CC BY
15
В ПОМОЩЬ ПРАКТИКУЮЩЕМУ ВРАЧУ
Пути совершенствования освоения лабораторной диагностики туляремии на курсах дополнительного профессионального образования
Сазанова Е.В., Осина Н.А., Горельникова Е.А., Попов Ю.А.
Федеральное казенное учреждение здравоохранения «Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб"» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 410005, г. Саратов, Российская Федерация
При подготовке специалистов различного профиля (бактериологов, генетиков, иммунологов, эпидемиологов), участвующих в проведении диагностических и экспериментальных исследований с материалом, подозрительным на зараженность или зараженным бактериями, относящимися к I-II группам патогенности, традиционно используют вирулентные штаммы Francisella tularensis. Однако основное направление государственной политики в области обеспечения биобезопасности РФ - исключение или максимальное снижение использования в технологических процессах патогенных микроорганизмов. Учитывая данный подход, приоритетной задачей является проведение научных исследований по замене вирулентных штаммов туляремийного микроба на вакцинные, аттенуированные или со сниженной вирулентностью.
Цель исследования - разработка критериев подбора штаммов F. tularensis в качестве учебных, принципа формирования и применения набора штаммов для освоения методов лабораторной диагностики туляремии.
Материал и методы. В качестве материалов использовали законодательные и подзаконные акты; нормативно-методические документы (методические указания, санитарные правила) и научные публикации в области лабораторной диагностики туляремии и обеспечения биобезопасности работ с патогенными биологическими агентами (ПБА); открытые научно-технические источники информации; программы дополнительного профессионального образования (профессиональной переподготовки и повышения квалификации) специалистов для работ с возбудителями особо опасных инфекций (ООИ) и повышения квалификации. Метод исследования:аналитический.
Результаты и обсуждение. Определены критерии подбора штаммов возбудителя туляремии для освоения методов лабораторной диагностики в рамках учебного модуля «Микробиология и лабораторный диагноз туляремии» и разработан дифференцированный подход к их применению с целью снижения вероятности лабораторного инфицирования обучающихся.
Заключение. Обоснована необходимость формирования учебного набора штаммов F. tularensis. Разработаны критерии отбора штаммов в качестве кандидатов в учебные - штаммы со сниженной вирулентностью, вакцинные и аттенуированные, которые позволят снизить вероятность лабораторного инфицирования слушателей курсов при освоении методов лабораторной диагностики туляремии.
Финансирование. Авторы заявляют об отсутствии финансовой поддержки при написании статьи.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта финансовых/нефинансовых интересов, связанных с написанием статьи.
Вклад авторов. Концепция и дизайн исследования - Сазанова Е.В., Попов Ю.А.; сбор и обработка материала - Сазанова Е.В.; написание текста - Сазанова Е.В., Осина Н.А.; редактирование - Горельникова Е.А.
Для цитирования: Сазанова Е.В., Осина Н.А., Горельникова Е.А., Попов Ю.А. Пути совершенствования освоения лабораторной диагностики туляремии на курсах дополнительного профессионального образования // Инфекционные болезни: новости, мнения, обучение. 2020. Т. 9, № 3. С. 133-138. DOI: https://doi.org/10.33029/2305-3496-2020-9-3-133-138 Статья поступила в редакцию 03.11.2019. Принята в печать 02.07.2020.
Ключевые слова:
Frаncisellа
tularensis,
биологическая
безопасность,
подготовка
специалистов,
учебные штаммы
Ways to improve the mastering of laboratory tularemia diagnostics at vocational training courses
Sazanova E.V., Osina N.A., Russian Research Anti-Plague Institute "Microbe", 410005,
Gorei'nikova E.A., Popov Yu.A. Saratov, Russian Federation
During the training courses for the specialists of diverse expertise (bacteriologists, geneticist, immunolo-gists, epidemiologists etc.) participating in diagnostic and experimental investigations using material suspected of contamination or contaminated with bacteria of the I-II groups of pathogenicity, virulent Franciseiia tuiarensis strains are conventionally utilized. However, the main direction of the national policy in the sphere of biological safety provision in the Russian Federation is the exclusion of or maximum decrease in the use of pathogenic microorganisms in technological processes. Taking into consideration the stated approach, the priority task was to conduct research on the replacement of virulent strains of tularemia microbe with vaccine ones, attenuated or with lower virulence.
The aim of the study - development of criteria for the selection of F. tuiarensis strains as academic, training ones, principle of building-up and application of the strain panel for mastering laboratory diagnostics of tularemia.
Material and methods. Legislative instruments and bylaws; normative-methodological documents (methodological regulations, sanitary rules) and scientific publications in the field of laboratory diagnostics of tularemia and biosafety provision for work with pathogenic biological agents (PBA); open access scientific-technical information sources; programs for vocational education (professional retraining and continuing education) of specialists to handle the agents of particularly dangerous infections (PDI) and capacity building served as the framework of the study. The method utilized is an analytical one.
Results and discussion. Criteria for the selection of tularemia agent strains for mastering methods of laboratory diagnostics as part of educational module "Microbiology and laboratory diagnosis of tularemia" were identified; differentiated approach to their application aimed at reducing the probability of laboratory-acquired infection of the trainees was established.
Conclusion. Substantiated is the necessity to define the teaching F. tuiarensis strains to be included into the panel. Developed are the criteria for the selection of the candidate strains - strains with lowered virulence, vaccine and attenuated strains, which allow for the decrease in the probability of laboratory infection of trainees while mastering methods of laboratory diagnostics of tularemia.
Keywords:
Francisella tuiarensis, biological safety, training of specialists, academic, training strains
Funding. The authors state the absence of any financial support for manuscript preparation.
Conflict of interest. The authors declare no conflict of financial/non-financial interests associated with preparation of the manuscript.
Contribution. Concept and design of the study is created - Sazanova E.V., Popov Yu.A.; collection and processing of the data -Sazanova E.V.; writing of the manuscript - Sazanova E.V., Osina N.A.; and editing of the paper - Gorel'nikova E.A.
For citation: Sazanova E.V., Osina N.A., Gorel'nikova E.A., Popov Yu.A. Ways to improve the mastering of laboratory tularemia diagnostics at vocational training courses. Infektsionnye bolezni: novosti, mneniya, obuchenie [Infectious Diseases: News, Opinions, Training]. 2020; 9 (3): 133-8. DOI: https://doi.org/10.33029/2305-3496-2020-9-3-133-138 (in Russian) Received 03.11.2019. Accepted 02.07.2020.
Основной целью дополнительного профессионального образования (ДПО) является формирование специалиста, владеющего ключевыми профессиональными компетенциями, позволяющими осуществлять лабораторную диагностику туляремии.
В результате обучения слушатели должны приобрести базовые знания, используемые при проведении лабораторных исследований на туляремию, умение идентифицировать выделенные культуры по морфологическим, культуральным, биохимическим, антигенным, молекулярно-генетическим свойствам и навыки постановки микробиологических тестов, методы работы с лабораторными животными. Однако в Указе Президента РФ от 11.03.2019 № 97 обозначена одна из задач о необходимости максимальной замены в технологических процессах патогенных микроорганизмов на безопасные [1].
В связи с вышеизложенным обучение слушателей курсов тематического усовершенствования методам безопасной работы с возбудителями особо опасных бактериальных
инфекций по программам ДПО в противочумных учреждениях Роспотребнадзора необходимо проводить, учитывая профессиональные требования к уровню подготовки и актуальные направления государственной политики.
Для реализации поставленной цели сотрудниками отдела образовательных программ и подготовки специалистов ФКУЗ РосНИПЧИ «Микроб» Роспотребнадзора ранее были созданы наборы авирулентных штаммов, используемые при освоении учебных модулей «Микробиология и лабораторная диагностика холеры» и «Микробиология и лабораторная диагностика чумы» [2]. Это позволило решить важную практическую задачу обеспечения биологической безопасности - снизить вероятность лабораторного инфицирования обучающихся, минимизировав применение вирулентных штаммов. Вместе с тем необходимо продолжить работу по методическому обеспечению учебного модуля «Микробиология и лабораторная диагностика туляремии», обязательного при подготовке специалистов по особо опасным инфекциям (ООИ).
Согласно национальной классификации микроорганизмов, действующей на территории РФ, возбудитель туляремии относят ко II группе патогенности (опасности) [3]. F. tularensis по вероятности использования в качестве биологического оружия включена в I группу [4, 5]. Кроме того, возбудитель туляремии внесен в Список микроорганизмов, токсинов, оборудования и технологий, подлежащих экспортному контролю [6].
Природные очаги этой инфекции расположены на территории различных стран, в том числе широко распространены в Российской Федерации; устойчивы территориально, но могут трансформироваться в результате хозяйственной деятельности человека. Характеризуются динамической эпизоотической активностью и наличием эпидемических проявлений [7].
Проведение лабораторной диагностики туляремии требует грамотных действий специалистов. Одно из условий, предъявляемое к ним, - прохождение специализированных курсов с освоением методов безопасной работы и последующее повышение профессиональных компетенций [3, 8].
Согласно международной классификации, вид F. tularensis представлен 4 подвидами - F. tularensis subsp. tularensis (nearctica), F. tularensis subsp. holarctica (palearctica), F. tularensis subsp. mediasiatica и F. tularensis subsp. novicida.
Штаммы разных подвидов туляремийного микроба имеют высокую гомологию антигенной структуры и нуклеотидной последовательности генома, но, несмотря на это, они отличаются по вирулентности и географическому распространению [9-11]. Основываясь на данных анализа гомологии геномов возбудителя туляремии различного происхождения, выявлены области RD (region of difference, область различий), которые в разной степени делетированы у подвидов возбудителя [12]. Исключением является область RD1, содержащая делеции у F. tularensis holarctica, mediasiatica, нуклеотидные замены у F. tularensis novicida и интактная у F. tularensis tularensis [12]. Специалистами ВОЗ предложено использовать анализ вариабельности RD1 для подвидовой дифференциации туляремийного микроба [13]. Опубликованы сообщения о выделении на территории России подвида mediasiatica, циркуляция которого ранее наблюдалась только в природных очагах Средней Азии [14]. Также имеются данные о выделении на территории Европы высоковирулентных штаммов F. tularensis subsp. tularensis, распространенных ранее исключительно только в Северной Америке [15]. Поэтому важно подобрать штаммы F. tularensis для изучения слушателями курсов биологических свойств всех подвидов.
Сотрудники ФКУЗ РосНИПЧИ «Микроб» Роспотребнад-зора проводят обучение с учетом современных требований, предъявляемых к профессиональной деятельности специалистов при лабораторной диагностике туляремии [16, 17]. В настоящее время в процессе освоения диагностических методов используют единственный безопасный штамм F. tularensis 15 НИИЭГ, относящийся к III группе патогенности, применяемый для вакцинации людей [3]. Вместе с тем данный штамм позволяет изучать биологические свойства только F. tularensis подвида holarctica и не дает возможности продемонстрировать весь спектр типичных биологических свойств иных подвидов, а также освоить комплекс базовых
методов индикации и идентификации [18]. Поэтому на практических занятиях используют также вирулентные штаммы II группы патогенности, в том числе F. tularensis 503/840, относящийся к подвиду holarctica, Ш50 которого для белых мышей при подкожном методе заражения составляет 5 КОЕ. Данный штамм позволяет эффективно освоить биологический метод исследования, который является обязательным в схеме диагностики, вызывая в организме биопробных лабораторных животных картину острого сепсиса со значительным накоплением бактерий в органах и тканях. При посеве тканей паренхиматозных органов на питательные среды отмечают стабильное выделение возбудителя. Однако при возникновении аварийных ситуаций штамм потенциально опасен в плане риска инфицирования обучающихся, что обусловливает необходимость его замены авирулент-ными или менее вирулентными.
Подбор штаммов в рамках программ (ДПО) определяет преподаватель с учетом действующих нормативно-методических документов по лабораторной диагностике туляремии и в соответствии с тематическим планом образовательного модуля «Микробиология и лабораторная диагностика туляремии», разработанного специалистами противочумных учреждений [19-23]. Отсутствуют методические документы, регламентирующие критерии выбора и применение штаммов возбудителя туляремии в целях подготовки специалистов. В открытых научно-технических источниках не обнаружено информации о штаммах туляремийного микроба, используемых в учебных целях.
Все вышеизложенное свидетельствует об актуальности разработки стандартизированного научно-обоснованного подхода к совершенствованию методической базы и обеспечению биологической безопасности подготовки бактериологов по программам ДПО путем формирования учебного набора штаммов F. tularensis.
Цель исследования - разработка критериев подбора штаммов F. tularensis в качестве учебных принципов формирования и применения набора штаммов для освоения методов лабораторной диагностики туляремии.
Материал и методы
Законодательные и подзаконные акты РФ, нормативные и методические документы, научные публикации по лабораторной диагностике туляремии и биобезопасности работ с ПБА; научно-технические источники; программы профессиональной переподготовки и повышения квалификации специалистов для работ с возбудителями ООИ. Метод исследования: аналитический.
Результаты и обсуждение
Ранее проведен ретроспективный анализ аварийных ситуаций при освоении слушателями курсов профессиональной переподготовки лабораторной диагностики холеры, бруцеллеза, сибирской язвы, туляремии и чумы. Установлено, что с 1972 по 2009 г. апостериорная вероятность возникновения аварий составила р=0,094 для 1 слушателя курсов; периодичность при работе с возбудителем туляремии -
I авария в 343 учебных часа или 0,08 аварии на протяжении одних курсов [24]. Полностью исключить аварийные ситуации и инфицирование при манипуляциях с патогенным биологическим материалом невозможно, тем не менее можно снизить их вероятность. Один из подходов - подбор штаммов Г. 1и1агепз!з со сниженной вирулентностью, вакцинных и аттенуированных.
Для практической реализации поставленной цели проанализированы учебные планы практических занятий в рамках образовательного модуля «Микробиология и лабораторная диагностика туляремии», нормативные и информационно-методические документы, регламентирующие методы лабораторного исследования на туляремию, научно-технические источники [19-23].
Установлено, что исследования материала, зараженного или подозрительного на зараженность возбудителем туляремии, проводят в специализированных лабораториях (территориальный, региональный и федеральный уровни) Роспотребнадзора, имеющих санитарно-эпидемиологическое заключение и лицензию на проведение работ с ПБА
II группы [19, 21, 25, 26].
Для лабораторий каждого уровня нормативно закреплен перечень проводимых ими исследований [19]. Медицинские организации территориального уровня, имеющие лицензию на работу с ПБА Ш-^ групп, проводят исследования сывороток крови, контроль состояния противотуляремий-ного иммунитета аллергологическим и иммунологическими методами [туляриновая проба, реакция агглютинации (РА), реакция объемной агломерации, реакция непрямой гемаг-глютинации (РНГА), иммуноферментный анализ (ИФА)]. Центры гигиены и эпидемиологии в субъектах РФ, в структуру которых входят лаборатории ООИ, имеющие лицензию на работу с ПБА II-IV групп, осуществляют диагностические исследования материала методами индикации [поли-меразной цепной реакции (ПЦР), метод флюоресцирующих антител (МФА), ИФА, РНГА и др.], постановку биологической пробы, выделение, накопление чистой культуры на питательных средах и идентификацию по сокращенной схеме.
Региональный уровень образуют подразделения противочумных учреждений Роспотребнадзора. Специалисты контролируют состояние иммунитета у вакцинированных; проводят исследование материала от больных (умерших) людей, анализ проб в ходе эпизоотологического обследования территории, окружающей среды. Диагностические исследования осуществляют с помощью методов, применяемых на территориальном уровне, дополняя следующими тестами: определение вирулентности для белых мышей и морских свинок, чувствительности к антибактериальным препаратам, типирование внутри вида. В лабораториях центров индикации, кроме перечисленного выше, осуществляют идентификацию по полной схеме [19].
Комплекс исследований на федеральном уровне включает подробное изучение молекулярно-генетических биохимических свойств выделенных штаммов возбудителя туляремии, а также генетическое типирование и секвениро-вание ДНК [19, 25]. В результате проведенной окончательной идентификации устанавливают подвидовую принадлежность и генотип выделенных штаммов Г. Ыагепз!з.
Исходя из этого обучающий процесс, учитывая современные схемы лабораторной диагностики туляремии и принципы организации исследований в лабораториях разного уровня, должен включать:
■ освоение бактериологического, биологического, мо-лекулярно-генетического и иммунологических методов лабораторной диагностики туляремии, применяемых для индикации и идентификации;
■ изучение видовых морфологических, культуральных, биохимических, антигенных свойств, генома возбудителя туляремии; биологических особенностей подвидов, биоваров, отдельных штаммов; алгоритма дифференциации подвидов, в том числе с использованием молекулярно-генетических технологий.
На основании предполагаемых направлений использования, перечней изучаемых биологических свойств, ключевых результатов подготовки специалистов и правил безопасной работы с туляремийным микробом были сформулированы критерии подбора штаммов в качестве учебных:
1) вирулентность для белых мышей (1-й50) при подкожном введении должна быть не менее 102 КОЕ [18]. За основу был взят количественный показатель «остаточная вирулентность», предъявляемый к вакцинным штаммам вследствие отсутствия четких критериев, дающих возможность разделить штаммы Г. Шагепз13 по вирулентности;
2) типичные видовые культурально-морфологические свойства определенных подвидов Г. Шагепз1з;
3) типичный набор генетических маркеров, специфичный для вида Г. 1и1агепз!з и его подвидов Г. Шагепз13 1и1агепз!з, Г. Шагепз13 Ьо1агШса Егу5/1), Г. Шагепз13 japonica, Г. 1и1агепз!з поУ1а<Са рс1р й и др.), для аттенуированных штаммов туляремийного микроба ^8, RDM и др.);
4) способность формировать патологоанатомические изменения (картина острого сепсиса) во внутренних органах лабораторных животных;
5) чувствительность к антибактериальным препаратам, регламентированным для экстренной профилактики туляремии.
Все природные штаммы характеризуют по степени пато-генности как более или менее патогенные для человека и животных. Наиболее безопасным для применения в учебном процессе является вакцинный штамм Г. 1и1агепз!з 15 НИИЭГ, 1_й50 которого при подкожном введении белым мышам -не менее 1-102 КОЕ. Высокую вирулентность проявляют штаммы Г. 1и1агепз!з подвида 1и1агепз!з, вызывая развитие инфекционного заболевания от заражения одной микробной клеткой. Меньшую вирулентность проявляют штаммы подвидов Ьо1агШса и тес<1ав1а^са, 1_й50 которых для кроликов более 103-106 КОЕ. Подвид Г. Шакт^в поУ1а<Са обладает сниженной вирулентностью для кроликов, 1_й50 более 106 КОЕ. Очевидно, что необходимость реализации учебного плана в полном объеме может обусловить включение в набор штаммов различной вирулентности и потребует рассмотрения вопроса об обеспечении условий для минимизации вероятности инфицирования обучающихся при манипуляциях с ними.
Сотрудниками ФКУЗ РосНИПЧИ «Микроб» Роспотребнад-зора разработан дифференцированный подход к применению набора учебных штаммов с позиции обеспечения биологической безопасности обучающихся.
Штаммы вакцинный и аттенуированные предполагается выдавать слушателям курсов для индивидуальной работы при изучении типичных свойств возбудителя туляремии, утвержденных методов индикации, сокращенной идентификации и внутривидовой дифференциации.
Штаммы F. tularensis подвида tularensis, F. tularensis подвида mediasiatica, F. tularensis подвида novicida будут использованы преподавателями для демонстрации тестов, определяющих подвидовую принадлежность: ферментации глицерина, цитруллин-уреидазной, фосфатазной, пеницил-линазной активности, выявления специфичных для подвидов генетических маркеров с помощью ПЦР.
Для освоения биологического метода слушателями курсов будет использован вакцинный штамм F. tularensis подвида holarctica 15 НИИЭГ. Воспроизведение выраженных патологоанатомических изменений (картина острого
сепсиса) во внутренних органах лабораторных животных будет проводить преподаватель с применением вирулентных штаммов F. tularensis подвида tularensis или Е tularensis подвида holarctica для демонстрации на практических занятиях.
Будет применен типичный набор генетических маркеров, специфичный для вида Е. tularensis и его подвидов Е. tularensis tularensis, Е tularensis holarctica Егу5/1), Е. tularensis japonica, Е. tularensis novicida рс1р й и др.), для аттенуи-рованных штаммов туляремийного микроба ^й18 RD19 и др.) для подготовки преподавателями проб, применяемых для обучения молекулярно-генетическим методам диагностики.
Таким образом, в работе впервые обозначены принципы формирования учебного набора штаммов, перечень критериев подбора штаммов Е. tularensis для реализации в полном объеме плана образовательного модуля «Микробиология и лабораторная диагностика туляремии», а также их дифференцированного применения с целью максимального исключения вирулентных штаммов из индивидуальной работы обучающихся, и, как следствие, снижения вероятности их лабораторного инфицирования.
СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ
ФКУЗ РосНИПЧИ «Микроб» Роспотребнадзора, Саратов, Российская Федерация:
Сазанова Елена Владимировна (Elena V. Sazanova) - кандидат биологических наук, научный сотрудник отдела образовательных программ и подготовки специалистов E-mail: rusrapi@microbe.ru https://orcid.org/ 0000-0001-9140-3910
Осина Наталия Александровна (Natalia A. Osina) - кандидат биологических наук, заведующая отделом микробиологии
E-mail: rusrapi@microbe.ru
https://orcid.org/0000-0003-1999-4726
Горельникова Елена Александровна (Elena A. Gorelnikova) - кандидат биологических наук, старший научный сотрудник отдела образовательных программ и подготовки специалистов E-mail: rusrapi@microbe.ru https://orcid.org/0000-0002-9247-8380
Попов Юрий Алексеевич (Yuri A. Popov) - доктор биологических наук, профессор, заведующий отделом образовательных программ и подготовки специалистов E-mail: rusrapi@microbe.ru https://orcid.org/0000-0001-7641-6334
ЛИТЕРАТУРА
1. Об основах государственной политики Российской Федерации в области обеспечения химической и биологической безопасности на период до 2025 года и дальнейшую перспективу: указ Президента РФ от 11.03. 2019 г. № 97. URL: https://www.garant.ru/products/ipo/prime/ doc/72092478/ (дата обращения: 17.03.2020).
2. Сазанова Е.В., Малюкова Т.А., Бойко А.В., Вахрушина Н.И., Попов Ю.А. Набор учебных штаммов для освоения лабораторной диагностики чумы // Инфекционные болезни: новости, мнения, обучение. 2017.№ 5 (22). C. 22-27.
3. Безопасность работ с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности): санитарные правила. СП 1.3.3118-13. // Бюллетень нормативных и методических документов Госсанэпиднадзора. 2013. № 3. С. 95-115.
4. Воробьев А.А., Боев Б.В., Бондаренко В.М., Гинцбург А.Л. Проблема биотерроризма в современных условиях // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2002. № 3. С. 3-12.
5. Inglesby T.V., Dennis D.T., Henderson D.A., Bartlett J.G., Ascher M.S., Eitzen E. et al. Plague as a biological weapon: medical and public health management // JAMA. 2000. Vol. 283, N 17. Р. 2281-2290.
6. Об утверждении Списка микроорганизмов, токсинов, оборудования и технологий, подлежащих экспортному контролю: указ Президента РФ от 20 августа 2007 г. № 1083 (с изм. от 14 ноября 2017 г.). URL: http://www.consultant.ru/document/cons_doc_LAW_70610/ (дата обращения 05.03.2020)
7. Кудрявцева Т.Ю., Попов В.П., Мокриевич А.Н., Пакскина Н.Д., Холин А.В., Мазепа А.В. и др. Эпидемическая активность природных очагов туляремии на территории Российской Федерации в 2018 г. и прогноз ситуации на 2019 г. // Проблемы особо опасных инфекций. 2018. № 1. С. 32-41.
8. Об образовании в Российской Федерации: федеральный закон от 29.12.2012 № 273-Ф3 (ред. от 01.03.2020). URL: http://www.consultant. ru/document/cons_doc_LAW_140174/ (дата обращения 05.03.2020)
9. Олсуфьев И.Г. Таксономия, микробиология и лабораторная диагностика возбудителя туляремии. Москва : Медицина, 1975. 192 с.
10. Sjostedt A. Virulence determinants and protective antigens of Francisella tularensis II // Curr. Opin. Microbiol. 2003. Vol. 6, N 1. P. 66-71.
11. Titball R.W., Sjostedt A. Francisella tularensis: an overview // ASM News. 2003. Vol. 69, N 11. P. 558-563.
12. Broekhuijsen M., Larsson P., Johansson A., Bystrom M., Eriksson U., Larsson E. et al. Genome-wide DNA microarray analysis of Francisella tu-larensis strains demonstrates extensive genetic conservation within the species but identifies regions that are unique to the highly virulent F. tula-rensis subsp. tularensis // J. Clin. Microbiol. 2003. Vol. 41, N 7. P. 29242931.
13. WHO Guidelines on Tularaemia. Geneva : WHO, 2007. 115 p. URL: https://www.who.int/csr/resources/publications/WH0_CDS_EPR_2007_ 7.pdf?ua=1 (дата обращения 05.03.2020)
14. Мокриевич А.Н., Кравченко Т.Б., Титарева Г.М., Бахтеева И.В., Вахрамеева Г.М., Горбатов А.А. и др. Методы изучения возбудителя туляремии : практическое пособие / под ред. И.А. Дятлова. Оболенск : ФБУН ГНЦ ПМБ, 2018. Режим доступа: по запросу на почту info@obolensk. org.
15. Gurycova D. First isolation of Francisella tularensis subsp. tularensis in Europe // Eur. J. Epidemiol. 1998. Vol. 14, N 8. P. 797-802.
16. Попов Ю.А., Малюкова Т.А., Тихомирова Л.А., Кутырев В.В. Система подготовки специалистов по биологической безопасности в Российской Федерации // Инфекционные болезни: новости, мнения, обучение. 2016. Т. 5, № 1. С. 11-18.
17. Растунцева Е.В. Тихомирова Л.А., Сазанова Е.В. Алгоритмы обучения специалистов на курсах профессиональной переподготовки и повышения квалификации в ФКУЗ РосНИПЧИ «Микроб» Роспотребнад-зора // Биозащита и биобезопасность. 2014. № 6. C. 10-16.
18. Основные требования к вакцинным штаммам туляремийного микроба: методические указания МУ 3.3.1.2161-07. Москва, 2007.
REFERENCES
1. On the fundamentals of the state policy of the Russian Federation In the field of chemical and biological safety for the period up to 2025 and beyond: decree of the President of the Russian Federation No. 9 of 11.03.2019. URL: https://www.garant.ru/products/ipo/prime/ doc/72092478/ (date of access March 17, 2020) (in Russian)
2. Sazanova E.V., Malyukova T.A., Boyko A.V., Vakhrushina N.I., Popov Yu.A. A kit of practice strains for mastering laboratory diagnostics of plague. Infektsionnye bolezni: novosti, mneniya, obuchenie [Infectious Diseases: News, Opinions, Training]. 2017; 5 (22): 22-7. (in Russian)
3. Safety of work with pathogenicity groups I-II microorganisms (hazards): sanitary rules. SP 1.3.3118-13. Byulleten' normativnykh i metodicheskikh dokumentov Gossanepidnadzora [Bulletin of Normative and Methodical Documents of Gossanepidnadzor]. 2013; (3): 95-115. (in Russian)
4. Vorob'ev A.A., Boev B.V., Bondarenko V.M., Gintsburg A.L. The problem of bioterrorism in modern conditions. Zhurnal mikrobiologii, epi-demiologii i immunobiologii [Journal of Microbiology, Epidemiology and Im-munobiology]. 2002; (3): 3-12. (in Russian)
5. Inglesby T.V., Dennis D.T., Henderson D.A., Bartlett J.G., Ascher M.S., Eitzen E., et al. Plague as a biological weapon: medical and public health management. JAMA. 2000; 283 (17): 2281-90.
6. On approval of the list of microorganisms, toxins, equipment and technologies subject to export control: decree Of the President of the Russian Federation of August 20, 2007 N 1083 (as amended on November 14, 2017). http://www.consultant.ru/document/cons_doc_LAW_70610/ (date of access March 3, 2020) (in Russian)
7. Kudryavtseva T.Yu., Popov V.P., Mokrievich A.N., Pakskina N.D., Kholin A.V., Mazepa A.V., et al. Epidemic activity of natural foci of tularemia on the territory of the Russian Federation in 2018 and the forecast of the situation for 2019. Problemy osobo opasnykh infektsiy [Problems of Particularly Dangerous Infections]. 2018: (1): 32-41. (in Russian)
8. On education in the Russian Federation: Federal law No. 273-FZ of 29.12.2012 (as amended on 01.03.2020). http://www.consultant.ru/ document/cons_doc_LAW_140174/ (date of access March 3, 2020) (in Russian)
9. Olsuf'ev I.G. Taxonomy, microbiology and laboratory diagnostics of the tularemia pathogen. Moscow: Meditsina, 1975: 192 p. (in Russian)
10. Sjostedt A. Virulence determinants and protective antigens of Francisella tularensis II. Curr Opin Microbiol. 2003; 6 (1): 66-71.
11. Titball R.W., Sjostedt A. Francisella tularensis: an overview. ASM News. 2003; 69 (11): 558-63.
12. Broekhuijsen M., Larsson P., Johansson A., Bystrom M., Eriksson U., Larsson E., et al. Genome-wide DNA microarray analysis of Francisella tularensis strains demonstrates extensive genetic conservation within the species but identifies regions that are unique to the highly virulent F. tularensis subsp. tularensis. J Clin Microbiol. 2003; 41 (7): 2924-31.
19. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики туляремии для лабораторий территориального, регионального и федерального уровней: методические указания МУК 4.2.2939-11. Москва, 2011.
20. Эпидемический надзор за туляремией: методические указания МУ 3.1.2007-05. Москва, 2005.
21. Профилактикатуляремии: санитарные правила. СП 3.1.7.2642-10. Москва, 2010.
22. Определение чувствительности возбудителей опасных бактериальных инфекций (чума, сибирская язва, холера, туляремия, бруцеллез, сап, мелиоидоз) к антибактериальным препаратам: методические указания МУК 4.2.2495-09. Москва, 2009.
23. Контроль диагностических питательных сред по биологическим показателям для возбудителей чумы, холеры, сибирской язвы, туляремии, бруцеллеза, легионеллеза: методические указания МУ 3.3.2.2124-06. Москва, 2006.
24. Сазанова Е.В., Бойко А.В., Малюкова Т.А., Лоцманова Е.Ю. Пути снижения вероятности возникновения аварийных ситуаций при подготовке специалистов для работы с возбудителями 1-11 групп патоген-ности // Биозащита и биобезопасность. 2012. № 1. С. 16-20.
25. О совершенствовании системы мониторинга, лабораторной диагностики инфекционных и паразитарных болезней и индикации ПБА в Российской Федерации: приказ Роспотребнадзора от 01.12.2017 № 1116 // Бактериология. 2017. Т. 2, № 4. С. 66-71.
26. Лабораторная диагностика опасных инфекционных болезней : практическое руководство / под ред. Г.Г. Онищенко, В.В. Кутырева. Москва : Шико, 2013. 555 с.
13. WHO Guidelines on Tularaemia. Geneva: WHO, 2007: 115 p. URL: https://www.who.lnt/csr/resources/publlcatlons/WH0_CDS_EPR_2007_ 7.pdf?ua=1 (date of access March 3, 2020)
14. Mokrievich A.N., Kravchenko T.B., Tltareva G.M., Bakhteeva I.V., Vakhrameeva G.M., Gorbatov A.A., et al. Methods for studying the causative agent of tularemia: a practical guide. Edited by Academician of the Russian Academy of Sciences I.A. Dyatlov. Obolensk: FBUN GNTs PMB, 2018. Access mode: on request by mail info@obolensk.org (in Russian)
15. Gurycova D. First isolation of Francisella tularensis subsp. tularensis in Europe. Eur J Epidemiol. 1998; 14 (8): 797-802.
16. Popov Yu.A., Malyukova T.A., Tikhomirova L.A., Kutyrev V.V. System of training of specialists in biological safety in the Russian Federation. Infektsionnye bolezni: novosti, mneniya, obuchenie [Infectious Diseases: News, Opinions, Training]. 2016; (1): 11-8. (in Russian)
17. Rastuntseva E.V., Tikhomirova L.A., Sazanova E.V. Algorithms for training specialists in professional retraining and advanced training courses in the Federal State Educational Institution Rosnipchi "Microb" of Rospotrebnadzo. Biozashchita i biobezopasnost' [Biosecurity and Bio-safety]. 2014; (6): 10-6. (in Russian)
18. Basic requirements for vaccine strains of tularemia microbe: methodical instructions MU 3.3.1.2161-07. Moscow, 2007. (in Russian)
19. Procedure for organizing and conducting laboratory diagnostics of tularemia for laboratories at the territorial, regional and Federal levels: methodical instructions MUK 4.2.2939-11. Moscow, 2011. (in Russian)
20. Epidemic surveillance of tularemia: methodical instructions MU 3.1.2007-05. Moscow, 2005. (in Russian)
21. Prevention of tularemia: sanitary rules. SP 3.1.7.2642-10. Moscow, 2010. (in Russian)
22. Determination of the sensitivity of pathogens of dangerous bacterial infections (plague, anthrax, cholera, tularemia, brucellosis, glanders, melioidosis) to antibacterial drugs: methodical instructions MUK 4.2.249509. Moscow, 2009. (in Russian)
23. Control of diagnostic nutrient media by biological indicators for pathogens of plague, cholera, anthrax, tularemia, brucellosis, legionellosis: methodical instructions MU 3.3.2.2124-06. Moscow, 2006. (in Russian)
24. Sazanova E.V., Bojko A.V., Malyukova T.A., Locmanova E.Yu. Ways to reduce the probability of accidents when training specialists to work with pathogens of groups I-II pathogenicity. Biozashchita i biobezopasnost' [Biosecurity and Biosafety]. 2012; (1): 16-20. (in Russian)
25. On improving the monitoring system, laboratory diagnostics of infectious and parasitic diseases and indication of PBA in the Russian Federation: Rospotrebnadzor order No. 1116 dated 01.12.2017. Bakteriologiya [Bacteriology]. 2017; 2 (4): 66-71. (in Russian)
26. Laboratory diagnostics of dangerous infectious diseases. A practical guide / edited by G. G. Onishchenko, V. V. Kutyreva. Edited by G.G. Onishchenko, V.V. Kutyrev. Moscow: Shiko, 2013: 555 p. (in Russian)
