CC BY
135
Є
Противовирусная активность водных экстрактов и полисахаридных фракций, полученных из мицелия и плодовых тел высших грибов
И. А. РАЗУМОВ, Т. А. КОСОГОВА, Е. И. КАЗАЧИНСКАЯ, Л. И. ПУЧКОВА, Н. С. ЩЕРБАКОВА,
И. А. ГОРБУНОВА, И. Н. МИХАЙЛОВСКАЯ, В. Б. ЛОКТЕВ, Т. В. ТЕПЛЯКОВА
Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора, р. п., Кольцово, Новосибирская область
Antiviral Activity of Aqueous Extracts and Polysaccharide Fractions from Mycelium and Fruit Bodies of Higher Fungi
I. A. RAZUMOV, T. A. KOSOGOVA, E. I. KAZACHINSKAYA, L. I. PUCHKOVA, N. S. SHCHERBAKOVA, I. A. GORBUNOVA, I. N. MIKHAILOVSKAYA, V. B. LOKTEV, T. V. TEPLYAKOVA
State Scientific Centre of Virology and Biotechnology VEKTOR, Koltsovo, Novosibirsk Region
Проведено изучение токсичности для клеток Vero и противовирусной активности 60 препаратов, приготовленных из высших грибов, базвдиомицетов (Ganoderma, Lentinus, Pleurotus, Laetiporus, Polyporus, Inonotus, Flammulina, Grifóla, Trametes). Антивирусная активность этих препаратов оценивалась с использованием вирусов Западного Нила (ВЗН) и простого герпеса 2 типа (ВПГ-2). Было обнаружено, что одиннадцать препаратов, полученных из грибов, относящихся к родам Ganoderma, Lentinus и Pleurotus, полностью подавляли инфекционную активность не менее чем 1000 ТЦЦ50 ВЗН и 100 бляшкообразующих единиц (БОЕ) ВПГ-2. Антивирусная активность этих препаратов связана, по-видимому, с наличием в их составе полисахаридов или их производных. Она возрастала по мере увеличения содержания суммарной полисахаридной фракции или её концентрирования в исследованных препаратах.
Ключевые слова: высшие грибы, мицелий, плодовые тела, водные экстракты, полисахаридные фракции, противовирусная активность, вирус Западного Нила, вирус простого герпеса 2 типа.
Sixty preparations of basidiomycetes (Ganoderma, Lentinus, Pleurotus, Laetiporus, Polyporus, Inonotus, Flammulina, Grifola, Trametes) were investigated with respect to their toxicity for Vero cells and antiviral activity. The antiviral activity was estimated with the use of the West Nile virus and type 2 Herpes simplex. It was shown that 11 preparations of Ganoderma, Lentinus and Pleurotus completely inhibited the infective activity in doses not lower than 1000 TCD50 (the West Nile virus) and 100 PPU (type 2 Herpes simplex). The antiviral activity of the preparations was likely due to the content of polysaccharides or their derivatives in the composition. It increased with increasing of the quantity of the total polysaccharide fraction or its concentration.
Key words: higher fungi, mycelium, fruit bodies, aqueous extracts, polysaccharine fractions, antiviral activity, the West Nile virus, type 2 Herpes simplex.
Введение
В последнее столетие достигнуты значительные успехи в борьбе с инфекционными заболеваниями, что позволило снизить смертность от них более чем в сто раз [1]. Однако, по данным ВОЗ, смертность от инфекций продолжает занимать лидирующее место в структуре смертности населения земного шара и фактически инфекционные болезни уносят жизни около 15 миллионов человек ежегодно [2, 3]. Существенная часть этих заболеваний вызывается различными вирусными агентами, так только количество больных вирусным гепатитом С достигает 130 миллионов чело-
© Коллектив авторов, 2010
Адрес для корреспонденции: Адрес для корреспонденции: 630559 р. п. Кольцово Новосибирского района Новосибирской области. Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор»
век на нашей планете [4 ]. Вторая половина XX и начало XXI столетия характеризуются увеличением частоты заболеваний, вызываемых вирусами, а также выявлением вирусной природы болезней неясной ранее этиологии и открытием новых вирусов, патогенных для человека [5]. Важно отметить, что открытие нового вирусного агента требует, а это сегодня происходит фактически ежегодно, тестирования уже известных антивирусных препаратов в отношении этих вирусов и проведения всего комплекса научных исследований по созданию новых антивирусных препаратов, эффективных в отношении вновь обнаруженных вирусов.
Другим аспектом этой проблемы является возникновение лекарственной устойчивости у хорошо известных вирусных агентов [6—7]. Это фактически делает необходимым постоянное тестирование современных вирусных штаммов на устойчивость к хи-
-е-
Є
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
миопрепатам и требует проведения антивирусной терапии при помощи нескольких антивирусных препаратов с различными механизмами противовирусного действия для исключения формирования лекарственно-устойчивых вирусных штаммов. Поэтому вопрос о необходимости разработки и поиска новых, нетрадиционных антивирусных препаратов представляется крайне важным и особо актуальным.
В настоящее время высшие грибы, в том числе используемые в пищу (в основном базидиомице-ты), являются источником различных лекарственных соединений, которые обладают противоопухолевой, антимикробной, иммуномодулирующей и противовирусной активностью [7, 8]. Многие высшие грибы были исследованы на противовирусную активность, и в результате было обнаружено наличие в некоторых из них веществ (соединений), вызывающих значительный антивирусный эффект против ряда вирусов, патогенных для человека [9, 10]. Так, было показано, что экстракты, полученные из гриба Rozites caperata, подавляли репликацию вируса простого герпеса 1 и 2 типов [11]. Выделенный из экстракта белок, обозначенный как RC-183, возможно, является новым антивирусным средством, которое может быть использовано в клиниках, а также может служить «ведущим» (прототипным) соединением для развития и синтеза новых антивирусных соединений [12—13]. Биологическую активность многих грибов связывают с наличием в них углеводов (полисахаридов), в том числе глюканов, глюкозаминог-ликанов, гетерогликанов. В грибной стенке они представлены свободными и связанными сахарами (например, полисахаридно-белковыми комплексами), количество которых достигает 60% и более от сухой биомассы [14—17].
В связи с вышесказанным, целью настоящей работы явилось изучение экстрактов из мицелия и плодовых тел высших грибов: выделение полисахаридных фракций и определение антивирусной активности этих экстрактов и фракций в отношении РНК-содержащего вируса Западного Нила и ДНК-содержащего вируса простого герпеса 2 типа.
Материал и методы
Объекты исследования и их культивирование. В работе были исследованы 60 препаратов (экстрактов и полисахаридных фракций) из высших грибов родов Ganoderma, Lentinus, Pleurotus, Laetiporus, Polyporus, Inonotus, Flammulina, Grifóla, Trametes, хранящихся в лаборатории коллекции грибных культур и простейших Государственного научного центра вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора (ГНЦ ВБ «Вектор»). Для подготовки препаратов использовали, в основном, биомассу грибов, полученную путем выращивания их в поверхностной культуре на пептонно-кукурузном агаре (ПКА) или жидкой среде №19 (с мелассой и кукурузным экстрактом) [18]. Некоторые из образцов были представлены плодовыми телами.
Приготовление водных экстрактов. Вариант А. Водный экстракт мицелия гриба, полученного путем поверхностного выращивания на жидкой или агаризованной среде, готовили
следующим образом. Биомассу замораживали при -20°С, затем размораживали, измельчали скальпелем, суспендировали в TEN-буфере (0,01М Трис, рН 7,5; 0,001М ЭДТА, 0,05М NaCl) (пробы № 22, 23,27, 28,30, 32, 34,) или в физиологическом растворе (пробы № 35, 41, 46/2) в соотношении (биомасса: буфер) 1:4 и разрушали ультразвуком при амплитуде 18—24 кГц в течение 5-10 мин во льду, используя ультразвуковой дезинтегратор (MSE, Англия). Для удаления нерастворимых осадков полученные экстракты центрифугировали в центрифуге J-2-21 (Весктап, США) 10 мин при 12000 об/мин.
Вариант Б. Экстракты из плодового тела гриба получали путем растирания образца в ступке, затем его суспендировали в стерильной дистиллированной воде, прогревали на кипящей водяной бане в течение 60 мин, центрифугировали и на-досадочную жидкость замораживали. Все клеточные экстракты хранили в замороженном состоянии при -20°С.
Выделение суммарной полисахаридной фракции (СПФ). Перед выделением полисахаридов экстракты размораживали, обрабатывали 96% этанолом, смешивая в объёмном отношении 1:1 при температуре 6—8°С в течение 18—24 часов. Осадок осаждали центрифугированием 20 мин на центрифуге J-2-21 (Весктап, США) при 8—10 тысяч об/мин и растворяли в 1—2 мл стерильной дистиллированной воды.
Определение содержания полисахаридов в пробах. Содержание полисахаридов в пробах определяли с использованием фенол сернокислотного метода [19] по оптической плотности при длине волны 200 нм на спектрофотометре СФ-16 [20].
Культура клеток. Перевиваемую культуру клеток Vero (почки африканской зеленой мартышки) поддерживали на питательной среде DMEM (ГНЦ ВБ «Вектор»), содержащей 5% сыворотки плода коровы («BioClot», Германия), глутамина 0,6 мг/мл, гентамицина 40 0,14 мг/мл («КРКА», Словения).
Вирусы. Штамм MS вируса простого герпеса 2-го типа (ВПГ-2) был получен из Американской коллекции типовых культур (АТСС). В ГНЦ ВБ «Вектор» вирусный штамм прошел 1 пассаж на культуре клеток Vero. До начала работ исходную суспензию, содержащую вирус, хранили в жидком азоте. Штамм Egypt 101 (Eg101) вируса Западного Нила (ВЗН) был получен из Государственной коллекции вирусных штаммов ГУ НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского РАМН (Москва, Россия).
Определение токсичности проб для клеток. Для определения токсичности на клетки в 96-луночные платы с культурой клеток Vero вносили экспериментальные пробы, которые предварительно были разведены на питательной среде DMEM (ГНЦ ВБ «Вектор»), содержащей 5% сыворотки. Экспозицию проводили в течение 1 часа при 37°С в атмосфере 5% СО2. Затем клетки трехкратно промывали средой DМEМ без сыворотки и заливали средой DMEM с 2% сыворотки крупного рогатого скота (ООО «БиолоТ», Москва), прогретой до 56°С. Наблюдение за состоянием клеток, обработанных препаратами и в контрольных необработанных рядах, проводили в течение семи суток при помощи световой микроскопии.
Экспериментальные препараты стерилизовали путем фильтрования через фильтр 0,2 мкм (Millipore, США).
Определение антивирусной активности. Изучение антивирусной активности грибных проб проводили, руководствуясь методами, представленными в Руководстве по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ [21] и статьей Госфармакопии [22]. Снижение инфекционного титра вируса оценивали после инкубации вирусной суспензии с экспериментальными препаратами в течение 1 ч при 37°С. Далее суспензии препаратов с вирусом вносили в лунки 96-луночных планшетов с культурой клеток. После адсорбции в течение 1 ч при 37°С монослой клеток промывали средой без сыворотки и заливали поддерживающую среду. Снижение инфекционного титра вируса, обработанного или инактивированного препаратами, выражали: для вируса простого герпеса 2 типа (ВПГ-2) в бляшкообразующих единицах (БОЕ) как описано [23], а для вируса Западного Нила (ВЗН) в 50% тканевой цитопатической дозе (ТЦД50) [24]. Ре-
Є
Таблица 1. Экспериментальные препараты экстрактов грибов, показавшие антивирусную активность
Номер препарата Наименование гриба (штамма) Длительность, способ и среда культивирования или источник получения Метод Токсичность приготовления для клеток пробы разведения 1:10
16 Ganoderma lucidum PSt 24 суток, поверхностное, ПКА Вариант А
56 Ganoderma lucidum K-1 15 суток, поверхностное, Механохимическая —
жидкая среда №19 обработка*
23 Pleurotus ostreatus HK-35 12 суток, поверхностное, ПКА Вариант А +
23-СПФ Pleurotus ostreatus HK-35 12 суток, поверхностное, ПКА СПФ из пробы 23 —
26 Pleurotus ostreatus, Харбин 12 суток, поверхностное, ПКА Вариант А —
26-СПФ Pleurotus ostreatus, Харбин 12 суток, поверхностное, ПКА СПФ из пробы 26 _
41 Pleurotus citrinopileatus 12 суток, поверхностное, ПКА Вариант А +
41-СПФ Pleurotus citrinopileatus 12 суток, поверхностное, ПКА СПФ из пробы 41 —
46/2 Lentinus edodes 3760 60 суток, поверхностное, жидкая среда №19 Вариант А —
46/2-СПФ Lentinus edodes 3760 60 суток, поверхностное, жидкая среда №19 СПФ из пробы 46/2 —
53 Lentinus edodes, Вьетнам Сухие плодовые тела после 5 лет хранения Механохимическая —
обработка*
Примечание. * — для получения этих образцов использовали специальную механохимическую обработку. Образцы были приготовлены в Институте химии твердого тела и механохимии СО РАН автором данного метода О. И. Ломов-ским [25]. Для пробы № 53 использовали плодовые тела гриба, а для пробы № 56 использовали высушенную биомассу гриба, полученную в поверхностной культуре на жидкой среде.
зультаты учитывали визуально при ежедневном наблюдении в световом микроскопе. Цитопатическое действие (ЦПД) обработанного вируса на клетки сравнивали с контрольными рядами: титрование вируса на клетках; клетки, незаражённые вирусом; клетки, незаражённые вирусом, но обработанные препаратами (тест на токсичность). Протоколы заполнялись на каждые сутки наблюдений. В тот день, когда выявляли ЦПД в лунках контрольного ряда титрования вируса (для ВПГ-2 обычно на 2-3 сутки, для ВЗН обычно на 3—5 сутки), учитывали результат титрования ВПГ-2 в БОЕ, ВЗН в ТЦД50 и инактивации этих вирусов исследуемыми препаратами, то есть меньшее количество или отсутствие 10—100 БОЕ для ВПГ-2 и отсутствие ЦПД для 100—10000 ТЦД50 ВЗН по сравнению с контролем.
Результаты и обсуждение
Оценка цитотоксического воздействия экстрактов из высших грибов на культуру клеток. Цитоток-сическая активность 60 экспериментальных препаратов была определена с использованием культуры клеток Vero. В течение 7 дней для всех препаратов в разведении 1:16 не было зарегистрировано видимой цитотоксичности. Для 9 препаратов в разведениях 1:2 — 1:8 наблюдалось цито-
токсичное действие. Это позволило использовать для определения антивирусной активности разведения препаратов от 1:10 и более.
Выявление антивирусной активности грибных препаратов. С этой целью нами был получен и протестирован на противовирусную активность набор, состоящий из 60 образцов. Свойства и состав грибныгх препаратов, проявивших антивирусную активность, представлены в таблице 1. Из всех исследованных препаратов противовирусной активностью обладали 11 образцов. Они оказались способными полностью инактивировать инфекционность вируса Западного Нила и вируса простого герпеса 2 типа в культуре клеток Vero. Противовирусной активностью обладали препараты приготовленные из грибов Ganoderma lucidum, Pleurotus ostreatus, Pleurotus citrinopileatus и Lentinus edodes. Количественная оценка антивирусной активности (табл. 2) показала, что некоторые препараты полностью ингибировали инфекционную активность не менее 1000 ТЦД50 ВЗН и 100
Таблица 2. Противовирусная активность препаратов грибов в отношении ВЗН и ВПГ-2
Номер препарата ВЗН*
ВПГ-2*
1000 ТЦЦ50 100 ТЦЦ50 100 БОЕ 10 БОЕ
16 1/160 1/320 1/40 1/40
56 1/1280 1/1280 1/10 1/320
23 1/40 1/80 — 1/20
23-СПФ (1/80) (1/80) (1/10) 1/40
26 1/10 1/10 — 1/20
№6-СПФ 1/20 1/40 1/10 1/20
41 н.о. н.о. —
41-СПФ — — 1/10 1/10
46/2 — — — 1/20
46/2-СПФ 1/160 1/160 1/10 1/40
53 1/1280 1/1280 1/10 1/40
Контроль титрования вируса — — — —
Примечание. * — разведения препаратов, вызывающие 100% инактивацию указанной дозы вирусов; «—» — нет эффекта инактивации; н. о. — не определяли.
e
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
Таблица 3. Сравнение противовирусного действия водных экстрактов (ВЭ) и суммарных полисахаридных фракций (СПФ) грибов рода Pleurotus на вирус Западного Нила.
Обозначение препарата (вид гриба, штамм, действующее начало)
ОП
при 2OO нм
B3H*
lOOOO TUÄ5O lOOO TЦД5o lOO TЦД5o
Pleurotus eryngii PSt (ВЭ) 0,257 — — —
Pleurotus eryngii PSt (СПФ) 0,425 — 1/10 1/20
Pleurotus djamor PSt (ВЭ) 0,198 — — 1/10
Pleurotus djamor PSt (СПФ) 0,421 — 1/10 1/20
Pleurotus ostreatus Н^З5 (ВЭ) 0,147 — — —
Pleurotus ostreatus Н^З5 (СПФ) 0,З0З — — 1/10
Pleurotus ostreatus K-06 (ВЭ) 0,2З2 — — 1/10
Pleurotus ostreatus K-06 (СПФ) 0,581 — 1/10 1/20
Pleurotuspulmonarius 2-59 (ВЭ) 0,0З7 — 1/20 1/40
Pleurotus pulmonarius 2-59 (СПФ) 0,ЗЗ0 1/10 1/40 1/80
Примечание. * — указаны разведения препаратов, вызывающие 100% нейтрализацию или инактивацию вируса; «—» — нет эффекта нейтрализации, наличие 100% ЦПД.
БОЕ ВПГ-2 в культуре клеток Vero. В большинстве случаев препараты инактивировали оба исследованных вируса. Причем, как правило, РНК-содер-жащий ВЗН инактивировался более эффективно, при больших разведениях, чем ВПГ-2.
Наибольшая противовирусная активность против 1000 ТЦД50 ВЗН была отмечена в разведении 1/1280 препарата № 56, полученного из поверхностной культуры Ganoderma lucidum К-1, а также для препарата № 53 (разведение 1/1280), приготовленного из плодового тела гриба Lentinus edodes. Антивирусный эффект против 100 БОЕ ВПГ-2 был менее значительным, исходя из разведений препарата. Он достигал максимума для препарата №16 (разведение 1/40), приготовленного из поверхностной культуры Ganoderma lucidum Pst. Препараты, проявляющие активность, различались не только источником получения (мицелий или плодовое тело), но и способом приготовления, методом и временем выращивания биомассы.
Определение влияния содержания полисахаридов в препаратах на антивирусную активность. Так как известно, что полисахариды могут обладать противовирусными свойствами [14—16], из водных экстрактов осаждением этанолом были выделены суммарные полисахаридные фракции и определена их противовирусная активность. Как видно из данных, представленных в табл. 2, полисахаридные фракции (препараты № 23-СПФ, 26-СПФ, 41-СПФ, 46/2-СпФ) проявляли более высокую антивирусную активность и некоторые (препараты № 23-СПФ, 41-СПФ) были менее токсичны для клеток, чем исходные водные экстракты, из которых они были приготовлены.
Для более детального рассмотрения и подтверждения полученных данных, мы провели дополнительное сравнительное изучение противовирусного действия водных экстрактов и суммарных полисахаридных фракций грибов рода Pleurotus на ВЗН в реакции нейтрализации. Было установлено, что увеличение содержания полисахаридов в препаратах, по сравнению с исходными
Влияние препарата СПФ штамма Pleurotus pul-monаrius 2-59 на цитопатическую активность ВЗН в культуре клеток при множественности инфицирования от 0,001 до 1 ТЦД50/клетку.
экстрактами, усиливает антивирусную активность суммарных полисахаридных фракций, выделенных из водных экстрактов грибов (табл. 3). Кроме того, необходимо отметить, что максимальная антивирусная активность для препаратов из грибов рода РІеитоШ, была выявлена у штамма Ріеигоїш риїтопатіш 2-59, СПФ которого в разведении 1:10 полностью ингибировала 10000 ТЦД50 ВЗН.
Как показано на рисунке, под действием СПФ штамма РІеитоШ риїтопапш 2-59 наблюдалось более чем 50% подавление инфекционной активности ВЗН при множественности инфицирования (МИ) 1 ТЦД50/клетку. Анализ полученных данных позволяет заключить, что соединения в составе СПФ достоверно подавляют инфекционную активность ВЗН, при заражении с МИ от 0,0001 до 1 ТЦД50/кл. При этом степень подавления цитопатической активности вируса находилась в прямой зависимости от МИ и концентрации (разведения) препарата. Антивирусное действие водных экстрактов и суммарных по-
О
е
лисахаридных фракций из этих грибов на ВЗН, который является типичным представителем семейства Flaviviridae (ICTV код 00.026), рода Flavivirus, описано впервые. Род флавивирусов включает в себя 53 вида вирусов и большинство из них вызывают тяжёлые заболевания домашних животных и человека. Наиболее значимые с медицинской точки зрения инфекционные заболевания связаны с вирусами Денге, Японского энцефалита, клещевого энцефалита, Западного Нила и жёлтой лихорадки. Обнаруженное антивирусное действие грибных препаратов против ВЗН может оказаться более широким по спектру вирусных патогенов и, по всей вероятности, эти препараты будут обладать противовирусной активностью и в отношении других представителй рода флавивирусов. В семейство Flaviviridae входит также такой важнейший патоген человека, как вирус гепатита С. Предположение об эффективности полученных препаратов в отношении вируса гепатита С также вполне закономерно, что требует проведения оценки возможной противовирусной активности грибных препаратов для лечения этого заболевания.
Заключение
В результате проделанной работы было показано, что антивирусным действием в отношении РНК-содержащего ВЗН и ДНК-содержащего ВПГ-2 обладают препараты грибов, относящихся к представителям родов Ganoderma (G.lucidum),
ЛИТЕРАТУРА
1. Lederberg J. Infectious disease as an evolutionary paradigm. Emer Infect Dis 1997; 3: 4: 417-423.
2. http://www.who.int/whr/2008/en/index.html
3. Morens D. M, Folkers G. K., Fauci A. S. The challenge of emerging and re-emerging infectious diseases. Nature 2004; 430: 6996: 242—249.
4. Alter M. J. World epidemiology of hepatitis C virus infection. J Gastroenterol. 2007; 13: 17: 2436—2441.
5. Локтев В. Б. Вирус клещевого энцефалита. Генетические особенности и его изменчивость в современном мире. Бюллетень СО РАМН. 2007; 4: 14—21.
6. Белова Н. В. Перспективы использования биологически активных соединений высших базидиомицетов в России. Микология и фитопатология. 2004; 38: 2: 1—7.
7. Griffiths P. D. A perspective on antiviral resistance. J Clin Virol 2009; 46: 1: 3—8.
8. Успехи медицинской микологии / Под ред. Ю. В. Сергеева. 2003; 1: 1—321.
9. Stamets P. MycoMedicinals / P. Stamets. An Informational Yreatise on Mushrooms: Printed in China, 2002; 96.
10. Brandt C. R., Pirano F. Mushroom antiviral. Recent Res Dev Antimicrob Agent Chemother 2000; 4: 11—26.
11. Piraino F, Brandt C. R. Isolation and partial characterization of an antiviral, RC-183, from the edible mushroom Rozites caperata. Antiviral Res 1999; 43: 2: 67—78.
12. Pirano F. F. The Development of the antiviral drug RC 28 from Rozites caperata (Pers.: Fr.) P. Karst. (Agaricomycetideae). Intern J Med Mushrooms 2005; 7: 356.
13. Gong M, Piraino F., Yan N. et al. Purification, partial characterization and molecular cloning of the novel antiviral protein RC 28. Peptides 2009; 30: 4: 654—659.
Pleurotus (P.eryngii, P.djamor, P.ostreatus, P.pulmonar-ius) и Lentinus (L.edodes). Это позволяет высказать предположение, что тип нуклеиновой кислоты вирусного агента не играет принципиальной роли в механизме антивирусного действия этих препаратов. При этом было установлено, что противовирусное воздействие у суммарных полисахаридных фракций грибов было выше, чем у исходных водных экстрактов, то есть антивирусная активность проб из грибов связана, по-видимому, с наличием полисахаридов и возрастает по мере увеличения содержания их в исходном материале или концентрирования суммарной полисахаридной фракции.
Препараты СПФ из Pleurotus pulmonarius 2-59 представляются наиболее перспективными для поиска и выделения антивирусных веществ, так как они проявляют весьма выраженную вирулицидную активность и обладают низкой токсичностью для культуры клеток. По-видимому, съедобные грибы рода Pleurotus, широко культивируемые во всем мире, представляют большой интерес для дальнейшего изучения, поиска и выделения антивирусных соединений. С этой целью целесообразно использование штаммов, полученных из сибирских популяций гриба вешенки, наиболее распространённых видов Pleurotus ostreatus и Pleurotus pulmonarius.
Работа выполнена при финансовой поддержке государственной программы поддержки ведущих научных школ (грант Президента Российской Федерации Hm-387.2008.4).
14. Wasser S. P. Medicinal mushrooms as a source of antitumor and immunomodulating polysaccharides. Appl Microbiol Biotechnol 2002; 60: 3: 258—2У4.
15. Ooi V. E. C., Liu F. Immunomodulation and anticancer activity of poly-saccharide-protein complex. Curr Med Chem 2000; У: У: У10—У29.
16. Zaidman B. Z., Yassin M., Mahajna J., Wasser S. P. Medicinal mushroom modulators of molecular targets as cancer therapeutics. Appl Microbiol Biotechnol 2005; 6У: 4: 453-468. Review.
ІУ. Бухало A. С. Высшие съедобные базидиомицеты в чистой культуре. ^ев: Наукова думка, 1988.
18. Tenmêoea T. В. Биоэкологические аспекты хищных грибов-гифо-мицетов. 1999; 252.
19. Dibois M., Gilles K. A., Hamilton J. K. et al. Analytical Chemistry. 1956; 23: 3: 350—356.
20. Чxeнкeлu В. A. Биологически активные вещества базидиомицета Coriolus pubescens (Schum: Fr.) Quel. и их использование. PАСXH. Сиб.отд-ление. ИФ ИЭВС и ДВ. Новосибирск, 2006; 288.
21. Pуководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М.: Минздрав PФ, 2000. 1—398.
22. Государственная фармакопея С OOP// Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье. М., Медицина, 1990. 11 изд. вып. 2. том 2. 18У—209.
23. ËeHHem Э., Шмидт Н. Лабораторная диагностика вирусных и рик-кетсиозных заболеваний. М.: 19У4; 44—95.
24. Razumov I. A., Kazachinskaia E. I., Ternovoi V. A. et al. Neutralizing monoclonal antibodies against Russian strain of the West Nile virus. Viral Immunol 2005; 18: 3: 558—568.
25. ËoMoecêuü О. И. Прикладная механохимия: применение в пищевой промышленности и в сельском хозяйстве. Обработка дисперсных материалов и сред. Одесса, 2002; 12: 133—149.
