CC BY
31
1. За умов експериментального токсичного гепатиту виявлено ряд патоморфологічних змін структури системи канальців нирок: зменшення їх просвіту, збільшення кровопостачання інтерстиційних судин в кірковій речовині та помутніння цитоплазми клітин.
2. Настоянка ехінацеї пурпурової та мелатонін мали корегуючий вплив на морфологічні зміни в нирках викликані дією тетрахлорметану, покращуючи мікроциркуляцію в судинах і стан епітелію звивистих канальців.
Перспективи подальших розробок у даному напрямку. Вимірювання окислювальної модифікації білків в гістологічних препаратах нирок.
1. Губский Ю.И. Коррекция химического поражения печени.-К:Здоров’я, 1989.- 168с.
2. Мещишен І.Ф., Пішак В.П., Заморський І.І. Мелатонін: обмін та механізм дії// Бук. мед. Вісник.-2001.-Т.5, №2.-С.3-15.
3. Скакун Н.П., Писько Г.Т., Мосейчук И.П. Поражение печени четыреххлористым углеродом: Обзорн. информ.- М.: НИИТЭХИМ, 1989.- 106с.
4. Чекман І.С. Клініко-фармакологічні властивості ехінацеї // Ліки. —2001. —№3. —С. 25—26.].
5. Venerucci F. Histopathology kits: methods and applications.- Bologna, Milan: Bio-Optica. - 2001.- 95p
МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ПОЧЕК КРЫС НА ФОНЕ ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬГО ТОКСИЧЕСКОГО ГЕПАТИТА ПРИ СОВМЕСТНОМ ДЕЙСТВИИ НАСТОЙКИ ЭХИНАЦЕИ ПУРПУР НОЙ И МЕЛАТОНИНА В УСЛОВИЯХ ИСКУССТВЕННОГО РАВНОДЕНСТВИЯ Мещишен И.Ф., Мацёпа И.В., Давиденко И.С.
На белых нелинейных крысах-самцах с токсическим гепатитом, вызванным раство-ром тетрахлорметана, изучено морфологи-ческие особенности почек при совместном действии настойки эхинацеи пурпурной и мелатонина в условиях искусственного равноденствия.
Ключевые слова: мелатонин, токсический гепатит, настойка эхинацеи пурпурной, почки.
MORPHOLOGICAL CHARACTERISTICS OF KIDNEYS RATS UNDER CONDITION OF TOXIC HEPATITIS UNDER ECHINACEA PURPUREA AND MELATONIN ACTION IN CASE OF VARYING DURATION OF THE DAYLIGHT Meshchyshen I. F. , Matsiopa I. V. , Davydenko I. S.
Morphological characteristics coadministration of Echinacea purpurea and melatonin has been studied under conditions of a vary-ing duration of the photoperiod (12 light: 12 darkness) on nonline male rats with toxic hepatitis induced by tetrachloromethane solution.
Key words: melatonin, toxic hepatitis, Echinacea purpurea, kidneys.
УДК 616.5-092.9:615.916’175
ПРОНИЦАЕМОСТЬ КОЖИ БЕЛЫХ КРЫС ДЛЯ ВОДОРАСТВОРИМЫХ ВЕЩЕСТВ В УСЛОВИЯХ ИЗБЫТОЧНОГО ОБРАЗОВАНИЯ ОКСИДА АЗОТА ИЗ ЭКЗОГЕННОГО
ИСТОЧНИКА
'//////////////////////;, ^в^yз.yкрaины?y<йa^s<aямeдици^aяс^cмaтcлc^чeскaя^'кaдeмия"и^^ncл^aвa^
Статья является фрагментом плановой НИР ВГУЗУ «Украинская медицинская стоматологическая академия» ‘МО-залежні механізми розвитку патологічних процесів та їх корекція фізіологічно активними речовинами” (№ держреєстрації №0104и000746).
В коже N0 играет важную роль в поддержании ее барьерно-защитных функций и обеспечении нормального кровотока в микроциркуляторном русле, опосредует процесс ацетилхолин-индуцированной вазодилатации, обеспечивает норадренэргическую трансмиссию и электрическую проводимость в точках с низким сопротивлением (точках акупунктуры) [7,8].
Вывление протективных эффектов оксида азота в отношении кожи вылилось в создание различных NO-содержащих мазей, кремов, гелей и других лекарственных форм и косметических средств [12]. Отмечается способность NO-содержащего газового потока ускорять заживление кожных дефектов [9]. В то же время оксид азота известен как мощный повреждающий агент, проявляющий прооксидантные и апоптотические свойства, угнетающий биоэнергетические и репаративные процессы [1,6].
В настоящее время практически отсутствуют работы, освещающие изменения функциональных и метаболических процессов в коже млекопитающих при избыточном образовании оксида азота из экзогенных предшественников. Одним из таких источников, являются нитраты, относящиеся к числу основных экологических загрязнителей как в аграрных, так и в промышленных регионах.
Целью работы было исследование влияния образования избыточного количества оксида азота из экзогенного предшественника (модель хронической интоксикации нитратом натрия) на проницаемость кожи белых крыс для водорастворимых веществ.
Материал и методы исследования. Эксперименты выполнены на 20 белых крысах линии Вистар массой 130-160 г. Проведено четыре серии опытов: в первой серии необходимые показатели изучали у интактных животных (контрольная серия); во второй, третьей и четвертой сериях - животным вводили нитрат натрия в течение соответственно 2-х недель, 1-го и 3-х месяцев. Нитрат натрия вводили животным интрагастрально в дозе 200 мг/кг массы тела в виде водного раствора. Использование этой методики разрешает воссоздать избыточное образование NO и депонирование его в виде парамагнитных комплексов с гемовым и негемовым железом [1].
Моделью для изучения трансгландулярной проницаемости кожи служила кожа подошвенных участков передних и задних лапок крыс, что связано с наличием на подушечках лапок у грызунов потовых желез, отсутствующих на коже туловища [4]. Методика пробы заключалась в том, что на кожу подушечек всех лапок белых крыс наносили каплю 1% раствора адреналина, приготовленного ex tempore [5]. В наших исследованиях определялась продолжительность времени от начала поступления раствора в выводные протоки потовых желез до появление мраморно-бледных участков кожи.
Результаты пробы расценивали как отрицательные (-) при отсутствии побледнения кожи; слабоположительные (+) - при появлении побледнения кожи в виде отдельных белых точек; положительные (++) - при слиянии точек побледнения и образовании узловатой сетки; резко положительные (+++) - при образовании сплошного пятна, близкого по размеру к помещенной на кожу капле.
Полученные данные обрабатывали статистически с использованием критерия х2 и критерия Стьюдента.
Результаты исследования и их обсуждение. Нанесение 1% раствора адреналина на кожу спины и подушечек всех лапок белых крыс (без активации механизмов постперспирационной проницаемости кожного покрова для водных растворов веществ) во всех сериях экспериментов не сопровождалось сужением сосудов. Визуально исследуемые участки кожи не изменялись. Это свидетельствует о том, что как у интактных животных, так и при введении нитрата натрия в изучаемые сроки транскорнеальное проникновение водорастворимых веществ отсутствует.
Для активации трансгландулярного пути проникновения водорастворимых веществ лапки животных помещали в термокамеру с температурой 55-65°С (на 3 мин), затем резко захолаживали до температуры 25-30°С (в течение 2 мин), после чего вновь подвергали тепловому воздействию при температуре 55-65°С (3 мин) с последующим захолаживанием до температуры 25-30°С (на 2 мин) [3].
Выявлено, что при исследовании интактных животных все адреналиновые пробы на подушечках правых лапок дают отрицательный результат (табл. 1), что указывает на отсутствие проницаемости кожного барьера для водорастворимых веществ.
На 14 сутки после начала введения нитрата натрия на коже 60% подушечек праых лапок результаты адреналиновой пробы были слабо положительными (+). На 30 сутки хронической интоксикации нитратом натрия результаты адреналиновой пробы были слабо положительными (+) на коже 70% и положительными (++) - 30% подушечек правых лапок. На 90 сутки после начала введения нитрата натрия результаты адреналиновой
пробы были слабо положительными (+) на коже 20%, положительными (++) - 70% и резко положительными (+++) - 10% подушечек правых лапок.
Таблица 1
Оценка пробы на проницаемость кожи правых лапок белых крыс (нанесение 1% раствора адреналина) в условиях избыточного поступления в организм нитрата _________________________натрия, абс. к-во проб и %_______________________
Характер пробы Контроль Время введения нитрата натрия
2 нед 1 мес 3 мес
Отрицательная (-) 10 (100%) 4 (40%)
Слабо положительная (+) 6 (60%) 7 (70%) 2 (20%)
Положительная (++) 3 (30%) 7 (70%)
Резко положительная (+++) 1 (10%)
Х2 17,00 92,00 91,00
Р <0,001 <0,001 <0,001
Примечание: здесь и в табл. 3 критерий х2 и вероятность ошибки Р рассчитывали при сравнении
результатов с данными контрольной серии.
На 30 сутки хронической интоксикации нитратом натрия были выявлены различия в скорости развития побледнения кожи при положительных результатах (+,++,+++) адреналиновой пробы на подушечках правых передних и задних лапок (табл. 2). На подушечках правых передних лапок побледнение развивается через 302.8±4.6 с, а на подушечках правых задних лапок - 331.2±3.8 с (на 9.1% позднее, Р<0,001).
На 90 сутки после начала введения нитрата натрия на подушечках правых передних лапок побледнение развивается через 282.8±1.9 с, на подушечках правых зад -них лапок - 294.4±3.0 с (на 4.1% позднее, Р<0,01). Эти данные свидетельствуют о наличии передне-задней асимметрии показателей скорости проникновения водорастворимых веществ через кожный барьер. Это, по-видимому, может быть связано с различным числом потовых желез на подушечках левых и правых лапок, что проявляется в период наибольшей активации их функциональной активности.
Таблица 2
Время выявления побледнения кожи подушечек правых лапок белых крыс после 30- и 90-дневного избыточного поступления в организм нитрата натрия (М+т,
п=20), с
Время введения нитрата натрия Время наступления побледнения кожи, с
Правая передняя лапка Правая задняя лапка
30 суток 30.8±4.6 331.2±3.8*
90 суток 282.8±1.9** 294.4±3.0*/**
Примечание: *- Р<0,05 при сравнении результатов исследования кожи подушечки задних лапок с
данными, полученными при исследовании передних; **- Р<0,05 при сравнении результатов на 90 сутки интоксикации с данными, полученными на 30 сутки после начала введения нитрата натрия.
Таким образом, регулирующее действие высоких концентраций N0 направлено на активизацию процесса потоотделения, который предшествует трансгландулярному переносу водорастворимых веществ через кожу.
Выявленное нами в динамике хронической интоксикации нитратом натрия усиление трансгландулярного пути проникновения водорастворимых веществ не в полной мере согласуется с полученными нами ранее данными о развитии биоэнергетической недостаточности в тканях кожи (выявлено снижение концентрации АТФ и энергетического потенциала) [2]. Известно, что потоотделение - непременная фаза, предшествующая реабсорбции воды и растворенных в ней веществ [5] - является АТФ-зависимым процессом (АТФ необходим в данном случае и как макроэрг, и как регуляторный фактор [10]). Однако, данные литературы подчеркивают, что N0 играет важную роль в регуляции процесса экскреции пота эккринными железами. Так, у больных с гипергидрозом (усиленной потливостью) уровень N0 в плазме крови существенно
выше, чем у здоровых лиц [11]. N0 и АФК способны непосредственно активировать как центральный, так и периферический компоненты симпатического отдела нервной системы, регулирующие потоотделение.
В динамике интоксикации отмечается ускорение появления побледнения в ходе адреналиновой пробы. Так, на 90 сутки после начала введения нитрата натрия на подушечках правых передних лапок побледнение развивается на 6.6% (Р<0,01) ранее, чем на 30 сутки интоксикации. На подушечках правых задних лапок побледнение развивается на 11.1% (Р<0,001) ранее, чем на 30 сутки интоксикации.
При оценке адреналиновых проб на подушечках левых лапок у интактных животных также отмечается отрицательный результат (табл. 3), что подтверждает отсутствие проницаемости кожи для водорастворимых веществ. На 14 сутки после начала введения нитрата натрия на коже 40% подушечек левых лапок результаты адреналиновой пробы были слабо положительными (+). На 30 сутки хронической интоксикации нитратом натрия результаты адреналиновой пробы были слабо положительными (+) на коже 60% и положительными (++) - 40% подушечек левых лапок. На 90 сутки после начала введения нитрата натрия результаты адреналиновой пробы были слабо положительными (+) на коже 20%, положительными (++) - 80% подушечек левых лапок.
Таблица 3
Оценка пробы на проницаемость кожи левых лапок белых крыс (нанесение 1% раствора адреналина) в условиях избыточного поступления в организм нитрата _________________________натрия, абс. к-во проб и %_______________________
Характер пробы Контроль Время введения нитрата натрия
2 нед 1 мес 3 мес
Отрицательная (-) 10 (100%) 6 (60%)
Слабо положительная (+) 4 (40%) 6 (60%) 2 (20%)
Положительная (++) 4 (40%) 8 (80%)
Резко положительная (+++)
Х2 8,67 92,00 92,00
Р <0,05 <0,001 <0,001
Приведенные данные существенно не отличаются от результатов постановки адреналиновой пробы на подушечках правых лапок.
На 30 сутки хронической интоксикации нитратом натрия также выявлены различия в скорости развития побледнения кожи при положительных результатах (+,++,+++) адреналиновой пробы на подушечках левых передних и задних лапок (табл. 4). На подушечках левых передних лапок побледнение развивается через 305.6±5.2 с, а на подушечках левых задних лапок - 324.9±4.2 с (на 6,3 % позднее, Р<0,02).
Таблица 4
Время выявления побледнения кожи подушечек левых лапок белых крыс после 30- и 90-дневного избыточного поступления в организм нитрата натрия (М+т,
п=20), с
Время введения нитрата натрия Время наступления побледнения кожи, с
Левая передняя лапка Левая задняя лапка
30 суток 305.6±5.2 324.9±4.2*
90 суток 286.4±2.6** 296.8±3.3*/**
Примечание: *- Р<0,05 при сравнении результатов исследования кожи подушечки задних лапок с данными, полученными при исследовании передних; **- Р<0,05 при сравнении результатов на 90 сутки интоксикации с данными, полученными на 30 сутки после начала введения нитрата натрия; ***- Р<0,05 при сравнении результатов с данными, полученными в те же сроки интоксикации на контрлатеральной лапке.
На 90 сутки после начала введения нитрата натрия на подушечках левых передних лапок побледнение отмечается через 286.4±2.6 с, на подушечках левых задних лапок - 296.8±3.3 с (на 3.6% позднее, Р<0,05). Эти данные подтверждают наличие
передне-задней асимметрии показателей скорости проникновения водорастворимых веществ через кожный барьер в динамике хронической интоксикации нитратом натрия.
Время обнаружения побледнения кожи при адреналиновой пробе на подушечках левых лапок также заметно сокращается при 90-дневной интоксикации по сравнению с данными на 30 сутки: на подушечках правых передних лапок - на 6.3% (Р<0,01) ранее, правых задних лапок - на 8.6% (Р<0,001) ранее.
В ходе исследования кожи подушечек лапок белых крыс, содержащей потовые железы, выявлено, что торможение потоотделения не сопровождается повышением проницаемости кожи для адреналина у интактных животных и приводит к прогрессирующему увеличению проникновения адреналина у животных с избыточной нагрузкой нитратом натрия, что свидетельствует об активации в этих условиях трансгландулярного пути проникновения водорастворимых веществ. На 30- и 90-сутки хронической интоксикации нитратом натрия выявлена передне-задняя асимметрия скорости проникновения водорастворимых веществ через кожный барьер, что выявляется в достоверно более быстром трансгландулярном проникновении адреналина в коже подушечек передних лапок по сравнению с задними.
1. Костенко В.О. Механізми порушення окисних процесів у тканинах при надлишковому утворенні оксиду азоту з екзогенних попередників / Костенко В.О., Костенко А.Г., Денисенко С.В. [та ін.] // Клін. та експ. патол. - 2004. - Т.З, № 2 (Ч.1). - C.202-204.
2. Оренчук Е.П. Окислительные процессы в коже в условиях длительного поступления нитрата натрия в организм белых крыс / Оренчук Е.П., Костенко В.А. // Світ медицини та біології. - 2008. - №3. - С.78-81.
3. Пат. 2191558 Pоссийская Федерация. Способ лечения облысения и устройство для его осуществления / Педдер В.В., Педдер А.В., Шкуро Ю.В. ; заявитель и патентообладатель Педдер Валерий Викторович. - заявл. 17.09.98 ; опубл. 01.04.07.
4. Pуководство по изучению кожного покрова млекопитающих / [В.Е.Соколов, Л.Н.Скурат, Л.В.Степанова и др.] ; под ред. В.Е.Соколова, P.П.Женевской. - М. : Наука, 1988. - 279 с.
5. Слынько П.П. Потоотделение и проницаемость кожи человека / П.П. Слынько. - К. : Наукова думка, 1973. - 255 с.
6. Циклические превращения оксида азота в организме млекопитающих / [ Pеутов В.П., Сорокина Е.Г., Охотин В.Е., Косицын Н.С.]. - М. : Наука, 1998. - 159 с.
7. Bruch-Gerharz D. Nitric oxide in human skin: current status and future prospects / Bruch-Gerharz D., Ruzicka T., Kolb-Bachofen V. // J. Invest. Dermatol. - 1998. - V.110, №1. - P.1-7.
8. Chen J.X. Effects of nitric oxide and noradrenergic function on skin electric resistance of acupoints and meridians / Chen J.X., Ma S.X. // J. Altern. Complement. Med. - 2005. - V.11, №3. - P.423-431.
9. Ghaffari A. Potential application of gaseous nitric oxide as a topical antimicrobial agent / Ghaffari A., Miller C.C., McMullin B., Ghahary A. // Nitric Oxide. - 2006. - V.14, №1. - P.21-29.
10. Granger D. V-type H+-ATPase in the human eccrine sweat duct: immunolocalization and functional demonstration / Granger D., Marsolais M., Burry J., Laprade R. // Am. J. Physiol. Cell Physiol. - 2002. -V.282, №6. - P.C1454-C1460.
11. Karaca S. Is nitric oxide involved in the pathophysiology of essential hyperhidrosis? / Karaca S., Kulac M., Uz E. [et al.] // Int. J. Dermatol. - 2007. - V.46, №10. - P.1027-1030.
12. Seabra A.B. Topically applied S-nitrosothiol-containing hydrogels as experimental and pharmacological nitric oxide donors in human skin / Seabra A.B., Fitzpatrick A., Paul J. [et al.] // Br. J. Dermatol. - 2004. - V.151. - P.977-983.
ПРОНИКНІСТЬ ШКІРИ БІЛИХ ЩУРІВ ДЛЯ ВОДОРОЗЧИННИХ РЕЧОВИН ЗА УМОВ НАДЛИШКОВОГО УТВОРЕННЯ ОКСИДУ АЗОТУ З ЕКЗОГЕННОГО ДЖЕРЕЛА Оренчук Е.П.
У експерименті на 20 білих щурах виявлено, що пригнічення пітніння не супроводжується підвищенням проникності шкіри подушечок лапок білих щурів, що містять потові
PERMEABILITY OF RATS’ SKIN FOR WATER-SOLUBLE SUBSTANCES IN EXCESSIVE NITRIC OXIDE FORMATION FROM EXOGENOUS SOURCE Orenchuk E.P.
The experiment on 20 white rats has shown that inhibition in perspiration hasn’t been accompanied by increasing of the permeability of pad-cushion skin (contained sweat glands) to
залози, для адреналіну у інтактних тварин і epinephrine in the intact animals and lead to the
призводить до прогресуючого збільшення progressive increasing permeability to
проникнення адреналіну у тварин з надлишковим epinephrine in the rats with sodium nitrate
навантаженням нітратом натрію, що свідчить про burden. It is evidence of the activation of
активацію за цих умов трансгландулярного шляху transglandular skin permeability for water-soluble
проникнення водорозчинних речовин. substances.
Ключові слова: трансгландулярна Key words: transglandular skin
проникність шкіри, оксид азоту, хронічна permeability, nitric oxide, chronic intoxication with
інтоксикація нітратом натрію. sodium nitrate.
УДК 611.316.5:615.217.2
ЗМІНИ СТРУКТУРИ ПІД’ЯЗИКОВОЇ ЗАЛОЗИ ЩУРІВ ПІСЛЯ ВВЕДЕННЯ АДРЕНАЛІНУ І
АЦЕТИЛХОЛІНУ
Під’язикова залоза щурів є найменшою серед великих слинних, серед кінцевих відділів переважають слизові, що робить секрет під’язикової залози густим з великим вмістом муцину [7]. Означена особливість обумовлює основну функцію під’язикової залози - захист слизової оболонки порожнини рота від впливу агресивних (алкоголь, тютюновий дим, кислоти) і відкиданих речовин [2]. Введення адреноміметиків викликає посилене виведення секреторних гранул клітинами серозних півмісяців шляхом екзоцитозу [3, 5]. Стимуляція під’язикових залоз холіноміметиками не стимулювала секрецію сероцитів, а призводила до посиленного секретовиділення мукоцитів з втратою цитоплазми [8]. Це питання дискутабельне, тому що, згідно інших джерел, парасимпатична інервація ацинарних відділів під’язикових залоз не визначена і введення холіноміметиків не викликає виведення секрету залози [9].
Метою роботи було визначення морфологічних змін в під’язикових залозах щурів після введення адреналіну і ацетилхоліну.
Матеріал та методи дослідження. Дослідження виконано на статевозрілих щурах-самцях. Під гексеналовим наркозом (0,05 мг/кг) перша група - контрольна (10 тварин) отримувала внутрішньо-артеріально розчин 0,85% NaCl, друга -експериментальна (10 тварин)отримувала розчин адреналіну (0,3 мг/кг) і третя - 10 тварин, яким вводили розчин ацетилхоліну (1,5 мг/кг). Виводили тварин з експерименту шляхом передозування гексеналового наркозу. Шматочки слинних залоз заключали в епон-812 [4]. Напівтонкі зрізи отримували на ультрамікротомі УМТП-7, забарвлювали толуїдиновим синім і вивчали в світловому мікроскопі. Морфометричне дослідження включало визначення зовнішнього діаметру - Дз, діаметру просвіту - Дп, висоти секреторних гландулоцитів - Ве секреторних епітеліальних комплексів, кількості клітин в стані екструзії секреторних гранул - Кее, діаметрів капілярів, посткапілярів і венул в складі часточок слинних залоз за допомогою окуляр-мікрометра МОВ-1-16 [1]. З отриманних блоків виготовляли ультратонкі зрізи на ультратомі УМПТ-4, контрастували і монтували їх на бленди. Вивчали в електронному мікроскопі МБР-100 при прискорюючій напрузі 75 КВт. Статистичну обробку проводили за методами варіаційної статистики за допомогою програми ЕхеІ [6].
Результати дослідження та їх обговорення. Вивчення двовимірних реконструкцій з напівтонких зрізів під’язикових залоз щурів, забарвлених розчином толуїдинового синього з рН 8,4, визначило, що цитоплазма мукоцитів забарвлювалась в бузковий колір (Р-форма), що свідчило про наявність в секреторних гранулах білків і мукополісахаридів. Клітини серозних півмісяців, з переважанням білків в складі цитоплазми, забарвлювались в синій колір (а-форма). У щурів контрольної групи в складі часточок під’язикової залози нами не визначені клітини, які містили в складі секреторних продуктів тільки вуглеводи ^-форма).
