CC BY
137
АБИСИЛИН ПРОТИВООПУХОЛЕВАЯ АКТИВНОСТЬ □ 17
УДК 615.277.3:616-006.-092.4
Л.А. Лацерус1, Н.М. Пинигина1, З.С. Смирнова2, А.Ю. Барышников2 ПРОТИВООПУХОЛЕВАЯ АКТИВНОСТЬ ПРЕПАРАТА АБИСИЛИН®
'ООО «Инитиум-Фарм», Москва 2РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва
Контактная информация
Лацерус Людмила Анатольевна, кандидат медицинских наук, генеральный директор ООО «Инитиум-Фарм» адрес: 142000, Московская область, г. Домодедово, Каширское ш., д. 7, тел.: +7(499)-722-2357 e-mail: initium-pharm@yandex.ru
Статья поступила: 15.12.2009, принята к печати 25.03.2010.
Резюме
Работа посвящена изучению противоопухолевой активности на перевиваемых опухолях мышей и крыс препарата Абисилин®, содержащего в своем составе природный комплекс терпеноидов, синтезируемый хвойными деревьями. Выявлена противоопухолевая активность препарата Абисилин® в отношении меланомы В-16, аденокарциномы молочной железы Са-755, эпидермоидной карциномы легкого Льюис (LLC), рака шейки матки (РШМ-5) и саркомы М-1 крыс. Установлена терапевтическая доза препарата Абисилин равная 100 мг/кг при ежедневном пероральном введении животным с перевиваемыми опухолями. Не выявлено токсических проявлений препарата Абисилин®.
Ключевые слова: Абисилин®, перевиваемые опухоли, противоопухолевая активность.
L.A. Latseruz1, N.M. Pinigina1, Z.S. Smirnova2, A.Yu. Baryshnikov2 ANTICANCER ACTIVITY OF ABISILIN®
'Initium-Parm, LTD, Moscow
2N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center of RAMS, Moscow Abstract
We have studied the anticancer activity of Abisilin® in vivo animal models. Abisilin® is a complex of terpenoids synthesized in coniferous trees. The data reveal that Abisilin® possessed the anticancer activity in the treatment of melanoma B-16, Lewes lung carcinoma, carcinoma of uterine cervix, mammary gland adenocarcinoma and sarcoma M-1. The effective therapeutic dose of Abisilin® was 100 mg/kg of body weigh when administrated per os. The toxic side-effects was not observed.
Key words: Abisilin, transplantable tumors, anticancer activity.
Введение
В настоящее время одним из перспективных направлений в онкологии является поиск природных средств растительного происхождения, эффективных при лечении злокачественных новообразований.
Возрастает интерес к исследованию противоопухолевой активности наиболее распространенных в природе веществ, относящихся к классу терпенои-дов. Противоопухолевые свойства выявлены у таких известных соединений терпеноидной структуры и их производных, как например, таксаны, каротиноиды, витамины А и Е, бетулиновая кислота, лимонен и другие [5; 6].
Одним из основных источников получения различных групп растительных терпеноидов являются хвойные породы деревьев (сосна, ель, пихта, лиственница), которые по их количественному содержанию и качественному составу многократно превосходят все другие виды, широко распространенные в мире растений [4].
На основе природного комплекса терпенои-дов хвойных деревьев разработана лекарственная форма Абисилина® для перорального применения [8]. У субстанции Абисилина® (Абисил - пихты сибирской терпены) и его лекарственной формы для местного и наружного применения, включенных в Государственный реестр лекарственных средств, выявлены антимикробные, противовоспалительные, ранозаживляющие, иммуномодулирующие и другие
фармакологически значимые эффекты [1; 2]. Предполагается, что большой набор моно-, сескви-, ди- и тритерпеноидов, содержащихся в препарате Абиси-лин® и обеспечивающий многофункциональное фармакологическое действие, может также оказывать эффективное терапевтическое действие при онкологических заболеваниях.
Целью настоящего исследования являлось изучение противоопухолевой активности Абисили-на® на перевиваемых опухолях мышей и крыс.
Материалы и методы
Работа выполнена на мышах-гибридах первого поколения ББР1 (С57 В1/6 х бБл/2) и Б1 (С57 Б1/6 х СБЛ), мышах чистых линий СБЛ, БЛЬБ/е, ББЛ/2 самках и самцах массой 20-25 г, а также на самках беспородных крыс массой 200-250 г. Мышей и крыс получали из отдела лабораторных животных РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН и содержали на обычном рационе питания.
Противоопухолевое действие Абисилина® изучали на широком спектре перевиваемых опухолей мышей: меланоме В-16, эпидермоидной карциноме легкого Льюис (ЬЬС), аденокарциноме молочной железы Са-755, раке шейки матки РШМ-5, аденокарциноме толстой кишки АКАТОЛ, асцитной форме опухоли Эрлиха и лимфоцитарной лейкемии Р-388, а также полиморфноклеточной саркоме М-1 крыс [3; 7].
Лекарственная форма Абисилина® представляет собой 20 %-ный масляный раствор для перорального применения.
Абисилин® вводили в дозах 10; 50; 100; 150; 300; 500 мг/кг ежедневно перорально в течение 10 дней, а также двукратно в дозе 2500 мг/кг с интервалом 96 или 216 ч (на 2-й и 6-й дни или 2-й и 11-й дни опыта). В качестве растворителя использовали подсолнечное масло.
Для перевивки солидных опухолей мышей (Са-755, АКАТОЛ, меланома В-16, ЬЬС, РШМ-5) опухолевую ткань измельчали ножницами до гомогенной консистенции, добавляли среду 199 до соотношения 1:10, и 0,5 мл полученной суспензии, что составляет приблизительно 50 мг опухолевой массы, вводили подкожно в область правой подмышечной впадины мышам, а для перевивки саркомы М-1 крыс добавляли среду 199 до соотношения 1 : 5. Тогда как асцитные опухоли (Р-388 и опухоль Эрлиха) перевивали внутрибрюшинно асцитной жидкостью разведенной средой 199 по 0,3 мл, содержащей 106 опухолевых клеток
Лечение начинали через 48 ч после перевивки солидных опухолей и через 24 ч после перевивки лимфолейкоза Р-388 и асцитной формы опухоли Эрлиха. Группы формировались с учетом получения статистически достоверных результатов: контрольная группа состояла не менее чем из 10, опытная группа - 6-8 животных.
Критериями оценки противоопухолевой активности служили: торможение роста опухоли (ТРО, %) и увеличение продолжительности жизни (УПЖ, %) подопытных животных по сравнению с контрольными [3; 7].
ТРО вычисляется по формуле:
(Ук - Уо)
ТР0(%)=кхЮТ•«
Ук - средний объем опухолей в контрольной группе (мм3), Уо - средний объем опухолей в опытной группе (мм3).
УПЖ вычисляется по формуле:
УПЖ (%) =
(СПЖо - СПЖк)
, где
СПЖк х 100
СПЖк - средняя продолжительность жизни животных в контрольной группе (дни),
СПЖо - средняя продолжительность жизни животных в опытной группе (дни).
Минимальные критерии активности - торможение роста опухоли >50 %, увеличение продолжительности жизни >25 %. Токсичность Абиси-лина® оценивалась по ранней гибели опытных мышей по сравнению с гибелью контрольных животных и состоянию внутренних органов животных (селезенка, легкие, наличие метастазов в легких), изменению массы тела по сравнению с исходной.
Статистическая значимость противоопухолевого эффекта Абисилина® по отношению к животным группы контроля (нелеченным) определялась по методу Фишера-Стьюдента. Различия между сравниваемыми группами считались статистически достоверными при р<0,05.
Результаты и обсуждение
В результате проведенных исследований установлено, что на меланоме В-16 Абисилин® про-
являл кратковременный умеренный статистически значимый противоопухолевый эффект только в дозах 10 мг/кг и 100 мг/кг при его введении в течение 10 дней - ТРО составило 66 % (на 13 день опыта) и 63 % (на 7 день опыта) соответственно, а также в дозе 2500 мг/кг при двукратном введении с интервалом 96 ч (ТРО=62 %) на 7-й день опыта (табл. 1). В тоже время Абисилин был неэффективен в дозах 50; 300 и 500 мг/кг при ежедневном введении в течение 10 дней и в дозе 2500 мг/кг при двукратном введении с интервалом в 216 ч. При применении Абисилина® в суммарной дозе 5000 мг/кг токсических проявлений не выявлено.
На аденокарциноме молочной железы Са-755 противоопухолевая активность Абисилина® исследована в диапазоне доз от 10 до 2500 мг/кг при приеме внутрь масляного раствора препарата в трех режимах и посредством смазывания опухоли дважды в день в течение 10 дней (табл. 2). На Са-755 статистически значимый противоопухолевый эффект Абисилина® был выявлен в дозе 10 мг/кг (ТРО составило 59 % на 7-й день опыта) и в дозе 100 мг/кг (ТРО-62 % на 7-й день и 65 % на 10-й день). В группе мышей, которым проводили наружное смазывание опухоли, УПЖ составило 27 % и было выше минимального критерия эффективности (УПЖ=25 %), несмотря на отсутствие эффекта торможения роста опухоли.
На эпидермоидной карциноме легкого Льюис противоопухолевый эффект Абисилина® выявлен в дозе 100 и 150 мг/кг при пероральном введении на 7-й день после перевивки опухоли: ТРО=57 и 56 % соответственно (табл. 3). В последующие сроки наблюдения эффективность лечения снижалась. При этом УПЖ составило 22 и 14 % (р>0,05). Умеренный противоопухолевый эффект Абисилина® наблюдался также в дозе 2500 мг/кг (ТР0=60 % на 13-й день опыта) при двукратном пероральном введении с интервалом 216 ч. Проведенные исследования выявили кратковременный противоопухолевый эффект Абисили-на® на РШМ-5 после ежедневного перорального введения в течение 5 дней (табл. 4). Максимальное торможение роста опухоли показано на 7-е сутки от начала опыта в дозе 150 мг/кг (ТРО=61 %). Затем эффективность лечения снижалась. На аденокарциноме толстой кишки мышей АКАТОЛ Абисилин® был неэффективен в дозах 50 и 100 мг/кг при ежедневном пероральном введении в течение 10 дней (табл. 5). Однако препарат проявлял слабый противоопухолевый эффект на 7-й день от начала лечения в дозе 500 мг/кг при ежедневном введении в течение 10 дней (ТРО=26 %) и на 28-й в дозе 2500 мг/кг и при двукратном введении с интервалом 96 ч (ТРО=26 %).
При изучении противоопухолевой активности Абисилина® на саркоме М-1 крыс показано, что препарат проявлял умеренную терапевтическую эффективность непосредственно после введения его в течение 5 дней в дозе 100 мг/кг (на 7-й день опыта): ТРО=54 %, р<0,05 (табл. 6). Наблюдался также противоопухолевый эффект препарата при двукратном введении с интервалом 216 ч в дозе 2500 мг/кг на 7-й и 16-й дни от начала опыта (ТРО=68 % и 53 % соответственно).
При изучении противоопухолевой активности Абисилина® на асцитной форме опухоли Эрлиха при ежедневном пероральном введении в течение 10 дней в дозах 50, 100 и 150 мг/кг, а также на лимфоцитарной лейкемии Р-388 мышей в дозах 50 и 100 мг/кг препарат не оказывал противоопухолевого действия - УПЖ в исследуемых дозах было ниже минимального критерия эффективности.
Таблица 1
Противоопухолевая активность Абисилина® при пероральном введении на меланоме В-16
Доза, мг/кг Дни введения ТРО, % УПЖ, % Г ибель от ток сичности*
дни после перевивки опухоли
7 13 17 21
10 2-11 7 66** 25 14 14 0/8
50 2-11 0 34 9 8 8 0/8
100 2-11 63** 28 10 1 9 0/8
300 2-11 0 10 3 14 4 0/7
500 2-11 14 20 20 10 8 0/7
2500 2,6 62** 29 26 11 9 0/7
2500 2,11 13 47 11 16 9 0/8
0,25*** 2-11 +5**** +15 +7 +6 0 0/8
*п/п - число павших к общему числу животных в группе;
**р<0,05 по отношению к нелеченному контролю;
***0,25 мл подсолнечного масла (растворитель);
****«+» означает стимуляцию роста опухоли._____________________________________________________________
Таблица 2
Противоопухолевая активность Абисилина® на аденокарциноме молочной железы Са-755 мышей
Доза Абисили-на® мг/кг Дни введе- ния Путь введения ТРО, % УПЖ, % Г ибель от токсичности*
Дни после перевивки опухоли
7 10 13 17
10 2-11 per os 59** 38 35 17 4 0/7
50 2-11 per os 15 50 38 12 8 0/7
100 2-11 per os 62** 65** 35 20 3 0/7
300 2-11 per os 19 24 12 19 11 0/7
500 2-11 per os 24 28 32 0 0 0/8
2500 2, 6 per os 38 26 21 9 0 0/8
2500 2, 11 per os 13 10 5 30 1 1/8
0,25*** 2-11 per os +11**** +9 +6 +5 +1 0/8
20 %-ный масляный раствор 2-11 Смазывание опухоли 2 раза в день 11 7 14 0 27 0/8
*п/п - число павших к общему числу животных в группе; **р<0,05 по отношению к контролю; ***0,25 мл подсолнечного масла (растворитель); **** «+» означает стимуляцию роста опухоли.
Таблица 3
Противоопухолевая активность Абисилина® при пероральном введении на LLC
а, кг з /к Дм Дни введения ТРО, % УПЖ, % Г ибель от ток сичности*
Дни после перевивки опухоли
7 13 17 21
50 2-11 4 3 2 5 7 0/8
100 2-11 51 11 18 12 13 0/8
150 2-11 57** 5 17 4 22 0/8
300 2-11 16 10 13 2 0 0/8
500 2-11 40 40 45 28 16 0/8
100 2-6 56** 18 13 6 14 0/8
2500 2, 6 33 43*** 39*** 27 23 0/8
2500 2, 11 53 60** 51*** 43 16 0/8
*п/п - число павших к общему числу животных в группе;
**р<0,05 по отношению к контролю; ***р 0,05 по отношению к контролю.
Таблица 4
Противоопухолевая активность Абисилина® при пероральном введении на РШМ-5 мышей
Доза, мг/кг Дни введения ТРО, % УПЖ, % Г ибель от ток сичности*
Дни после перевивки опухоли
7 12 19 25 31
10 2-11 12 11 8 16 19 3 0/8
50 2-11 33 12 5 27 26 15 0/8
100 2-11 22 7 9 4 1 7 0/8
150 2-11 61** 2 8 7 2 10 0/8
500 2-11 13 5 2 13 20 0 0/8
2500 2,6 43 8 3 10 2 0 0/8
2500 2,11 35 16 35 31 32 9 0/8
*п/п - число павших к общему числу животных в группе; **р<0,05 по отношению к контролю.__________________
Таблица 5
Противоопухолевая активность Абисилина® при пероральном введении на аденокарциноме толстой кишки мышей АКАТОЛ
Доза, мг/кг Дни введения ТРО, %
Дни после перевивки опухоли
7 12 21 28 34
50 2-11 8 9 3 6 0
100 2-11 3 2 6 18 0
500 2-11 26* 8 15 20 12
2500 2,6 19 22 0 26* 17
*р>0,05 по отношению к контролю
Таблица 6
Противоопухолевая активность Абисилина® при пероральном введении на саркоме М-1 крыс_____________
Доза, мг/кг Дни введения ТРО, %
дни после перевивки опухоли
7 12 16 21
50 2-11 8 7 10 2
100 2-11 54* 7 4 0
300 2-11 24 9 2 10
500 2-11 45 14 3 0
2500 2, 11 68* 23 53* 40
*р<0,05 по отношению к контролю
В результате экспериментальных исследований, полученных при изучении противоопухолевой активности на перевиваемых опухолях, определена оптимальная терапевтическая
Выводы
1. Показано, что Абисилин® при пероральном введении обладает противоопухолевой активностью в отношении 5 перевиваемых солидных опухолей при использовании в различных режимах применения: Са-755 (ТРО=59-65 %), меланома В-16 (ТРО=62-66 %), LLC (ТРО=56-60 %), РШМ-5 (ТРО=61 %), саркома М-1 (ТРО=68 %).
2. Не выявлено противоопухолевого действия Абисилина® на лимфоцитарной лейкемии Р-388 и асцитном варианте опухоли Эрлиха.
3. Терапевтическая доза Абисилина® при ежедневном пероральном введении животным с перевиваемыми солидными опухолями составляет 100 мг/кг.
4. Абисилин® не вызывает токсических проявлений в суммарной дозе 5000 мг/кг как при ежедневном введении в дозе 500 мг/кг в течение 10 дней, так и при двукратном введении в дозе 2500 мг/кг.
Литература
1. Государственный реестр лекарственных средств. - М., 2004. - Т. 1. - С. 93.
2. Лацерус Л.А., Носков А.П., Пинигина Н.М. Биологическая активность и клиническая эффективность нового фитопрепарата "Абисил-1" // Современные проблемы педиатрии и детской хирургии: Материалы Сибирско-Американской научно-практической конференции. Иркутск, 7-8 октября 1998 г. - Иркутск: Изд-во Иркутского университета, 1998. - С. 233-8.
3. Методические указания по изучению противоопухолевой активности фармакологических веществ. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - Под ред. Хабриева Р.У. - М.: Медицина, 2005. - С. 637-52.
4. Пентегова В.А., Дубовенко Ж.В., Ралдугин В.А., Шмидт Э.П. Терпеноиды хвойных растений. - Новосибирск: Наука, 1987. - 97 с.
5. Семенов А.А. Очерк химии природных соединений. - Новосибирск: Наука. Сибирская издательская фирма РАН, 2000. - 664 с.
6. Трещалина Е.М. Противоопухолевая активность веществ природного происхождения. - М.: Практическая медицина, 2005. - 272 с.
7. Экспериментальная оценка противоопухолевых препаратов в СССР и США. - Под ред. З.П. Софьиной, А.Б. Сыркина (СССР), А. Голдина, А. Кляйна (США). - М.: Медицина, 1979. - 296 с.
8. PCT/RU2008/000147. Pub.No.: W0/2009/113902, 17.09.2009. Pinigina N.M., Latserus L.A., Baryshnikov A.U. et. al. Antitumoral terpenoid pharmaceutical composition “Abisilin” exhibiring an-giogenesis-inhibitig action.
доза Абисилина®, которая составила 100 мг/кг при ежедневном пероральном введении в течение 5 дней. Абисилин® не вызывал токсического действия у всех взятых в опыты животных.
