CC BY
16
© Коллектив авторов, 2020
УДК 546.76-615.275.4-615.273.53:616.61
DOI - https://doi.org/10.14300/mnnc.2020.15076
ISSN - 2073-8137
ПРОЦЕССЫ ГЕМОКОАГУЛЯЦИИ И ЛИПОПЕРОКСИДАЦИИ И МЕХАНИЗМЫ НАРУШЕНИЯ ОСМОРЕГУЛИРУЮЩЕЙ ФУНКЦИИ ПОЧЕК ПРИ ХРОНИЧЕСКОЙ ИНТОКСИКАЦИИ СОЕДИНЕНИЯМИ ХРОМА
Э. М. Гаглоева 1, В. Б. Брин 1 2, В. О. Ахполова 1
1 Северо-Осетинская государственная медицинская академия, Владикавказ, Российская Федерация
2 Институт биомедицинских исследований Владикавказского научного центра РАН, Российская Федерация
HEMOCOAGULATION AND LIPOPEROXIDATION PROCESSES AND MECHANISMS OF RENAL OSMOREGULATORY FUNCTION'S IMPAIRMENT IN CHRONIC INTOXICATION WITH CHROMIUM COMPOUNDS
Gagloeva E. M. 1, Brin V. B. 1 2, Akhpolova V. O. 1
1 North Ossetian State Medical Academy, Vladikavkaz, Russian Federation
2 Institute of Biomedical Investigation, Vladikavkaz Scientific Center of Russian Academy of Sciences, Russian Federation
Длительное поступление хрома в организм экспериментальных животных приводит к развитию токсической нефропатии, сопровождающейся значительными нарушениями процессов гемокоагуляции и липопероксидации. Выявлены корреляционные связи изменений показателей осморегулирующей функции почек с изменением показателей антикоагулянтного и фибринолитического звеньев системы гемостаза и уровнем тромбинемии. Данные эффекты коррелировали с повышением уровня продуктов перекисного окисления липидов и уменьшением активности антиоксидантных ферментов крови. Результаты исследования позволяют патогенетически обоснованно рекомендовать применение антикоагулянтов и антиоксидантов для разработки способов профилактики и коррекции проявлений токсической нефропатии при воздействии на организм соединений хрома.
Ключевые слова: хром, гемостаз, перекисное окисление липидов, функция почек
The prolonged intake of chromium into the body of experimental animals leads to the development of toxic nephropathy, accompanied by significant violations of hemocoagulation and lipid peroxidation processes. Correlation relationships between the changes in the indicators of renal osmoregulatory function and the changes in the indicators of anticoagulant and fibrinolytic links of the hemostatic system and the level of thrombinemia were revealed. These effects correlated with an increase in the level of lipid peroxidation products and a decrease in the activity of antioxidant blood enzymes. The results of the study make it possible to pathogenetically reasonably recommend the use of anticoagulants and antioxidants for the development of methods for the prevention and correction of the manifestations of toxic nephropathy when the body is exposed to chromium compounds.
Keywords: chromium, hemostasis, lipid peroxidation, kidney function
Для цитирования: Гаглоева Э. М., Брин В. Б., Ахполова В. О. ПРОЦЕССЫ ГЕМОКОАГУЛЯЦИИ И ЛИПОПЕРОКСИДАЦИИ И МЕХАНИЗМЫ НАРУШЕНИЯ ОСМОРЕГУЛИРУЮЩЕЙ ФУНКЦИИ ПОЧЕК ПРИ ХРОНИЧЕСКОЙ ИНТОКСИКАЦИИ СОЕДИНЕНИЯМИ ХРОМА. Медицинский вестник Северного Кавказа. 2020;15(3):320-324. DOI - https://doi.org/10.14300/mnnc.2020.15076
For citation: Gagloeva E. M., Brin V. B., Akhpolova V. O. HEMOCOAGULATION AND LIPOPEROXIDATION PROCESSES AND MECHANISMS OF RENAL OSMOREGULATORY FUNCTION'S IMPAIRMENT IN CHRONIC INTOXICATION WITH CHROMIUM COMPOUNDS. Medical News of North Caucasus. 2020;15(3):320-324. DOI - https://doi.org/10.14300/mnnc.2020.15076 (In Russ.)
AT(III) - антитромбин (III)
АЧТВ - активированное частичное тромбопластиновое время
ВПФМ - относительное время полимеризации фибрин-мономеров ГП - гидроперекиси МДА - малоновый диальдегид ПВ - протромбиновое время ПОЛ - перекисное окисление липидов
РФМК - растворимые фибрин-мономерные комплексы
СОД - супероксиддисмутаза
СЭЛ - спонтанный эуглобулиновый лизис
С05т - осмотическое очищение
Е^т - экскретируемая фракция осмотически активных веществ
ТсН2О - транспорт осмотически свободной воды и05т - осмолярность мочи
У05т XV - экскреция осмотически активных веществ
медицинский вестник северного кавказа
2020. Т. 15. № 3
medical news of north caucasus
2020. Vоl. 15. Iss. 3
Более полувека хром (Сг3+) относили к эссен-циальным нутриентам, которым свойственно влияние на углеводный, жировой и, по некоторым данным, белковый обмен [1, 2]. Вместе с тем литературные данные свидетельствуют об аллергенном, мутагенном, канцерогенном, гона-дотропном воздействии хрома, а также полиорганных структурно-функциональных нарушениях при поступлении его в организм [3-5]. Описывается корреляция зависимости гематологических показателей у работников тяжелой промышленности от стажа работы [6, 7]. Соли хрома Сг6+ демонстрируют выраженную нефротоксичность, связанную с окислительным стрессом у людей и животных [3, 8].
Патология почек нередко сопровождается изменениями функциональной активности системы свертывания крови, зависимой от интенсивности процессов липопероксидации [9, 10]. Однако взаимосвязь показателей патологии почек, развивающейся под влиянием длительного токсического воздействия хрома, с интенсивностью нарушений в системе гемостаза не изучалась. Отдельные наблюдения противоречивы и носят преимущественно экспериментальный характер и отражают сугубо токсикологические аспекты [11-13]. Проблема создания и разработки эффективных способов патогенетической профилактики и лечения хронической хромовой интоксикации является актуальной.
Цель исследования - изучение взаимосвязи механизмов формирования токсической нефропатии с нарушениями процессов гемокоагуляции и липопероксидации при хронической хромовой интоксикации у крыс.
Материал и методы. Опыты проведены на 40 крысах-самцах линии Вистар массой 200-250 г. Моделирование хронической токсической нефропатии производили раствором бихромата калия («По-лихим», Россия), введением через зонд в желудок в дозе 5 мг/кг в течение двух недель (10 крыс), одного (10 крыс) и двух месяцев (10 крыс). Контролем служили интактные животные (10 крыс).
Для изучения состояния мочеобразовательной функции почек измеряли объем 6-часового спонтанного диуреза. Концентрацию креатинина и общего белка в моче и плазме крови определяли на спектрофотометре «SOLAR 300» с помощью наборов «Агат-Мед» (Москва, Россия). Осмолярность мочи и плазмы крови определяли методом криоскопии на миллиос-мометре «Osmomat-2». Экстракция натрия из тканей почки производилась 0,75 Н азотной кислотой. Концентрацию натрия определяли с помощью пламенного автоматического фотометра «ФПА-2». Содержание мочевины в слоях тканей почки определялось методом С. Г. Гасанова (1962). По клиренсу эндогенного креатинина определяли скорость клубочковой фильтрации. Рассчитывали осмотическое очищение плазмы (Cosm), транспорт осмотически свободной воды (ТсН2О) и экскретируемую фракцию осмотически активных веществ (Efosm) для количественной оценки осморегулирующей функции почек.
С целью изучения состояния системы гемостаза определяли количество тромбоцитов и их агрегаци-онную активность (индуктор АДФ - 10,0 мкг/мл), активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ), протромбиновое время (ПВ), тромбиновое время, относительное время полимеризации фибрин-мономеров (ВПФМ), концентрацию фибриногена, активность антитромбина III, время спонтанного эуглобулинового лизиса, концентрацию растворимых фибрин-мономерных комплексов (РФМК) («Технология стандарт», Россия).
Состояние свободнорадикального перекисного окисления липидов (ПОЛ) оценивали по содержанию малонового диальдегида в эритроцитах и гидроперекисей (диеновые конъюгаты и диеновые кетоны) в плазме крови. Антиоксидантный статус оценивали по активности супероксиддисмутазы (СОД) и каталазы в эритроциах. Измерения выполнялись на спектрофотометре «Solar-300», Беларусь.
Полученные результаты обрабатывались статистически с учетом распределения признаков в группах с использованием критерия Шапиро - Уилка. Данные представлены в виде медианы (Me) и [25-75] процентилей выборки. Оценку статистической значимости различий в группах животных проводили с использованием непараметрического U-критерия Манна - Уитни. Для оценки статистической зависимости рядов наблюдений использовали коэффициент ранговой корреляции (rs) Спирмена. Различия считались достоверными при вероятности ошибки р<0,05. Использовали пакет программ Microsoft Excel 2016 и «STATISTICA 10.0» (StatSoft).
Результаты и обсуждение. Проведенные исследования показали, что при внутрижелудочном введении раствора хрома у экспериментальных животных развиваются нарушения в системе клеточного и плазменного гемостаза. В частности, уже через две недели введения хрома выявлялось значительное увеличение концентрации фибриногена в плазме крови на 27,8 % (p<0,05) и повышение степени АДФ-агрегации тромбоцитов на 15,2 % (p<0,05). С увеличением времени эксперимента через один месяц выявлялась гиперкоагуляционная направленность процессов свертывания крови. Сохранялась высокая концентрация фибриногена. Выявлялось укорочение АЧТВ на 15,4 % (p<0,001) и ПВ на 9 % (p<0,05). Напряжение в системе гемостаза подтверждалось укорочением времени полимеризации фибрин-мономерных комплексов (ВПФМ) с 1,66 до 1,04 отн. ед. (p<0,01). Достоверно уменьшилось количество тромбоцитов (p<0,05) с увеличением активности АТ III с 100,2 % до 122,3 % (p<0,05) и укорочение времени спонтанного эуглобулинового лизиса.
Через два месяца экпериментального применения хрома изменения системы гемостаза в сторону гиперкоагуляции нарастали, о чем свидетельствовало укорочение АЧТВ и ПВ (p<0,05), повышение концентрации фибриногена на 30,2 % выше контрольных значений (p<0,05). Значимо возросла концентрация маркеров тромбинемии - растворимых фибрин-мономерных комплексов, на фоне укорочения времени их полимеризации. Явления гиперкоагуляции в данные сроки сопровождались выраженным снижением активности антитромбина на фоне угнетения фибри-нолитической активности плазмы крови в 2 раза.
Изучение мочеобразовательной функции почек у экспериментальных животных показало, что внутри-желудочное введение хрома в течение двух недель и одного месяца приводит к увеличению 6-часового спонтанного диуреза вследствие уменьшения каналь-цевой реабсорбции воды (RH2o) по срокам исследования (табл.1), скорость клубочковой фильтрации от контроля не отличалась. Рост диуреза сопровождался достоверным уменьшением осмолярности мочи, что может свидетельствовать о снижении концентрирующей функции почек. Вместе с тем выявлялось повышение экскреции осмотически активных веществ (V*Uosm) и Efosm вследствие уменьшения их канальце-вой реабсорбции. При этом транспорт осмотически свободной (несвязанной) воды в канальцах ТсН2О был выше, чем у интактных крыс (p<0,01).
Таблица 1
Показатели водовыделительной функции почек и ПОЛ у крыс при хронической хромовой интоксикации
Условия опыта Группы животных
контроль 2 нед. 1 мес. 2 мес.
Диурез V, мл/ч/100 г 0,086 [0,08-0,092] 0,102* [0,087-0,109] 0,126*** [0,121-0,138] 0,124*** [0,109-0,129]
Фильтрация F, мл/ч/100 г 19,6 [18,0-22,4] 18,7 [16,3-21,1] 21,0 [19,2-22,6] 15,4** [15,0-17,1]
Реабсорбция ^20, % 99,58 [99,51-99,60] 99,48* [99,43-99,51] 99,38*** [99,32-99,45] 99,26*** [99,19-99,30]
Uosm, мосм/мл 1,334 [1,255-1,44] 1,224 [1,191-1,41] 1,142** [1,075-1,22] 0,862*** [0,845-0,90]
х V, мосм/ч/100 г 0,115 [0,108-0,118] 0,129*** [0,113-0,137] 0,147*** [0,138-0,154] 0,106 [0,093-0,113]
Cosm, мл/ч/100 г 0,388 [0,365-0,398] 0,436 [0,385-0,462] 0,497*** [0,467-0,52] 0,36 [0,318-0,384]
Е^т, % 1,884 [1,753-2,208] 2,286 [2,185-2,534] 2,357*** [2,277-2,555] 2,218* [2,038-2,447]
усН20 мл/ч/100 г 0,306 [0,28-0,317] 0,324 [0,289-0,364] 0,37** [0,344-0,384] 0,235** [0,215-0,258]
МДА, мкмоль/л 28,75 [27,65-30,01] 27,89 [27,11-29,23] 33,81** [31,05-36,44] 38,42*** [37,32-40,76]
ГП (233 нм) 0,061 [0,054-0,071] 0,070* [0,062-0,077] 0,084** [0,075-0,088] 0,079* [0,068-0,082]
ГП (278 нм) 0,044 [0,041-0,051] 0,054 [0,048-0,059] 0,065** [0,055-0,071] 0,058** [0,051-0,062]
СОД (ед. ингибир., %) 71,32 [64,54-73,32] 72,21 [65,27-74,22] 63,21* [60,03-66,88] 57,33** [50,8-61,45]
Каталаза (*10-4 МЕ/гНЬ) 7,47 [6,65-8,04] 7,87 [6,84-8,99] 6,42* [5,35-6,9] 5 49* [4,12-6,32]
Белок в моче, мг/мл 0,128 [0,08-0,138] 0,145 [0,107-0,242] 0,56* [0,46-0,75] 1,56*** [1,15-1,87]
Примечание: */**/***- р<0,05/0,01/0,001 - степень достоверности относительно интактного контроля.
Для выяснения механизмов нарушения моче-образовательной функции проводилось исследование электролито-мочевинного профиля слоев ткани почек у крыс (табл. 2). Через один месяц интоксикации при естественном уровне гидратации содержание натрия и мочевины в слоях тканей почки достоверно не отличалось от уровня контроля. Следовательно, выявляемое в эксперименте достоверное увеличение канальцевого транспорта осмотически свободной воды ТсН20 из просвета канальцев в интерстиций мозгового вещества почки не зависит от изменения кортико-папиллярного осмотического градиента почки. Однако анализ литературы позволяет противоречивые на первый взгляд экспериментальные данные объяснить избирательностью токсического действия хрома на эпителий проксимальных извитых канальцев (почки), вследствие избирательного накопления металла, обусловленного реабсорбцией белков транспортеров в этих отделах нефрона [3, 14]. Можно заключить, что при токсическом воздействии хрома происходит снижение проксимальной реабсорбции, что может приводить к увеличению объёма жидкости, поступающей в дистальные отделы канальцев и собирательные трубочки, приводя к росту дистальной реабсорбции осмотически свободной воды. Следовательно, увеличение диуреза сопровождается одновременно повышением экскреции осмотически активных веществ, не реабсорбированных в канальцевом аппарате, и ростом осмотически свободной воды ТсН20. Об этом также может свидетельствовать выявляемое увеличение экскреции бета-2-микроглобулина с мочой у рабочих с хромовой интоксикацией [15].
Таблица 2
Удержание мочевины и натрия в слоях ткани почки в условиях спонтанного диуреза у крыс при хронической хромовой интоксикации
Условия опыта Группы животных
контроль 1 мес. 2 мес.
Мочевина в слоях ткани почки (ммоль/100 г влажного веса)
Корковое вещество 19,83 [18,22-21,8] 19,58 [18,57-20,0] 16,6 ** [15,81-18,21]
Мозговое вещество 56,72 [55,98-58,4] 57,03 [53,49-58,33] 35,25** [34,3-47,5]
Папил-ла 167,4 [161,8-167,9] 146,7 [139,6-151,6] 100,7*** [98,81-118,5]
Натрий в слоях ткани почки (ммоль/кг сухой массы)
Корковое вещество 24,5 [23,11-25,43] 23 4 [22,1-24,8] 22,34 [20,73-23,8]
Мозговое вещество 39,8 [38,5-42,0] 37,9 [36,8-39,0] 36,8* [34,2-38,9]
Папил-ла 98,21 [94,3-103,4] 90,06 [86,4-94,33] 82,4** [80,0-87,64]
Примечание: */**/*** - р<0,05/0,01/0,001 - степень достоверности относительно интактного контроля.
Через два месяца интоксикации регистрировалось резкое уменьшение клубочковой фильтрации, но на фоне снижения канальцевой реабсорбции воды уровень диуреза оставался выше фоновых значений.
медицинский вестник северного кавказа
2020. Т. 15. № 3
medical news of north caucasus
2020. Vоl. 15. Iss. 3
Развивалась протеинурия до 1,56 мг/мл (p<0,001) (табл. 1). Рост диуреза сопровождался ростом Efosm, однако осмотическое очищение Cosm плазмы и экскреция осмотически активных веществ достоверно не менялись, так как одновременно уменьшалась фильтрационная загрузка нефронов. Снижение ос-молярности мочи на фоне роста диуреза происходило вследствие значительного падения канальцевого транспорта осмотически свободной воды. Уменьшение ТсН20 в канальцах коррелировало с увеличением диуреза (rs=0,70) у экспериментальных животных.
Через два месяца на фоне увеличения активности процессов ПОЛ выявлялось ингибирование активности СОД и каталазы в эритроцитах. При воздействии хрома активизация процессов свободнорадикально-го окисления и окислительный стресс могут развиваться в результате уменьшения активности антиок-сидантных ферментов.
Изучение мочевинно-натриевого профиля слоев тканей почки (табл. 2) через 2 месяца хромовой интоксикации выявило уменьшение градиента концентрации натрия и мочевины в слоях ткани почки от коры к папилле относительно контроля. Следовательно, снижение концентрирующего транспорта осмотически свободной воды и диуретический эффект соли хрома можно связать с уменьшением величины кортико-папиллярного осмотического градиента у животных при хронической интоксикации.
Статистический анализ полученных экспериментальных данных при хронической интоксикации выявил корреляционные связи изменений показателей осморегулирующей функции почек с изменением показателей антикоагулянтного и фибринолитического звеньев системы гемостаза и уровнем тромбине-мии. Данные эффекты коррелировали с повышением уровня продуктов перекисного окисления липидов и уменьшением активности антиоксидантных ферментов крови. Через два месяца эксперимента снижение активности АТ(Ш) и увеличение времени спонтанного эуглобулинового лизиса ассоциировалось со снижением канальцевой реабсорбции воды (rs=0,62; р<0,05 и rs=-0,71; р<0,05) и уменьшением клубочко-вой фильтрации (rs=0,58; р<0,05 и rs=-0,66; р<0,01). Вместе с тем снижение RH20 имело высокую степень обратной корреляции с увеличением концентрации МДА (rs=-0,78; р<0,001) и положительную связь со снижением активности СОД (rs=0,67; р<0,01) и каталазы (rs=0,61; р<0,05). Установлена достоверная корреляционная связь тромбинемии со степенью про-теинурии (rs=0,62; р<0,05) и снижением канальцевой реабсорбции воды (rs=-0,69; р<0,05).
Литература/References
1. Piotrowska A., Pilch W., Tota t., Nowak G. Biological significance of chromium III for the human organism. Medycyna Pracy. 2018;69(2):211-223. https://doi.org/10.13075/mp.5893.00625
2. Vincent J. B. New Evidence against Chromium as an Essential Trace Element. The Journal of Nutrition. 2017;147(12):2212-2219. https://doi.org/10.3945/jn.117.255901
3. Wu Y. H., Lin J. C., Wang T. Y. Hexavalent chromium intoxication induces intrinsic and extrinsic apoptosis in human renal cells. Molecular Medicine Reports. 2020;21(2):851-857. https://doi.org/10.3892/mmr.2019.10885
4. Chen Q. Y., Murphy A., Sun H., Costa M. Molecular and epigenetic mechanisms of Cr(VI)-induced carcinogenesis. Toxicology and Applied Pharmacology. 2019;377:114636. https://doi.org/10.1016Zj.taap.2019.114636
5. Des Marais T. L., Costa M. Mechanisms of Chromium-Induced Toxicity. Current Opinion in Toxicology. 2019;14:1-7. https://doi.org/10.1016/j.cotox.2019.05.003
6. Husain N., Mahmood R. Hexavalent chromium induces reactive oxygen species and impairs the antioxidant power of human erythrocytes and lymphocytes: Decreased me-
Согласно современным представлениям ионы хрома Cr6+ могут оказывать прямое воздействие на свободнорадикальные механизмы [15]. Попадая в организм, они легко проникают через биомембраны, подвергаются процессу восстановления до Cr3+ и в комплексе с белком транспортируются в различные органы. Наиболее вероятной способностью восстанавливать Cr6+ обладают глутатион и аскорбат, а также цистеин и другие соединения. В процессе восстановления Cr6+ до Cr3+ могут образовываться промежуточные неустойчивые степени окисления, которые вызывают образование гидроксильных радикалов. Генерация активных форм кислорода в процессе одноэлектронного восстановления, возможно, происходит при взаимодействии интермедиатов с перекисью водорода по реакциям Хабера - Вейса и Фентона [3, 6, 13]. Образующиеся при воздействии хрома эндоперекиси обеспечивают повреждение различных макромолекул, структурных компонентов мембран и, как следствие, повреждение тканей и органов, включая печень, почки, элементы крови [5, l5].
Статистические связи, выявленные при длительной интоксикации, подтверждают литературные данные о параллельной активации процессов липо-пероксидации и свертывания крови, а также данные о нефротоксичности соединений хрома и впервые демонстрируют взаимосвязь почечной патологии с изменением параметров системы гемостаза при хронической хромовой интоксикации.
Заключение. Полученные данные свидетельствуют о том, что нарушения системы гемостаза и оксидативный стресс являются важными патогенетическими звеньями механизма нефротоксическо-го действия соединений хрома. Результаты исследования позволяют патогенетически обоснованно рекомендовать изучение возможности применения антикоагулянтов и антиоксидантов для разработки способов профилактики и коррекции проявлений токсической нефропатии при воздействии на организм соединений хрома.
Информированное согласие: Исследование проведено в полном соответствии с требованиями Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации (1964), «Международными рекомендациями по проведению медико-биологических исследований с использованием животных» (1985), Правилами лабораторной практики в Российской Федерации (приказ МЗ РФ от 19.06.2003 № 267) и положительным заключением этического комитета.
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
tal reducing and free radical quenching ability of the cells. Toxicology and Industrial Health. 2017;33(8):623-635. https://doi.org/10.1177/0748233717703892
7. Husain N., Mahmood R. Taurine attenuates Cr(VI)-in-duced cellular and DNA damage: an in vitro study using human erythrocytes and lymphocytes. Amino Acids. 2020;52(1):35-53. https://doi.org/10.1007/s00726-019-02807
8. Goodarzi Z., Karami E., Ahmadizadeh M. Simvastatin attenuates chromium-induced nephrotoxicity in rats. Journai of Nephropathology. 2017;6(1):5-9. https://doi.org/10.15171/jnp.2017.02
9. Гаглоева Э. M., Брин В. Б., Скупневский С. В., Боци-ева Н. В., Молдован Т. В. Влияние хлорида никеля на показатели гемокоагуляции и липопероксидации у крыс в эксперименте. Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2019;63(1):83-90. [Gagloyeva E. M., Brin V. B., Skupnevskiy S. V., Botsiyeva N. V., Moldovan T. V. Vliyaniye khlorida nikelya na pokazateli gemokoagulyatsii i lipoperoksidatsii u krys v eksperimente. Patologicheskaya fiziologiya i eksperi-mental'naya terapiya. - Pathological physiology and experimental therapy. 2019;63(1):83-90. (In Russ)]. https://doi.org/10.25557/0031-2991.2019.01.83-90
10. Bhatti G. K., Bhatti J. S., Kiran R., Sandhir R. Alterations in Ca2+ homeostasis and oxidative damage induced by ethion in erythrocytes of Wistar rats: ameliorative effect of vitamin E. Environmental toxicology and pharmacology. 2011;31(3):378-386.
https://doi.org/10.1016/j.etap.2011.01.004
11. Vihol P., Patel J., Varia R. D., Patel J. M. Effect of Sodium Dichromate on Haemato-biochemical Parameters in Wistar Rats. Journal of Pharmacology and Toxicology. 2012;7(1):58-63. https://doi.org/10.3923/jpt.2012.58.63
12. Ray R. R. Adverse hematological effects of hexavalent chromium: an overview. Interdisciplinary Toxicology. 2016;9(2):55-65. https://doi.org/10.1515/intox-2016-0007
13. Mary Momo C. M., Ferdinand N., Omer Bebe N. K. Oxi-dative Effects of Potassium Dichromate on Biochemical,
Hematological Characteristics, and Hormonal Levels in Rabbit Doe (Oryctolagus cuniculus). Veterinary Sciences. 2019;6(1):30. https://doi.org/10.3390/vetsci6010030
14. El-Mahalaway A. M., Salem M. M., Mousa A. M. The effect of potassium dichromate on convoluted tubules of the kidney of adult male albino rats and the possible protective role of ginseng. Egyptian Journal of Histology. 2015;38(2):157-167.
https://doi.org/10.1097/01.EHX.0000464738.41270.06
15. Junaid M., Hashmi M. Z., Malik, R. N. Toxicity and oxi-dative stress induced by chromium in workers exposed from different occupational settings around the globe: A review. Environmental Science and Pollution Research. 2016;23:20151-20167. https://doi.org/10.1007/s11356-016-7463-x
Сведения об авторах:
Гаглоева Эльмира Муратовна, кандидат медицинских наук, доцент кафедры нормальной физиологии; тел.: 89188231442; e-mail: mira-med@yandex.ru
Брин Вадим Борисович, доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой, заведующий отделом физиологии и патологии висцеральных систем; тел.: 89188261559; e-mail: vbbrin@yandex.ru; http://orcid.org/0000-0001-8382-3210
Ахполова Варвара Олеговна, кандидат медицинских наук, доцент кафедры нормальной физиологии; тел.: 89188234009; e-mail: tshabria@yandex.ru
© Коллектив авторов, 2020 УДК 61-616-091.811
D0I - https://doi.org/10.14300/mnnc.2020.15077 ISSN - 2073-8137
ОСОБЕННОСТИ ЦИТОТОКСИЧЕСКОГО ИММУНОФЕНОТИПА МАКРОФАГОВ ПРИ ФИБРОЗНО-КАВЕРНОЗНОМ ТУБЕРКУЛЕЗЕ ЛЕГКИХ
Е. П. Голубинская, Ю. А. Ермола, А. В. Кубышкин, А. В. Геращенко, Т. В. Крамарь
Медицинская академия им. С. И. Георгиевского Крымского федерального университета им. В. И. Вернадского, Симферополь, Российская Федерация
FEATURES OF CYTOTOXIC IMMUNOPHENOTYPING OF MACROPHAGES IN FIBRO-CAVERNOUS PULMONARY TUBERCULOSIS
Golubinskaya E. P., Ermola Yu. A., Kubyshkin A. V., Gerashchenko A. V., Kramar T. V.
Medical Academy named after S. I. Georgyevsky of V. I. Vernadsky Crimean Federal University, Simferopol, Russian Federation
Изучены фрагменты легких 84 пациентов с фиброзно-кавернозным туберкулезом (ФКТ) с верифицированным выделением микобактерий (ФКТ-МБТ+) и 79 пациентов с ФКТ с отсутствием бактериовыделения (ФКТ-МБТ-). Им-мунопрофилирование клеточных популяций ткани легких с маркерами Т-хелперов 1 типа и цитотоксических лимфоцитов позволило определить пул эпителиоидных клеток с крупным везикулярным ядром округло-овальной формы, демонстрирующих цитоплазматическую реакцию, позитивную как для рецепторов СD4, так и CD8, исключительно у пациентов с активной бактериальной экскрецией. Локализация соответствовала интактной легочной ткани на границе резекции каверны и перикавернозного участка эмфиземы. Визуализировались группы таких клеток в просвете альвеол либо единичные клетки в «нишах» эпителиальной выстилки. При сопоставлении с рутинной окраской гематоксилином и эозином, а также с верификацией маркером макросиалина CD68 было доказано гистиоцитарное происхождение данной клеточной популяции. При этом CD68+, CD4+, CD8+ демонстрировали отрицательную реакцию с VEGF-A, что исключало их принадлежность к макрофагам 2 функционального типа, обладающим ремоделирую-щей активностью в отношении легочной ткани. Анализ ИГХ-реакций с маркером необратимой индукции апоптоза в макрофагальном пуле показал, что экспрессия Cаspаsе-3 визуализировалась во всех CD68+VEGF-A" макрофагах. Однако интенсивность цитоплазматической реакции была максимально выражена в зоне специфической грануляционной ткани макрофагов 1 функционального типа и в перикавернозных скоплениях CD68+, CD4+, CD8+ клеток. Показано, что ИГХ-идентификация популяции макрофагов с цитотоксическим иммунофенотипом (CD68+, CD4+, CD8+) в легочной ткани является диагностическим и прогностическим показателем активации и диссеминации ФКТ.
Ключевые слова: туберкулез, иммуногистохимия, T-лимфоциты, макрофаги
