CC BY
27
2005 апрель РЕМШииМ
Е.Б.ЖИБУРТ, проф., Центр крови Минздравсоцразвития РФ
Пути повышения качества отечественных
ПРЕПАРАТОВ КРОВИ
Ключевое требование к лечебному применению препаратов, приготовленных из донорской крови, — вирусная безопасность. Несмотря на впечатляющие достижения в области отбора и обследования доноров крови, повышение качества диагностических тест-систем, сохраняется риск заготовки крови от лиц с отсутствием клинико-лабораторных признаков гемо-трансмиссивных инфекций, в серонегативном периоде [1]. Для получения серии лечебных доз препаратов крови необходимой стадией является пу-лирование нескольких сотен или тысяч образцов донорской крови, и чем больше размер пула, тем больше повышается риск инфекционной контаминации конечного продукта.
За рубежом внедрены в практику и интенсивно развиваются технологии инактивации вирусов в плазме и продуктах ее переработки: метод «растворитель/детергент», фотодинамическая и фотохимическая инактивация в плазме, концентратах тромбоцитов и эритроцитов.
Метод «растворитель/детергент» (Solvent/Detergent, SD) лицензирован для обработки концентратов факторов свертывания в США в 1985 г. Суть метода заключается в инкубации пулов плазмы с органическим растворителем три^-бутил^ос-фат (TNBP) и детергентом Тритон X-100. При SD-обработке разрывается оболочка вирусов, содержащая липиды, и инфекционность вирусов (ВИЧ, ВГВ, ВГС и др.) утрачивается. Безопасность таких продуктов обеспечивается, с одной стороны, за счет элиминации покрытых оболочкой вирусов, а с другой — за счет сохранения в пуле нейтрализующих антител к вирусу гепатита А и парвовирусу В19 — двум безоболочечным гемотрансмис-сивным вирусам. В течение 13 лет использовано более 35 млн. доз концентратов факторов свертывания и иммуноглобулинов, приготовленных с использованием SD-технологии. Случаев передачи покрытых оболочкой вирусов и токсических реакций не зарегистрировано. Дополнительные гарантии
чистоты продукта обеспечиваются четкой связью в производственном процессе этапов экстракции, хроматографии и фильтрации.
Для каждой технологии получения препаратов крови предусмотрена процедура подтверждения эффективности инактивации вируса методом моделирования контаминации сырья различными вирусами [12].
Например, новая технология производства иммуноглобулина для внутривенного введения на основе хроматографии и использования каприлата для инактивации оболо-чечных вирусов (Bayer Healthcare, США) валидируется с использованием шести вирусов (табл. 2). Внедрение в производство высоко-очищенного концентрата фактора IX в Bio Products Laboratory (Великобритания) предполагает валиди-рованный этап SD-обработки про-тромбинового комплекса (табл. 3). В России валидация вирус-инактивации препаратов крови методом моделирования вирусной контаминации исходного сырья еще не внедрена. Существующие нормативные документы (Отраслевой стандарт
таблица 1| Основные препараты плазмы крови
Препарат Показание
Альбумин 5% Восстановление объема циркулирующей плазмы
Альбумин 20% Гипоальбуминемия, отеки
Протеин Восстановление объема циркулирующей плазмы
Фактор VIII Гемофилия А, болезнь Виллебранда
Протромбиновый Гемофилия В, кровотечение при передозировке
комплекс кумаринов и болезнях печени
Фактор IX Гемофилия В
Фактор XI Врожденный дефицит
Фактор XIII Врожденный дефицит
Фибриноген Врожденный дефицит, ДВС при низком уровне фибриногена
Протеин С Врожденный дефицит
Антитромбин III Врожденный дефицит
Нормальный Первичный и вторичный дефицит антител; некоторые
иммуноглобулин аутоиммунные/воспалительные заболевания
Гипериммунный иммуноглобулин Пассивная профилактика
С1 ингибитор Наследственный ангионевротический отек
Альфа1- антитрипсин Врожденный дефицит
Холинэстераза Врожденный дефицит
Фибринолизин Растворение внутрисосудистых сгустков
Гаптоглобин Поддерживающая терапия при вирусном гепатите и пернициозной анемии
КОНЪЮНКТУРА И ИССЛЕДОВАНИЯ
43
РШШ1ШМ апрель 2005
таблица 2| Характеристики вирусов, использующихся для валидации
вирус-инактивации иммуноглобулина для внутривенного введения [13]
Характеристика ВИЧ BVDV PRV Рео ВГА PPV
Модель вируса ВИЧ-1, ВИЧ-2 ВГС ЦМВ, ВЭБ, HSV, ВГВ Безоболочечные вирусы ВГА Парвовирус В19
Штамм (III B) Кентукки-23 PRV dL tk Abney HM175 18f NADL-2
Нуклеиновая кислота РНК РНК ДНК РНК РНК ДНК
Оболочка Есть Есть Есть Нет Нет Нет
Размер(нм) 80-130 40-60 120-220 60-80 27-32 6 2 - 8 1
Устойчивость к физико-химическим агентам Низкая Средняя Средняя Высокая Высокая Очень высокая
СОКРАЩЕНИЯ: BVDV - bovine viral diarrhea virus, вирус бычьей вирусной диареи; PRV - pseudorabies virus, вирус псевдобешенства; Рео - реовирус; ВГА - вирус гепатита А; PPV - porcine parvovirus, свиной парвовирус; HSV - herpes simplex virus, вирус простого герпеса.
ОСТ 91500.05.001.00 «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения», утвержденный приказом Минздрава России от 1 ноября 2001 г. №388) предусматривают включение в Перечень разделов фармакопейных статей и фармакопейных статей на лекарственные средства конкретных предпри-
ятий-производителей лекарственных средств по разделу «XV. Препараты крови человека» пункта «Испытание на отсутствие антигенов (антител) вирусов гепатита, иммунодефицита человека, других возможных контаминантов крови человека». Очевидно, что такое испытание должно проводиться в отно-
шении сырья, а не готового препарата. Традиционно серологические маркеры гемотрансмиссивных инфекций исследуются методом им-муноферментного анализа в сыворотке крови доноров. Для других целей соответствующие тест-системы не предназначены. Поиск маркеров иммунного ответа организма в
44
ПУТИ ПОВЫШЕНИЯ КАЧЕСТВА ОТЕЧЕСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ КРОВИ
таблица з| Инактивация модельных вирусов при обработке
«растворитель/детергент» промежуточного продукта
получения концентрата фактора IX [13]
Вирус Инактивация вирусов (log) * в различные моменты обработки
2 мин. 10 мин. 30 мин. 1 ч.
Синдбис 0,8 2,0 4,0 5,4
SFV 0,5 1,5 3,0 4,1
HSV-1 2,8 5,6 > 5,6 НО
VSV НО 3,2 4,1 > 5,0
ВИЧ-1 5,3 5,8 6,3 НО
СОКРАЩЕНИЯ: SFV - вирус Semliki Forest; HSV-1 - вирус простого герпеса, тип 1; VSV - вирус везикулярного стоматита; НО - не определен. * Инкубация в отсутствие обработки «растворитель/детергент» завершилась инактивацией менее 0,4 log после 1 ч.
2005 апрель РЕМШииМ
готовой лекарственной форме также не может принести значимой информации.
Во-первых, препарат крови - лекарственное средство, содержащее химически модифицированные нативные белки и стабилизаторы. В процессе производства белки плазмы подвергаются обработке пептидазами, плазмином, кислотами, пропиолактоном и т.д. [11]. Во-вторых, специфические диагностику-мы для серологических маркеров инфекций разработаны именно для крови (плазмы, сыворотки) с учетом, в частности, ее физико-химических свойств (вязкости, рН и т.д.). Для практики иммуноферментного анализа принципиально важно то, что результат скрининга маркеров гемотрансмиссивных инфекций не является окончательным и нуждается в обязательном подтверждении.
В отношении крови как диагностического объекта разработана система подтверждающих методов, система верификации результатов скрининга, позволяющая определить чувствительность и специфичность диагностикумов.
В отношении ВИЧ-инфекции специальными диагностикумами проводится подтверждение результатов и арбитраж первичных исследований сывороток крови, а для постановки окончательного лабораторного диагноза и подтверждения наличия антител к вирусу иммунодефицита человека применяется метод иммунного блота [5].
Для проведения анализа по подтверждению наличия HBsAg и анти-ВГС необходимо использовать кон-фирматорные тест-системы. Постановка окончательного лабораторного диагноза без подтверждения в одном из конфирматорных тестов запрещается [6].
Использование предназначенных для крови тест-систем в отношении другого объекта бессмысленно, т. к. неизбежно приведет к ложноположительным или ложноотрицательным результатам, верифицировать которые невозможно. Тем не менее посерийный контроль ка-
чества препаратов крови предписывается проводить с обязательным тестированием препаратов крови на отсутствие антител к ВИЧ, вирусу гепатита С, поверхностного антигена вируса гепатита В [3]. Логичным развитием неверно заданной идеи поиска серологических маркеров в готовых препаратах крови становится необходимость валидации тест-систем (вовсе не предназначенных для этой задачи). При этом констатируется необходимость посерийной валидации наборов для каждого вида лекарственных средств [2].
Некорректность вышеуказанных регламентированных исследований обусловливает их ничтожность, ведет к напрасным трудозатратам, материальным издержкам и дискредитирует профессионализм специалистов [10].
Сохранение надуманной процедуры подменяет внедрение современных методов обеспечения инфекционной безопасности препаратов крови.
Реализация решений органов государственной власти России о строительстве современных производств фракционирования плазмы [4, 8] требует от специалистов совершенствования системы обеспечения качества препаратов крови с тем, чтобы продукция российских пред-
приятий отвечала мировым стандартам безопасности и эффективности.
Таким образом, для производителей препаратов крови в России актуальны следующие задачи:
1) отмена требования обязательного тестирования препаратов крови на отсутствие антител к ВИЧ и вирусу гепатита С, поверхностного антигена вируса гепатита В при контроле качества препаратов крови -в силу биологической нецелесообразности этой процедуры, отсутствующей в мировой практике;
2) внедрение в практику переработки плазмы методов вирус-инактивации;
3) создание специального центра по оценке эффективности применяемых производителями препаратов крови методов инактивации вирусов;
4) внедрение методов генотестиро-вания ВИЧ, вирусов гепатитов В и С для контроля качества пулов донорских сывороток, использующихся для производства препаратов [9].
