 лет. Билатеральная форма РМЖ встречалась чаще у носителей мутаций. У 15 из 50 женщин с наличием мутаций в генах BRCA рак второй молочной железы развивался в течение 1 -5 лет. Однако, в группе пациенток с диким типом генов BRCA было еще 4 пациентки с билатеральным поражением молочной железы. Ожирение, по данным мировой литературы, достоверно повышает риск развития РМЖ. Нами установлено, что среди носителей мутаций избыточную массу тела имело 34% пациенток, ожирение 1 степени - 8%; в группе пациенток с диким типом BRCA избыточная масса тела была у 28% пациенток, ожирение 1 степени у 16%, 2 и 3 степени - по 2% пациенток. Тщательный анализ семейного онкооанамнеза показал, что у 14% пациенток-носителей герминальных мутаций отсутствуют случаи злокачественных новообразований в семейном анамнезе. Отягощенный семейный анамнез по РМЖ и раку яичников имели более половины пациенток с наличием терминальных мутаций (60%), однако и среди женщин с диким типом BRCA онкоанамнез был отягощен у каждой третьей. Это подтверждает необходимость углубленного молекулярно-генетического исследования дефектов других генов,
ассоциированных с развитием РМЖ. В то же время нами установлено, что у 14% пациенток-носителей терминальных мутаций отсутствуют случаи злокачественных новообразований в семейном анамнезе. Частота случаев злокачественных новообразований других локализаций в обеих группах была примерно одинакова (Рисунок 3)._
Результаты: семейный онкоанамнез
Изучение репродуктивного анамнеза показало, отсутствие существенных различий в обеих группах. Каждая вторая пациентка имела 1-2 беременности, а около 35% пациенток беременели 3 и более раз. По данным мировой литературы отсутствие беременности и родов является одним из факторов риска развития РМЖ, однако, по результатам наших исследований беременности и роды отсутствовали только у 15% женщин в каждой из групп. Относительно большое количество беременностей в анамнезе косвенно свидетельствует о хорошем репродуктивном здоровье женщин в независимости от наличия герминальных мутаций. Анализ гинекологической патологии демонстрирует преобладание воспалительных заболеваний в анамнезе у пациенток с РМЖ:66% и 54% соответственно в каждой из групп. Это обусловлено тем, что в исследование включались только пациентки, заболевшие в возрасте до 50 лет. Доброкачественные гормонозависимые пролиферативные заболевания, такие как генитальный эндометриоз и миома матки, встречались с равной частотой (10%) в обеих группах.
Выводы. Установлено, что использование недорого и доступного метода ПЦР -диагностики позволяет выявить 60% от числа всех пациенток с BRCA- ассоциированным РМЖ в Западном регионе Беларуси. Самой распространенной герминальной мутацией у пациенток с РМЖ и косвенными признаками наследственного рака является 5382 insC. По результатам молекулярно-генетического тестирования с использованием NGS она выявляется у каждой второй пациентки с BRCA-ассоциированным РМЖ. Использование метода NGS позволяет выявить герминальные мутации еще у 40% женщин с РМЖ в Западном регионе Беларуси. Молодым пациенткам с РМЖ и генами BRCA дикого типа необходимо проведение углубленного молекулярно-генетического тестирования на наличие полиморфизмов в других генах, ассоциированных с развитием РМЖ (CHEK2, ATM, PALB2, TP53, BARD1, RAD51D). В семейном анамнезе у 14% пациенток с BRCA-ассоциированным РМЖ отсутствовали случаи онкопатологии. Анализ других известных факторов риска РМЖ показал, что при развитии рака в молодом возрасте их значимость ограничена.
ЛИТЕРАТУРА
1. Arnold M, Morgan E, Rumgay H, Mafra A, Singh D, Laversanne M, Vignat J, Gralow JR, Cardoso F, Siesling S, Soerjomataram I. Current and future burden of breast cancer: Global statistics for 2020 and 2040. Breast. 2022 Dec;66:15-23. doi: 10.1016/j.breast.2022.08.010. Epub 2022 Sep 2. PMID: 36084384; PMCID: PMC9465273
2. Melchor L, Benitez J. The complex genetic landscape of familial breast cancer. Hum Geneti. 2013 Aug; 132 (8): 845-63. DOI: 10.1007/s00439-013-1299-y
3. NCCN Clinical practice guidelines in oncology: genetic/familial high risk assessment: breast & ovarian. - Ver. 2.2016, ed.2016 //
www.nccn.org/professionals/physician gls/pdg/genetics screening.pdf. 05.08.2016;
4. NCCN Clinical practice guidelines in oncology: genetic/familial high risk assessment: breast & ovarian. - Ver. 2.2016, ed.2016 //
www.nccn.org/professionals/physician_gls/pdg/genetics_screening.pdf. 05.08.2016;
