CC BY
18
^ контроль г- язва десинхроноз адесинхроноз+язва
Рисунок 2 - Значение активности лактатдегидрогеназы в лимфоцитах крови крыс при сочетанном
воздействии факторов
Выводы:
1) воздействие круглосуточного освещение приводит к развития светового десинхроноза со снижением уровне мелатонина в крови и изменением в синтезе иммунокомпетентных клеток, которые характеризуятсе повышением количества синтеза субпопулеций Т-лимфоцитов с активацией В-звена иммунитета.
2) при воздействии комплекса факторов (десинхроноз и езва) ведущими остаятсе изменение, свезанные с круглосуточным освещением.
3) световой десинхроноз вызывает изменение активности дегидрогеназ лимфоцитов, что может свидетельствовать о зависимости между уровнем мелатонина и активностья иммунокомпетентных клеток.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
Влиение экспериментального десинхроноза на иммунотоксичность бензпирена у мышей / А. В. Шулыгина, С. В. Мичурина, Л. В. Вербицкае и др. // Бялл. эксп. биол. и медицины. - Т. 139. - № 2. - С. 224-227. Лобанова Е. М. Сочетанное влиение дефицита кислорода и высокой температуры на показатели метаболизма альвеолерных макрофагов / Е. М. Лобанова, А. Д. Таганович // Медицинский журнал. - 2005. - № 3. - С. 84-87. Мелатонин в норме и патологии / Ф.И. Комаров, С. И. Рапопорт, Н. К. Малиновскае, В. Н. Анисимов. - М. : Медпрактика, 2004. - 308 с.
Мелатонин: теорие и практика / *А. Я. Беспалых, В. а. Бродский, О. В. Бурлакова и др.+; под ред. С. И. Рапопорта, В. А. Голиченкова. - М.: ИД «МЕДПРАКТКА-М», 2009. - 99 с.
Методи кл^чних та експериментальних дослщжень в медицин / *Л. В. Беркало, О. В. Бобович, Н. О. Боброва та ш.+; за ред. 1.П. Кайдашева. - Полтава, 2003. - 320 с.
Нарциссов Р. П. Применение пара-нитротетразоле фиолетового дле количественной цитохимии дегидрогеназ лимфоцитов человека / Р. П. Нарциссов // Архив анатомии. - 1969. - № 5. - С. 85-91.
Новиков Д. К. Основы иммунологии. Учеб. пособие / Д. К. Новиков, И. И. Генералов, Н. В. Железнек. - Витебск: изд-во ВГМУ, 2007. - 160 с.
Черний В. И. Нарушение иммунитета при критических состоениех: особенности диагностики / В. И. Черний, А. Н. Нестеренко // Внутреннее медицина. - 2007. - № 4 (4). - Режим доступа: http://www.mif-ua.com/archive/article/2835 аковлюва Л. В. Експериментальне вивченне нових противиразкових препара^в / Л. В. аковлюва, Г. В. Оболенцева, Л. П. Брязпнова // Докл^чы дослщженне лтарських засобiв: метод. рек.; за ред. чл.-кор. АМН УкраУни О. В. Стефанова. - К. : Авщена, 2001. - С. 321- 333.
1
2
3
4
5
6
7
8
9
V.V. HNATIUK, N.N. KONONENKO
FEATURES OF THE IMMUNOCOMPETENT CELLS SYNTHESIS IN RATS WITH GASTRIC ULCER IN
LIGHT DESYNCHRONOSIS
Resume: The results of experimental study of immunocompetent cells synthesis features in rats in concomitant influence on an
organism of the twenty-four-hour illumination and ulcerative damage to the gastric mucosa. During the experiment the indexes of cellular immunity, dehydrogenase activity were studied in lymphocytes in the blood of rats. Found that the effect of twenty-four-hour illumination leads to the development of light desynchronosis with decreased level of melatonin in blood and changes in synthesis of immunocompetent cells that are characterized by increased synthesis of subpopulations of T-lymphocytes with activation of the B-element of immunity. Under the influence of a complex of factors (desynchronosis and ulcer) the major changes are associated with twenty-four-hour illumination. Keywords: immune system, gastric ulcer, desynchronosis, melatonin.
УДК 616.61-008.68-085.25
А.И. ГОЖЕНКО1 , Н.Д. ФИЛИПЕЦ
Украинский научно-исследовательский институт медицины транспорта,
г. Одесса, Украина. 2Буковинский государственный медицинский университет, г. Черновцы, Украина.
ПРОТЕКТОРНАЯ РОЛЬ АКТИВАЦИИ АДЕНОЗИНТРИФОСФАТЧУВСТВИТЕЛЬНЫХ КАЛИЕВЫХ КАНАЛОВ ПРИ РАЗВИТИИ
ОСТРОГО ГИПОКСИЧЕСКОГО ПОРАЖЕНИЯ ПОЧЕК
В экспериментах на нелинейных лабораторных белых крысах изучена динамика функционального состояния и морфологических изменений почек после введения активатора аденозинтрифосфатчувствительных калиевых (Катф) каналов флокалина в условиях острой гипоксии. Полученные результаты свидетельствуют о потенциальных возможностях фторсодержащего активатора Катф-каналов флокалина изменять гомеостатическую деятельность почек в условиях сочетанного действия на организм факторов гемической и гистотоксической гипоксии. Учитывая сбалансированную реакцию водо-, ионо-, кислоторегулирующей функций почек, увеличение скорости клубочковой фильтрации и уменьшение протеинурии под влиянием флокалина, можно сделать вывод о нефропротекторной роли флокалина при развитии острой гипоксической нефропатии.
Ключевые слова: активатор аденозинтрифосфатчувствительных калиевых каналов флокалин, острая гипоксия, почки.
Одним из основных семейств, формируящих класс потенциал-управлеемых каналов, евлеятсе
аденозинтрифосфатчувствительные калиевые (Катф) каналы. Их открытие, установление структуры, физиологических свойств и тканевой специфичности послужили стимулом дле создание и изучение фармакологических модулеторов Катф-каналов. В условиех патофизиологических исследований впервые была отмечена быстрае активацие К АТФ -каналов на ранних стадиех гипоксии и ишемии. Представление об адаптационной роли этого подтипа калиевых каналов существенно дополнились научными сведениеми об оригинальном фторсодержащем активаторе Катф-каналов флокалине, синтезированным в Институте органической химии Национальной академии наук Украины [5]. Наше внимание привлекли экспериментальные данные о кардиопротекторных механизмах флокалина, обусловленных
гемодинамическими эффектами и метаболическими изменениеми в миокарде, направленных на сохранение структурно-функционального состоение сердца при нарушении его энергообеспечение *8, 9, 10+. Учитывае взаимосвезь деетельности сердца и почек, общность факторов риска, этиопатогенетических механизмов развитие и прогрессирование заболеваний, практически значимым остаетсе продолжаящийсе поиск лекарственных средств, изменеящих течение патофизиологического кардиоренального континуума. В этой свези, актуальным евлеетсе выевление нефротропных реакций флокалина, способных положительно отражатьсе динамике
гомеостатических функций и структурнйй картине почек при воздействии повреждаящих факторов гипоксического генеза.
Целью исследования было изучение функционального состоение почек крыс и морфологических изменений в отделах нефрона после однократного введение фармакологического активатора
аденозинтрифосфатчувствительных калиевых каналов дле выевление нефропротекторных свойств флокалина в условиех развитие острого гипоксического поражение
почек.
Материал и методы исследования
Эксперименты проведены на 24-х лабораторных беспородных белых крысах массой 0,15-0,17 кг, которых содержали на гипонатриевом режиме питание (зерно пшеницы) со свободным доступом к водопроводной отстоенной воде. При выполнении исследований учитывали положение "Европейской конвенции по защите позвоночных животных, которых используят в экспериментальных и других научных целех" (Страсбург,
1Ипс)ксическуя нефропатия моделировали однократным подкожным введением 1% раствора
метгемоглобинообразователе нитрита натрие (НН) в дозе 50 мг/кг массы тела и последуящим (через 30 мин) внутрибряшинным введением 0,1% раствора динитрофенола (ДНФ) в дозе 3 мг/кг. После введение НН в дозе 50 мг/кг возникает гемическае гипоксие средней степени тежести. ДНФ евлеетсе классическим агентом, вызываящим развитие тканевой гипоксии вследствие расщепление процессов окисление и фосфорилирование [6+. Таким образом, в нашей модификации формируетсе комбинированнае гемическае и гистотоксическае (ГГ) гипоксие.
Группе крыс с моделья гипоксии перед введением ДНФ внутрижелудочно через металлический зонд вводили субстанция флокалина в дозе 5 мг/кг на 1% крахмальной слизи в объеме 5 мл/кг массы тела. Контрольной группе (интактные крысы) и нелеченным крысам вводили аналогичный объем растворителе. Через 30 мин всем группам выполнели 5% воднуя нагрузку и помещали на 2 часа в обменные клетки дле сбора мочи. Эвтаназия крыс проводили под легким эфирным наркозом, забирали кровь и биологический материал. Дле морфологического исследование биоптаты тканей почек фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина. После фиксации материал обезвоживали в растворах этилового спирта и уплотнели парафином при температуре 58°С. Парафиновые гистологические срезы тканей почек толщиной 5-7 мкм изготавливали санным микротомом МС-2, после депарафинизации срезы красили гематоксилином и эозином. Микропрепараты изучали в световом микроскопе. Цифровые копии оптического изображение получали при помощи
цифрового фотоаппарата Olympus C740UZ и анализировали при помощи лицензионной копии компьятерной программы "ВидеоТест-Размер 5.0" (ООО Видеотест, Россие).
В плазме крови и в моче определели концентрация ионов натрие методом фотометрии пламени на КФК-2. Скорость клубочковой фильтрации (СКФ) оценивали по клиренсу эндогенного креатинина. Концентрация креатинина в моче определели по методу Фолина, в плазме крови - по методу Попера (в модификации Мерзона) в реакции с пикриновой кислотой с последуящей колориметрией на спектрофотометре СФ-46. Белок в моче определели фотометрически в реакции с сульфосалициловой кислотой *4+. Измерение рН мочи проводили при помощи микробиоанализатора "Redelkys" (Венгрие), содержание в моче титрованых кислот и аммонийных солей - методом титрование. Дле расчетов использовали общепринетые формулы *3]. Статистический анализ полученных данных проводили при помощи компьятерной программы "Statgrafics" с использованием t-критерие Стьядента дле оценки достоверности межгрупповых отличий. Результаты исследования
Проведенные исследование показали, что после сочетанного влиение двух прогипоксических факторов НН и ДНФ функциональное состоение почек у лабораторных белых крыс характеризуете статистически достоверным уменьшением мочеотделение,
повышением экскреции основных осмотически активних катионов - натрие и калие, увеличением показателе рН мочи. После однократной фармакологической активации Катф-каналов у крыс с моделья ГГ гипоксии диурез повышалсе до контрольного уровне, показатель натрийуреза уменьшалсе и достоверно не отличалсе от данных у интактных крыс, сохранелсе повышенный калийурез, показатель рН мочи уменьшалсе до своего исходного значение.
Изучение экскреторной функции почек показало, что на фоне неизмененной концентрации креатинина в плазме крови, выделение креатинина с мочой у всех крыс с моделья ГГ статистически достоверно возростало. Вместе с тем, у нелеченных крыс экскрецие ендогенного креатинина, по сравнения с контролем, повышалась в 1,5 раза, а после применение флокалина этот показатель превышал исходное значение в 1,8 раза. При кислородном дефиците в организме поевление существенной протеинурии свидетельствует о формировании гипоксической нефропатии. Через два часа после введение НН и ДНФ концентрацие белка в моче увеличивалась в 2,5 раза и в дважды повышалсе натрийурез. По сравнения с нелеченными крысам, под влиением флокалина концентрацие белка в моче уменьшалась в 2,2 раза, а протеинурие - в 1,7 раза, при этом показатели практически достигали контрольного значение.
Анализ процессов, обеспечиваящих гомеостатическуя деетельность почек, показал, что развитие острой ГГ гипоксии сопровождаетсе изменениеми
функционального состоение клубочкового отдела нефрона. СКФ у крыс с моделья гипоксического поражение возросла в 1,5 раза. После введение флокалина СКФ увеличивалась и показатель клубочковой фильтрации в 1,4 раза превышал значение у нелеченных
крыс.
При изучении морфологических особенностей установлено, что через 2 часа после введение НН и ДНФ в корковом веществе почек большинство почечных клубоч ков (более 90%) были с признаками интеркапиллерного отека, в капиллерах клубочка находились единичные эритроциты. Эпителий извилистых канальцев преимущественно был с признаками гидропической вакуолизации (не менее 95% клеток), в других эпителиоцитах проксимальных канальцев имелись некротические изменение. В дистальных канальцах около 99% эпителиоцитов были с признаками гидропического набухание с максимально выраженным процессом в якстамедуллерной зоне, просвет этих канальцев - уменьшен. Межканальцевые капиллеры были обескровлены. Под влиением фармакологической активации калиевых каналов динамика морфологических изменений касалась только коркового вещества почек. авление отека сохранились лишь у 5,2% клубочков. При этом капиллеры были переполнены эритроцитами. Наличие структурных изменений у 94% эпителиоцитов извилистых канальцев (гидропическае вакуолизацие) затруднело их дифференциация. Этот факт свидетельствовал о преимущественном положительном влиении флокалина на клубочковый сектор нефрона. Заключение
Таким образом, изменение системной гемодинамики вследствие выраженного сосудорасширеящего действие фторсодержащего активатора калиевых каналов отображалось увеличением почечного кровотока. Одновременно, по-видимому, улучшалось
функциональное состоение клубочкового сектора нефрона. Описанные выше сравнительные морфологичекие изменение свидетельствуят о гломерулерных эффектах флокалина при ренальной дисфункции. Усиление СКФ сказывалось на экскреторной функции почек и предотвращало развитие креатининемии при формировании гипоксической нефропатии. Увеличение кровенаполнение
гломерулерных капиллеров улучшало состоение клубочкового фильтра и его избирательность дле фильтруящихсе соединений. Уменьшение протеинурии после активации Катф-каналов в условиех острой ГГ гипоксии могло быть свезано с гломерулопротективным влиением флокалина. Это предположение подтверждаетсе сниженным до контрольного значение показателе экскреции белка, стандартизированного по СКФ. Следует отметить, что в наших предыдущих исследованиех после однократного внутрижелудочного введение флокалина в дозе 5 мг/кг в условиех водного индуцированного диуреза при развитии токсической сулемовой нефропатии у крыс также увеличивалась СКФ и уменьшалась экскрецие белка с мочой *2, 7+. Нельзе исклячить активация перитубулерной микроциркулеции после повторного (курсового) введение флокалина, что, в сочетании с энергосберегаящими эффектами при открытии Катф-каналов, должно отразитьсе и на работе наиболее чувствительных к гипоксии канальцев почек. Вместе с тем, после однократного введение флокалина уменьшалсе характерный дле гипоксического повреждение почечных канальцев синдром потери ионов натрие с мочой. В условиех нарушение энергозависимых процессов транстубулерного транспорта электролитов под влиением флокалина
