Протективная активность водных экстрактов из высших грибов при экспериментальной герпесвирусной инфекции у белых мышей Текст научной статьи по специальности «Биологические науки»

Протективная активность водных экстрактов из высших грибов

«_» и 1 ^ «_»

при экспериментальной герпесвируснои инфекции у белых мышеи

И. А. РАЗУМОВ1-2, Е. И. КАЗАЧИНСКАЯ2, Л. И. ПУЧКОВА2,

Т. А. КОСОГОВА2, И. А. ГОРБУНОВА3, В. Б. ЛОКТЕВ2, Т. В. ТЕПЛЯКОВА2

1 Институт цитологии и генетики, СО РАН, Новосибирск

2 Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор», Кольцово, Новосибирская область

3 Центральный сибирский ботанический сад СО РАН, Новосибирск

Protective Activity of Aqueous Extracts from Higher Mushrooms Against Herpes sipmlex Virus Type-2 on Albino Mice Model

I. A. RAZUMOV, E. I. KAZACHINSKAYA, L. I. PUCHKOVA,

T. A. KOSOGOVA, I. A. GORBUNOVA, V. B. LOKTEV, T. V. TEPLYAKOVA

Institute of Cytology and Genetics, Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences, Novosibirsk State Research Center of Virology and Biotechnology Vector, Novosibirsk Region, Koltsovo Central Siberian Botanical Gardens, Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences, Novosibirsk

Проведено изучение токсичности и противовирусной активности водных экстрактов, приготовленных из высших грибов, базвдиомицетов: Lentinula edodes (Berk.) Pegler) — шиитаке, Pleurotus ostreatus (Jacq.) P. Kumm. — вешенка устричная, Inonotus obliquus (Ach. ex Pers.) Pilat — чага, Hydnellum compactum (Pers.) P. Karst. — ежовик плотный. Экстракты не обладали острой токсичностью для мышей в дозах от 0,8 до 4 мг на животное при пероральном и внутрибрюшинном введении. При повышении дозы сухого вещества экстракта чаги до 20 мг на мышь наблюдалась гибель половины животных. При внутрибрюшинном введении водных экстрактов грибов 0,4—2 мг сухого вещества на мышь за сутки до заражения животных одной ЛД50 вируса простого герпеса 2 типа была выявлена 100% выживаемость животных, получивших экстракты грибов Lentinula edodes и Pleurotus ostreatus, и 90% выживаемость при использовании экстрактов Inonotus obliquus и Hydnellum compactum.

Ключевые слова: базидиальные грибы, Lentinula edodes, Pleurotus ostreatus, Inonotus obliquus, Hydnellum compactum, водные экстракты, противовирусная активность in vivo, вирус простого герпеса 2 типа.

Toxicity and antiviral activity of aqueous extracts from higher mushrooms such as Lentinula edodes (Berk.) Pegler (shiitake), Pleurotus ostreatus (Jacq.) P. Kumm. (oyster), Inonotus obliquus (Ach. ex Pers.) Pilat (chaga), Hydnellum compactum (Pers.) P. Karst. (compact tooth) were studied. In doses of 0.8 to 4.0 mg (dry weight) per mouse administered orally or intraperitoneally the extracts showed no acute toxicity. When the dose of the chaga extract was increased to 20 mg per mouse, a half of the animals died. Intraperitoneal administration of the aqueous extracts in a dose of 0.4—2 mg per mouse prior to the contamination by a single LD50 of Herpes simplex type 2 provided 100-percent survival of the animals exposed to the Lentinula edodes or Pleurotus ostreatus extracts and 90-percent survival of the animals exposed to the Inonotus obliquus or Hydnellum compactum extracts.

Key words: basidiomycetes, Lentinula edodes, Pleurotus ostreatus, Inonotus obliquus, Hydnellum compactum, aqueous extracts, in vivo antiviral activity, Herpes simplex type 2.

Введение

Вирус простого герпеса 2 типа (ВПГ-2) является членом подсемейства А1рНаНегре8Утпае семейства Herpesviridae [1]. Геном представлен двухцепочечной ДНК размером более 154 тысяч нуклеотидов, которая кодирует 77 полипептидов (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genome/10301). ВПГ-2 наиболее часто вызывает генитальную герпетическую инфекцию [2, 3]. Заболевание ге-

© Коллектив авторов, 2013

Адрес для корреспонденции: E-mail: [email protected]

нитальным герпесом в разных странах достигает уровня в 80—200 случаев на 100 тыс. населения [4]. Для пациентов с иммунодефицитными состояниями ВПГ-2 представляет особую опасность, вызывая генерализованную герпетическую инфекцию с обширными поражениями внутренних органов, нередко с летальным исходом.

Для лечения герпесвирусных инфекций используется целый ряд противовирусных препаратов. Наиболее часто применяется препарат ацикловир (зовиракс, виролекс), являющийся синтетическим аналогом дезоксигуанидина. После фосфорилирования он способен блокировать

Таблица 1. Характеристики экстрактов из грибов базидиомицетов

Вид, штамм гриба

Происхождение биомассы Способ приготовления образца для экстрактов

Масса сухого вещества, мг/мл

Lentinula edodes 3760 (шиитаке)

Inonotus obliquus (чага)

Hydnellum compactum KL-9 (ежовик плотный)

Pleurotus ostreatus HK-35 (вешенка устричная)

Мицелий, выращенный на зерне в течение 1 мес

Чага сухая из аптеки (поставщик ООО «Лека-Трест», г. Барнаул)

Плодовые тела (собраны в Караканском бору, Новосибирской обл.)

Мицелий, выращенный на зерне в течение 1 мес

Навеску гриба с сырым зерном суспендировали в стерильной дистиллированной воде 1:4 по массе, прогревали на кипящей водяной бане в течение 30 мин, фильтровали через несколько слоев марли, а затем центрифугировали 20 мин при 10000 об/мин. 5 г измельчённой на кофемолке чаги залили 100 мл кипящей воды, выдерживали 1 ч на качалке при комнатной температуре, затем 3 суток в термостате при температуре 50°С, отфильтровали через марлю, затем центрифугировали 20 мин при 10000 об/мин.

10 г высушенных, измельчённых на кофемолке плодовых тел залили 200 мл кипящей дистиллированной воды, встряхивали на качалке при температуре 28—30°С в течение 1 ч при 120 об/мин, затем выдерживали 2 суто к в термостате при 50°С, профильтровали через 8 слоев марли, центрифугировали 20 мин при 10000 об/мин.

Навеску гриба с сырым зерном суспендировали в стерильной дистиллированной воде 1:4 по массе, прогревали на кипящей водяной бане в течение 30 мин, затем выдерживали 48 ч при 50°С в термостате, центрифугировали 20 мин при 10000 об/мин.

4,0

20,0

5,5

4,0

вирусную ДНК полимеразу и синтез вирусной ДНК [5]. Клеточные синтезы при этом блокируются незначительно. Его широкое использование привело к возникновению лекарственно-устойчивых штаммов вируса герпеса. Токсичность ацикловира также накладывает ограничения к его применению у пациентов с нарушениями функции почек. В медицинской практике для лечения герпесвирусных инфекций также используются идоксуридин, фоскарнет, тромантадин, интерфе-роны и их индукторы, а также препараты растительного происхождения, например, панавир [6]. Однако существующие лекарственные средства на основе ацикловира, а также другие антивирусные препараты химического и растительного происхождения, не позволяют эффективно контролировать герпесвирусные инфекции [4]. Это ставит перед исследователями задачу поиска и разработки новых антивирусных препаратов как химического, так и растительного происхождения.

Нами ранее была показана антивирусная активность водных экстрактов и полисахаридных фракций, полученных из мицелия и плодовых тел высших грибов, для культур клеток инфицированных ВПГ-2 [7]. Было обнаружено, что ряд препаратов, полученных из грибов, относящихся к родам Ganoderma, Lentinula и Pleurotus, полностью подавляли инфекционную активность ВПГ-2 на культуре клеток Vero. Антивирусная активность этих препаратов была связана, по-видимому, с наличием в их составе полисахаридов.

Целью данной работы явилось получение экстрактов из высших грибов базидиомицетов:

Lentinula edodes, Pleurotus ostreatus, Inonotus obliquus, Hydnellum compactum и изучение токсичности и протективной активности этих экстрактов для белых мышей, инфицированных ВПГ-2.

Материал и методы

Объекты исследования и их культивирование и приготовление. В работе были использованы экстракты из базидиальных грибов: Lentinula edodes (Berk.) Pegler (= Lentinus edodes (Berk.) Singer) — шиитаке, Pleurotus ostreatus (Jacq.) P. Kumm. — вешенка устричная, Inonotus obliquus (Ach. ex Pers.) Pilat — чага, Hydnellum compactum (Pers.) P. Karst. — ежовик плотный, имеющиеся в лаборатории микологии Государственного научного центра вирусологии и биотехнологии «Вектор» (ГНЦ ВБ «Вектор»). Для подготовки экстрактов или образцов использовали биомассу грибов, полученную путём выращивания их на стерильном зерне [8], некоторые из образцов были представлены плодовыми телами. Более полные данные по образцам представлены в табл. 1.

Вирусы. Штамм MS вируса простого герпеса 2-го типа (ВПГ-2) был получен из Американской коллекции клеточных культур (АТСС). В ГНЦ ВБ «Вектор» вирусный штамм прошёл 1 пассаж на культуре клеток Vero. До начала работ исходную суспензию, содержащую вирус, хранили в жидком азоте.

Культура клеток. Перевиваемую культуру клеток Vero (почки африканской зелёной мартышки) поддерживали на питательной среде DMEM (ГНЦ ВБ «Вектор»), содержащей 5% сыворотки плода коровы («BioClot», Германия).

Мыши. Опыты по определению токсичности и протек-тивной активности образцов проводили на белых беспородных мышах 3—4-недельного возраста, полученных из вивария ГНЦ ВБ «Вектор».

Определение токсичности проб. Для выявления токсичности образцы объёмом 100 и 500 мкл/мышь вводили внутрибрю-шинно или перорально (per os) дважды с интервалом в трое суток. Срок наблюдения за животными составил 2 недели.

Таблица 2. Протективная активность водных экстрактов грибов у белых мышей, инфицированных вирусом простого герпеса 2 типа

Экстракт гриба Количество сухого Число Число

вещества, введенного инфицированных выживших

в животное, мг мышеи мышеИ, %

Lentinula edodes (шиитаке) 0,4 10 10(100)

1попо1ш оЪЩиш (чага) 2 10 9 (90)

НуётПит compactum (ежовик плотный) 0,55 10 9 (90)

Pleurotus ostreatus (вешенка устричная) 0,4 10 10(100)

Физиологический раствор 0 10 5 (50)

Примечание. Мышей инфицировали одной ЛД50 ВПГ-2. ТГ-2. За животными наблюдали в течение 26 сут после инфицирования. Объём преперата на мышь - 100 мкл.

Определение протективной активности образцов. Защитное действие экспериментальных препаратов изучали при их введении по 100 мкл/мышь внутрибрюшинно за сутки до инфицирования мышей ВПГ-2 в дозе, вызывающей 50% гибель инфицированных животных. Срок наблюдения составил 26 дней. Изучение антивирусной активности грибных проб проводили, руководствуясь методами, представленными в Руководстве по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ [9] и Государственной Фармакопеи [10].

Результаты и обсуждение

Определение токсичности образцов на животныгх.

Определение токсичности водных экстрактов грибов Lentinula edodes, Inonotus obliquus, Hydnellum compactum, Pleurotus ostreatus проводилось с использованием белых беспородных мышей при перо-ральном и внутрибрюшинном введении экстрактов. В диапазоне доз от 0,8 до 5,5 мг (из расчёта на суммарное сухое вещество экстракта) острой токсичности водных экстрактов четырёх видов грибов выявлено не было. При использовании экстракта гриба чаги была предпринята попытка определить нижнюю границу токсичности подобных препаратов. В результате было обнаружено, что острая токсичность проявляется при парентеральном введении 20 мг разведённого сухого вещества этого препарата на каждое животное. В результате инокуляции такой дозы погибла половина животных.

Определение протективной активности образцов. Протективную активность водных экстрактов грибов определяли в соответствии с рекомендациями [11] при использовании внутрибрюшинного способа введения водных экстрактов за 24 ч до инфицирования животных ВПГ-2 (табл. 2). При введении водных экстрактов грибов видов Lentinula edodes и Pleurotus ostreatus в дозе 0,4 мг сухого вещества на мышь за сутки до заражения животных одной ЛД50 (летальная доза вируса, вызывающая гибель 50% животных при введении) вируса простого герпеса 2 типа (ВПГ-2) была выявлена 100 % выживаемость животных и 90% у обработанных экстрактами грибов видов Inonotus obliquus и Hydnellum compactun в дозе 2 и 0,55 мг сухого вещества на мышь соответственно.

Итак, установлено, что введение препаратов для защиты от экспериментальной герпесвирус-

ной инфекции обеспечивает 100% выживаемость белых мышей, обработанных водными экстрактами грибов Lentinula edodes и Pleurotus ostreatus.

Препараты водных экстрактов Inonotus obliqu-us и Hydnellum compactum показали несколько меньшую, но весьма существенную протективную активность.

Антивирусная активность экстрактов бази-диальных грибов описана в отношении вируса гепатита В [12], вируса простого герпеса первого типа (ВПГ-1) и вируса гриппа А [13, 14], вируса иммунодефицита человека, ортопоксвиру-сов [15, 16], а также некоторых других вирусов [17—19]. Так, рядом авторов было показано, что препараты, приготовленные из гриба Ganoderma lucidum (Curtis) P. Karst, достоверно ингибиро-вали цитопатический эффект вируса простого герпеса и вируса везикулярного стоматита на культуре клеток [20, 21]. Основными компонентами этих препаратов являются различные полисахариды (40,6%) и белки (7,8%). Из культуры гриба Macrocystidia cucumis (Pers.) Joss, был выделен пуриновый нуклеозид, который обладал антивирусной активностью против ВПГ-1 на культуре клеток в концентрациях 300—440 мкг/мл с индексом селективности более 22 [22]. Был обнаружен синергический эффект при совместном использовании этого препарата с ацик-ловиром и видарабином. Из водного экстракта гриба Rozites caperatus (Pers.: Fr) P. Karst были выделены новые антивирусные препараты RC28 и RC183 белковой природы, препятствующее процессу репликации ВПГ 1 и 2 типов, цитоме-галовирусов, респираторно-синцитиального вируса и вируса гриппа типа А [23]. Другими авторами был обнаружен протеин, обладающий антивирусной активностью в отношении вирусов герпеса и гепатита [24, 25]. Гликопротеин, выделенный из мицелия G.lucidum также был эффективен против ВПГ 1 и 2 типа [26]. Из экстракта плодового тела гриба Grifola frondosa (Dicks.) Gray было выделено соединение белковой природы, ингибирующее репликацию ВПГ-1. В результате анализа химического состава соединения антивирусного белка с помощью метода

масс-спектрометрии было найдено, что это пептид, состоящий из 11 аминокислот [24, 25]. Большую группу биологически активных соединений грибов составляют изопреноиды. При анализе антивирусной активности экстракта Ganoderma pfeifferi Bres. против вируса гриппа типа А и вируса простого герпеса 1 типа было установлено, что основным антивирусным компонентом экстракта были тритерпеноиды: гано-дермадиол, луцидодиол, апланоксиновая кислота G [27]. Недавно было выявлено, что антивирусной активностью в отношении вирусов герпеса обладают полисахариды гриба Agaricus brasiliensis Fr. и гликаны из Pleurotus tuber-regium (Lentinus tuber-regium (Fr.) Fr.) [28, 29]. Полученные результаты указывают, что препараты на основе базидиальных грибов, как правило, проявляют активность при низких концентрациях активного вещества и обладают низкой токсичностью. Кроме того, по-видимому, антивирусное действие in vitro веществ в составе грибных препаратов связано с неспецифическим реагированием их со свободными вирионами. Эти вещества или субстанции после инкубации in vitro с вирусом и последующим заражении клеток взаимодействуют с мембранами клеток и конкурируют с вирусами за рецепторы или полисахариды на поверхности клеток, с помощью которых происходит прикрепление и проникновение вируса внутрь клетки-хозяина. А при обработке клеток до инфицирования вирусом эти субстанции блокируют клеточные рецепторы для проникновения вируса, а после инфицирования не позволяют вирусному потомству выходить из заражённых клеток и далее инфицировать соседние здоровые клетки.

Нами ранее была показана антивирусная активность водных экстрактов и полисахаридных фракций, полученных из грибов, относящихся к родам Ganoderma, Lentinus и Pleurotus, для клеток культуры Vero, инфицированных ВПГ-2 [7]. Нами было высказано предположение, что антивирусная активность этих препаратов была связана с непосредственным взаимодействием полисахаридов с вирусными частицами.

Возможность защиты животных от вирус -ной инфекции подобными препаратами далеко не очевидна. Поэтому были предприняты эксперименты по оценке возможной острой токсичности водных экстрактов, приготовленных из грибов родов Lentinula, Pleurotus, Inonotus и Hydnellum, для беспородных белых мышей при двух способах введения препаратов. Все исследованные препараты не проявляли острой токсичности при пероральном и парентеральном

введении в дозах от 0,8 до 5,5 мг на животное. Попытка достичь порога токсичности была предпринята только для препарата из гриба чаги при внутрибрюшинном введении. Оказалось, что острая токсичность проявляется при концентрациях порядка 20 мг/мл сухого вещества. Вполне понятно, что это весьма высокие концентрации сухого вещества для простых водных экстрактов и на практике они весьма труднодостижимы без использования специальных способов экстракции.

Невысокая токсичность позволила нам провести оценку способности водных экстрактов, приготовленных из грибов базидиомице-тов, защищать от гибели белых мышей от летальной инфекции, вызванной введением ВПГ-2. Полученные результаты подтвердили выявленную на клетках Vero противовирусную активность грибных экстрактов. Протективная или защитная активность водных экстрактов из базидиомицетов Lentinula edodes (шиитаке), Pleurotus ostreatus (вешенка устричная), Inonotus obliquus (чага), Hydnellum compactum (ежовик плотный) при экспериментальной герпесви-русной инфекции у мышей не была показана ранее. Наличие выраженного антивирусного эффекта в экспериментах in vitro и in vivo указывает на перспективность использования водных экстрактов для создания относительно простых антивирусных препаратов. Важно отметить, что противовирусная активность водных экстрактов грибов против вируса простого герпеса может позволить сконструировать технологически простые препараты для лечения поверхностных герпетических поражений. Другая возможность связана с поиском и выделением антивирусных веществ или соединений из водных экстрактов высших грибов. Перспективность этого направления несомненна, и она обосновывается выраженной протектив-ной активностью исследованных экстрактов и их низкой токсичностью. Это может позволить не только проводить поиск препаратов для лечения вирусных заболеваний, но и разрабатывать лекарственные средства для комплексной терапии, что особенно важно при вирусных заболеваниях, так как они зачастую осложняются сочетанными инфекциями.

Работа была частично поддержана грантом РФФИ, интеграционным проектом СО РАН № 52, грантом Президента Российской Федерации для государственной поддержки ведущих научных школ НШ-65387.2010.4 и НШ-2996.2012.4, договором Минобрнауки № 11.G34.31.0034.

ЛИТЕРАТУРА

10.

11.

12.

13.

14.

15.

Fields B.N., Knipe D.M., Howley P.M. et al. Fields virology. Publisher: Philadelphia :Wolters Kluwer Health/Lippincott Villiams & Wilkins, 2007.

Weiss H. Epidemiology of Herpes simplex virus type 2 infection in the

developing world. Herpes 2004; 11: Supp 1: 1: 24A—35A.

Malkin J.E. Epidemiology of genital Herpes simplex virus infection in

developed countries. Herpes 2004; 11:Supp 1: 1: 2A—23A.

Джонс Ш, Каннинхэмг А. Вакцинопрофилактика генитального и

неонатального герпеса, вызванного вирусом простого герпеса.

Инфекц перед пол пут 2004; 1: 46-49.

Faulds D, Heel R.C. Ganciclovir. A review of its antiviral activity, phar-macokinetic properties and therapeutic efficacy in cytomegalovirus infections. Drugs 1990; 39: 597-638.

Кузовкова T.B., Герасимова H.M., Кунгуров H.B. Опыт применения препарата панавир при лечении больных генитальной герпесви-русной инфекцией. Вестн последиплом мед обр 2002; 3—4: 14—16. Разумов И.А., Косогова Т.А., Казачинская Е.И., Пучкова Л.И., Щербакова Н.С., Горбунова И.А., Михайловская И.Н, Локтев В.Б., Теп-лякова Т.В. Противовирусная активность водных экстрактов и по-лисахаридных фракций, полученных из мицелия и плодовых тел высших грибов. Антибиотики и химиотер 2010; 55: 9—10: 14—18. Бухало А.С. Высшие съедобные базидиомицеты в чистой культуре. Киев: 1988; 144.

Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М.: 2000; 1—398. Государственная фармакопея СССР. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье. М.: 1990; 11: 2: 2: 187—209. Бурова Л.Г, Евстропов А.Н., Грек О.Р., Захарова Л.Н. Волхонская Т.А. Применение полифенольного комплекса экстрагированного из пятилистника кустарникового {Penthaphylloides fruticosa (L.) O.Schwarz) для профилактики Коксаки-вирусной инфекции. Бюлл сибир мед 2002; 4: 27—31.

Gao Y, Zhou Sh, Huang M, Xu A. Antibacterial and antiviral value of

the genus Ganoderma P. Karst. Species (Aphyllophoromycetideae): a

review. Int J Med Mushrooms 2003; 5: 235—246.

Niedermeyer T.H., Lindequist U, Mentel R, Gordes D, Schmidt E,

Thurow K, Falk M. Antiviral Terpenoid Constituents of Ganoderma

pfeifferi. J Nat Prod. 2005; 68: 12: 1728—1731.

Teplyakova T.V., Psurtseva N.V., Kosogova T.A., Mazurkova N.A.,

Khanin V.A., Vlasenko V.A. Antiviral activity of polyporoid mushrooms

(higher Basidiomycetes) from Altai mountains (Russia). Intern J Med

Mush 2012; 14: 1: 37—45.

Гашникова H.M., Теплякова Т.В., Проняева Т.Р., Пучкова Л.И., Косогова Т.А., Сергеев А.Н. Результаты исследований по выявлению анти-ВИЧ активности экстрактов из высших базидиальных грибов. Иммунопатол аллергол инфектол 2009; 2: 170—171.

16. Теплякова Т.В., БулычевЛ.Е., Косогова Т.А., Ибрагимова Ж.Б., Юр-ганова И.А., Кабанов A.C., Пучкова Л.И., Бормотов НИ, Бардаше-ва A.B. Противовирусная активность экстрактов из базидиальных грибов в отношении ортопоксвирусов. Проблем особо опас инфекц 2012; 3: 113: 99-101.

17. Wasser S. P. Current findings, future trends, and unsolved problems in studies of medicinal mushrooms. Appl Microbiol Biotechnol 2011; 89: 5: 1323-1332.

18. Stamets P. MycoMedicinals. An informational treatise on mushrooms. Olympia, WA: Myco Media Productions 2002; 96.

19. Brandt C.R., Pirano F. Mushroom antiviral. Recent Res Dev Antimicrob Agent Chemother 2000; 4: 11—26.

20. Eo S.-K., Kim Y.-S, Lee C.-K, Han S.-S. Antiherpetic activities of various protein bound polysaccharides isolated from Ganoderma lucidum. J Ethnopharmacol 1999; 68: 1: 1—3: 175—181.

21. Eo S.-K., Kim Y.-S., Lee C.-K., Han S.-S. Antiviral activities ofvarious water and methanol soluble substances isolated from Ganoderma lucidum II. J Ethnopharmacol 1999; 68: 1: 1—3: 129—136.

22. Oh K-W, Lee C.-K., Kim Y.-S, Eo S.-K., Han S.-S. Antiherpetic activities of acidic protein bound polysaccharide isolated from Ganoderma lucidum alone and in combinations with acyclovir and vidarabine. J Ethnopharmacol 2000; 72: 1: 1—2: 221—227.

23. Pirano F. F. The Development of the Antiviral Drug RC 28 from Rozites caperatus (Pers.: Fr.) P. Karst. (Agaricomycetideae). International Journal of Medicinal Mushrooms 2005; 7: 356.

24. Gu C, Li J., Chao F., Jin M, Wang X., Shen Z.Isolation, identification and function of a novel anti-HSV-1 protein from Grifola frondosa. Antivir Res 2007; 75: 250—257.

25. Gu C., Li J., Chao F. Inhibition of hepatitis В virus by D-fraction from Grifola frondosa: Synergistic effect of combination with interferon-a in HepG2 2.2.15. Antivir Res 2006; 72: 162—165.

26. Eo S.-К., Kim Y.-S., Lee C.-К., Han S.-S. Antiherpetic activities of various protein bound polysaccharides isolated from Ganoderma lucidum. J Ethnopharmacol 1999; 68: 1—3: 175—181.

27. Mothana R.A.A., Awadh Ali N.A., Jansen R., Wegner U., Mentel R., Lindequist U. Antiviral lanostanoid triterpenes from the fungus Ganodermapreifferi. Fitoterapia 2003; 74: 177-180.

28. Cardozo F.T., Camelini C.M., Mascarello A., Rossi M.J., Nunes R.J., Barardi C.R., de Mendonga M.M., Simoes C.M. Antiherpetic activity of a sulfated polysaccharide from Agaricus brasiliensis mycelia. Antivir Res 2011; 92: 1: 108—114.

29. Zhang M., Cheung P. C., Ooi V. E., Zhang L. Evaluation of sulfated fungal beta-glucans from the sclerotium of Pleurotus tuber-regium as a potential water-soluble anti-viral agent. Carbohydr Res 2004; 339: 13: 2297—3001.