CC BY
18УДК: 611.343+611 - 018.1+597.593]:613.693+577.156
ПРОТЕАЗНЫЙ ПРОФИЛЬ ПОПУЛЯЦИИ ТУЧНЫХ КЛЕТОК ТОЩЕЙ КИШКИ МОНГОЛЬСКИХ ПЕСЧАНОК ПОСЛЕ ОРБИТАЛЬНОГО ПОЛЕТА
А.С. Бурцева Д.А. Атякшин 2, Н.Т. Алексеева 1
:ФГБОУ ВО «Воронежский государственный медицинский университет имени Н.Н.Бурденко» Министерства здравоохранения Российской Федерации
2НИИ экспериментальной биологии и медицины, 394036, г.Воронеж, Россия
Для корреспонденции: Атякшин Дмитрий Андреевич, доктор медицинских наук, 394036, ул.Студенческая, 10, г.Воронеж, Россия.
E-mail: [email protected]
РЕЗЮМЕ
В работе изучен протеазный профиль популяции тучных клеток (ТК) тощей кишки у трех групп монгольских песчанок: виварийного контроля, синхронного эксперимента и 12-суточного орбитального полета. Показано, что после космического полета на фоне снижения объема популяции тучных клеток в оболочках тощей кишки происходило перераспределение соотношения протеаз, которое заключалось в возрастании доли химаза-позитивных ТКи ТК с одновременным содержанием триптазы и химазы. Такое изменение экспрессии протеаз наблюдалось как в слизистой, так и соединительнотканной субпопуляциях ТК. В то же время, относительное содержание триптаза-позитивных ТК в стенке тощей кишки снижалось. Моделирование факторов космического полета в условиях синхронного эксперимента не вызывало существенных изменений в про-теазном профиле популяции тучных клеток тощей кишки монгольских песчанок. Обсуждается значение тучных клеток в адаптации тощей кишки к условиям космического полета, в т.ч., в развитии процессов ремоделирования внеклеточного матрикса соединительной ткани органов пищеварительной системы под влиянием невесомости.
Ключевые слова: космический полет, триптаза, химаза, тучные клетки, тощая кишка, монгольские песчанки.
PROFILE OF PROTEASES IN POPULATION OF MAST CELLS OF MONGOLIAN GERBILS' JEJUNUM AFTER AN ORBITAL FLIGHT
A.S. Вш18еуа, D.A. Atiakshin, N.T.Alexeeva
VoronezhN.N.BurdenkoStateMedicalUniversity, Voronezh, Russia
Research Institute of Experimental Biology and Medicine.
Atiakshin Dmitrii, Doctor of Medical Sciences, 394036, ul. Studencheskaya, 10, Voronezh, Russia. E-mail: [email protected]
SUMMARY
This paper discusses the profile of proteases in the structure of the population of mast cells (MC) in the Mongolian gerbils' jejunum of three groups: a vivarium control, a synchronous experiment and a 12-day orbital flight. The study hasdemonstrated that after a space flight under the reduction of the mast cells' population in the jejunum structures there was a redistribution of protease ratio, e. i. an increase in the proportion of chymase-positive MC and MC with simultaneous containing tryptase and chymase. This change in the expression of proteaseswas observed in mucous and connective subpopulations MC. At the same time, the relative content of tryptase-positive MC in the jejunum wall reduced. Simulation of spaceflight factors in a synchronous experiment did not cause significant changes in the profile of the protease population of mast cells of Mongolian gerbils' jejunum. The paper also focuses on the value of mast cells in the jejunum to adapt to the conditions of space flight, as well as the remodeling of the extracellular matrix of digestive system' connective tissue under the influence of a weightlessness.
Key words: space flight, tryptase, chymase, mast cells, jejunum, the Mongolian gerbil.
Развитиекосмонавтики привело к увеличению продолжительности профессиональной деятельности человека в орбитальных полетах. В этой связи большой практический интерес вызывает изучение состояния соединительной ткани различных органов под влиянием факторов космического полета [1].Недавно была вы-
явлена высокая сенситивность состояния колла-геновых, ретикулярных и эластических волокон в различных органах пищеварительной системы животных к изменению уровня гравитационного стимула [2,3, 4]. Поскольку тучные клетки принимают важное участие в формировании адаптивных реакций организма на различные
факторы внешней среды[5, 6], они представляют собой актуальные объекты исследования в космической биомедицине при изучении механизмов развития эффектов микрогравитации[7]. Ранее в экспериментах на монгольских песчанках были проанализированы некоторые популя-ционные характеристики тучных клеток органов пищеварительной системы после орбитального полета и наземного моделирования физиологических эффектов невесомости при использовании методики метахроматиче-ского окрашивания толуидиновым синим [8, 9]. Однако данный подход не дает возможности сделать объективные выводы о содержании триптаза-позитивных и химаза-позитивных тучных клеток в органе. В то же время, протеа-зы тучных клеток обладают высокой биологической активностью, в том числе, в отношении ремоделирования внеклеточного матрикса внутриорганной соединительной ткани. В частности, известно влияние триптазы и химазы на состояние матриксных металлопротеиназ, деструкцию и биосинтез компонентов межклеточного матрикса соединительной ткани [10, 11]. В этой связи представляет большой интерес исследование протеазного профиля популяции тучных клеток под влиянием факторов космического полета, как важного инструмента в механизмах изменения состояния соединительной ткани. Решению обозначенной выше актуальной проблемы космической гастроэнтерологии была посвящена настоящая работа.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Исследование выполнено на монгольских песчанках Merionesungшculatus трёх экспериментальных групп: биологического контроля (п=12), синхронного эксперимента по моделированию некоторых условий космического полета в макете полетной аппаратуры «Контур-Л» в наземных условиях (п=11) и группе животных, перенесших 12-суточный орбитальный полет на КА «Фотон-М» №3 (п=12) [12]. Фрагменты тощей кишки длиной не менее 10 мм фиксировали в растворе нейтрального формалина, заливали в парафин и на гистологических срезах выявляли тучные клетки. Триптазу идентифицировали иммуногистохимическим маркированием мышиными моноклональными антителами к триптазе тучных клеток (Апй-MastCellTryptaseantibody, АЬСат, #аЬ2378, разведение 1:2000) согласно стандартному протоколу [13]. Гомологичные мышиные иммуноглобулины блокировались при предварительной инкубации срезов с неконъюгированными Fab-фрагментами (Goatanti-mouseIgG,
JacksonImmunoResearh, #115-007-003, разведение 1:13). Химаза выявлялась кроличьими по-ликлональными антителами к химазе тучных клеток, конъюгированных с биотином (MastcellChymase/CHYMASEAntibody,
BiotinConjugated, Bioss, #bs-2353R-Biotin, разведение 1:500). Для светлопольной микроскопии связанные первичные антитела детектировали с помощью пероксидазы хрена (AmpliStain™ HorseradishPeroxidaseconjugates (SDTGmbH, Baesweiler, Germany) в соответствии с инструкцией производителя. В дальнейшем ферментную метку визуализировали набором с 3,3'-диаминобензидином в качестве субстрата (DABsubstratekit, VectorLaboratories, Burlingame, CA, USA), срезы докрашивали гематоксилином Майера и заключали в монтажную среду. Для множественного маркирования триптазы и химазы в тучных клетках использовалась иммунофлуоресцентная микроскопия. Для иммунофлуоресцентной детекции триптазы и химазы инкубация с первичными антителами к триптазе в разведении 1:2000 и химазе 1:500 проводилась в течение ночи при температуре +4°С. Связанные антитриптазные первичные антитела в рабочей концентрации 10 мг / мл PBS визуализировали с помощью козьих вторичных антител, конъюгированных с Су3 (CyTM3-conjugatedAffinPureGoatAntiMouseIgG, #115-165-166), используя соответствующий набор фильтров. Антихимазные антитела, связанные с биотином, идентифицировали стрептави-дином (StreptavidinAlexaFluor 488, # S11223) и изучали с помощью набора фильтров для визуализации FITC. Ядра контрастировали неинтер-калирующим красителем DAPI (5 мкг/мл PBS, 15 сек), после чего срезы заключались в монтажную среду Vectashield (Vector Laboratories, Burlingame, США). Иммунофлуоресцентная маркировка была выполнена в соответствии со стандартными протоколами [13].Кроме того, для определения числа тучных клеток, обладающих метахроматическим свойствами, использовали традиционное окрашивание толуи-диновым синим [14, 15]. В тощей кишке раздельно изучали мукозную субпопуляцию ТК, гистотопографически расположенную в пределах слизистой оболочки, и соединительнотканную субпопуляцию ТК, функционирующих в других структурах тощей кишки - подслизи-стой, мышечной и серозной оболочках [16, 17, 18].
Иммуноокрашенные срезы изучены на микроскопеZeissAxioImagerZ 1. Изображения были документированы камерой
AxioCamdigitalmicroscopecamera и в дальнейшем проанализированы с помощью программного обеспечения AxioVision (CarlZeissVision, Germany). Количественное содержание тучных клеток выявляли на полях зрения размером 700х500 мкм во время работы с объективом х20, при этом исследуемые площади микропрепарата не пересекались друг с другом. Для получения репрезентативного объема тучных клеток обрабатывали не менее 15 полей зрения в каждом срезе.Показатели популяционных характеристик тучных клеток рассчитывали в абсолют-
ных (на поле зрения) и относительных (в % от общего количества) величинах. Полученный информационный массив статистически обра-батывалсяс помощью программного обеспечения AxioVision. Достоверность различий, исходя из полученного характера распределения данных, определялась с помощью ^критерия Стьюдента. Исследования проведены с соблюдением требований по гуманному обращению с животными в соответствии с решением Комиссии по биомедицинской этике ИМБП (протокол № 206 от 07.10.2007 г.).
РЕЗУЛЬТАТЫ
Преимущественное распределение тучных клеток в стенке тощей кишки монгольских песчанок наблюдалось в пределах собственной пластинки слизистой оболочки. При этом наибольшая плотность тучных клеток обнаруживалась в области интерстиция, окружающего эпителий крипт. Эта закономерность была характерна как для триптаза-позитивных тучных клеток, так и химаза-содержащих. Гисто-топография тучных клеток после метахромати-ческого окрашивания была аналогична результатам иммуномаркирования. В мукозной субпопуляции преобладали триптаза-позитивные тучные клетки. Они часто формировали группы, состоящие из нескольких клеток (рис. 1-А, 1-В). Гораздо меньшее количество тучных клеток содержало химазу (табл. 1, рис. 1-Г). Множественное маркирование показало, что наиболее редкими были тучные клетки, содержащие в гранулах обе протеазы (табл.2). Особенностью результатов иммуноги-стохимического анализа стало выявление некоторых тучных клеток в строме ворсин, в том числе в их верхней трети, тогда как после окрашивания толуидиновым синим визуализация тучных клеток в ворсинах была случайным событием. В соединительнотканной субпопуляции тучных клеток, локализованной в подсли-зистой, мышечной и серозной оболочках, обнаруживались преимущественно триптаза-позитивные тучные клетки, в то время как хи-маза-содержащие были единичными (табл. 2). Наиболее часто тучные клетки встречались в подслизистой оболочке, окружая пролегающие сосуды. Иногда тучные клетки обнаруживались в прослойках соединительной ткани мышечной оболочки. При этом тучные клетки не кооперировались в группы, которые наблюдались в слизистой оболочке. Аналогичной плотностью распределения характеризовались тучные клетки, окрашенные толуидиновым синим. Однако их было несколько больше, чем выявленных с помощью иммуномаркирования (табл. 1).
Моделирование некоторых факторов космического полета в наземных условиях, которые проводились в макете аппаратуры «Контур-Л», не приводило к существенным изменениям
объема популяции тучных клеток в стенке тощей кишки монгольских песчанок (табл. 1). Тенденция к возрастанию численности трипта-за- и химаза-позитивных тучных клеток, а также обладающих метахромазией не обладала достоверностью (рис. 1-Б). Наиболее значимые изменения касались численности тучных кле-токс одновременной экспрессией триптазы и химазы, которая усиливалась в сравнении с показателями животных виварийной группы (табл. 2). Также с большей частотой начинали выявляться химаза-позитивные тучные клетки в подслизистой оболочке тощей кишки (табл. 2). По остальным критериям показатели популяции тучных клеток были аналогичны имеющимся в группе виварийного контроля. В то же время можно обратить внимание на появление некоторых гистотопографических особенностей, в частности, более частое обнаружение тучных клеток мукозной субпопуляции в ворсинах тощей кишки по сравнению с животными вива-рийной группы.
После космического полета, прежде всего, обращало на себя внимание сокращение численности триптаза-позитивных тучных клеток как в мукозной субпопуляции тощей кишки, так и соединительнотканной, в сравнении с аналогичными показателями животных группы синхронного эксперимента и виварийного контроля. Однако снижение численности триптаза-позитивных тучных клеток в соединительнотканной субпопуляции не было столь драматичным, как в слизистой оболочке (табл. 1). Одновременно происходило достоверное увеличение как численности, так и относительного содержания химаза-позитивных тучных клеток в му-козной и соединительнотканной субпопуляциях тощей кишки по отношению к показателям животных синхронного эксперимента и виварий-ного контроля (табл. 1, 2). Химаза-позитивные тучные клетки с большей частотой идентифицировались в строме ворсин, в т.ч. их верхней трети. С другой стороны, результаты множественного маркирования показали усиление одновременной экспрессии обеих протеаз в тучных клетках по сравнению с показателями синхронного эксперимента и виварийного контроля (табл. 2, рис. 1-Д). В соединительнотканной субпопуляции тучных клеток наблюдалась аналогичная тенденция. Однако здесь она приобретала большие масштабы по сравнению с показателями в слизистой оболочке - общая доля тучных клеток, содержащих химазу, становилась преобладающей в подслизистой, мышечной и серозной оболочках (табл. 2). Результаты традиционного окрашивания толуидиновым синим также свидетельствовали о достоверном уменьшении численности тучных клеток в структурах тощей кишки после космического полета как в сравнении с показателями вива-рийного контроля, так и синхронного эксперимента (табл. 1).
Триптаза
4
Ш л-
50 цт
Триптаза
ПДР1
1^У1гии и л
V 'ж:
Л А* Ег
ГЦ
Метахромазия
Г5* | ГЛ >> Л . ^
Щ аГ'Ж ~
Йг^иЗЗ %
пг^у, ? .. ■ ^г * 'г; У
Б
В
Рисунок 1. Тучные клетки тощей кишки монгольских песчанок.
A. Виварийный контроль. Иммуногистохимическое выявление триптазы тучных клеток. Тучные клетки локализованы преимущественно в области межкриптальной стромы слизистой оболочки. Б.Синхронный эксперимент. Окрашивание толуидиновым синим. Видны тучные клетки слизистой оболочки в различном морфофункциональном состоянии.
В-Д. Двойное иммуномаркирование триптазы (красный цвет) и химазы (зеленый цвет) в тучных клетках. Шкала на фотографиях соответствует 20 мкм.
B. Виварийный контроль. Триптаза-позитивные гранулы (красный цвет)заполняют цитоплазму тучных клеток. Кооперация тучных клеток в группы в пределах слизистой оболочки тощей кишки.
Г. Виварийный контроль. Химаза-позитивная тучная клетка локализована на границе слизистой и подслизистой оболочек тощей кишки.
Д. Космический полет. Тучная клетка подслизистой оболочки тощей кишки с одновременной экспрессией триптазы (красный цвет) и химазы (зеленый цвет).
ОБСУЖДЕНИЕ
Большие количества триптазы и химазы в тучных клетках подчеркивают их важное значение в координации интегративно-метаболического состояния соединительной ткани [19, 20]. У человека триптаза является основным белковым компонентом тучных клеток и находится преимущественно в секреторных гранулах. Для функциональной активизации триптаза должна приобрести тетрамерную структуру, что требует присутствия гепарина и определенный уровень рН [21, 22]. При отсутствии гепарина триптаза претерпевает серьезные конформационные изменения от тетрамер-ного строения к мономерному спотерей активности [21]. Проведенные исследования подтвердили, что наличие триптазы в гранулах тучных клеток коррелируетс их метахроматиче-ским окрашиванием, которое, в свою очередь, может формироваться присутствием гепарина [23]. Результаты нашейработы свидетельствуют, что в тощей кишке монгольских песчанок обнаруживалось примерно равное количество тучных клеток при иммуномаркировании трип-тазы и окрашивании толуидиновым синим. При этом нужно учитывать условную объективность суждения о наличии гепарина в тучных клетках после окрашивания катионовыми красителями, поскольку метахромазия проявляется при содержании в гранулах ТК и других протеоглика-нов, имеющих полианионный характер: гепа-рансульфата, хондроитинсульфата и др.[24]. Поэтому наличие метахромазии не гарантирует присутствие гепарина. В то же время видоспе-цифичной особенностью тучных клеток тощей кишки монгольских песчанок является высокое содержание гепарина в гранулах [25, 26]. Очевидно, именно поэтому популяция тучных клеток гастроинтестинального тракта монгольских песчанок является удобным объектом для изучения при окрашивании толуидиновым синим [7, 8, 9]. В гранулах тучных клеток триптаза в различных соотношениях может солокализо-ваться с химазой, карбоксипептидазой, катеп-син G-подобной протеиназой. При этом известно, что триптаза связана с протеогликановыми комплексами в меньшей мере по сравнению с химазой и карбоксипептидазой [27].
Триптаза способна стимулировать высвобождение ИЛ-8, который участвует в регуляции экспрессии межклеточных молекуладгезии 1САМ-1. Таким образом, триптаза играетваж-ную роль в регенерации эпителия и направленной миграции гранулоцитов после активации тучных клеток [11, 28]. Участвуя в обмене фиб-ронектина [29], а также коллагеназы IV типа триптаза вовлечена в процессы ремоделирова-ния ткани и деградации межклеточного матрик-са, в том числе, при заживлении ран [30, 31]. Протеазы тучных клеток могут выступать как защитные и провоспалительные медиаторы
[32]. Матриксные металлопротеиназы (ММР) обладают свойством деградировать практически все типы белков внеклеточного матрикса соединительной ткани, и они секретируются клетками в виде неактивных предшественников. К настоящему времени существует достаточно много открытых вопросов в механизмах активации матриксных металлопротеиназ. В то же время известно о способности триптазы активировать ММР III и проколлагеназу [33]. Это говорит о том, что триптаза способствует локальной активации ММР и последующей деградации внеклеточного матрикса [34]. Хима-за продуцируется преимущественно в тучных клетках [35], а также, в меньшей степени, может синтезироваться эндотелиальными клетками [36]. Химазы тучных клеток сильно различаются по уровню поверхностного заряда и, соответственно, их связывания с отрицательно заряженными биополимерами, в том числе, гепарином, хондроитинсульфатом и другими про-теогликанами. Однако, имеются сведения, что активность химазы не так сильно зависит от гепарина, как активность триптазы. У человека химаза может участвовать в преобразовании ангиотензина I в ангиотензин II независимо от ингибиторов ангиотензинпревращающего фермента [37], что предполагает активное участие химазы в регуляции артериального давления. В отношении влияния на состояние соединительной ткани, помимо определения активности провоспалительных факторов, химаза способна активировать матриксные металлопротеиназы, в частности, ММР-1 и ММР-3, инициируя последующую деградацию компонентов внеклеточного матрикса [34]. Было показано, что активация ММР-1 требует больших затрат времени и концентрации фермента. Также известно,что гепарин способствует увеличению скорости активации химазой ММР-1.
Изменение стромы тощей кишки под влиянием факторов космического полета можно рассматривать с различных позиций, оценивая перестройки соединительной ткани как со стороны адаптивных, так и альтеративных грави-тационноиндуцированных процессов [2]. Особенности системного кровотока в космическом полете вызывали расстройства внутриорганного кровообращения. При этом можно считать, что снижение количества тучных клеток в строме тощей кишки усугубляло ситуацию в регуляции местного гомеостаза и проницаемости сосудистой стенки. Невесомость могла приводить к снижению эффективности фибриллогенеза в результате затруднения экстрацеллюлярной сборки коллагеновых волокон. Данное состояние соединительной ткани в условиях орбитального полета можно считать одним из проявлений ремоделирования межклеточного матрикса соединительной ткани в соответствии с достижением уровня адаптационной, или "космической", нормы [38]. В результате сни-
жение количества волокнистых структур в строме органов пищеварительной системыобу-славливалось ускоренной редукцией в совокупности с замедлением новообразования волокон, что могло быть связано с активным расходованием протеаз тучных клеток во время космического полета. Выявленное уменьшение численности тучных клеток, видимо, является признаком формирования дефицита их физиологического резерва. Также интересные сведения были получены в экспериментах на японских перепелах на борту орбитальной станции «Мир», показавших слабое развитие соединительной ткани стромы желудочно-кишечного тракта, если эмбриональное развитие проходило в условиях невесомости [39]. Однако авторы не проводили анализ состояния популяции тучных клеток.
В связи с тем, что тучные клетки являются регуляторами тканевого гомеостаза малого действия, или «тактическими» регуляторами, ней-роиммуноэндокринными виртуозами, при их функциональной недостаточности в условиях невесомости можно предположить изменение межклеточной кооперации, ангиогенеза, нейро-иммунного взаимодействия, репаративных, го-меостатических и воспалительных процессов, а также синтеза коллагена, его экстраклеточной агрегации в надмолекулярные структуры и т.д.Очевидно, что редукция числа тучных клеток под влиянием факторов орбитального полета является одним из ключевых звеньев струк-
турно-функциональных изменений интерсти-ция, эпителиальной ткани слизистой оболочки и мышечной оболочки полых органов пищеварительного тракта животных.
Таким образом, после космического полета изменение протеазного профиля в структуре популяции тучных клеток тощей кишки монгольских песчанок происходило на фоне редукции их общей численности. Учитывая влияние активированной триптазы на матриксные ме-таллопротеиназы, проколлагеназу, высвобождение и расщепление фибронектина, коллагена IV типа, а также влияние на митотическую активность фибробластов и их биосинтетические потенции можно предположить, что в условиях невесомости тучные клетки являются непосредственными участниками процессов ремодели-рования внеклеточного матрикса соединительной ткани. В этой связи обращает на себя внимание возрастание уровня химазы в протеиновом профиле популяции тучных клеток. Очевидно, что данный факт имеет значение не только для определения состояния соединительной ткани, но и для регуляции артериального давления.
Авторы выражают искреннюю признательность профессору И.Бухвалову, В.Самойловой, доктору медицины М.Тиману и доктору медицины В.Бекеру (Институт гематопатологии г.Гамбурга, Германия) за консультативную помощь и методическую поддержку в выполнении настоящей работы.
Таблица 1.
Содержание тучных клеток в тощей кишке монгольских песчанок (на поле зрения, светлопольная микроскопия)
Группы животных Толуидиновый синий (метахромазия) Триптаза-позитивные тучные клетки Химаза-позитивные тучные клетки
МСП ССП МСП ССП МСП ССП
Виварий-ный контроль 39,7±3, 1 3,2±0,2 39,6±2, 2 2,5±0,2 2,6±0,4 Единичные
Синхрон-ный\ эксперимент 41,4±2, 2 3,1±0,2 42,4±2, 8 2,8±0,3 2,8±0,2 0,4±0,0 *
Космический полет 24,4±1, 4*, ** 1,4±0,1 *, ** 28,6±1, 1*, ** 2,1±0,2 *, ** 7,8±0,8 *, ** 2,2±0,1 *, **
Условные обозначения и сокращения: МСП - мукозная субпопуляция тучных клеток, локализованная в слизистой оболочке; ССП - соединительнотканная субпопуляция тучных клеток, расположенная в подслизистой, мышечной и серозной оболочках; * - р<0,05 по сравнению с виварийным контролем, ** - р<0,05 по сравнению с синхронным экспериментом.
Таблица 2.
Протеазный профиль тучных клеток тощей кишки монгольских песчанок
(в %, методика - множественное маркирование, флуоресцентная микроскопия)
Группы животных Слизистая субпопуляция тучных клеток Типичная субпопуляция тучных клеток
ТКтр ТКХИМ ТКТР+Х ИМ ТКТР ТКХИМ ТКТР+ХИ М
Виварий-ный контроль 89,8±3, 1 6,1±0,2 4,1±0,2 94,3±3,3 3,8±0,2 1,9±0,1
Синхрон- 90,6±4, 6,0±0,4 3,4±0,3 84,8±4,2 12,1±1, 3,1±0,2
ный эксперимент 4 * 1* *
Космический полет 65,7±4, 5*,** 17,9±1, 1*,** 16,4±1, 2*,** 33,3±2,8 34,9±3, 4*,** 31,8±2, 5*,**
Условные обозначения и сокращения:ТКтр- триптаза-позитивные тучные клетки; ТКхим — химаза-позитивные тучные клетки; ТКТР+ХИМ - тучные клетки с одновременным содержанием триптазы и химазы; * - р<0,05 по сравнению с виварийным контролем, ** - р<0,05 по сравнению с синхронным экспериментом.
ЛИТЕРАТУРА
1. Судаков К.В. Соединительная ткань у крыс при эмоциональном стрессе / К.В.Судаков // Авиакосмическая и экологическая медицина. -2000. - Т.34, №3. - С.27-33.
2. Состояние интерстиция тощей кишки монгольских песчанок после полета на космическом аппарате «Фотон-МЗ» / Д.А. Атякшин,
3.Г. Быков, Е.А. Ильин, А.Н. Пашков // Авиакосмическая и экологическая медицина. - 2012.
- Т.46, № 3. - С.8-13.
3. Атякшин Д.А. Ретикулярные волокна интер-стиция органов пищеварительной системы монгольских песчанок после 12-суточного орбитального полета на КА «Фотон-МЗ» / Д.А. Атякшин, Э.Г. Быков // Журнал анатомии и гистопатологии. - 2013.- Т.2, №3.- С. 14-21.
4. Атякшин Д.А. Коллагены и эластический компонент интерстиция органов пищеварительной системы монгольских песчанок после 12-суточного орбитального полета на борту космического аппарата "Фотон-М3"/ Д.А. Атякшин, Э.Г. Быков // Морфология. - 2014. -Т.145, №3. - С.22.
5. Кондашевская М.В. Тучные клетки и гепарин
- ключевые звенья в адаптивных и патологических процессах / М.В. Кондашевская // Вестник РАМН. - 2010. - № 6. - С.49-54.
6. Silva E.Z.M. Mast cell function: a new vision of an old cell / E.Z.M. Silva, M.C. Jamur, C. Oliver // Journal of Histochemistry & Cytochemistry, 2014.
- V. 62, №.10. - P. 698-738.
7. Атякшин Д.А. Популяционные характеристики слизистых тканевых базофилов тощей кишки монгольских песчанок после 12-суточного орбитального полета на космическом аппарате «ФОТОН-М3» / Д.А. Атякшин, Э.Г. Быков // Авиакосмическая и экологическая медицина. 2013. Т. 47. № 6. С. 17-24.
8. Атякшин Д.А. Состояние тучных клеток тощей кишки монгольских песчанок после космического полета / Д.А. Атякшин, Э.Г. Быков // Журнал анатомии и гистопатологии. 2014. Т. 3. № 3 (11). С. 15-27.
9. Бурцева А.С. Морфологические эквиваленты функциональной активности тучных клеток тощей кишки монгольских песчанок после моделирования эффектов невесомости / А.С. Бурцева, Н.Т. Алексеева, Д.А. Атякшин // Журнал анатомии и гистопатологии. 2015. Т. 4. № 4 (16). С. 26-33.
10. Welle M. Development, significance, and heterogeneity of mast cells with particular regard to the mast cell-specific proteases chymase and tryptase / M.Welle // Journal of leukocyte biology. 1997. V.61. N 3. P.233-245.
11. Tryptase: genetic and functional considerations / L. Hernández-Hernández, C. Sanz, V. García-Solaesa, J. Padrón, A. García-Sánchez, I. Dávila, M. Isidoro-García, F. Lorente // Allergologia et immunopathologia (Madr). 2012. V.40. N 6. P.385-389.
12. Эксперимент с монгольскими песчанками в полете космического аппарата «Фотон-МЗ» / Е.А. Ильин, И.А. Смирнов, П.Э. Солдатов, О.И. Орлов // Авиакосмическая и экологическая медицина. 2009. Т. 43. № 4. С. 21-25.
13. Buchwalow I.B. Immunohistochemistry: Basics and Methods, 1st Edition / I.B. Buchwalow, W. Boecker ed. - London, New York: Springer, 2010 -p. 158.
14. Belanger L.F. Persistent toluidine blue metach-romasia / L.F.Belanger, A. Hartnett // The journal of histochemistry and cytochemistry: official journal of the Histochemistry Society. -1960. - N 1.-P.75.
15. Mulisch Maria, Welsch Ulrich. Romeis - Mikroskopische Technik. 2010. 18 ed. Heidelberg: Spektrum Akademischer Verlag.p.551.
16. БыковВ.Л. Развитиеигетерогенностьтуч-ныхклеток / В.Л. Быков // Морфология. - 2000. - №3. - С.86-92.
17. Kitamura Y., Kanakura Y., Fujita J., Nakano T. Differentiation and transdifferentiation of mast cells; a unique member of the hematopoietic cell family. Int. J. Cell Cloning, 1987. V 5. P. 108-121.
18. Kitamura Y., Kanakura Y., Sonoda S., Asai H., Nakano, T. Mutual phenotypic changes between connective tissue type and mucosal mast cells. Int. Arch. Allergy Appl. Immunol., 1987. V. 82. P. 244-248.
19. ОмельяненкоН.П. Соединительнаяткань (гистофизиологияибиохимия)/ Н.П.Омельяненко, Л.И.Слуцкий. Т.1. / подред. акад. РАН и РАМН С.П.Миронова. - Москва: Изд-во Известия, 2009. - 380 с
20. Schwartz L.B., Bradford T.R., Irani A.M., Deb-lois G., Craig S.S. The major enzymes of human mast cell secretory granules. / The American review of respiratory disease. 1987. V.135. N.5. P. 1186-1189.
21. Schwartz L.B. Immunologic and physicochem-ical evidence for conformational changes occurring on conversion of human mast cell tryptase from
active tetramer to inactive monomer. Production of monoclonal antibodies recognizing active tryptase / L.B. Schwartz, T.R. Bradford, D.C. Lee, J.F. Chle-bowski // The Journal of immunology : official journal of the American Association of Immunolo-gists. 1990. V. 144. N.6. P.2304-2311.
22. Sakai K., Ren S., Schwartz L.B. A novel hepa-rin-dependent processing pathway for human tryp-tase. Autocatalysis followed by activation with dipeptidyl peptidase I. / K. Sakai, S. Ren, L.B. Schwartz // The Journal of clinical investigation.. 1996. V.97. N.4. P.988-995.
23. Craig S.S. Ultrastructural analysis of maturing human T and TC mast cells in situ. / S.S. Craig, N.M. Schechter, L.B. Schwartz // Laboratory investigation; a journal of technical methods and pathology. 1989. V.60. N.1. P.147-157.
24. Rönnberg E., Melo F.R., Pejler G. Mast cell proteoglycans. / The journal of histochemistry and cytochemistry: official journal of the Histochemistry Society. 2012. V.60. N. 12. P.950-962.
25. Horii Y. Heparin-containing mast cells in the jejunal mucosa of normal and parasitized Mongolian gerbils, Meriones unguiculatus / Y. Horii // Int. Arch. Allergy Immunol. - 1992. -Vol. 98, N4. - P.415-419.
26. Nawa Y. Histochemical and cytological characterizations of mucosal and connective tissue mast cells of Mongolian gerbils (Meriones unguiculatus) / Y.Nawa // Int. Arch. AllergyImmunol. - 1994. -Vol.104, N 3.- P.249-254.
27. Goldstein S.M. Protease composition of exocy-tosed human skin mast cell protease-proteoglycan complexes. Tryptase resides in a complex distinct from chymase and carboxypeptidase. / S.M. Goldstein, J. Leong, L.B. Schwartz, D. Cooke // The Journal of immunology : official journal of the American Association of Immunologists. 1992. V. 148. N 8. P.2475-2482.
28. Cairns J.A. Mast cell tryptase is a mitogen for epithelial cells. Stimulation of IL-8 production and intercellular adhesion molecule-1 expression. / J.A. Cairns, A.F. Walls // The Journal of immunology : official journal of the American Association of Immunologists. 1996 V.156. N.1. P.275-283.
29. Lohi J. Pericellular substrates of human mast cell tryptase: 72,000 dalton gelatinase and fibro-nectin. / J. Lohi, I. Harvima, J. Keski-Oja // Journal of cellular biochemistry. 1992. V.50. N.4. P.337-349.
30. Adams J.C., Watt F.M. Fibronectin inhibits the terminal differentiation of human keratinocytes. / J.C. Adams, F.M. Watt // Nature. 1989. V.340. N6231. P.307-309.
31. Douaiher J. Development of Mast Cells and Importance of Their Tryptase and Chymase Serine Proteases in Inflammation and Wound Healing / J. Douaiher, J. Succar, L. Lancerotto, M.F. Gurish, D.P. Orgill, M.J. Hamilton, S.A. Krilis, R.L. Stevens // Adv Immunol., 2014. - V.122. - P.211-252.
32. Caughey G.H. Mast cell proteases as protective and inflammatory mediators. / Advances in experimental medicine and biology. 2011. N 716. P.212-234.
33. Gruber B.L. Synovial procollagenase activation by human mast cell tryptase dependence upon matrix metalloproteinase 3 activation. / B.L. Gruber, M.J. Marchese, K. Suzuki, L.B. Schwartz, Y. Oka-da, H. Nagase, N.S. Ramamurthy // The Journal of clinical investigation. 1989 V.84. N.5. P.1657-1662.
34. Lees M. Mast cell proteinases activate precursor forms of collagenase and stromelysin, but not of gelatinases A and B. / M.Lees, D.J. Taylor, D.E. Woolley // European journal of biochemistry. 1994. V.223. N.1. P.171-177.
35. Irani A.A., Schechter N.M., Craig S.S., DeB-lois G., Schwartz L.B. Two types of human mast cells that have distinct neutral protease compositions. / A.A. Irani, N.M. Schechter, S.S.Craig, G. DeBlois, L.B. Schwartz // Proceedings of the Na-tionalAcademy of Sciences of the United States of America. 1986. V.83. N.12. P.4464-4468.
36. Urata H. Cellular localization and regional distribution of an angiotensin II-forming chymase in the heart. / H. Urata, K.D. Boehm, A. Philip, A. Kinoshita, J. Gabrovsek, F.M. Bumpus, A. Husain // The Journal of clinical investigation. 1993. V.91. N4. P. 1269-1281.
37. Hoit B.D. Effects of angiotensin II generated by an angiotensin converting enzyme-independent pathway on left ventricular performance in the conscious baboon. / B.D. Hoit, Y. Shao, A. Kinoshita, M. Gabel, A. Husain, R.A. Walsh // The Journal of clinical investigation. 1995. V.95 N.4. P.1519-1527.
38. Пестов И.Д. Управление процессами естественной адаптации в космических полетах / И.Д.Пестов // Организм и окружающая среда: адаптация к экстремальным условиям: материалы российской конференции с международным участием. - Москва, 2003. - С.272-273.
39. Гистогенез внутренних органов эмбрионов японского перепела, развившихся в условиях невесомости / Т.С. Гурьева [и др.] // Авиакосмическая и экологическая медицина. - 2009. -Т.43, №6. - С.8-13.
