CC BY
52
УДК 57.083.3
ПУТИ ПОВЫШЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ИММУНОДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ
Людмила Викторовна СЕРДЮК1, Светлана Ивановна ЛЕЩУК1, София Марковна ПОПКОВА1, Галина Валерьевна ЮРИНОВА2, Елена Борисовна РАКОВА1
1 ФГБУ Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека СО РАМН 664025, г. Иркутск, ул. Тимирязева, 16
2 ФГБОУ ВПО Иркутский государственный университет Минобрнауки России 664003, г. Иркутск, ул. Карла Маркса, 1
Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) остается по-прежнему в арсенале диагностических тестов исследователей, поскольку как в медицинской, так и в ветеринарной практике зарекомендовала себя с хорошей стороны за счет сочетаемости высокой специфичности и экономичности. Однако имеющиеся на вооружении лабораторий диагностикумы, к сожалению, отличаются низкой чувствительностью и небольшим сроком хранения. В данной работе предлагаются и рассматриваются некоторые методы совершенствования имму-нодиагностических систем для РНГА по двум основным направлениям: использование конъюгирующего компонента, усиливающего адсорбционные свойства носителя (эритроцита) и способствующего увеличению срока хранения, а также подбор высокоактивного антигена для сенсибилизации эритроцитов, повышающего чувствительность диагностикума. В работе анализируются результаты испытания диагностикумов с водорастворимым полимером поли-1-винилимидазолом, используемым в качестве конъюгата, в сравнении с традиционным конъюгатом хлористым хромом, производится оценка антигенной активности разных фракций микробных клеток при иммунизации животных и в составе диагностикумов, обосновываются преимущества применения новых компонентов диагностикумов. Установлено, что применяемая технология способствует улучшению качественных характеристик эритроцитарного диагностикума: специфичности, чувствительности, срока хранения, воспроизводимости результатов.
Ключевые слова: эритроцитарный иммунодиагностикум, антиген, клеточные фракции, синтетический полимер, антитело.
Современная серодиагностика бактериальных инфекций опирается на модернизацию классических методов анализа и разработку новых. Следует отметить, что в научной литературе имеется достаточное количество работ, посвященных сравнительной оценке качеств различных серологических тестов, а также перспектив их применения [5, 7, 13]. При этом указывается, что совпадения результатов, к примеру, имму-ноферментного метода с традиционными серологическими тестами (реакция связывания комплемента; реакция непрямой гемагглютинации эритроцитов - РНГА), при выявлении антител к различным патогенам могут колебаться от 71 до 93 % [6]. Таким образом, совершенствуя качественные характеристики тест-систем для РНГА,
можно повысить чувствительность реакции до уровня чувствительности иммуноферментного анализа [13]. Специфичность РНГА всегда считалась весьма высокой, к достоинствам метода можно отнести его практичность и универсальность [4, 5].
Совершенствование классической РНГА ведется по нескольким направлениям: получение функционально активных антигенных препаратов; использование в дизайне тест-систем полифункциональных конъюгирующих компонентов; модификация условий постановки реакции; разработка способов повышения специфической активности и срока хранения тест-систем.
Сердюк Л.В. - к.б.н., научный сотрудник лаборатории микроэкологии, e-mail: radugarose@yandex.ru Лещук С.И. - д.б.н., ведущий научный сотрудник лаборатории микроэкологии, e-mail: leschuk.swet@yandex.ru
Попкова С.М. - д.б.н., руководитель лаборатории микроэкологии, e-mail: smpopkova@gmail.com Юринова Г.В. - к.б.н., доцент кафедры физико-химической биологии, e-mail: yurinova@yandex.ru Ракова Е.Б. - к.б.н., научный сотрудник лаборатории микроэкологии, e-mail: lenova_@mail.ru
В ряду данных направлений важным фактором, определяющим эффективность серологического теста, по-прежнему остается качество используемого антигенного препарата, обусловливающего чувствительность и специфичность как РНГА, так и любого другого метода в серологической диагностике [4]. Не менее существенной нам представляется задача усиления адсорбционных свойств носителя (эритроцита), способствующих повышению чувствительности иммунодиагностикума [1].
В связи с вышесказанным целью исследований явилось совершенствование технологии изготовления бактериальных иммунодиагнос-тикумов с помощью синтетических конъюгиру-ющих компонентов и функционально активных белковых (антигенных) субстанций.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
В качестве антигенов в работе использовались клеточные фракции бифидобактерий, культивированных из коммерческого штамма Bifidobacterium bifidum № 1 производства «Ла-нафарм» (г. Москва). Фракцию клеточных стенок и цитоплазматическую фракцию получали путем двукратного разрушения клеток на ультразвуковом дезинтеграторе (UD-20, Польша) в течение 2 мин при 4 °С (непрерывная волна рабочей частоты - 22 кГц). Дезинтегрированную микробную массу суспендировали в 100 мл фосфатного буфера (рН 7,2) и центрифугировали в течение 10 мин при 2000 об/мин (центрифуга К 70D, ГДР) при 4 °С для осаждения неразрушенных клеток бифидобактерий. Супернатант повторно центрифугировали в течение 10 мин при 8000 об/мин на лабораторной медицинской центрифуге ОПН-8 (Россия). Полученный осадок представлял собой фракцию клеточных стенок, а надосадочная жидкость - цитоплазматическую фракцию. Таким образом, были получены две клеточные фракции бифидобактерий - фракция клеточных стенок (ФКС) и цитоплазматическая фракция (ЦПФ) [19].
Изучение белкового спектра и аминокислотного состава клеточных фракций бифидобакте-рий проводилось с помощью электрофореза в полиакриламидном геле и на аминокислотном анализаторе.
В качестве второго антигена была использована фракция клеточных стенок нетоксигенных коринебактерий дифтерии (НТКД) (белок с молекулярной массой 64 кДа), полученная методом дезинтеграции и любезно предоставленная доктором Е.А. Шмелевой (г. Москва, НИИ экспериментальной медицины) [12].
При конструировании тест-систем применялись конъюгирующие компоненты: хлорид хрома (CrCl3 х 6H2O, 0,3%), традиционно используемый при изготовлениии эритроцитар-ных диагностикумов, и синтетический полимер поли-1-винилимидазол (ПВИ) в концентрации 0,01 мкг/мл. Последний был синтезирован и предоставлен для испытания В.В. Анненковым в рамках совместных исследований конъюги-рующих и адъювантных свойств синтетических водорастворимых полимеров (г. Иркутск, Лимнологический институт РАН) [1]. В состав оригинальных диагностикумов входили стандартизованные эритроциты барана, формалини-зированные по методу R. Weinbach [19].
При приготовлении эритроцитарных диа-гностикумов формалинизированные эритроциты барана конъюгировали полимером ПВИ или CrCl3 в течение 2 ч при комнатной температуре (шутель ИФКО-1, Россия), после чего сенсибилизировали антигенами (дезинтегрированные клетки бифидобактерий и нетоксигенных ко-ринебактерий дифтерии в концентрациях, соответствующих стандарту мутности не менее 10 ед.) при 56 °С (аппарат АИС, Россия) в течение 30 мин, отмывали физиологическим раствором, содержащим 1 % твина-80, на центрифуге 70D (ГДР) при 1500-2000 об/мин в течение 10 мин. Затем готовили 0,8 % взвесь сенсибилизированных эритроцитов в физиологическом растворе, содержащем 1 % твина-80 с добавлением консерванта (0,1% азид натрия), которая и являлась готовым диагностикумом [9], хранившемся в условиях бытового холодильника при температуре 4-6 °С. Всего изготовлено 15 серий тест-систем.
Контролем специфичности и чувствительности диагностикумов служили гипериммунные сыворотки крови животных, полученные в результате иммунизации антигенами Bifidobacterium bifidum № 1 и бактериальной вакциной «Кодивак». В эксперименте использовали 60 мышей. Схема иммунизации - 4-кратная с интервалом 7 дней и ревакцинацией через месяц. Забор крови производили через 7 дней после последней инъекции. Исследования на животных выполняли в соответствии c «Правилами проведения работ c использованием экспериментальных животных» (Приложение к Приказу Министерства здравоохранения СССР № 755 от 12.08.1977 г.). Животных содержали в соответствии c правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей. По окончании эксперимента животных умерщвляли методом
Таблица 1
Антигенная активность клеточных фракций бифидобактерий
Титры антител
1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64
Пулы сывороток от мышей, иммунизированных ФКС ++
Пулы сывороток от мышей, иммунизированных ЦПФ ++++ ++++ +++ ++ + - -
декапитации, соблюдая «Правила проведения работ c использованием экспериментальных животных» (Страсбург, 1986).
Содержание гуморальных антибактериальных антител в сыворотках крови определяли методом РНГА с помощью полученных имму-нодиагностических препаратов на основе антигенов клеточных стенок нетоксигенных корине-бактерий дифтерии [12] и фракций клеток бифи-добактерий. Сыворотки крови для исследования взяты от пациентов гастроэнтерологического отделения Научного центра проблем здоровья семьи и репродукции человека СО РАМН, на что было получено информированное согласие в соответствии с Хельсинкской декларацией Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека» с поправками 2000 г. и с «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утвержденными Приказом Минздрава РФ № 266 от 19.06.2003 г.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Антигены бактерий представляют собой мультимолекулярные сложные смеси, способные вызывать образование антител разной специфичности, в связи с чем проводились исследования функциональной активности клеточных фракций бифидобактерий. Клеточную стенку штамма Bifidobacterium bifidum составляет обширная группа гетерогенных белков, которые, в свою очередь, представлены тридцатью отдельными субъединицами c молекулярной массой от 44,2 до 125 кДа. В структурообразовании белков клеточных стенок большая часть приходится на неполярные гидрофобные (44 мол.%) и заряженные аминокислоты (34 мол.%). Значительное содержание неполярных аминокислот (44 %) в белках ФКС свидетельствует в пользу их участия в формировании адгезинов. В белковом спектре ЦПФ белковые субъединицы с вы-
сокими и средними молекулярными массами, характерными для белков ФКС, отсутствовали [13].
Для оценки антигенности полученных клеточных фракций проводили иммунизацию лабораторных мышей, одна часть животных иммунизировалась ЦПФ бифидобактерий, другая - ФКС. Функциональная активность данных фракций оценивалась по уровню специфических антител в образцах сывороток крови, полученных от вакцинированных животных [14, 18]. Кровь мышей по окончании опытов собирали от каждой группы в одну пробирку (в виде пула) и анализировали на наличие антител к вводимым антигенам методом РНГА при помощи оригинальной тест-системы на основе ФКС. Данные эксперимента представлены в табл. 1.
Эксперимент показал, что ФКС бифидобак-терий обладает большей антигенной активностью по сравнению с ЦПФ, что, скорее всего, обусловлено особенностями ее белкового и аминокислотного состава. Таким образом, ФКС би-фидобактерий наиболее перспективна в качестве антигена как для получения гипериммунных контрольных сывороток, так и при конструировании диагностических систем.
Следующим важнейшим моментом в технологии изготовления эритроцитарных диагности-кумов является подбор конъюгирующего (связывающего) компонента между эритроцитом и белком (антигеном). Вещества, наиболее часто используемые для связывания иммуноактивных частиц с поверхностью эритроцита (глутаровый альдегид, гидрохинон, хлорид хрома), не обеспечивают достаточной воспроизводимости результатов и стабильности тест-систем при хранении. Довольно часто наблюдаются явления спонтанной агглютинации эритроцитов. Конъюгация с применением подобных низкомолекулярных веществ основана на образовании кова-лентных связей между сенсибилизируемым белком и поверхностью эритроцита. При хранении таких эритроцитарных диагностикумов происходит постепенное конформирование макромо-лекулярных цепей белка, что и обусловливает их нестабильность, отражающуюся на воспроизводимости РНГА [10].
Напротив, при конъюгации эритроцита синтетическим полимером с последующей сенсибилизацией белковыми составляющими клеточных фракций между синтетическим полимером и белком формируются ионно-водородные связи. Многоточечная система ионных и водородных контактов молекул белка и синтетического полимера обеспечивает устойчивость системы. При данных химических взаимодействиях об-
Рис. Зависимость диагностического титра антибактериальных антител от связующего компонента в тест-системах (СгС13 и ПВИ); 1 — диагностикум на основе фракции клеточных стенок по определению антител к бифидо-бактериям, 2 — диагностикум по определению антител к коринебактериям дифтерии
разуется комплекс, подобный интерполимерному, в котором синтетическая часть не изменяет структуру белковой молекулы [11]. При испытании новых конъюгирующих компонентов нами также учитывались концентрация полимера и объемные соотношения взвеси эритроцитов, антигена и раствора полимера.
Сравнительный анализ результатов испытания сконструированных диагностикумов на основе антигенов ФКС бифидобактерий и кори-небактерий дифтерии с разными конъюгирую-щими компонентами (см. рисунок) показал, что с помощью СгС13 возможна эффективная связь эритроцитов с белками, но при этом отмечалась более низкая чувствительность и нестабильность диагностикумов при хранении (не более 3-5 месяцев). Использование синтетического полимера в качестве конъюгирующего компонента позволило повысить их чувствительность, стабильность и продлило срок хранения готовых тест-систем до 3 лет и более [1-3, 8]. В данных опытах было показано, что чувствительность тест-систем, изготовленных с помощью синтетических полимеров, в 2 раза и более превышает чувствительность диагностических систем на основе хлорида хрома.
Для сравнения чувствительности диагности-кумов, приготовленных с эритроцитами, сенси-билизироваными антигенами разных фракций микробных клеток бифидобактерий, нами изготовлены и испытаны 3 варианта тест-систем. В качестве конъюгата использовался ПВИ, а антигенными составляющими были фракция клеточных стенок, цитоплазматическая фракция и целые клетки бифидобактерий. Исследовались сыворотки крови людей, содержащие антитела к бифидобактериям.
Таблица 2
Сравнительная характеристика диагностикумов на основе фракций (ФКС и ЦПФ) и целых клеток бифидобактерий
№ исследуемой сыворотки Титры антибактериальных антител при использовании антигенных диагностикумов
на основе ФКС на основе ЦПФ на основе целых клеток бифидобак-терий
1 1:8 1 2 1:2
2 1:16 1 2 1:4
3 1:16 1 2 1:4
4 1:16 1 2 1:4
5 1:32 1 4 1:16
6 1:64 1:16 1:2
7 1:32 1 8 1:16
8 1:16 1 8 1:16
9 1:16 1 2 1:2
10 1:16 1 4 1:4
11 1:16 1 2 1:4
12 1:16 1 4 1:4
13 1:32 1 4 1:2
14 1:64 1 2 1:16
15 1:64 1 2 1:16
М ± т (1о§2) 4,46 ± 0,44* 1,73 ± 0,14 2,40 ± 0,22
Примечание. М- среднее арифметическое; т - ошибка среднего; * - титра исследуемых сывороток составил 6,8 ± 0,7; отличие от величин во втором и третьем столбцах статистически значимо по критерию Стъюдента (Р < 0,05).
Полученные результаты (табл. 2) свидетельствовали о том, что эритроцитарный иммуно-диагностикум на основе ФКС бифидобактерий определял антитела в средних и высоких титрах (1:16 - 1:64) в 93 % сывороток, эритроцитар-ный иммунодиагностикум на основе ЦПФ — в 6,6 % сывороток (только средние титры антител 1:16). Третий вариант диагностикума (на основе целых клеток бифидобактерий) выявлял антитела в таких же титрах в 33,3 % сывороток. Средний титр антител к ФКС бифидобактерий был значимо выше, чем аналогичный показатель при использовании ЦПФ или целых клеток бифидобактерий.
Следовательно, использование антигенов клеточной стенки бифидобактерий для сенсибилизации эритроцитов при конструировании иммунодиагностикумов по данной технологии значительно усиливает их эффективность. Это обстоятельство можно объяснить тем, что в результате процесса дезинтеграции клеток
«обнажаются» антигенные детерминанты, локализованные в более глубоких слоях клеточных стенок бактерий, что значительно расширяет их антигенный спектр и в дальнейшем приводит к увеличению сенсибилизационной активности белка с носителем. Как следствие - повышается чувствительность тест-систем [7, 13]. Проведенные исследования показали преимущество ФКС как при иммунизации животных с целью получения гипериммунных сывороток, так и в качестве антигенной составляющей эритроци-тарных диагностикумов.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Установление и подтверждение диагноза как при вирусных, так и при бактериальных заболеваниях в большой степени зависит от лабораторных данных, поэтому разработка и совершенствование тестовых систем и методов лабораторной диагностики, выбор наиболее рационального подхода при конструировании и оценке функциональных характеристик диагностических препаратов являются чрезвычайно актуальной проблемой. При этом следует обращать внимание на простоту постановки анализа, воспроизводимость результатов, а также информативность методов, эффективность которых может быть оценена при проведении как клинических, так и популяционных исследований. Особое значение для повышения качества диа-гностикумов, по нашему мнению, имеют выбор антигена, выбор способа изготовления диагнос-тикума, а также использование качественного конъюгирующего компонента.
Иммунодиагностика на основе РНГА остается по-прежнему в арсенале исследователей, поскольку она зарекомендовала себя с хорошей стороны как в медицинской, так и в ветеринарной практике. Тем не менее имеются некоторые негативные моменты при использовании тест-систем, связанные как с их невысокой чувствительностью, так и с короткими сроками сохранности препаратов [15, 16]. Использование нами синтетических полимеров (поливинил-имидазолов) в качестве конъюгатов позволяет не только на порядок усилить чувствительность иммунодиагностикумов по сравнению с традиционными способами их приготовления (хлорид хрома), но и значительно повысить сроки использования (до 3-5 лет) с хорошей воспроизводимостью результатов. В исследованиях G. КиЫпвку-ЕМай и соавт. [17] за счет усовершенствования только способа приготовления антигена для сенсибилизации эритроцитов авторам удалось довести сроки хранения до 9 мес., что представлялось значительным дости-
жением, особенно в масштабных популяцион-ных исследованиях. При этом чувствительность полученной ими тест-системы для определения антител к Streptococcus pyogenes оставалась на таком же уровне. Применяемая нами технология, основанная на введении в конструкцию тест-системы водорастворимых полимеров в качестве конъюгатов, связывающих антиген (белок) с поверхностью эритроцита-носителя, существенно повлияла на основные качественные характеристики иммунодиагностикумов (чувствительность, воспроизводимость), значительно удлинив сроки хранения тест-системы до 3 лет. Таким образом, применение новых конъюгиру-ющих компонентов и многофункциональных белковых составляющих представляет перспективу создания высокочувствительных и экономичных диагностических систем для широкого применения, в том числе и в популяционных исследованиях.
Авторы благодарят доктора биологических наук Шмелеву Елену Александровну, доктора химических наук Анненкова Вадима Владимировича за консультативную и техническую помощь в проведении исследований.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Анненков В.В., Лещук С.И., Попкова С.М. и др. Современные подходы к конструированию препаратов в иммунотехнологии // Бюл. ВСНЦ СО РАМН. 2004. (9). 50-54.
2. Анненков В.В., Мазяр Н.Л., Круглова В.А. и др. Исследование взаимодействия полиакриловой кислоты с поли-1 винилазолами // Высокомолекулярные соединения. Сер. А. 1999. 41. (2). 357-362.
3. Анненков В.В., Мазяр Н.А., Лещук С.И. и др. Взаимодействие бычьего сывороточного альбумина с поли-^винилазолами // Высокомолекулярные соединения. Сер. А. 2000. 42. (11). 1804-1810.
4. Каральник Б.В. Эритроцитарные реагенты в клинической иммунологии // Иммунология. 1995. (6). 4-6.
5. Кокорев В.С. Методология повышения диагностической эффективности вирусных препаратов. Екатеринбург, 2000. 350 с.
6. Никитин В.М. Справочник методов иммунологии. Кишинев: Штиинца, 1982. 304 с.
7. Николаева Т.Н., Бондаренко В.М., Николаева А.И. и др. Иммуномодулирующий эффект белковых фракций, выделенных из бифидобактерий // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2004. (2). 60-64.
8. Пат. 2009126306 РФ. Способ получения эритроцитарного антигенного диагностикума / С.И. Лещук, В.В. Анненков, С.М. Попкова, Л.В. Сердюк; Опубл. 08.07.2009.
9. Пат. 2499483 РФ. Способ получения эритро-цитарного антигенного диагностикума / С.И. Ле-щук, Е.Н. Даниловцева, Л.В. Сердюк и др.; Опубл. 20.09.2011.
10. Петров Р.В., Хаитов Р.М. Коньюгирован-ные полимер-субъединичные иммуногены и вакцины // Вестн. РАМН. 2003. (1). 10-14.
11. Хаитов Р.М., Пинегин Б.В. Современные представления о механизмах действия полиокси-дония // Иммунология. 2005. (4). 197-199.
12. Шмелева Е.А. Биологическая функция антигенов клеточной стенки C. diphtheriae и научно-производственная разработка иммуномодулирую-щего препарата «Кодивак»: автореф. дис. ... докт. биол. наук. М., 1992.
13. Юринова Г.В. Совершенствование технологии приготовления эритроцитарных иммуно-диагностикумов для РПГА на основе клеточных фракций бифидобактерий с использованием синтетических полимеров: дис. ... канд. биол. наук. Улан-Удэ, 2005.
14. Andrianov A.K., De Collibus D.P., Gillis H.A. et al. Poly[di(carboxyphenoxy)phosphazene] is a po-
tent adjuvant for intradermal immunization // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2009. 106. 18936-18941.
15. Barakat A.M.A., Abd Elaziz M.M., Fada-ly H. A. Comparative diagnosis of toxoplasmosis in Egyptian small ruminants by indirect hemagglutination assay and ELISA // Global Veterinaria. 2009. 3. (1). 9-14.
16. Nakarin J., Pradutkanchana S. Evaluation of enzyme-linked immunosorbent assay and indirect hemagglutination assay for detection of leptospiral antibody by using three different antigens // J. Med. Assoc. Thai. 2004. 87. (10). 1218-1224.
17. Rubinsky-Elefant G., Hoshino-Shimizu S., Mamizuka E.M., Asciutti M.M.R. Improvement of the indirect hemagglutination test for the detection of antibodies to Streptococcus pyogenes // Braz. J. Med. Biol. Res. 1998. 31. 1081-1089.
18. Tagliabue A., Rappuoli R. Vaccine adjuvants: the dream becomes real // Hum. Vaccin. 2008. 4. 347-349.
19. Weinbach R. Die Verwen di barkeit formol behandelter Erythrozyten als Antigen-Tagger in der indirekten Hamagglutination // Z. Allerg. Path. 1959. 22. 1-8.
WAYS OF INCREASING THE EFFICIENCY OF IMMUNODIAGNOSTIC BACTERIAL PREPARATIONS
Lyudmila Viktorovna SERDYUK1, Svetlana Ivanovna LESHCHUK1,
Sofiya Markovna POPKOVA1, Galina Valer'evna YURINOVA2, Elena Borisovna RAKOVA1
1 Sientific Center of Family Health and Human Reproduction Problems SB RAMS 664025, Irkutsk, Timiryazev str, 16
2 Irkutsk State University 664003, Irkutsk, Karl Marx str., 1
Indirect haemagglutination (IHA) test remains as before in an arsenal of researchersrs diagnostic tests both in medical and veterinary fields owing to fortunate combination of such factors as high specificity and savings on costs. Nevertheless diagnostic antigens currently using in laboratories, unfortunately, are characterized by low sensitivity and a short storage life. In the article some methods for development of IHA immunodiagnostic test-systems in two main directions as a pairing component using to enhance adsorption activity of a carrier (erythrocyte) and to increase immunodiagnostic antigens storage life and also highly active antigen selecting for erythrocytes sensitiza-tion to improve diagnostic antigen sensitivity are offered and considered. Test data of diagnostic test-systems with the water-soluble polymer poly-1-vinyl imidazol as a conjugate in comparison with generally accepted conjugate, chromium chloride, are analyzed. Antigen activity of microbal cell different particles at animals' immunization and in structure diagnostic test-systems itself is assessed. Advantages of diagnostic test-systems new components application are proved too. The applied technology of preparing antigenic erythrocyte diagnostic systems promotes an improvement of their qualitative characteristics such as specificity, sensitivity, storage life, results reproducibility.
Key words: erythrocyte immunodiagnostics, antigen, cell wall, synthetic polymer, antibody.
Serdyuk L.V. - candidate of biological sciences, researcher of the laboratory of microecology, e-mail: radugarose@yandex.ru
Leshchuk S.I. - doctor of biological sciences, leading researcher of the laboratory of microecology, e-mail: leschuk.swet@yandex.ru
Popkovа S.M. - doctor of biological sciences, head of laboratory of microecology, e-mail: smpopkova@gmail.com Yurinova G.V. - candidate of biological sciences, associate professor of the chair for physical and chemical biology, e-mail: yurinova@yandex.ru
Rakova E.B. - candidate of biological sciences, researcher of the laboratory of microecology, e-mail: lenova_@mail.ru
