CC BY
130
КРАТКОЕ СООБЩЕНИЕ
после стихания ярких клинических проявлений туберкулеза присоединять АРВТ. Следовательно, в данном случае были допущены ошибки, как в диагностическом обследовании больной с ВИЧ-инфекцией, так и в лечении. Больной ВИЧ-инфекцией с выраженным иммунодефицитом и лихорадкой неясного генеза не проведена МСКТ органов дыхания и брюшной полости, назначена АРВТ, что привело к бурному прогрес-сированию недиагностированного туберкулеза.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Представленный случай демонстрирует атипич-ность проявлений генерализованного милиарного туберкулеза с поражением ЦНС, легких, печени, селезенки, почек, внутригрудных и внутрибрюшных лимфоузлов у больной ВИЧ-инфекцией с выраженным иммунодефицитом.
Туберкулез проявлялся синдромом интоксикации без видимых на обзорной рентгенограмме очаговых
ЛИТЕРАТУРА / REFERENCES:
теней в легких. УЗИ органов брюшной полости также не выявило патологии.
При проведении диагностического обследования больной ВИЧ-инфекцией с выраженным иммунодефицитом и с лихорадкой неуточненного генеза допущены дефекты: не проведена МСКТ органов дыхания и брюшной полости. Лихорадка неуточненного генеза явилась поводом для назначения АРВТ, что вызвало развитие ВСВИС в виде выраженного прог-рессирования недиагностированного туберкулеза с развитием остропрогрессирующего диссеминирован-ного генерализованного процесса с поражением ЦНС. Атипичность туберкулеза ЦНС на фоне ВИЧ-инфекции проявилась в развитии тотального менингоэнце-фалита и гнойном характере ликвора.
У больных ВИЧ-инфекцией с выраженным иммунодефицитом и лихорадкой неуточненного генеза при отсутствии достоверных данных за туберкулез следует проводить пробную противотуберкулезную терапию до получения результатов посевов на МБТ.
1. Revyakina OV, Alekseeva TV, Filippova OP. et al. Key indicators of TB activities in Siberian and far Eastern Federal districts. Novosibirsk, 2014. 87 p. Russian (Ревякина О.В., Алексеева Т.В., Филиппова О.П. и др. Основные показатели противотуберкулезной деятельности в Сибирском и Дальневосточном федеральных округах. Новосибирск, 2014. 87 с.).
2. Bartlett J, Galante D. Clinical aspects of HIV infection. M.: R. Valent, 2010. 490 p. Russian (Барлетт Дж., Галант Д. Клинические аспекты ВИЧ-инфекции. М.: Р. Валент, 2010. 490 с.).
3. Federal clinical recommendations on diagnostics and treatment of tuberculosis in patients with HIV infection. Moscow - Tver: LLC «Publishing house «Triada», 2014. 56 p. Russian (Федеральные клинические рекомендации по диагностике и лечению туберкулеза у больных ВИЧ-инфекцией. М. -Тверь: ООО «Издательство «Триада», 2014. 56 с.).
4. Filippov TP, Novitskaya ON, Bykov YN, Kornilova ZH. HIV-associated tuberculosis of the Central nervous system in a region with high prevalence of tuberculosis and HIV infection. M.: R. Valent, 2012. 132 p. Russian (Филиппова Т.П., Новицкая О.Н., Быков Ю.Н., Корнилова З.Х.. ВИЧ-ассоцииро-ванный туберкулез центральной нервной системы в регионе с высоким уровнем распространения туберкулеза и ВИЧ-инфекции. М.: Р. Валент, 2012. 132 с.).
5. Zimn VN, Koshechkin VA, Kravchenko AV. Tuberculosis and HIV infection in adults. Guide. GEOTAR-Media, 2014. 224 p. Russian (Зимина В.Н., Ко-шечкин В.А., Кравченко А.В. Туберкулез и ВИЧ-инфекция у взрослых. Руководство. Гэотар-Медиа, 2014. 224 с.).
а
Статья поступила в редакцию 06.02.2016 г.
Волков А.Н., Цуркан Е.В.
ФГБОУ ВПО «Кемеровский государственный университет», ФГБОУВО«Кемеровский государственныймедицинскийуниверситет», ГАУЗ «Кемеровская областная клиническая больница»,
г. Кемерово
ПЦР-ДИАГНОСТИКА AZF-МИКРОДЕЛЕЦИЙ ПРИ УСТАНОВЛЕНИИ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ПРИЧИН МУЖСКОГО БЕСПЛОДИЯ
Представлены результаты лабораторной апробации коммерческой тест-системы «Микроделеции AZF-локуса Y-хро-мосомы».
Цель исследования - оценка целесообразности использования диагностикума в клинической практике. Материалы и методы. С использованием набора реагентов «Микроделеции AZF-локуса Y-хромосомы» проведен ПЦР-анализ AZF-микроделеций у 10 мужчин. Постановка методики осуществлялась как в формате электрофоретической детекции продуктов ПЦР, так и с детекцией в «реальном времени».
ОКОицина Medicine
в Кузбассе
T. 15 № 3 2016 23
Результаты. Установлено, что тест-система выполнена на современном научно-методическом уровне, надежна и проста в исполнении и интерпретации результатов. Объем данных, получаемых в тесте, достаточен для вынесения клинического заключения.
Заключение. Можно рекомендовать диагностикум «Микроделеции AZF-локуса Y-хромосомы» для внедрения в лабораторную практику медицинских учреждений при выявлении генетических причин мужского бесплодия. Ключевые слова: ПЦР-диагностика; мужское бесплодие; AZF.
Volkov A.N., Tsurkan E.V.
Kemerovo State University,
Kemerovo State Medical Academy,
Kemerovo Regional Clinical Hospital, Kemerovo
PCR DIAGNOSTICS OF AZF MICRODELETIONS IN DISCOVERING OF GENETIC CAUSES OF MALE INFERTILITY Here we present the results of laboratory approbation of a commercial test system «Microdeletions in AZF-locus of Y-chromosome».
Study aim. To assess the expediency of using the diagnosticum in clinical practice.
Materials and methods. With applying the kit «Microdeletions in AZF-locus of Y-chromosome» we performed PCR analysis of AZF-microdeletions in 10 men. The technique was executed in the format of electrophoretic detection of PCR products and with real-time detection.
Results. It was found that the test system was designed on the modern scientific and methodological level, reliable and easy to perform and interpret the results. The volume of data received in the test is sufficient for making clinical judgment. Conclusion. The diagnosticum «Microdeletions in AZF-locus of Y-chromosome» can be recommended for implementation into laboratory practice of medical institutions when detecting the genetic causes of male infertility. Key words: PCR diagnostics; male infertility; AZF.
Микроделеции в длинном плече У-хромосо-мы являются распространенной причиной снижения репродуктивного статуса у мужчин, определяя в некоторых группах населения земли до 10 % случаев мужского бесплодия [1]. В выборках пациентов с идиопатической олигозооспермией эта величина увеличивается до 15 %, а среди мужчин с идиопатической необструктивной азооспермией - до 20 % [2].
Локусы У-хромосомы, ассоциированные с бесплодием, были объединены в т.н. «фактор азооспермии» (AZF), в соответствии с клиническим эффектом, вызываемым делециями в этой области. AZF-регион включает ряд генов, отвечающих за сперматогенез, и подразделяется на три субрегиона: AZFa, AZFb и AZFc.
Делеции в разных субрегионах AZF-области могут иметь различное проявление, от умеренного сни-
жения продукции сперматозоидов (гипосперматоге-нез) до полного их отсутствия во всех или в части семенных канальцев (синдром «только клетки Сер-толи») [3, 4]. Считается, что наиболее тяжелые клинические последствия имеет повреждение субрегиона AZFa, в то время как делеции в AZFb- и, особенно, AZFc-субрегионе дают шансы на обнаружение в тес-тикулярной ткани сперматозоидов, годных для проведения процедуры ICSI (ICSI, Intracytoplasmic Sperm Injection). Молекулярно-генетический анализ AZF-области позволяет определить необходимость использования вспомогательных репродуктивных технологий и шансы на репродуктивный успех в каждом клиническом случае [1, 2, 5].
Цель работы — лабораторная апробация коммерческой тест-системы «Микроделеции AZF-локуса Y-хромосомы» (ООО НПФ «Литех», г. Москва) и оценка целесообразности ее использования в практической медицине.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Для выполнения исследования использовались образцы цельной венозной крови с ЭДТА, полученные от 10 мужчин, обследуемых по поводу бесплодия
Корреспонденцию адресовать:
ВОЛКОВ Алексей Николаевич, 650029, г. Кемерово, ул. Ворошилова, 22а, ФГБОУ ВО КемГМУ Минздрава России. Тел.: 8 (3842) 73-48-56; +7-905-949-32-85. E-mail: volkov [email protected]
Сведения об авторах:
ВОЛКОВ Алексей Николаевич, к.б.н., доцент, ФГБОУ ВПО КемГУ; с.н.с., ЦНИЛ, ФГБОУ ВО КемГМУ Минздрава России, г. Кемерово, Россия.
ЦУРКАН Елена Владимировна, биолог, медико-генетическая консультация, ГАУЗ «Кемеровская областная клиническая больница», г. Кемерово, Россия.
Information about authors:
VOLKOV Aleksey, PhD Biology, associate professor, Kemerovo State University; the senior research assistant, Central research laboratory, Kemerovo State Medical University, Kemerovo, Russia.
TSURKAN Elena, biologist, medical-genetic consultation department, Kemerovo Regional Clinical Hospital, Kemerovo, Russia.
КРАТКОЕ СООБЩЕНИЕ
в медико-генетической консультации ГАУЗ КОКБ (г. Кемерово).
Выделение ДНК проводилось термокоагуляци-онным методом с помощью набора реагентов «ДНК-экспресс-кровь» производства ООО НПФ «Литех». Каждый из полученных образцов исследовался в ходе ПЦР с использованием коммерческой тест-системы «Микроделеции AZF-локуса Y-хромосомы» указанного производителя.
Основные манипуляции осуществлялись в ЦНИЛ ГБОУ ВПО КемГМА Минздрава России.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Для выполнения ПЦР-диагностики AZF-микро-делеций в Y-хромосоме ООО НПФ «Литех» разработаны два формата тест-системы: с электрофоре-тической детекцией результатов ПЦР и с детекцией динамики ПЦР в «реальном времени». В такой ситуации технические возможности ЛПУ, проводящих соответствующие исследования, позволяют сделать выбор в пользу одного из предложенных форматов.
В обоих вариантах диагностикума реализован общий принцип выбора амплифицируемых STS-мар-керов (sequence-tagged site markers) Y-хромосомы. Такие участки ДНК могут не являться кодирующими элементами, но их структура известна на основании результатов секвенирования, т.е. прямого анализа нуклеотидной последовательности. В данном случае в качестве мишеней для ПЦР используются STS-маркеры, локализованные в субрегионах AZFa (sY84 и sY86), AZFb (sY127 и sY134), AZFc (sY254 и sY255). Эти маркеры рекомендованы Европейской академией андрологии для анализа AZF-микроделе-ций [1]. Мишенями внутреннего контроля являются участки генов SRY (ген Y-хромосомы, определяющий пол) и ZFX/Y (ген «цинковых пальцев», присутствующий как на X, так и на Y хромосоме). Для каждого исследуемого образца одновременно выполняются 2 теста (система А и система В), что повышает надежность исследования.
Рассматриваемая схема ПЦР-анализа является мультипраймерной (мультиплексной), в каждой из ПЦР-смесей одновременно протекают 4 процесса амплификации. В системе A амплифицируются 3 STS-маркера (sY86 (AZFa), sY127 (AZFb), sY254 (AZFc)) и участок ZFX/Y в качестве внутреннего контроля. В системе В также амплифицируются 3 STS-марке-ра (sY84 (AZFa), sY134 (AZFb), sY255 (AZFc)) и участок SRY в качестве внутреннего контроля. У фер-
Рисунок1
Амплификация AZF-субрегионов и локусов внутреннего контроля с использованием тест-системы «Микроделеции AZF-локуса Y-хромосомы» с электрофоретической детекцией продуктов ПЦР
Figure 1
Amplification of AZF-subregions and loci of internal control applying the test system «Microdeletions in AZF-locus of Y-chromosome» with electrophoretic detection of PCR products
Примечание: К+ - положительный контрольный образец;
№ 1 - микроделеция в субрегионе AZFc; № 2 - отсутствие микроделеций в AZF-регионе.
Note: K + - positive control; № 1 - microdeletion in the subregion AZFc; № 2 - no microdeletions in AZF-region.
СИСТЕМА В
SRY
SY134 (AZFb) sY84 (AZFa) sY255 (AZFc)
К+ №1 №2
тильного мужчины без AZF-делеций в ходе ПЦР в системах А и В образуются по 4 ПЦР-продукта (рис. 1, 2).
Делеция в любом из субрегионов приведет к потере одного или нескольких ПЦР-продуктов как в системе А, так и в системе В (рис. 1, 3). Это связано с тем, что выбранные разработчиками STS-мар-керы каждого из субрегионов тесно сцеплены и при делеции, как правило, утрачиваются оба одновременно. Отсутствие одного или нескольких ПЦР-продук-тов только в одной из систем будет означать, вероятнее всего, ингибирование амплификации данных участков, а не их делецию. Таким образом, наличие дублирующей системы не позволит неверно истолковать результат неудачной ПЦР.
Не менее важно наличие в системе внутреннего контроля. Участки генов ZFX/Y и SRY не могут отсутствовать у мужчины, т.к. первый кодирует жизненно необходимый белок, а второй определяет половую дифференцировку организма по мужскому типу. Даже при полной делеции AZF-реги-
Конфликт интересов
Авторы заявляют о следующем конфликте интересов, возникшем в ходе выполнения работы:
- участие ФГБОУ ВПО "Кемеровский государственный университет" в работе связано с предоставлением приборной базы для выполнения части исследования;
- участие ФГБОУ ВО "Кемеровский государственный медицинский университет" связано с финансированием исследования и предоставлением приборной базы для выполнения части исследования;
- участие ГАУЗ "Кемеровская областная клиническая больница" связано с предоставлением коллекции биологических образцов и приборной базы для выполнения части исследования.
Ои^шта Médiane^ т. 15 № 3 2016
25
Рисунок 2
Амплификация AZF-субрегионов и локусов внутреннего контроля с использованием тест-системы «Микроделеции AZF-локуса Y-хромосомы» в режиме ПЦР в «реальном времени» при отсутствии микроделеций Figure 2
Amplification of AZF-subregions and loci of internal control applying the test system «Microdeletions in AZF-locus of Y-chromosome» with real-time PCR in the absence of microdeletions
Рисунок 3
Амплификация AZF-субрегионов и локусов внутреннего контроля с использованием тест-системы «Микроделеции AZF-локуса Y-хромосомы» в режиме ПЦР в «реальном времени» при микроделеции в субрегионе AZFc
Figure 2
Amplification of AZF-subregions and loci of internal control applying the test system «Microdeletions in AZF-locus of Y-chromosome» with real-time PCR while detecting microdeletion in the subregion AZFc
она в ходе амплификации такого образца ДНК будут образовываться продукты, соответствующие маркерам внутреннего контроля. Их отсутствие будет означать нарушение хода ПЦР и, как и в предыдущем случае, не позволит сделать ложное заключение о делеции, а потребует повторного проведения анализа.
Следует отметить, что разработчик тест-системы «Микроделеции AZF-локуса Y-хромосомы» не предоставляет информации о чувствительности, специфичности и других аналитических характеристиках диагностикума. Данные показатели могут быть установлены только в ходе масштабных клинических испытаний, которые, на наш взгляд, должны стать предметом дальнейших исследований.
ЛИТЕРАТУРА / REFERENCES:
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Тест-система «Микроделеции AZF-локуса У-хро-мосомы» выполнена на современном научно-методическом уровне, проста в исполнении и интерпретации результатов, обладает высокой надежностью. Производимый в двух форматах, диагностикум доступен лабораториям с различным уровнем технического оснащения. Объем информации, получаемой при проведении исследования достаточен для вынесения заключения о наличии или отсутствии у пациента делеций субрегионов AZFa, AZFb, AZFc У-хромосомы. Учитывая это, можно рекомендовать данную тест-систему для внедрения в практику здравоохранения при выяснении генетических причин мужского бесплодия.
1. Krausz C, Hoefsloot L, Simoni M et al. EAA/EMQN best practice guidelines for molecular diagnosis of Y-chromosomal microdeletions: state-of-the-art 2013. Andrology. 2014; 2: 5-19.
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
2. Foresta C, Ferlin A, Gianaroli L et al. Guidelines for the appropriate use of genetic tests in infertile couples. Europ J of Human Genetics. 2002; 10: 303-312.
3. Chernykh VB, Kurilo LF, Shileiko LV et al. Microdeletion analysis of AZF locus in infertile males: cooperative experience of research work. Medical genetics. 2003; 2(8): 367-379. Russian (Черных В.Б., Курило Л.Ф., Шилейко Л.В. и др. Анализ микроделеций в локусе AZF у мужчин с бесплодием: совместный опыт исследований // Медицинская генетика. 2003. Т. 2, № 8. С. 367-379.)
4. Longepied G, Saut N, Aknin-Seifer I et al. Complete deletion of the AZFb interval from the Y chromosome in an oligozoospermic man. Human Reproduction. 2010; 25(10): 2655-2663.
5. Jungwirth A, Giwercman A, Tournaye H. European Association of Urology guidelines on male infertility: The 2012 Update. European urology. 2012; 62: 324-332.
0
Статья поступила в редакцию 31.03.2016 г.
Крючкова О.Г., Голомидов А.В., Великанова Е.А., Григорьев Е.В.
Областной клинический перинатальный центр им. Л.А. Решетовой, Детская городская клиническая больница № 5, НИИ комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний, Кемеровский государственный медицинский университет,
г. Кемерово
С-РЕАКТИВНЫЙ БЕЛОК И TREM-1 КАК РАННИЕ МАРКЕРЫ ОСЛОЖНЕННОГО СИСТЕМНОГО ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ОТВЕТА У НЕДОНОШЕННЫХ НОВОРОЖДЕННЫХ
Предмет исследования. Определение уровня С-реактивного белка (СРБ) и TREM-1 (триггерный рецептор, экспрес-сируемый на миелоидных клетках) у недоношенных новорожденных с дыхательными расстройствами. Цель исследования - определение эффективности маркеров TREM-1 и СРБ для ранней диагностики осложненного неинфекционного системного воспалительного ответа (СВО) у недоношенных новорожденных с респираторным дистресс-синдромом (РДС).
Методы исследования. У 50 недоношенных новорожденных с РДС исследованы уровни маркеров инфекции СРБ и TREM-1 на 1-е, 3-и, 5-е сутки жизни.
Основные результаты. Количество лейкоцитов в группах детей не имело статистически достоверной разницы, ней-трофильный индекс (НИ) у детей с сепсисом был достоверно выше, чем в группе с РДС, но значения НИ были в пределах нормы. Тромбоцитопения у большинства детей с подтвержденной инфекцией отмечалась только при рождении. При дальнейшем наблюдении различия по количеству тромбоцитов в группах не выявлялись. Уровень TREM-1 и СРБ имел статистически достоверные различия, начиная с 3-х суток жизни. Область применения. Неонатология.
Выводы. У детей с РДС в первые сутки жизни (при явлениях неинфекционного системного воспалительного ответа) наибольшая диагностическая чувствительность среди маркеров инфекции отмечалась у тромбоцитов. В последующем все маркеры имели низкую диагностическую чувствительность, но высокую специфичность, которая составляла 8095 %. У детей с сепсисом наиболее высокую диагностическую чувствительность и специфичность показали СРБ и ТRЕМ-1. На 3-й день жизни их диагностическая чувствительность составляла 86 %. Диагностическая специфичность оставалась стабильно высокой с первых суток жизни (от 76 до 95 %).
Ключевые слова: критические состояния у недоношенных новорожденных; респираторный дистресс-синдром; системный воспалительный ответ; СРБ; ТРЕМ-1.
Kruchkova O.G., Golomidov A.V., Velikanova E.A., Grigoryev E.V.
Regional Clinical Perinatal Center, Children's City Clinical Hospital 5,
Research Institute of Complex Problems of Cardiovascular Diseases, Kemerovo State Medical University, Kemerovo
CRP AND TREM-1 AS EARLY MARKERS OF NONINFECTIOUS SYSTEMIC INFLAMMATORY RESPONSE IN PRETERM NEONATES
Objective - to assess the efficiency of CRP and TREM-1 markers for early diagnosis of noninfectious systemic inflammatory response (SIR) in preterm neonates with respiratory distress syndrome (RDS).
Methods. The levels of CRP and TREM-1 markers of infection were studied in preterm neonates with respiratory distress syndrome on the 1st, 3d and 5th day of their life.
Results. The number of leucocytes in the babies' groups did not have any statistically significant difference, neutrophil index (NI) in babies with sepsis being significantly higher than in the group with RDS but the NI values were normal. Thrombocytopenia in the majority of babies with confirmed infection was observed only at birth. No difference in the number of platelets in the groups was revealed later. The CRP and TREM-1 level had statistically significant difference from the 3d day of life.
Оiùuima Medicine
в Кузбассе
T. 1S № 3 2O16 27
