CC BY
35
Профессор В.И. Циркин, Т.Н. Кононова, доцент Е.Н. Сизова, доцент И.В. Попова,
A.C. Вахрушева, A.A. Костяев,
A.A. Куншин, Ю.А. Пенкина
Р-АДРЕНО-И М-ХОЛИНОМОДУЛИРУЮЩАЯ АКТИВНОСТЬ СЫВОРОТКИ КРОВИ И МОЧИ ПРИ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЕ
Кировская государственная медицинская академия
Вятский государственный гуманитарный университет Кировский НИИ гематологии и переливания крови
Кировская областная клиническая больница
Сокращения: АХ — ацетилхолин, ВА— бронхиальная астма, ß-AP — p-адренорецеп-торы; ВП — воздухопроводящие пути, ГРК— гиперкалиевый раствор Кребса, ЛФХ— лизо-фосфатидилхолин, М-ХР — М-холинорецеп-торы, РК — раствор Кребса, СА — сократительная активность, ЭАСМ — эндогенный активатор сократимости миоцитов, ЭББАР — эндогенный блокатор ß-AP, ЭСВАР — эндогенный сенсибилизатор ß-AP, ЭБМХР — эндогенный блокатор М-ХР, ЭСМХР — эндогенный сенсибилизатор М-ХР.
Ранее на основании исследования способности сыворотки крови и других жидких сред организма изменять сократительную реакцию гладких мышц матки и желудка крысы, коронарной артерии свиньи, артерий и вены пуповины человека, трахеи коровы, а также сердца лягушки на воздействие катехолами-
нов и ацетилхолина (АХ) было высказано положение [6, 16-19, 26-31] о наличии в организме человека эндогенных модуляторов хемореактивности прямого действия, в том числе эндогенного сенсибилизатора р-адреноре-цепторов (ЭСБАР), эндогенного блокатора р-адренорецепторов (ЭББАР), эндогенного сенсибилизатора М-холинорецепторов (ЭСМХР) и эндогенного блокатора М-холинорецепторов (ЭБМХР). Вопрос о природе этих факторов и их роли в физиологических и патологических реакциях до настоящего времени остается открытым. Вместе с тем известно, что р-адреносенсибилизирующую активность, или ЭСБАР-активность, проявляют гистидин, триптофан, тирозин и некоторые лекарственные препараты, в частности, предуктал и милдронат [9,12,16,19,22,23,27,30]; ЭБ-БАР-активность проявляют дофамин [27], АХ [20], лизофосфатидилхолин, или ЛФХ [12], киназа р-АР плазмы крови [35,37] и антитела к р-АР [39,43], а ЭБМХР-активность проявляют ЛФХ в высоких концентрациях
[3,7,13,14,21], олигопептиды [25], киназа М-ХР [34] и антитела к М-ХР [52], а ЭСМХР-ак-тивность, вероятно, проявляет ЛФХ в низких концентрациях [7,17]. Следовательно, гипотеза о наличии эндогенных модуляторов хемореактивности прямого действия имеет право на существование. Поэтому логично поставить вопрос относительно их роли в развитии заболеваний, обусловленных дисбалансом адренергических и холинергических влияний на органы. К таким заболеваниям относится и бронхиальная астма (БА), при которой, как известно [4, 10, 11, 24, 32, 33, 49], эффективность р-адренергических влияний на миоци-ты воздухопроводящих путей (ВП) снижена, а эффективность М-холинергических влияний, наоборот, повышена. Вопрос о причинах этих изменений и сегодня является дискуссионным [4, 11, 24, 33]. Полагают, что снижение эффективности передачи сигнала от р-АР к внутриклеточным эффекторам происходит под влиянием цитокинов и ряда БАВ, продуцируемыми воспалительными клетками ВП [24,33] и антител к р2-АР [24, 40,42], либо из-за снижения плотности Р2-АР в миоцитах ВП, в том числе вследствие десенситизации под влиянием стабильного увеличения содержания катехоламинов в крови [24, 33, 45]. Повышение бронхоконстрикторного действия вагуса при БА объясняется [11, 24, 33, 45] такими причинами, как: 1) избыточное выделение АХ из синапсов под влиянием нейропептидов, ПГФ2пльф> тромбоксана А2 и других медиаторов воспаления; 2) снижение активности ацетилхолинэстеразы; 3) чрезмерное
повышение тонуса вагуса вследствие раздражения ирритантных и юкстаальвеолярных рецепторов легких; 4) повышение эффективности активации М3-ХР миоцитов ВП под влиянием вырабатываемых нейтрофилами медиаторов воспаления (протеаз, основного щелочного белка эозинофилов, цитокинов); 5) увеличение числа холинергических нервов в бронхах. Считается, что такое обилие факторов, способных изменять р-адрено- и М-холи-нореактивность миоцитов ВП, порождает и многообразие клиники БА у детей и взрослых [11, 24, 33]. В то же время анализ литературы свидетельствует о том, что вопрос о роли содержащихся в крови ЭСБАР, ЭББАР, ЭБМХР и ЭСМХР в патогенезе БА до настоящего времени детально не изучался, хотя были выполнены интересные работы в этом направлении [25, 38, 40, 42, 51, 54]. В частности, показано, что плазма крови больных БА снижает Р2-адренореактивность гладких мышц трахеи крысы и это объясняется наличием в крови антител к Р2'АР [40,42], а при анафилаксии у морской свинки эпителий ВП продуцирует фактор, снижающий р-адрено-реактивность миоцитов трахеи и бронхов [38], что также способствует бронхоконстрик-ции. С другой стороны, у животных обнаружена способность эпителия ВП выделять фактор, снижающий реакцию миоцитов ВП на АХ [25,51,54] и имеющий олигопептидную природу [25]. Его, вероятно, можно рассматривать как аналог ЭБМХР, который препятствует бронхоконстрикции. В данной работе была поставлена цель исследовать содержание ЭСБАР, ЭББАР, ЭБМХР и ЭСМХР в сыворотке крови и моче больных БА.
Методика
Оценку содержания ЭСБАР, ЭББАР, ЭБМХР и ЭМСХР в сыворотке крови и моче проводили по методу [26] путем определения р-адрено- и М-холиномодулирующей активности различных их разведений. Применяли два тест-объекта — 1) продольные полоски (п=2231) рога матки 234 небеременных крыс, взятых в опыт в фазу метаэструса или диэст-руса (ее определяли по картине влагалищного мазка); на этих полосках исследовали мочу детей и сыворотку крови детей и взрослых; 2) циркулярные полоски (п=216) трахеи 34 коров, иссеченные из дорзальной стенки трахеи между хрящевыми полукольцами, параллельно ее периметру; на них исследовали сыворотку крови взрослых. Длина полосок составляла 6-8 мм, ширина — 2-3 мм; на каждой из них тестировали не более 1-2 разведений сыворотки или мочи. Сократительную
активность (СА) полосок регистрировали при 38°С на 6-канальном «Миоцитографе», содержащем механотроны 6МХ1С, предусилители, самопишущие приборы Н-3020, термостати-рующее устройство и шприцевой дозатор, позволяющий непрерывно перфузировать рабочие камеры прибора (объем 1 мл) раствором Кребса (РК) со скоростью 0,7 мл/мин. (состав РК, в мМ — ИаС1 — 136; КС1 — 4,7; СаС12 — 2,52; МёС12 — 1,2; КН2Р04 — 0,6; ШНСОа — 4,7; СаН1206 — 11; рН-7,4).
р-адренореактивность полосок матки крысы определяли по адреналину (10'8или 10 7 г/мл), а М-холинореактивность — по АХ (10 6 г/мл); оценку хемомодулирующей активности сыворотки или мочи проводили по схеме; РК > адреналин или АХ > РК > исследуемое разведение сыворотки крови или мочи
> это же разведение сыворотки крови или мочи + адреналин или АХ > РК > адреналин или АХ
> РК (длительность этапов — по 10 мин.).
р-адренореактивность полосок трахеи, учитывая их низкий базальный тонус, оценивали, согласно [18], по релаксирующему эффекту адреналина (10 7 г/мл) на фоне тонического сокращения, вызванного гиперкалиевым (60 мМ КС1) раствором Кребса (ГРК); схема опытов предусматривала; раствор Кребса > ГРК > ГРК + адреналин > ГРК + адреналин + это же разведение сыворотки крови > ГРК > раствор Кребса (длительность этапов — 10 мин). М-холинореактивность полосок трахеи оценивали по АХ (10 6 г/мл), а исследование М-холиномодулирующей активности сыворотки крови проводили по схеме: РК > АХ > АХ + исследуемое разведение сыворотки крови > АХ > РК (длительность этапов — 10 мин).
Исследованы моча и сыворотка венозной крови 19 детей 6-8 лет (на полосках матки крысы) и сыворотка венозной крови 32 (на полосках матки крысы) и 24 (на полосках трахеи) взрослых. У детей контрольную группу, или группу сравнения, составили 9 девочек и мальчиков, прошедших успешное лечение в гастроэнтерологическом отделении детской городской больницы по поводу функционального расстройства желудка (3), хронического гастрита (3), хронического колита (2) или хронического гастродуоденита (1). Группу больных составили 10 детей с атопической БА средней (8) и тяжелой (2) степенями тяжести. У взрослых в опытах с полосками матки контрольную группу составили 18 доноров крови (5 мужчин и 13 женщин) в возрасте 35-50 лет, а группу больных — 14 человек с атопической БА (5 мужчин и 9 женщин этого же возраста). В опытах с полосками трахеи контрольную группу составили 12 женщин-доно-
ров крови, а группу больных — 12 женщин с БА. У всех взрослых БА имела персистирую-щее течение средней степени тяжести в стадии обострения, а длительность БА варьировала от 5 до 20 лет. Все больные (дети и взрослые) получали лекарственную терапию, включающую (5-адреномиметики (беродуал, сальбутамол) и ингаляционные глюкокортикостероиды (фликсотид, бекотид). Забор мочи (до 60 мл) и/или венозной крови (по 5-7 мл) проводили с 7 до 9 часов, причем у больных с БА — в первые дни поступления в стационар, а у детей контрольной группы — накануне выписки из стационара, т.е. по окончании курса лечения. Сыворотку венозной крови детей и взрослых получали путем центрифугирования (2000 об/мин, 10 мин); ее разводили раствором Кребса в 50, 100, 500, 103и 104 раз. Мочу разводили в 5, 10, 20, 30, 40 и 50 раз (при оценке ЭБМХР) или в 100, 500, 103, 104, 105и 10б раз (при оценке ЭСБАР). Исследования проводили спустя 2-24 часа после забора мочи или крови. В ряде опытов оценивали влияние блокаторов р-АР (обзидана) и М-ХР (атропина) на сократительные ответы полосок при воздействии адреналина или АХ. В работе использовали адреналина гидрохлорид (Россия), ацетилхолина хлорид (Россия), об-зидан (Германия) и атропин (Россия), Результаты исследования обработаны параметрическим методом статистики [2]; различия оценивали по критерию Стьюдента [2] и считали их достоверными при р<0,05.
Результаты исследования
1. Опыты с продольными полосками рога матки крысы. Исходно полоски матки проявляли спонтанную фазную СА, которая дозозависимо угнеталась адреналином (10 в-10'е г/ мл) и усиливалась АХ (10‘бг/мл); оба эффекта блокировались соответственно обзиданом (10 6 г/мл) и атропином (10‘6/мл). Эти данные согласуются с представлением [27,53] о наличии в продольной мускулатуре рога матки крысы р-АР и М-ХР.
Миоцитстимулирующая активность мочи и сыворотки крови. Ранее было показано [19,26-29], что небольшие разведения сыворотки крови (1:50, 1:100, 1:500) и мочи (1:50) повышают СА (преимущественно ее частоту) миометрия крысы, и такой эффект снижается кальциевым блокатором дилтиазе-мом (10'7 г/мл); все это объяснялось наличием эндогенного активатора сократимости ми-оцитов (ЭАСМ), который, вероятнее всего, реализует свой эффект за счет повышения входа Са2+ в миоциты. Применяемая в работе схема опытов по изучению р-адрено- или М-
холиномодулирующей активности мочи и сыворотки крови в опытах с полосками миометрия также давала возможность оценить выраженность ЭАСМ-активности, а косвенно
— и содержание ЭАСМ при БА, хотя тестирование полосок мочой или сывороткой проводилось либо после воздействия адреналина, либо после воздействия АХ.
При оценке адреномодулирующей активности мочи детей (1:100, 1:500, 1:103, 1:104, 1:105) установлено (табл. 1), что, судя по изменению частоты спонтанной СА, ни одно из указанных разведений не проявляло ЭАСМ-активность. При оценке холиномодулирую-щей активности мочи детей (1:10, 1:20, 1:30, 1:40 и 1:50) ЭАСМ-активность в контрольной группе достоверно (р<0,05) проявляли разведения 1:10 и 1:30, а в группе БА — разведения 1:10 и 1:40; однако в целом достоверных различий между группами не обнаружено. При оценке адреномодулирующей активности сыворотки крови детей (1:50, 1:100, 1:500, 1:103 и 1:104) в контрольной группе ЭАСМ-активность проявляло разведение 1:50, а в группе БА — разведения 1:50 и 1:100; в целом же достоверных различий между группами не обнаружено. При оценке холиномо-дулирующей активности сыворотки крови детей (1:50, 1:100, 1:500, 1:103 и 1:10*) ЭАСМ-активность в контрольной группе проявляли разведения 1:50, 1:100 и 1:500, а в группе БА
— разведения 1:50 и 1:100; при этом достоверных различий между группами не обнаружено. При оценке адреномодулирующей активности сыворотки крови взрослых (1:50, 1:100, 1:500, 1:103 и 1:101) ЭАСМ-активность в обеих группах проявляли разведения 1:50, 1:100 и 1:500 при отсутствии достоверных различий между группами. При оценке холи-номодулирующей активности сыворотки крови взрослых (1:50, 1:100, 1:500, 1:10*и1:104) ЭАСМ-активность в контрольной группе проявляли разведения 1:50, 1:100 и 1:500, а в группе БА — 1:50 и 1:100; при БА разведение 1:500 оказывало достоверно более слабый стимулирующий эффект, чем в контрольной группе. Все эти данные указывают на то, что при БА не возрастает ЭАСМ-активность крови и мочи, а следовательно, и не повышается содержание ЭАСМ в этих средах. Более того, при БА содержание ЭАСМ может снижаться, что отмечено для взрослых.
Р-адреномодулирующая активность мочи и сыворотки крови. Исследование мочи детей (1:100, 1:500, 1:103, 1:10', 1:105и 1:10е) показало (табл. 2), что в контрольной группе ЭСБАР-активность ни одно из разведений не проявляло, а ЭББАР-активность проявляли
Таблица 1
Число спонтанных сокращений продольных полосок рога матки небеременных крыс (в % к фоновому уровню) при действии различных разведений мочи и сыворотки крови исследуемых контрольной группы и пациентов с бронхиальной астмой
Опыты по определению Р-адреномодулирующей активности среды Опыты по определению М-холиномодулирующей активности среды
Разве- дения Контроль Бронхиальная астма Разве- дения Контроль Бронхиальная астма
п М±ш п \ М+т п | М±т N М+ш
Моча 6-8-летних детей
1:100 8 120±18 10 114+23 1:10 9 246+69* 10 261±58*
1:500 8 84 ±8 10 105+14 1:20 9 163±34 10 136+47
1:10* 8 89±16 10 85+9 1:30 9 181±33* 10 180±45
1:10* 8 86+8 10 99±11 1:40 9 167±55 10 265±49*
1:105 8 88±9 10 69±9* 1:50 9 132±37 10 152+38
Сыворотка крови 6-8-летних детей
1:50 8 201±46* 8 158+15* 1:50 9 271+69* 9 263±59*
1:100 8 192±68 8 216+34* 1:100 9 296±53* 9 258±49*
1:500 8 109±22 8 129+19 1:500 9 164±28* 9 158±32
1:103 8 08±12 8 81±11 1:103 9 88±9 9 144±37
1:104 8 106±9 8 104±7 1:10' 9 94±32 9 76±13
Сыворотка крови взрослых людей
1:50 14 173±24* 12 187±31* 1:50 10 231±54* 12 257+63*
1:100 14 233±49* 12 142+18* 1:100 10 249+41* 12 242±50*
1:500 14 140±16* 12 136+14* 1:500 10 211±35* 12 121±21а
1:103 14 118±15 12 114+8 1:10а 10 146±41 12 132±22
1:10“ 14 101 ±9 12 100+7 1:104 10 77±16 12 86±18
Примечание: * — различие с фоновым уровнем достоверно, р<0,05; а — различи« е контрольной группой достоверно, р<0,05.
разведения 1:105 и 1:10е (на их фоне адреналин прекращал вызывать достоверное снижение суммарной СА полосок); в группе БА ЭС-БАР-активность проявляло разведение 1:103 (на его фоне ингибирующий эффект адреналина приобретал достоверный характер), а ЭББАР-активность проявляли разведения 1:100, 1:500 и 1:10е. Сыворотка крови детей (1:50, 1:100, 1:500, 1:10а, 1:104) в контрольной группе ЭСБАР-активность не проявляла, а ЭББАР-активность проявляла в разведении 1:103(на его фоне адреналин прекращал достоверно проявлять ингибирующее действие); в группе БА она также не проявляла ЭСБАР-активность, но проявляла ЭБ-БАР-активность в разведениях 1:50, 1:500 и 1:103. Все это означает, что у детей при БА повышается ЭББАР-активность мочи и сыворотки крови, а следовательно, в моче и в сыворотке крови возрастает содержание ЭББАР и/ или снижается содержание ЭСБАР. Сыворотка крови взрослых (1:50, 1:100, 1:500, 1:103, 1:104) в контрольной группе ЭСБАР-активность проявляла в разведениях 1:100 и 1:500
(на их фоне выраженность ингибирующего влияния адреналина на тест-объект достоверно повышалась), но не проявляла ЭББАР-ак-тивность; в группе ВА сыворотка не проявляла ЭСБАР-активность, но проявляла ЭВБАР-активность в разведениях 1:100,1:500 и 1:104 (на их фоне адреналин прекращал достоверно проявлять ингибирующее действие). Это означает, что у взрослых при БА снижается ЭСБАР-активность сыворотки крови и повышается ее ЭББАР-активность, а, следовательно, при БА в сыворотке крови снижается содержание ЭСБАР и возрастает содержание ЭББАР. В целом результаты исследования свидетельствуют о том, что при БА в сыворотке крови уменьшается содержание ЭСБАР (достоверно выявлено у взрослых) и возрастает содержание ЭББАР (дети и взрослые).
М-холиномодулирующаи активность мочи и сыворотки крови. Показано (табл. 3), что моча детей (1:10, 1:20, 1:30, 1:40 и 1:50) в контрольной группе проявляла ЭБМХР-ак-тивность в разведениях 1:10,1:30,1:40 и 1:50 (на их фоне стимулирующее действие АХ до-
Таблица 2
Суммарная сократительная активность продольных полосок рога матки небеременных крыс (в % к фоновому уровню) при тестировании адреналином (10 е или 10'7 г/мл) до, во время и после воздействия мочи или сыворотки крови (соответственно 1-е, 2-с и 3-е тестирования) исследуемых контрольной группы и пациентов с бронхиальной астмой
Разведения Контроль Бронхиальная астма
Тестирования адреналином Тестирования адреналином
1-е 2-е 3-є 1-е 2-е 3-є
Моча детей (в контрольной группе п=8, в группе БА п= 10)
1:100 60+5* 60+15* 59+16* 75±12* 97+36 57+17*
1:500 68+6* 57±14* 49±16* 63±8* 84+35 71±11*
1:103 60+11* 45±10* 54+11* 80±7 66±17* 81±7
1:10і 60+8* 35±9* 34+10* 69+11* 67±11* 81±10
1:105 68+6* 83+6 65±11* 54±9* 62±11 * 26±10*
1:10е 62+6* 82+9 57±21 65+9* 74±14 53+11*
Сыворотка крови детей (в контрольной группе п=8, в группе ВА п=8)
1:50 61±7* 57+17* 69±19 79+6* 81±12 59±15*
1:100 69+8* 76±8* 69±8* 82+14 93±12 73±19
1:500 38+10* 55±17* 36±11* 63+14* 89*19 60±16*
1:103 65+10* 70+18 66±17 53+10* 87±18 57±12*
1:104 64+10* 70+13* 52+12* 69+6* 60+7* 67±19
Сыворотка крови взрослых (в контрольной группе п=14, в группе БА п~12)
1:50 67±7* 62±7* 77+12 60+13* 52+10* 60+10*
1:100 87±10 59±9* # 72±15 57+5* 87+12 # 51+10*
1:500 94±13 61±7* # 82+9 75+8* 00 СЯ І+- о 53+11*
1:105 70+8* 5 7 ± 1.0* 69±9* 73+6* 74+10* 55+9*
1:104 72+4* 60+7* 52+12* 68+5* 97±16 63±8*
Примечание: * — различие с фоновым уровнем достоверно, р<0,05; #— различие с 1-м тестированием адреналином достоверно, р<0,05.
стоверно уменьшалась на 27-42% от первоначального, т.е. наблюдаемого при 1-м тестировании полоски АХ); признаков наличия ЭСМХР-активности в этой группе не установлено. В группе БАмоча не проявляла ЭБМХР-активность (при всех ее разведениях АХ сохранял способность оказывать такой же стимулирующий эффект, как и при 1-м тестировании), но в то же время моча, в определенной степени, проявляла ЭСМХР-активность (удаление разведений 1:20, 1:40 и 1:50 сопровождалось достоверным снижением стимулирующего эффекта АХ). В целом можно утверждать, что при ВА снижается ЭБМХР-актив-ность мочи, а, следовательно, в ней снижается содержание ЭБМХР и/или возрастает содержание ЭСМХР. Сыворотка крови детей (1:50, 1:100, 1:500, 1:103 и 1:104) в контрольной группе ЭБМХР-активность проявляла в разведениях 1:100, 1:5 00, 1:103 и 1:104 (на их фоне стимулирующее действие АХ достоверно уменьшалось на 29-32% от первоначального), а в группе БА ни одно из 5 разведений не проявляло ЭБМХР-активность (на их
фоне АХ сохранял способность повышать СА тест-объекта). В обеих группах выявить проявление ЭСМХР-активности не удалось. Все эти данные позволяют считать, что у детей при БА ЭБМХР-активность сыворотки крови (как и мочи) снижена, а следовательно, снижено содержание ЭБМХР и/или повышено содержание ЭСМХР.
Сыворотка крови взрослых (1:50, 1:100, 1:500, 1:103 и 1:101) в контрольной группе ЭБМХР-активность проявляла в разведениях 1:100 и 1:500 (они достоверно уменьшали стимулирующее действие АХ на 35-43% от первоначального), а в группе БА — в разведениях 1:50,1:500и 1:103 (они уменьшали стимулирующее действие АХ на 21-33% от первоначального). В обеих группах выявить проявление ЭСМХР-активности не удалось. В целом эти данные говорят о том, что, в отличие от детей, у взрослых при БА М-холиноблокирующая активность сыворотки крови не снижается, а возрастает, а, следовательно, в сыворотке крови повышается содержание ЭБМХР и /или уменьшается содержание ЭСМХР.
Таблица 3
Суммарная сократительная активность продольных полосок рога матки небеременных крыс при 2-м и 3-м тестированиях ацетилхолином (10ег/мл), т.е. соответственно на фоне и после воздействия соответствующего разведения мочи или сывороткой крови исследуемых контрольной группы и пациентов с бронхиальной астмой, в %, к 1-му (т.е. до воздействия)
тестированию ацетилхолином
Разведения Контроль Бронхиальная астма
Тестирования ацетилхолином Тестирования ацетилхолином
2-е (совместно с биожидкостью) 3-є (после удаления биожидкости) 2-е (совместно с биожидкостью) 3-є (после удаления биожидкости)
Моча детей (в контрольной группе п=9, в группе БА п = 10)
1:10 73*12* 95*17 99*16 109*38
1:20 74*16 68*10* 76*12 61*6*
1:30 61*8* 66*6* 102*23 89*19
1:40 68+12* 59*12* 99*9 73*11*
1:50 58*12* 69*10* 77*14 58*12*
Сыворотка крови детей (в контрольной группе п=9, в группе БА п=9)
1:50 83±13 92*7 91*9 93*10
1:100 68*8* 88*11 103*19 105*9
1:500 71*9* 91*16 102*14 110*21
1:103 67±11* 69*11* 96*9 88*14
1:104 73*10* 75*8* 89*18 71*6*
Сыворотка крови взрослых (в контрольной группе п=10, в группе БА п=12)
1:50 79*17 89±10 72*10* 85*10
1:100 57*10* 64*9* 78*17 93*10
1:500 65*10* 75*7* 67*8* 73*6*
1:103 85*9 98*24 79*5* 71*6*
ШО“ 83*10 70*8* 89*8 71*6*
* — различие с 1-м тестированием ацетилхолином достоверно, р<0,05.
Таким образом, при БА М-холиноблоки-рующая активность сыворотки крови (мочи) изменяется — у детей она снижается (следовательно, в крови и в моче снижается содержание ЭБМХР и/или повышается содержание ЭСМХР), а у взрослых она возрастает (следовательно, в сыворотке крови повышается содержание ЭБМХР и/или снижается содержание ЭСМХР).
2. Опыты с циркулярными полосками трахеи коровы. Полоски трахеи обладали низким базальным тонусом. Этот тонус дозозависимо возрастал под влиянием АХ (10 е-10 е г/мл), что блокировалось атропином (10 6 г/мл), а также при воздействии гипер-калиевого (60 мМ КС1) раствора Кребса. Адреналин (10 9-10 6/мл) дозозависимо снижал КСЬвызванный тонус полосок, что блокировалось обзиданом (10 6 г/мл). Эти данные соответствуют представлению [18,33,46,48,49] о наличии в циркулярной мускулатуре ВП [}-АР и М-ХР (главным образом, р2-АР и М3-ХР). Сыворотка крови (1:50, 1:100, 1:500, 1:103) женщин обеих групп при введении на фоне КС1-вызванного тонуса не изменяла его. Это
означает, что ЭАСМ не способен влиять на миоциты ВП.
При оценке ¡З-адреномодулирующей активности сыворотки крови (1:50, 1:100, 1:500, 1:103) установлено (табл. 4), что в контрольной группе исходно адреналин снижал КСЬвызван-ный тонус полосок (его величина в обеих группах достигала 3,5-7,2 мН) до 76-60% от первоначального уровня; дополнительное введение сыворотки крови не влияло на выраженность релаксирукпцего эффекта адреналина (тонус сохранялся на уровне 70-57% от первоначального), а удаление сыворотки крови и адреналина восстанавливало тонус до 94-114% от первоначального уровня. Таким образом, выявить ЭСБАР- и ЭБМХР-активность у сыворотки крови женщин контрольной группы при таком выражении результатов исследования не удалось. В группе БА адреналин исходно снижал КС1-вызванный тонус полосок до 75-59% от первоначального его уровня (т.е. как и в контрольной группе); дополнительное введение сыворотки крови снижало релаксирующий эффект адреналина, что особенно выражено для разведений 1:50 (на его фоне тонус повысился с 56% до
Таблица 4
Величина тонуса (в % к исходному уровню) циркулярных полосок трахеи коровы, вызванного гиперкалиевым (60 мМ КС1) раствором Кребса, при изолированном воздействии адреналина (10 7 г/мл) и при его воздействии совместно с сывороткой крови исследуемых контрольной группы (п=11) и пациентов с бронхиальной астмой (п=12)
Разведения сыворотки крови Контроль Бронхиальная астма
60 мМ КС! + адреналин 60 мМ КС1 + адреналин + сыворотка 60 мМ КС1 60 мМ КС1 + адреналин 60 мМ КС! + адреналин + сыворотка 60 мМ КС1
1-й этап 2-й этап 3-й этап 1-й этап 2-й этап 3-й этап
1:50 71*14 70±14* 113*20 56*14* 77±Х2 111*16
1:100 61±15* 58+16* 94±7 75*13 81*11 98*4
1:500 60*15* 57*15* 102*10 59*14* 74*13 97*5
1:10э 76*13 66*15* 114±12 72*13* 85±11 95*6
* — различие с фоновым уровнем достоверно, р<0,05. В обеих группах все различия 2-го этапа с 1-м этапом носят недостоверный характер, р>0,1; межгрупповые различив также недостоверны, р>0,1.
Таблица 5
Процент опытов с циркулярными полосками трахеи коровы, в которых сыворотка крови исследуемых контрольной группы (п=11) и пациентов с бронхиальной астмой (п=12) усиливает или ослабляет релаксирующий эффект адреналина (107 г/мл) при его воздействии на фоне тонуса, вызванного гиперкалиевым (60 мМ КС1) раствором Кребса
Разведения сыворотки крови Усиление эффекта адреналина (ЭСБАР-активность) Ослабление эффекта адреналина (ЭББАР-активность)
Контроль Бронхиальная астма Контроль Бронхиальная астма
1:50 63,6*14,3 16,7*0,8 а 27,3*13,4 75,0*12,5 а
1:100 45,5*15,0 50,0*14,4 18,2*11,6 41,7*14,2
1:500 45,5*15,0 33,3±13,8 36,4*14,5 58,3*14,2
1:105 54,6*15,0 8,3*8,0 а 18,2*11,6 75,0*12,5 а
а — различие с контролем достоверно, р<0,05.
77%), 1:500 (с 59% до 74%) и 1:103 (с 72% до 85%); удаление сыворотки крови и адреналина восстанавливала тонус до 95-115% от первоначального уровня. Эти данные косвенно указывают на повышение ЭББАР-активности сыворотки крови у женщин при БА. Такой вывод подтверждается и данными о числе опытов, в которых сыворотка крови проявляла ЭСБАР-активность или ЭББАР-активность (табл. 5), т.е. соответственно усиливала релаксирующий эффект адреналина или ослабляла его. В частности, ЭСБАР-активность разведений 1:50, 1:100, 1:500 и 1:103в контрольной группе отмечена соответственно в 63,6% , 45,5%, 45,5% и 54,6% опытов, а в группе БА — в 16,7%, 50,0%, 33,3% и 8,3% опытов (различия с контрольной группой для разведений 1:50 и 1:103 достоверны, р<0,08); ЭББАР-активность в контрольной группе наблюдалась соответственно в 27,3%, 18,2%, 36,4% и 18,2% опытов, а в группе БА — в 75,0%, 41,7%, 58,3% и 75,0% опытов (различия с контрольной группой для раз-ведений 1:50 и 1:103 достоверны, р<0,05). В це-
лом можно утверждать, что при БА у женщин ЭСБАР-активность сыворотки крови снижена (а следовательно, и снижено содержание ЭС-БАР), а ЭББАР-активность (и содержание ЭБ БАР), наоборот, повышена. Это согласуется с данными, полученными при исследовании сыворотки крови в опытах с миометрием крысы.
При оценке М-холиномодулирующей активности сыворотки крови(1:50, 1:100, 1:500 и 1:103) установлено (табл.6), что в контрольной группе все разведения сыворотки крови достоверно снижали тонус, вызванный АХ (его величина в обеих группах достигала
2,1-4,4 мН), в среднем до 16-44% от его исходного уровня, а их удаление сопровождалось почти полным восстановлением тонуса (до 85-94% от исходного уровня). Следовательно, все 4 разведения проявляли ЭБМХР-активность. В группе БА ЭБМХР-активность проявляли три разведения — 1:50, 1:100 и 1:103; они снижали АХ-вызванный тонус до 16-60% от исходного уровня, при этом релаксирующий эффект разведения 1:50 был дос-
Таблица 6
Величина тонуса (в % к исходному уровню) циркулярных полосок трахеи коровы, вызванного ацетилхолином (АХ, 106 г/мл), при воздействии сыворотки крови исследуемых контрольной группы (п=12) и пациентов с бронхиальной астмой (п=12)
и после его удаления
Разведения сыворотки крови Контроль Бронхиальная астма
АХ + сыворотка АХ после удаления сыворотки АХ + сыворотка АХ после удаления сыворотки
2-й этап 3-й этап 2-й этап 3-й этап
1:50 16±11* 94±9# 60±15* а 81+12
1:100 17±9* 85±12# 16±8* 85+12 #
1:500 26±13* 86±10# 82+11 а 113±10
1:10* 44±14* 93±7# 51±14* 98±4 #
* — различие с исходной величиной тонуса, вызванного АХ (10 * г/мл), достоверно, р<0,05; а — различие с контрольной группой достоверно, р<0,05; # — различие с 2-м этапом достоверно. В обеих группах различия между разведениями носят недостоверный характер, р>0,1.
товерно ниже, чем в контрольной группе (снижение тонуса до 60±15% против 16±11%). Удаление сыворотки крови сопровождалось почти полным (до 81-113% от исходного уровня) восстановлением АХ-вызванного тонуса. Все это указывает на то, что при БА у взрослых (как и у детей) ЭБМХР-активность сыворотки крови может снижаться (а следовательно, может снижаться содержание ЭБМХР и/ или возрастать содержание ЭСМХР).
Обсуждение результатов
Результаты исследования показали, что моча детей (1:10, 1:30, 1:40) и сыворотка крови детей и взрослых (1:50, 1:100, 1:500) повышают спонтанную СА продольных полосок рога матки небеременных крыс, т.е. проявляют миоцитстимулирующую активность. Эти данные подтверждают представление [19,27,29] о наличии в сыворотке крови и моче человека ЭАСМ, компонентами которого, по мнению [19], являются фибринопепти-ды А и В и другие продукты деградации фибриногена и фибрина, повышающие вход Са2+ в миоциты. Отсутствие у сыворотки крови способности проявлять миоцитстимулирующую активность на полосках трахеи коровы (на фоне тонуса, вызванного КС1), позволяет считать, что ЭАСМ преимущественно влияет на миоциты с относительно высокой возбудимостью, к категории которой не относятся миоциты ВП. Нами показано, что при БА ЭАСМ-активность крови и мочи (следовательно, и содержание в них ЭАСМ) не возрастает, а у взрослых пациентов она даже снижается. Это позволяет считать, что ЭАСМ, скорее всего, не участвует в регуляции СА миоцитов ВП и не имеет прямого отношения к развитию бронхоконстрикции при БА.
Нами показано, что р-адреносенсибили-зирующую активность, судя по усилению ингибирующего эффекта адреналина (10‘8-10 7 г/ мл), в опытах с полосками матки крысы проявляют моча детей (достоверно — разведение 1:103) и сыворотка крови взрослых (1:100, 1:500), а в опытах с полосками трахеи — сыворотка крови взрослых (1:50, 1:100, 1:500, 1:10я). Как известно [16,27,46,53,48,49], ингибирующий эффект адреналина на этих гладкомышечных объектах реализуется при активации, главным образом, р2-АР. Эти данные подтверждают наше представление [16,19,27-30] о наличии в крови и моче ЭСБАР. Нами установлено, что при БА у взрослых (опыты с сывороткой крови на полосках матки крысы и на трахеи коровы) р-адреносенсибилизиру-ющая активность снижена. Это позволяет говорить о снижении содержания ЭСБАР при БА.
Нами показано, что р-адреноблокирую-щую активность, судя по ослаблению ингибирующего эффекта адреналина (10 8-10 7 г/мл), в опытах с полосками матки крысы проявляют моча детей (1:100, 1:50 0, 1:103, 1:105 и 1:106), сыворотка крови детей (1:50, 1:500, 1:103) и взрослых (1:100, 1:500, 1:104), а в опытах с полосками трахеи — сыворотка крови взрослых (1:50, 1:500, 1:103). Эти данные подтверждают наше представление [19,27-30] о наличии в крови ЭББАР. Нами впервые установлено, что при БА у детей (опыты с мочой и сывороткой крови на полосках матки крысы) и у взрослых (сыворотка крови, полоски матки крысы и трахеи коровы) возрастает р-адреноблокирующая активность, что говорит о повышении при БА содержания в крови и моче ЭББАР.
В целом снижение содержания в крови
ЭСБАР и повышение содержания ЭББАР при БА должно приводить к уменьшению эффективности р-адренергического влияния на ми-оциты ВП и тем самым — к усилению бронхо-констрикции. Это позволяет рассматривать выявленные изменения в содержании ЭСБАР и ЭББАР как одно из звеньев патогенеза БА.
При исследовании М-холиномодулирую-щей активности биожидкостей установлено, что М-холиноблокирующую активность, судя по снижению стимулирующего влияния АХ, проявляют моча (1:10, 1:30, 1:40, 1:50) и сыворотка крови (1:100, 1:500, 1:103, 1:10-*) детей в опытах с полосками матки крысы, а также сыворотка крови взрослых (1:50, 1:100, 1:500, 1:103) в опытах с полосками матки крысы и трахеи коровы. Это подтверждает наше представление [17,19,27-29,31] о наличии в крови ЭБМХР. В то же время нам не удалось убедительно продемонстрировать способность мочи и сыворотки крови проявлять М-холи-носенсибилизирующую активность, что, возможно, связано с использованием АХ в относительно высокой концентрации. Тем не менее эти результаты не противоречат нашему представлению о наличии в крови ЭСМХР [17,19,28]. Впервые показано, что у детей (опыты с мочой и сывороткой крови на полосках матки крысы) и у взрослых (сыворотка крови, полоски трахеи коровы) М-холинобло-кирующая активность мочи и сыворотки крови при БА снижена, что может быть обусловлено снижением содержания ЭБМХР и/ или повышением содержания ЭСМХР. В любом случае такие изменения должны способствовать бронхоконстрикции, т.е. развитию БА. В то же время опыты с сывороткой крови взрослых людей, проведенные на полосках матки крысы, показали, что при БА М-холи-ноблокирующая активность сыворотки может возрастать, т.е. может повышаться содержание ЭБМХР и/или снижаться содержание ЭСМХР, что должно препятствовать бронхоконстрикции. Поэтому мы расцениваем повышение М-холиноблокирующей активности сыворотки крови при БА как проявление компенсаторной реакции, уменьшающей бронхо-констрикторный эффект АХ.
Таким образом, изучение р-адрено- и М-холиномодулирующей активности мочи и сыворотки крови позволяет заключить, что при БА изменяется содержание эндогенных модуляторов (5-адрено- и М-холинореактивности прямого действия. Преимущественно эти изменения (снижение содержания ЭСБАР и ЭБМХР, рост содержания ЭББАР и, вероятно, ЭСМХР), усиливая бронхоконстрикцию, способствуют формированию БА, В то же же время у части
пациентов (взрослые) могут наблюдаться такие изменения в содержании этих факторов (в частности, повышение содержания ЭБМХР и/или снижение содержания ЭСМХР), которые уменьшают бронхоконстрикцию, т.е. являются механизмом компенсации.
Относительно причин, ведущих к изменению содержания ЭСБАР, ЭББАР, ЭБМХР и ЭСМХР приБА, можно высказать следующие предположения, базирующиеся на представлениях о природе этих факторов.
Считается [9,16,19,22,23,27,30], что основными компонентами ЭСБАР являются гистидин, триптофан и тирозин. Очевидно, что их содержание, судя по снижению ЭСВАР-ак-тивности крови, при БА должно быть тоже снижено. Однако в единственно встретившейся нам работе отмечено [15], что в период обострения БА и на фоне эффективного лечения кортикостероидами уровень тирозина в плазме крови не снижен, а, наоборот, повышен (на 240—250% от нормы). Мы не исключаем, что при Б А действительно снижается содержание гистидина, триптофана и тирозина, а рост их содержания в крови (например, под влиянием кортикостероидов) лежит в основе положительного эффекта проводимой терапии БА.
Согласно данным литературы, функцию ЭББАР могут выполнять многие вещества, но наиболее реальным претендентом на эту роль являются киназа р-АР [35,37], антитела к р-АР [24, 39,40, 42,43] и, вероятно, лизофосфа-тидилхолин (ЛФХ). Ранее ЛФХ рассматривался нами [7,17,19,28,29,31] как основной компонент ЭБМХР, а другими авторами
[3,13,14,21] — как холинолитический фактор. Однако недавно в опытах с изолированным желудочком сердца лягушки нами установлено [12], что ЛФХ в концентрациях 10 10 М и выше снижает р-адренореактивность миокарда, а гистидин (105 г/мл) восстанавливает ее. В целом мы не исключаем, что повышение р-адреноблокирующей активности крови при БА, лежащее в основе формирования этого заболевания, у одних пациентов происходит за счет появления антител к р-АР (например, вследствие аутоиммунного процесса), а у других — за счет повышения содержания ЛФХ, которое, как известно, может быть обусловлено избыточной активацией фосфо-липазы А2 [1,8,14,41] или усилением ПОЛ [5,50]. Поданным литературы, в норме содержание свободного ЛФХ в сыворотке крови не превышает 20-80 мкМ [14,21] или 5-180 мкМ [55], а при БА оно существенно повышается, особенно в период обострения [36] или при низкой эффективности кортикостероидной терапии [1]. Это, как мы полагаем, и может
приводить к снижению р-адренореактивнос-ти миоцитов ВП.
Основным компонентом ЭБМХР, как уже отмечалось выше, по нашему мнению, является ЛФХ [6,7,18,19,27,31]. Не исключается также, что в роли ЭБМХР могут выступать антитела к М3-ХР [52] и киназа М-ХР [34]. Поэтому повышение содержания ЭБМХР при БА, выявленное у взрослых, и вероятно, носящее компенсаторный характер, можно объяснить чрезмерным повышением содержания ЛФХ (например, при избыточной активации ПОЛ) и/или появлением в крови антител к М-ХР. Снижение М-холи-ноблокирующей активности мочи и сыворотки крови, выявленное при БА у детей и части взрослых, мы склонны рассматривать как следствие повышения в крови содержания свободного ЛФХ. Согласно нашим данным [7], полученным в опытах с циркулярными полосками из дна желудка крысы, ЛФХ в относительно низких концентрациях (10 8-10 6 М) повышает стимулирующий эффект АХ (10 а г/мл), т.е. проявляет М-холиносенсиби-лизирующую активность, а в более высоких концентрациях (Ю ’-Ю1 М) — снижает этот эффект АХ, т.е. оказывает М-холиноблоки-рующее действие. Очевидно, что при БА вследствие повышения содержания в крови свободного ЛФХ (до 10 8 -10'6 М) р-адреноре-активность миоцитов ВП снижается и одновременно возрастает их М-холинореактив-ность, что и приводит к бронхоконстрикции. При высокой концентрации ЛФХ (10 ”-10 4М) у миоцитов ВП наряду с более выраженным снижением р-адренореактивности параллельно снижается и М-холинореактивность, что частично снижает бронхоконстриктор-ное действие вагуса.
В целом представленные данные позволяют утверждать, что одной из причин развития БА может быть повышение уровня свободного ЛФХ в крови, так как это, с одной стороны, снижает эффективность р-адренергичес-ких влияний на миоциты ВП, а с другой — усиливает эффективность М-холинергичес-ких воздействий на миоциты ВП, что усиливает бронхоконстрикцию. Вероятно, низкий уровень в крови гистидина, триптофана и тирозина способствует проявлению такого негативного эффекта ЛФХ. Исходя из такой трактовки патогенеза БА можно предположить, что при лечении БА перспективно применение средств, повышающих уровень любой из трех аминокислот (гистидина, триптофана и тирозина), и препаратов, снижающих уровень образования ЛФХ, т.е. антиоксидантов, ингибиторов фосфолипазы А2, ингибиторов леци-
тин-ходестерин-ацилтрансферазы, которая, как известно [14], тоже участвует в образовании ЛФХ. В этом отношении представляются важными данные литературы о том, что гистидин, помимо того, что он является сенсибилизатором р-АР, как это показано в наших исследованиях [9,16,19, 22, 23,27,30], одновременно является антиоксидантом и тушителем ПОЛ [44,47], так как обладает способностью улавливать синглетный кислород [44].
Заключение
При бронхиальной астме у детей и взрослых не возрастает миоцитстимулирующая активность сывороткикрови и мочи, но снижается их р-адреносенсибилизируюгцая активность, возрастает p-адреноблокирующая активность (у части пациентов) и снижается М-холиноблокирующая активность, что говорит об уменьшении содержания ЭСБАР и ЭБМХР и повышении ЭББАР. Эти изменения способствуют формированию бронхиальной астмы.
Список литературы
1. Бычковская С.В. Дифференцированный подход к оценке эффективности базисной терапии бронхиальной астмы у детей. Авто-реф. дисс. ... к. м. н. — Красноярск: КГМА, 2000. — 24 с.
2. Гланц С. Медико-биологическая статистика. Перевод с англ. — М.: Практика, 1999.
— 459 с.
3. Звездина Н.Д., Проказова И.В., Вавер
В.А. с соавт. // Физиологический журнал СССР им. И. М. Сеченова.— 1970.— Т. 56, № 11,— С. 1600 — 1605.
4. Капилевич Л.В., Дьякова Е.Ю., Зайцева Т.Н. с соавт. // Пульмонология.— 2005.— № 3. — С. 112-119.
5. Киселева Р. E., Еревин В.В., Юдина О.М. // Вопросы медико-биологических наук.
— 1999. — № 4.— С. 74-79.
6. Куншин A.A., Кононова Т.Н., Циркин
В.И. с соавт. // Тез. VI съезда научного общества гастроэнтерологов России. — М. — 2006.
— С. 13.
7. Куншин A.A., Проказова Н.В., Трухи-на С.И. // Физиология человека и животных: от эксперимента к клинической практике: Мат.У молодежной науч. конф, — Сыктывкар, 2006. — С. 75-76.
8. Литвинко H.H., Кисель М.А. Эндогенные фосфолипазы А2: структура и функции.— Мн.: Навука i тэхшка, 1991.— 270 с.
9. Ноздрачев А.Д., Туманова Т.В., Дворянский С.А. с соавт. // Доклады РАН. — 1998. — Т. 363, № 1. — С. 133-136.
10. Овчаренко С.И. // Русский медицинский журнал. — 2002. — N»17. — С. 766-769.
11. Окороков А.Н. Диагностика болезней внутренних органов. Т. 3. Диагностика болезней органов дыхания.— М.: Медицинская литература, 2003.— 464 с.
12. ПенкинаЮ.А., Проказова Н, В., Цир-кин В.И. // ЦНС и патология органов кровообращения: Тез. межд. симп,— СПб., 2006 .— В печати.
13. Проказова Н.В., Звездина Н.Д., Суслова И.В. и др. // Российский физиологический журнал им. И. М. Сеченова. — 1998.— Т. 84, №10.— С. 969-978.
14. Проказова Н.В., Звездина Н.Д., Ко-ротаева A.JI. // Биохимия. — 1998. — Т. 63, вып. 1, с. 38 — 46.
15. Расс И. Т., Бунатян А. Ф., Корнев Б. М., Турсина Т.А. // Терапевтический архив. — 1978. — № 11. — С. 98-101.
16. Сизова Е.Н., Циркин В.И., Туманова Т.В. с соавт. // Современные наукоемкие технологии. — 2004.— № 3.— С. 21— 26,
17. Сизова Е.Н., Циркин В.И., Трухин
A.Н. // Вестник Поморского университета. Серия «Физиологические и психолого-педаго-гические науки». — 2004.— №2.— С. 22-31.
18. Сизова E. Н,, Ноздрачев А. Д., Циркин В.И, с соавт. // Вестник Санкт-Петербургского университета. Серия 3 (биология).— 2004,— Вып. 2. — С. 47-57.
19. Сизова Е.Н. Физиологическая характеристика эндогенных модуляторов ß-адрено-и М-холинореактивноети и их участие в регуляции деятельности различных систем организма человека и животных. Автореф. дисс. ... д.б.н.— М., 2005. — 32 с.
20. Сизова Е.Н,, Циркин В.И. // Вятский мед. вестник.— 2005.— № 2. — С. 46-52.
21. Суслова И. В., Коротаева A.A., Проказова Н. В, // Доклады РАН.— 1995.— Т. 342, № 2,— С. 273—276.
22. Трухин А.Н., Циркин В.И., Сизова Е.Н. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 2004. — Т. 138, № 8.—
С. 144-131.
23. Туманова Т.В., Сизова Е.Н., Циркин
B.И. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 2004. — Т. 138, № 10.
C. 364-367.
24. Федосеев Г.Б. (ред.). Механизмы воспаления бронхов и легких и противовоспалительная терапия.— СПб.: Нордмед-издат, 1998.— 688 с.
25. Хавинсон В.Х., Кожемякин A.JI., Федин А.Н. с соавт. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 1992. — Т. 113, № 5._ с. 483-486.
26. Циркин В.П., Дворянский С. А., Ноздрачев А.Д. с соавт. // Доклады РАН.— 1997.
— Т. 352, № 1. — С. 124— 126.
27. Циркин В.И., Дворянский С.А. Сократительная деятельность матки (механизмы регуляции). — Киров, 1997. — 270 с.
28. Циркин В.И., Ноздрачев А.Д., Саза-нова M.JI. с соавт. // Доклады РАН. — 2003.
— Т. 388, № 5. — С. 704-707.
29. Циркин В.И., Ноздрачев А.Д., Сизова Е.Н. с соавт. //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 2003. — Т. 136, №7.— С. 18-22.
30. Циркин В.И., Ноздрачев А.Д., Сизова Е.Н., Туманова Т.В. // Доклады РАН.— 2004,— Т. 398, № 4.— С. 563-566.
31. Циркин В.Й., Трухин A.H., Сизова Е.Н., Дворянский С.А. // Российский кардиологический журнал. — 2004. — № 2. —
С. 64-69.
32. Цой А.Н., Архипов В.В. // Пульмонология. — 2004, — № 4. — С 92-104.
33. Чучалин А.Г. Бронхиальная астма. — М.: Русский врач, 2001. — 144 с.
34. Baselli E., Brandes S., Luthin G. et al. // Neurourol. and Urodyn. — 1999. — V.18, №5. — P. 511 520.
35. Bouvier M., Collins S., O’Dowd B.F. et al. // J. Biol, Chem. 1989, — Vol. 264, — P. 16786-16792.
36. Chhabra S., Khanduja A., Jain D. // Clin. Sei. — 1999. — Vol.97, JMb 5,— P. 595-601,
37. Chuang Tsu Tshen, Saliese M., Ambrosini G. // J. Biol. Chem. — 1992. — Vol. 287, № 10. — P. 6886-6892.
38. DaffonchioL,, Hernandez A., Martinotti E. et al // Pharmacol. Res. Commun.— 1988. — Vol. 20, Suppl. №2. — P. 122.
39. Gulick T., Pieper S., Murpgy M. et al. // Cicrulation. — 1991. — Vol. 84, № 1. — P. 313-321.
40. Huxtable R. // Frend Pharm Sei. — 1982. Vol.3, №3. — P. 97-98.
41. Kugiyama K., Ota Y., Sugiyama S. et al. // Am. J.Cardiol. — 2000.— Vol. 86. — P. 718-722.
42. Lulich K., Goldie R., Paterson J. // Gen. Pharmacol. — 1988. — Vol. 19. № 3. — P. 307-311.
43. Maigaard S., Forman A., Andersson K.-E. // Acta Physiol, Scand. — 1986, — Vol. 128, № 1. — P. 33-40.
44. Mizukawa H., Okabe E. // Brit. J. Pharmacol. — 1997. — Vol. 120, № 1.— P. 63-70.
45. Pande J., Guleria R. //Indian J. Chest Diseases and Alied Sei, — 1996, — Vol. 38, №3.
— P. 143-145.
46. Pang J-J., Xu X., Li H. et al. // Acta Pharmacol. Sin. — 2002. — Vol. 23, № 3. — P. 273-277.
47. Patterson R., Leake D. // FEBS Lett.
— 1998. — Vol .437, №3. — C. 317-321.
48. Samb A., TailleC., Almolki A. et al. // Amer. J. Physiol. — 2002. — Vol. 283, №3. — L. 596— L. 603.
49. Sjosward K., Josefsson M., Ahlner J., Schmekel B. // Clin. Physiol, and Funct. Imag.
— 2003. — Vol. 23, №2. — P.14-20.
50. Stiko A., Regnstrom J., Shah P. et al. //Arterioscl., Thromb. and Vase. Biol. — 1996.
— Vol.16, №2. — C. 194-200.
51. Tessier G., Lackner P., O’Grady S. et al. // Respir. Physiol. — 1991. — Vol. 84. — P. 105-114.
52. Wang H., Zeng S. J., Qiu P.-X. // Zhongguoyaolixuebao. — 1998. —Vol.19, №6.
— P. 523-526.
53. WrayS., Kupittayanant S., Shmygol A. et al. // Exp. Physiol. 2001. — Vol. 86, №2. — P. 239-246.
54. Xie L., Hacoda H„ Ito Y. // J. Physiol.
— 1992. — Vol. 449. — P. 619-630.
55. Zhu K., Baudhuin L., Hong G.et al. // J Biol Chem. — 2001. — Vol.276, № 44. — P. 41325-41335.
