CC BY
169
Противоопухолевые и антиоксидантные свойства водорастворимых полисахаридов из мицелия базидиального гриба Flammulina velutipes
Л. М. КРАСНОПОЛЬСКАЯ'*, М. И. ШУКТУЕВА', А. В. АВТОНОМОВА', М. С. ЯРИНА', Б. Р. ДЖАВАХЯН', Е. Б. ИСАКОВА', В. М. БУХМАН'2
' НИИ по изысканию новых антибиотиков им. Г. Ф. Гаузе, Москва 2 Российский онкологический научный центр. им. Н. Н. Блохина МЗ РФ, Москва
Antitumor and Antioxidant Properties of Water-Soluble Polysaccharides from Submerged Mycelium of Flammulina velutipes
L. M. KRASNOPOLSKAYA'*, M. I. SHUKTUEVA', A. V. AVTONOMOVA', M. S. YARINA', B. R. DZHAVAKHYAN', E. B. ISAKOVA', V. M. BUKHMAN'2
Gause Institute of New Antibioties, Moscow
N. N. Blokhin Russian Scientific Cancer Centre, Moscow
Цель исследования состояла в получении водорастворимых полисахаридов из погруженного мицелия Flammulina velutipes, выращенного в оптимизированных условиях, и оценке их противопухолевыгх и антиоксидантнх свойств. Оптимизация состава жидкой питательной среды, осуществленная методами математического планирования, позволила более чем в 2 раза увеличить выгход биомассы (до 35 г/л) и сократить длительность процесса культивирования. Погруженный мицелий наиболее перспективного штамма F.velutipes Fv-1, полученный на оптимизированной среде, содержал 14,8% водорастворимыгх полисахаридов, включавших остатки глюкозы, галактозы, фукозы, маннозы, ксилозы, рамнозы, 31,6% белков, содержащих все незаменимые аминокислоты за исключением триптофана, 2,5% общих липидов, вит амины группы В (В1, В5, В6). В опытах in vivo на модели перевиваемого мышиного лимфолейкоза Р 388 противоопухолевую активность продемонстрировали порошок погруженной биомассы гриба, водный экстракт мицелия и суммарная фракция водорастворимых полисахаридов. За противоопухолевую активность отвечали, прежде всего, полисахариды гриба, поскольку по мере их очистки повышались показатели торможения роста опухоли протестированных препаратов. Максимальное торможение роста опухоли, вызываемое водорастворимыми полисахаридами, составило 94%. Суммарная фракция водорастворимых полисахаридов F.velutipes штамм Fv-1 обладала антиоксидантной активностью. Антиоксидантная емкость (АОЕ) суммарной фракции этого препарата быыа выше таковой водорастворимых полисахаридов из погруженного мицелия Grifola frondosa, но уступала АОЕ водорастворимыгх полисахаридов из погруженного мицелия Ganoderma lucidum.
Ключевые слова: Flammulina velutipes, погруженное культивирование, оптимизация состава среды, мицелий, водорастворимые полисахариды, противоопухолевая активность, антиоксидантная активность.
The aim of the study was to evaluate antitumor and antioxidant properties of water-soluble polysaccharides from submerged mycelium of Flammulina velutipes grown under optimized conditions. The optimization of the nutrient medium composition allowed to increase the biomass yield by more than 2 times (up to 35 g/l) and to reduce the time of the cultivation process. The submerged mycelium of F.velutipes strain Fv-1 contained 14.8% of a water-soluble polysaccharides, 31.6% of proteins, 2.5% of total lipids, vitamins B (B1, B5, Bg). The polysaccharides contained glucose, galactose, fucose, mannose, xylose, rhamnose. The proteins contained all the essential amino acids except for tryptophan. Dry powder of the submerged mycelium, water extract of the mycelium and total fraction of the water-soluble polysaccharides demonstrated the antitumor activity against murine lymphocytic leukemia Р 388 in vivo. The antitumor activity of the substances was mainly due to the polysaccharides, since their purification increased the tumor growth inhibition. The maximum tumor growth inhibition by the water-soluble polysaccharides amounted to 94%. The total fraction of the water-soluble polysaccharides from F.velutipes strain Fv-1 demonstrated antioxidant activity. The antioxidant capacity (AOC) of the water-soluble fraction from F.velutipes was higher than that of the water-soluble polysaccharides from the submerged mycelium of Grifola frondosa, but inferior to the AOC of the water-soluble polysaccharides from the submerged mycelium of Ganoderma lucidum.
Key words: Flammulina velutipes, submerged cultivation, optimization of medium composition, mycelium, water-soluble polysaccharides, antitumor activity, antioxidant activity.
© Коллектив авторов, 2016
Адрес для корреспонденции: 119021, г. Москва, ул. Большая Пироговская, д.11. НИИ по изысканию новых антибиотиков им. Г. Ф. Гаузе. * Email: [email protected]
Введение
Полисахарида: базидиальных грибов известны своей высокой и многосторонней биологической активностью. В частности, полисахарида: лекарственно-съедобного базидиального гриба опёнка зимнего Flammulina velutipes (Curtis) Singer обладают иммуномодулирующими, противоопухолевыми, антиоксидантными и антитоксическими свойствами, препятствуют адгезии патогенных грибов на эпителиальных клетках, оказывают положительное воздействие на когнитивные функции и др. [1—7]. Биологически активные полисахарида: F.velutipes различаются по своей структуре и физико-химическим свойствам, в том числе по составу моносахаридов, типу гликозидной связи, молекулярной массе, наличию тройной спиральной структуры, способности растворяться в воде или в щёлочи [1—3, 5, 8, 9]. Источником биологически активных полисахаридов служат плодовые тела гриба, его мицелий, выращенный в условиях погруженной культуры, и культуральная жидкость [5, 9, 10]. Оптимизация условий погруженного культивирования позволяет резко увеличить выход биомассы продуцента и, как следствие, эн-дополисахаридов, а также в ряде случаев сокращать длительность процесса выращивания. Использование разработанной ранее стратегии оптимизации [11] показало, что штаммы F.velu-tipes, так же как и лекарственного базидиального гриба Hypsizygus ulmarius (Bull.) Redhead [12], представляют собой высокопродуктивные культуры. Выход их воздушно-сухой биомассы в результате оптимизации условий погруженного культивирования существенно превышает 30 г/л.
Цель настоящего исследования заключалась в получении препарата водорастворимых полисахаридов F.velutipes и оценке его противоопухолевых и антиоксидантный свойств.
Материал и методы
В работе использовали два штамма F.velutipes — Fv-1 и Fv-4, а также Ganoderma lucidum (Curtis) P. Karst. штамм Gl-5-1 и Grifóla frondosa (Dicks.) Gray штамм Gf-1 из коллекции лаборатории биосинтеза биологически активных соединений ФГБНУ «НИИНА». В качестве плотной питательной среды для культивирования использовали картофельно-глюкозный агар. Погруженное культивирование осуществляли в колбах на качалке по описанному способу [13, 14]. По окончании культивирования мицелий отделяли от культуральной жидкости фильтрованием через бязь, сушили при 40°С и измельчали на лабораторной мельнице. Содержание влаги в воздушно-сухом мицелии составляло 5—6%.
Оптимизацию состава жидкой питательной среды проводили с применением методов математического планирования [15].
Водный экстракт порошка мицелия получали автоклави-рованием (1,2 атм., 2 ч) навески мицелия (36 г/л) в дистиллированной воде. Готовый экстракт хранили при -20°C. Суммарную фракцию водорастворимых полисахаридов погруженного мицелия получали путём добавления в водный экстракт 4 объёмов 96% этанола. Осадок отделяли центрифугированием при 3000 об/мин в течение 20 мин. Затем осадок
растворяли в небольшом количестве воды, раствор фильтровали и лиофилизировали.
Содержание углеводов в воднык экстрактах мицелия определяли с использованием фенол-сернокислотного метода [16].
Определение моносахаридного состава. Для определения состава нейтральный: моносахаридов выделенной суммарной полисахаридной фракции, образцы подвергали полному гидролизу действием 2М трифторуксусной кислоты в присутствии мио-инозита в качестве маркера, в течение 8 ч при 100°С. Полученные моносахариды переводили в ацетаты полиолов, которые идентифицировали и определяли их соотношение с применением газожидкостной хроматографии на хроматографе НР 5890А.
Определение аминокислотного состава проводили по методу, заключающемуся в гидролизе образца до аминокислот и последующем количественном определении образовавшихся аминокислот с помощью аминокислотного анализатора Био-троник LC-7000 [17].
Определение витаминов Вь В5 и Вб проводили методом ВЭЖХ в обращеннофазовом ион-парном варианте в изокра-тическом режиме со спектрофлуорометрическим детектированием (интервал длин волн 220—650 нм) [17].
Определение общего содержания жиров проводили экстракционным методом с предварительным гидролизом навески [17].
Изучение противоопухолевого действия препаратов проводили in vivo на модели перевиваемого мышиного лимфолей-коза Р388. Мышей B6D2F1 получали из питомника РАМН «Крюково» и выдерживали 21 день в карантине. Контрольные и экспериментальные группы комплектовали по 8—10 животным. Инокуляция опухолевый: клеток проводили в день «0» подкожно, в количестве 106 клеток/мышь. Испытуемые препараты вводили ежедневно, начиная с 3 суток опыта, длительность курса лечения составляла 10 сут. Препараты вводили с помощью зонда внутрижелудочно. Использовали суспензию порошка погруженного мицелия в крахмальном клейстере, водный экстракт погруженного мицелия и водный раствор водорастворимых полисахаридов в концентрации 2 мг/кг [14]. В течение экспериментов контролировали рост опухоли. Торможение роста опухоли (ТРО) рассчитывали по формуле: ТРО (%)=(Мк-Мо)/(Мк)х100, где Мк и Мо — средняя расчётная масса опухоли (РМО) в контроле и опыте, соответственно. Массу опухоли рассчитывали по формуле РМО (мг) = (aXbXc)/2, где РМО — расчётная масса опухоли, a, b, c — 3 наибольших взаимоперпедикулярныгх диаметра опухолевого узла в мм. Достоверность различий средних значений массы опухоли определяли по ¿-критерию Стъюдента. За достоверные принимали различия при p<0,05.
Антиоксидантные свойства полисахаридов определяли кулонометрическим методом с помощью электрогенериро-ванного брома на анализаторе «Эксперт-006» НПК ООО «Эконикс-Эксперт». Прибор калибровали по стандартным растворам аскорбиновой кислоты. Суммарную антиокси-дантную емкость (АОЕ) выгаисляли по [18] в пересчете на аскорбиновую кислоту, рутин и кверцетин.
Результаты и обсуждение
Для установления трофических потребностей штаммов Fv-1 и Fv-4 провели сравнительное изучение сочетаний трёх источников углерода (глюкоза, масло растительное и меласса) и четырёх источников азота (соевая мука, пептон, дрожжевой экстракт и кукурузный экстракт). Наибольший выход биомассы обоих штаммов обеспечивала жидкая питательная среда, содержащая масло растительное и соевую муку. Оптимизация состава этой среды была осуществлена методами математичес-
Рис. 1. Накопление биомассы штаммов F.velutipes Fv-1 и Fv-4 в процессе погруженного культивирования.
кого планирования эксперимента. Опыт по плану полного факторного эксперимента выявил необходимость увеличения содержания источников углерода и азота, опыт по методу крутого восхождения установил их оптимальные концентрации для каждого из штаммов. Изучение процесса накопления биомассы на исходной и разработанных жидких питательных средах показало, что оптимизация среды привела к более чем двукратному увеличению выхода биомассы штаммов и сокращению длительности процесса (рис. 1). Показатели максимального выхода биомассы исследованных штаммов были практическими одинаковыми: 35,4±1,0 г/л — у штамма Fv-1 и 35,3±0,55 г/л — у штамма Fv-4. Однако штамм Fv-1 обеспечивал достижение максимального показателя содержания биомассы на сутки раньше и требовал для этого меньшего расхода источников углерода и азота. Учитывая, что противоопухолевая активность водных экстрактов погруженной биомассы обоих штаммов, оцененная в предварительных опытах, была близка, дальнейшая работа была проведена со штаммом Fv-1.
Погруженный мицелий штамма Fv-1, полученный в оптимизированных условиях культивирования, содержал 15,4% водорастворимых полисахаридов. В состав водорастворимых полисахаридов, по данным ГЖХ, входили остатки глюкозы, галактозы, фукозы, маннозы, ксилозы и рамнозы (табл. 1). Основными моносахаридами являлись глюкоза и галактоза. Об общем содержания белка в мицелии судили по сумме аминокислот, составившей 31,6%. В мицелии F.velutipes штамм Fv-1 было обнаружено 17 аминокислот, в том числе все незаменимые аминокислоты за исключением триптофа-
100
90
70
Î 60 пз
8 50
40
30
20
10
m
î
14
Сутки
■ Контроль роста опухоли
■ Биомасса
п Водный экстракт
Полисахаридная фракция
Рис. 2. Расчётная масса опухоли в контрольной и опытных группах животных при внутрижелудочном введении препаратов из погруженного мицелия F.velutipes штамм Fv-1, %. Модель - перевиваемый мышиный лимфолейкоз Р 388.
на. Больше всего в погруженной биомассе содержалось глутаминовой кислоты (14,7%), пролина (9,4%), аспарагиновой кислоты (9,0%) и лизина (8,8%). Суммарное количество липидов, выделенных из биомассы F.velutipes штамм Fv-1, составило 2,5%. Количественное определение витаминов Вь В5 (РР) и В6 показало, что в погруженной биомассе F.velutipes штамм Fv-1 наиболее высоко было содержание витамина PP — 266 мг/100 г биомассы. Количество витамина B1 составило 3,2 мг/ 100 г биомассы, B6 — 7,9 мг/100 г.
На основе погруженной биомассы F.velutipes штамм Fv-1 были получены препараты для изучения противоопухолевого действия метаболитов продуцента: порошок погруженной биомассы, водный экстракт погруженной биомассы и суммарная фракция водорастворимых полисахаридов мицелия. Опыты проводили in vivo на модели солидного перевиваемого мышиного лимфолейкоза Р 388. Препараты вводили внутрижелудочно в течение 10 дней. Все изученные препараты показали противоопухолевое действие, выраженное в торможении роста опухоли. Наибольшие показатели противоопухолевого действия изучаемых препаратов были отмечены на 14-е сутки опыта, т.е. на вторые сутки после окончания лечения. При введении животным порошка биомассы максимальное значение ТРО составило 52%, при введении водного экстракта биомассы — 86%, при введении суммарной полисахаридной фракции — 94%. Далее к 18 суткам опыта противоопухолевый эффект препаратов уменьшался (рис. 2). Увеличение показателей ТРО в ряду от биомассы к полисахаридной фракции говорит о том, что противоопухолевое действие
Таблица 1. Состав нейтральных моносахаридов в суммарной фракции водорастворимых полисахаридов из мицелия F.velutipes штамм Fv-1
Моносахарид Глюкоза Галактоза Фукоза Манноза Ксилоза Рамноза
Содержание, % 8,8 8,9 4,4 4,1 2,5 1,6
Таблица 2. Антиоксидантная ёмкость суммарных фракций водорастворимых полисахаридов из погруженного мицелия базидиомицетов в пересчете на аскорбиновую кислоту, рутин и кверцетин в г/100 г образца (п=4, р=0,95)
Вид базидиомицета АОЕ, г/100 г
В пересчёте на аскорбиновую кислоту В пересчёте на рутин В пересчёте на кверцетин
Flammulina velutipes 4,89+0,64 2,90+0,38 1,14+015
Ganoderma lucidum 5,14+1,14 3,06+0,68 1,21+0,27
Grifóla frondosa 4,27+0,90 2,54+0,54 1,00+0,21
определяет водорастворимая полисахаридная составляющая мицелия. Известно, что противоопухолевое действие полисахаридов базидиальных грибов основано на их иммунномодуляторных свойствах. Ранее было показано, что испытуемая полисахаридная фракции мицелия F.velutipes штамм бу-1 индуцировала выработку интерферона лимфоцитами человека, при этом выявленный ци-токин не являлся интерфероном у [19].
Для определения антиоксидантных свойств использовали метод кулонометрического титрования с помощью электрогенерированного брома, АОЕ выражали в расчётном количестве аскорбиновой кислоты, рутина или кверцетина в г на 100 г испытуемого образца. Тестировали суммарную фракцию водорастворимых полисахаридов из погруженного мицелия F.velutipes штамм бу-1. Для сравнения использовали аналогичные полисаха-ридные фракции лекарственных базидиомицетов ОЛиайиш и О.А-опйож, выделенные из их погруженного мицелия. Полученные результаты (табл. 2) свидетельствовали о наличии антиоксидантной активности у всех изученных полисахаридных препаратов. Наибольшее значение АОЕ было отмечено у суммарной фракции водорастворимых полисахаридов из погруженного мицелия ОЛиайиш, наименьшее — у водорастворимых полисахаридов из мицелия О.А-опйож. Сравнение полученных результатов с данными литературы показывает, что АОЕ грибных водорастворимых полисахаридов сопоставимы по величине с АОЕ водных экстрактов растений. Так в пересчёте на рутин (г/ 100 г абсолютно сухой массы) АОЕ водного экстракта свежих плодов боярышника зеленомякотного составляет 1,24+0,11, АОЕ водного экстракта сушёных образцов сорта капусты Арктика — 13,13+0,40 [18].
Заключение
Проведенное исследование показало, что лекарственно-съедобный базидиальный гриб F.velu-tipes является биотехнологически перспективным продуцентом биологически активных полисаха-
ридов, способным к интенсивному накоплению биомассы в условиях погруженной культуры. Достигнутый выход погруженной биомассы изученных штаммов F.velutipes представляет собой один из лучших известных в литературе показателей и приближается к выходу погруженного мицелия H.ulmarius, составляющему 36—38 г/л культураль-ной жидкости. Суммарная фракция водорастворимых полисахаридов из погруженого мицелия H.ulmarius также показала высокую противоопухолевую активность в опытах in vivo [12]. Результаты исследования подтвердили целесообразность применяемой стратегии оптимизации условий погруженного культивирования грибных организмов. Погруженный мицелий F.velutipes штамм Fv-1 представляет собой потенциальное сырье для получения целого ряда биологически активных соединений. В этой связи он был охарактеризован по содержанию водорастворимых полисахаридов с установлением моносахаридного состава, по содержанию аминокислот, липидов и витаминов группы В. Изучение противоопухолевых свойств препаратов из погруженного мицелия F.velutipes штамм Fv-1 показало, что искомой активностью обладали порошок погруженной биомассы, её водный экстракт, суммарная фракция водорастворимых полисахаридов мицелия. За противоопухолевую активность отвечали, прежде всего, полисахариды гриба, поскольку по мере их очистки повышались показатели торможения роста опухоли протестированных препаратов. Как известно, противоопухолевые свойства полисахаридов базируются, прежде всего, на активации клеточного и гуморального иммунитета. Ранее было показано, что исследуемая суммарная фракция водорастворимых полисахаридов из погруженного мицелия F.velutipes штамм Fv-1 стимулировала выработку лейкоцитами крови человека интерферона, который не являлся интерферо-ном-у [19]. Антиоксидантная ёмкость суммарной фракции водорастворимых полисахаридов из мицелия F.velutipes штамм Fv-1 была выше таковой
водорастворимых полисахаридов G.frondosa, но уступала АОЕ водорастворимых полисахаридов G.lucidum.
Таким образом, в результате проведения исследования с применением биотехнологических
ЛИТЕРАТУРА
1. Wua M, Luob X, Xub Xi, Weib W, Yub M, Jiangb N, Yeb L, Yanga Z, Feic X. Antioxidant and immunomodulatory activities of a polysaccharide from Flammulina velutipes. J Tradit Chin Med 2014; 34: 6: 733—740.
2. Leung M.Y.K., Fung K.P., Choy Y.M. The isolation and characterization of an immunomodulatory and anti-tumor polysaccharides preparation from Flammulina velutipes. Immunopharmacology 1997; 35: 3: 255—263.
3. Yang W, Pei F., Zhao L, Hu Q. Purification, characterization and anti-proliferation activity of polysaccharides from Flammulina velutipes. Carbohydrate Polymers 2012; 88: 2: 474—480.
4. Huang L, Chen M, Li S, Shah, Nagendra P. Antioxidant activities and bifidogenic properties of water-soluble crude polysaccharide preparations from Flammulina velutipes and Hypsizygus marmoreus mushrooms. Intern J Probiotics & Prebiotics 2015; 10: 1: 37—42.
5. Pang X., Yao W, Yang X., Xie C, Liu D, Zhang J., Gao X. Purification, characterization and biological activity on hepatocytes of polysaccharides from Flammulina velutipes mycelium. Carbohydrate Polymers 2007; 70: 3: 291—297.
6. Kashina S, Villavicencio L.L.F., Balleza M, Sabanero G.B., Tsutsumi V., Lopez M.S. Extract from Flammulina velutipes inhibits the adhesion of pathogenic fungi to epithelial cell. Pharmacognosy Res 2016; 8: 1: 56—60.
7. Yang W, Yu J., Zhao L, Ma N, fang Y, Pei F., Mariga A.M., Hu Q. Polysaccharides from Flammulina velutipes improve scopolamine-induced impairment of learning and memory of rats. J Funct Foods 2015; 18: A: 411—422.
8. Kashina S., Villavicencio L.L.F., Zaina S., Ordaz M.B., Sabanero G.B., Fujiyoshi V.T., Lopez M.S. Activity of extracts from submerged cultured mycelium of winter mushroom, Flammulina velutipes (Agaricomycetes), on the immune system in vitro. Intern J Med Mushrooms 2016; 18: 1: 49—57.
9. Jing P., Zhao S.-J., Lu M.-M., Cai Z., Pang J, Song L.-H. Multiple-fingerprint analysis for investigating quality control of Flammulina velutipes fruiting body polysaccharides. J Agric Food Chem 2014; 62: 50: 12128—12133.
10. Ma Z., Cui F., Gao X., Zhang J., Zheng L., Jia L. Purification, characterization, antioxidant activity and anti-aging of polysaccharides by Flammulina velutipes SF-06. Antonie van Leeuwenhoek 2015; 107: 1: 73—82.
11. Краснополъская Л.М., Белицкий И.В., АнтимоноваA.B., Соболева Н.Ю. Стратегия оптимизации способов культивирования лекарственных грибов. В сб.: Успехи медицинской микологии. Мат второго всероссийского конгресса по медицинской микологии. М.: 2004; III: 222—224./Krasnopol'skaja L.M., Belickij I.V., Antimonova A.V., Soboleva N.Ju. Strategija optimizacii sposobov kul'tivirovanija lekarstvennyh gribov. V sb.: Uspehi medicinskoj mikologii. Mat vtorogo vserossijskogo kongressa po medicinskoj mikologii. M.: 2004; III: 222224. [In Russian]
12. KrasnopolskayaL., LeontievaM., AvtonomovaA., IsakovaE., BelitskiiI.V., Usov A.I., Buchman V.M. Antitumor properties of submerged cultivated biomass and extracts of medicinal mushrooms of genus hypsizygus singer. Int J Med Mushrooms 2008; 10: 1: 25—35.
СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ:
Краснополъская Лариса Михайловна — зав.лабораторией, ФГБНУ «НИИНА, Москва
Шуктуева М.И. — научный сотрудник), ФГБНУ «НИИНА, Москва
Автономова A.B. — старший научный сотрудник), ФГБНУ «НИИНА, Москва
Ярина М.С. — научный сотрудник, ФГБНУ «НИИНА, Москва
методов была получена фракция водорастворимых полисахаридов из мицелия лекарственно-съедобного базидиомицета F.velutipes, обладающая выраженной противоопухолевой активностью, антиок-сидантными и интерфероногенными свойствами.
13. Бухман В.М., Трещалина Е.М., Краснополъская Л.М., Исакова Е.Б., Се-дакова Л.А., Автономова A.B., Леонтъева М.И., Соболева Н.Ю., Белицкий И.В., Баканов A.B. Получение и биологические свойства водных экстрактов и их композиций из мицелия базидиомицетов. Антибиотики и химиотер 2007; 52: 1—2: 4—9. / Buhman V.M., Treshhalina E.M., Krasnopol'skaja L.M., Isakova E.B., Sedakova LA, Avtonomova A.V., Leont'eva M.I., Soboleva N.Ju., Belickij I.V., Bakanov A.V. Poluchenie i biologicheskie svojstva vodnyh jekstraktov i ih kompozicij iz micelija bazid-iomicetov. Antibiotiki i khimioter 2007; 52: 1—2: 4—9. [In Russian]
14. Краснополъская Л.М., Ярина М.С., Автономова A.B., Усов А.И., Исакова Е.Б., Бухман В.М. Сравнительное изучение противоопухолевой активности полисахаридов из мицелия Ganoderma lucidum в опытах in vivo. Антибиотики и химиотер 2015; 60: 11—12: 29—34./ Krasnopol'skaja L.M., Jarina M.S., Avtonomova A.V., Usov A.I., Isakova E.B., Buhman KM.Sravnitel'noe izuchenie protivoopuholevoj aktivnosti polisaharidov iz micelija Ganoderma lucidum v opytah in vivo. Antibiotiki i khimioter 2015; 60: 11—12: 29—34. [In Russian]
15. Максимов В Н. Многофакторный эксперимент в биологии. М.: Из-во МГУ, 1980; 280./ Maksimov V.N. Mnogofaktornyj jeksperiment v biologii. M.: Iz-vo MGU, 1980; 280. [In Russian]
16. Dubois M., Gilles K.A., Hamilton J.K., Rebers P.A., Smith F. Colorimetric method for determination of sugars and related substances. Analyt Chem 1956; 28: 3: 350—356.
17. Руководство по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище. Руководство Р 4.1.1672-03. М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004; 240./ Rukovodstvo po metodam kontrolja kachestva i bezopasnosti biologicheski aktivnyh dobavok k pishhe. Rukovodstvo R 4.1.1672-03. M.: Federal'nyj centr gossanjepidnadzora Minzdrava Rossii, 2004; 240. [In Russian]
18. Лапин А. А., Романова H. Г., Зеленков В. Н. Применение метода гальваностатической кулонометрии в определении антиоксидантной активности различных видов биологического сырья и продуктов их переработки (учебное пособие). М.: Изд-во РГАУ — МСХА им. К. А. Тимирязева, 2011; 196. / Lapin A. A., Romanova N. G., Zelenkov V. N. Primenenie metoda gal'vanostaticheskoj kulonometrii v opredelenii antioksidantnoj aktivnosti razlichnyh vidov biologicheskogo syr'ja i pro-duktov ih pererabotki (uchebnoe posobie). M.: Izd-vo RGAU - MSHA im. K. A. Timirjazeva, 2011; 196. [In Russian]
19. Щегловитова O.H., Бабаянц А.А., Склянкина H.H., Болдырева H.A., Леонтъева М.И., Автономова А.В., Краснополъская Л.М.Полисахари-ды из мицелия Ganoderma lucidum и Flammulina velutipes индуцируют интерферон в культуре лейкоцитов крови человека, но различаются по типу продуцируемого интерферона. Иммунопатол аллергол ин-фектол (Труды II Междисциплинарного микологического форума, Москва, 14—15 апреля 2010 г.), 2010; 1: 276. / Shheglovitova O.N., Babajanc A.A., Skljankina N.N., Boldyreva N.A., Leont'eva M.I., Avtonomova A.V., Krasnopol'skaja L.M. Polisaharidy iz micelija Ganoderma lucidum i Flammulina velutipes inducirujut interferon v kul'-ture lejkocitov krovi cheloveka, no razlichajutsja po tipu produciruemogo interferona. Immunopatol allergol infektol (Trudy II Mezhdisciplinarnogo mikologicheskogo foruma, Moskva, 14—15 aprelja 2010 g.), 2010; 1: 276. [In Russian]
Джавахян Б.Р. — лаборант-исследователь, ФГБНУ «НИИНА, Москва
Исакова Е.Б. — научный сотрудник), ФГБНУ «НИИНА, Москва
Бухман В.М. — зав.лабораторией, ФГБНУ «НИИНА; ФГБУ РОНЦ В. им. Н.Н.Блохина МЗ РФ, Москва
