CC BY
21. В.Н. Сюрин, А.Я. Самуйленко, Б.В. Соловьев, Н.В.
Фомина. Инфекционный бронхит птиц // Вирусные болезни животных. М., 1998. С. 183-198.
2. В.Д. Сергеев. Диагностика инфекционного бронхита кур // БиоВю. 2001. № 2. С. 16.
3. Н.И. Троценко, Р.В. Белоусова, Э.А. Преображенская. Практикум по ветеринарной вирусологии. 2-е изд. М.: Колос, 1999. 272 с.
4. G.R. Dhinakar, R.C. Jones. Infectious bronchitis virus: immunopathogenesis of infection in the chicken // Avian Pathol. 1997. V 26. P. 677-706.
5. A.E. Castro, B. Reynolds, D. Hill et al. Diagnosis of avian infectious bronchitis virus in clinical and field specimens using tracheal ring organ cultures and se-
rology // Proc 37th West. Poultry Dis. Conf.; February 29-March 2. USA, California, Davis, 1988. P. 36-40.
6. H. Li, H. Yang. Sequence analysis of nephropatho-genic infectious bronchitis virus strains of the Massachusetts genotype in Beijing // Avian Path. 2001. V 30, № 5. P. 535-541.
7. H. Csermeliy, R. Thijssen, F Orthel et al. Serological classification of recent IBV isolates by the neutralization of immunofluorescent foci // Avian Pathol. 1988. V 17. P. 139-148.
8. J.H. Darbyshire, J.G. Rowell, J.K. Cook, R.W Peters Taxonomic studies on strains of infectious bronchitis virus using neutralization tests in tracheal organ cultures // Archiv. Virol. 1979. V 61. P. 227-238.
УДК 619:616.98:578.834.11:636.52/.58:616-085.371 О.А. Чупина
ПРОТЕКТИВНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ИЗОЛЯТА «ЩЕЛКОВСКИЙ» ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО БРОНХИТА КУР
Введение
Инфекционный бронхит кур (ИБК) является серьезной проблемой для современного промышленного птицеводства. Борьба с этим заболеванием осложняется тем, что вирус, его вызывающий (представитель семейства Coronaviridae, рода Coronavirus), способен проявлять высокую изменчивость, связанную с появлением новых антигенных штаммов. Важным условием успешной специфической профилактики инфекционного заболевания является изучение антигенных свойств полевых изоля-тов возбудителя и их использование в качестве вакцинных [1].
На птицефабрике «Щелковская» Московской области в 2004 г. была отмечена вспышка респираторного заболевания, сопровождавшегося высокой заболеваемостью и смертностью птицы, что наносило хозяйству значительный экономический ущерб.
В ходе исследований биологических свойств из патматериала от заболевших кур нами был выделен изолят вируса ИБК «Щелковский», доказана его патогенность для восприимчивого поголовья, определены антигенные различия с известными вакцинными штаммами. Нуклеотидное секве-нирование области гена S1, кодирующего спайковый белок, который в основном и определяет антигенные свойства вируса [4], показало, что вариант вируса ИБК, вызывавший заболевание, который получил название изолят «Щелковский», имеет
высокии уровень гомологии с вакцинным штаммом «Н-120» (серотип Массачусетс), использовавшимся в хозяИстве при иммунизации. Однако применение для профилактики вакцин из штаммов указанного се-ротипа оказалось неэффективным.
Целью наших исследовании было определение протективных своиств изоля-та «Щелковский» для возможного его использования в дальнеишем в качестве вакцинного.
Материалы и методы
Для опыта по перекрестному заражению использовали 36 СПФ-цыплят. 12 птиц не были иммунизированы и служили контролем, а остальные в возрасте 3 суток были иммунизированы инактивированны-ми эмульгированными препаратами вируса ИБК. Введение препаратов проводили внутримышечно в объеме 0.5 мл в грудную мышцу. 12 цыплят прививали препаратом изолята «Щелковскии», титр которого до инактивации составлял 6,2 ^ CD50/мл, а 12 других цыплят — препаратом штамма «Н-120» серотипа Массачусетс с титром до инактивации 7,2 ^ ЭИД50/мл. Через 21 сутки после иммунизации цыплят разделили на 6 изолированных групп по 6 птиц в каждои и подвергали контрольному заражению. Схема опыта по перекрестному заражению цыплят представлена в табл. 1.
Заражение цыплят проводили вируссо-держащей суспензией изолята «Щелковский» и штамма «М-41» серотипа Массачусетс в дозе 10000 CD50 и 10000 ЭИД50, соот-
Таблица 1
Схема опыта по перекрестному заражению
№ группы Штамм, использованный для
иммунизации заражения
1 Штамм «Н-120»
2 Изолят «Щелковский» Изолят «Щелковский»
3 Не иммунизированы
4 Штамм «Н-120»
5 Изолят «Щелковский» Штамм «М-41»
6 Не иммунизированы
ветственно, в объеме 1 мл, из которого по 2 капли наносили на конъюнктиву глаз, по 2 капли вводили интраназально, а остальное количество — перорально.
Через 4 суток после контрольного заражения был проведен убой и вскрытие птиц. Органы исследовали на наличие характерных для ИБК поражений. Для исследования цилиарной активности (ЦА) извлекали трахею, избегая повреждения тканей, и помещали ее в среду ПСП. Не позднее 1 часа после вынужденного убоя из верхнего, среднего и нижнего отделов трахеи бритвенным лезвием готовили по 3 поперечных среза толщиной 0,5-1 мм и исследовали под световым микроскопом при увеличении х100. Для каждой птицы и для группы определяли среднюю ЦА трахеи в баллах. Свойственное нормальному органу скоординированное биение цилей на всей внутренней поверхности кольца принимали за 4 балла, интенсивное движение ресничек на 3/4 периметра — 3 балла, достаточно активное движение цилей на участке, составляющем около половины поверхности эпителия — 2 балла, а остаточную активность цилей на отдельных участках трахеи или на 1/4 ее внутренней поверхности — 1 балл [4]. Устойчивыми к заражению считали цыплят, средняя ЦА трахеи которых составляла не менее 2 баллов [2].
Результаты и обсуждение
Ранее проведенные исследования изо-лята «Щелковский» выявили его антигенные различия с известными вакцинными штаммами. Однако для ветеринарной практики обнаружение многочисленных серотипов вируса ИБК при помощи реакции нейтрализации в лабораторных моделях лишь частично актуально, так как установлено, что результаты реакции нейтрализации с гомо- и гетерологическими штаммами не всегда совпадают с результатами при заражении животных гетеро-логичными штаммами [5]. Для решения вопроса о протективных свойствах анти-
тел, формирующихся к изоляту «Щелковский», проводили опыты по перекрестному заражению цыплят. Поскольку данный изолят является патогенным, для инокуляции цыплятам применяли инактивирован-ные препараты исследуемых штаммов. Результаты клинических и патологоанатоми-ческих исследований зараженных цыплят представлены в табл. 2.
Полученные результаты свидетельствуют, что отсутствие клинических признаков респираторного заболевания при проведении опыта не может служить единственным критерием устойчивости птицы к заражению вирусом ИБК, так как поражение цилиарного эпителия, которое при этом может наблюдаться микроскопически, предполагает репликацию вируса в организме и создает условия для развития вторичной инфекции. Так, в группе 4 у клинически здоровых цыплят было обнаружено значительное снижение ЦА трахеи. Снижение цилиарной активности, не сопровождавшееся клиническими признаками, отмечалось и в группах 1 и 2. Возможно, дальнейшее развитие патологического процесса привело бы к проявлению у них внешних признаков заболевания.
Иммунизация цыплят инактивирован-ным вирусом в раннем возрасте в данном случае оказывала защитное воздействие на животных, так как интактные цыплята поражались вирусом ИБК в большей степени, чем иммунизированные, и при заражении иммунизированных цыплят гомологичными штаммами тяжесть клинических признаков и степень поражения цилиарного эпителия трахеи оказалась ниже, чем при заражении гетерологичными штаммами.
После иммунизации инактивирован-ным препаратом из штамма «Н-120» цыплята были восприимчивы к заражению изолятом "Щелковский'.' Группа цыплят, иммунизированных изолятом "Щелковский" в целом оказалась устойчивой к заражению гетерологичным штаммом «М-
Таблица 2
Показатели клинических и патологоанатомических исследовании цыплят, имеющих различный иммунный статус
Характеристика группы Доля кли-ничес-ки больных птиц* Число защищенных птиц, исходя из ЦА
№ группы вирус ИБК, использованный для иммунизации вирус ИБК, использованный для заражения Осмотр при вскрытии Средняя ЦА, баллов
1 Шт. «Н-120» 2/6 Гиперемия верхней части трахеи у 4 цыплят, очаговая пневмония у 2 цыплят 0 1,0
2 Изолят «Щелковский» Изолят «Щелковский» 0/6 Покраснение верхней трети трахеи у 1 цыпленка 4 2,2
3 Контроль 6/6 Отек и гиперемия трахеи у 6 птиц, пневмония у 3 цыплят 0 0,1
4 Шт. «Н-120» 0/6 У 1 цыпленка гиперемия верхней части трахеи и очаговая пневмония 1 1,7
5 Изолят «Щелковский» Штамм «М-41» 1/6 Гиперемия трахеи у 1 цыпленка 5 2,6
6 Контроль 5/6 Гиперемия трахеи, в особенности верхней части, у 4 цыплят, очаговая пневмония 2 1,3
* - в числителе - количество клинически больных птиц, в знаменателе - количество птиц в группе
41» (серотип Массачусетс, гомологичный штамму «Н-120»). Это согласуется с данными, полученными нами ранее в реакции нейтрализации, о значительно более широкой вируснейтрализующей способности антител к полевому изоляту "Щелковский" по сравнению с вируснейтрализую-щей активностью антител к вакцинному штамму «Н-120».
Заключение Данные, полученные в ходе перекрес-
тного заражения, свидетельствуют о неспособности вакцинного штамма «Н-120» защитить цыплят от заражения изоля-том «Щелковский». В то же время изолят «Щелковский» обладает широкой протек-тивной активностью и способен защитить цыплят не только против заражения гомологичным вирусом, но и штаммом «М-41» серотипа Массачусетс. Данные особенности позволяют рекомендовать его для изготовления инактивированных вакцин.
РЕЗЮМЕ
В результате опытов по перекрестному заражению цыплят установлено, что новый вариантный изолят «Щелковский» вируса инфекционного бронхита кур обладает широким антигенным спектром и выраженной протективностью по отношению к штамму серотипа «Массачусетс», что позволяет рекомендовать его для применения в качестве вакцинного.
ABSTRACT
The results of cross-infection indicate wide antigenic range and expressed protectivity of the IBV "Schel-kovo" isolate in chickens as compared to the "Massachusetts" strain. That allows it to be used as a vaccine strain.
Литература
1. В.Д.. Сергеев. Диагностика инфекционного бронхита кур // БиоВю. 2001. № 2. С. 16.
2. B. Al-Targha, J. Kojnok, Gs. Varro. Immunisation of day-old chicks having maternally derived antibodies against infectious bronchitis: degree of protection as monitored by ciliary activity after intratracheal challenge // Acta Vet. Hungarica. 1991. V 39, № 1-2. Р. 83-93.
3. J.K.A. Cook, J.H. Darbyshire, R.W Peters. The use of chicken tracheal organ cultures for the isolation and
assay of avian infectious bronchitis virus // Arc. Virol. 1976. V 50. P. 109-118.
4. J. Ignjatovic, L. Galli. Immune responses to structural proteins of avian infectious bronchitis virus // Avian Pathol. 1995. V 24. P. 313-332.
5. L.G. Raggi, G.G. Lee. Lack of correlation between infectivity, serologic response and challenge results in immunization with an avian infection bronchitis vaccine // J. Immmunol. 1965. V 94. P. 538-543.
