CC BY
35
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ПРЕПАРА ТОВ
199. Терапевтический эффект оценивали по торможению роста опухоли (ТРО,%).
Результаты. С целью прогнозирования эффективности эстразина в клинике была использована аденокарцинома К.3327-Н, которая является адекватной моделью аденокарциномы предстательной железы человека и содержит рецепторы эстрогенов (12,1±1,3 фмоль/мг белка) и андрогенов (39,7±1,7 фмоль/мг белка). На І13327-Н эстра-зин в дозе 100 мг/кг при введении в течение 5 дней на 8 неделе опыта проявил статистически значимый терапевтический эффект (ТРО=64%). Постепенно терапевтический эффект эстразйна нарастал и к 17 неделе опыта составлял 88% ТРО. Противоопухолевый эффект эстрацита во время его введения был несколько выше действия эстразина. Однако максимальный терапевтический эффект этого препарата был выявлен на 17 неделе опыта и составлял 70% торможения роста опухоли, который стати-стичеки был ниже действия эстразина. Кастрация приво-
дила к торможению роста Ю327-Н уже через 2 недели после хирургического вмешательства. Торможение роста опухоли после кастрации на всем протяжении опыта составляло 63-76%.
Кроме того показано, что эстразин оказывал пограничный противоопухолевый эффект в отношении низкодифференцированного гормононезависимого рака предстательной железы К3327-МАТЬуІді (ТРО=43%), тогда как эстрацит тормозил рост этой опухоли только на 20%.
Заключение. Таким образом, результаты настоящего исследования показывают, что эстразин обладает отсроченным и пролонгированным противоопухолевым действием на гормонозависимой аденокарциноме предстательной железы К3327-Н. По терапевтическому эффекту на Я3327-Н эстразин превосходит действие эстрогеноцитос-татика эстрацит и кастрации. Эти данные позволяют рекомендовать его для лечения гормонозависимой аденокарциномы предстательной железы человека.
СИНТЕЗ И ИЗУЧЕНИЕ ЦИТОТОКСИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ ФРАГМЕНТОВ СИГНАЛЬНОГО БЕЛКА GRB-2
Л. И. Смирнова, А. П. Смирнова, С.В. Устинкина, Н.К. Власенкова, Г. К. Герасимова Российский онкологический научный центр им. H.H. Блохина РАМН
Успехи фундаментальной медико-биологической науки в изучении механизма злокачественной трансформации клеток открыли новые мишени воздействия потенциальных противоопухолевых средств. Данные о важной роли белка Grb-2 в запуске так называемых Ras-зависимых сигнальных путей, связанных с активацией протоонкогенов, послужили основанием для настоящей работы.
Белок Grb-2 способен к высокоаффинному связыванию с фосфотирозиновыми участками рецепторов, специфичность которого определяется небольшой последовательностью аминокислотных остатков. Генетические исследования показали, что направленные мутации доменов Grb-2 белка или фосфотирозиновых участков их лигандов могут ослабить или полностью блокировать Ras-зависимые сигнальные пути в опухолевых клетках.
В этой связи кажется возможной блокада передачи сигнала от рецептора к Ras-белку с помощью коротких олигопептидов.
Проанализировав литературные данные о взаимодействии белка Grb-2 с фосфотирозиновыми участками рецепторов, мы остановили свой выбор на фрагменте Ь,Зацепи аминокислотной последовательности SH2 домена Grb-2, содержащей 7 аминокислот.
Модификация этого фрагмента предполагала замену аминокислот по принципу их комплиментарности, а с целью увеличения ферментативной устойчивости пептида замену Ь-фенилаланина в положении 2 на неприродную аминокислоту Б-фенил аланина.
В целом классическими методами пептидной химии синтезировано и охарактеризовано 11 коротких пептидов, содержащих от 3-х до 7-ми аминокислот. Цитоток-сические свойства синтезированных соединений были изучены в РОНЦ РАМН на культурах клеток меланомы человека линии МБ и рака яичника СаОу. Было показано, что гептапептиды - это наименьшая аминокислотная последовательность, которая привела к появлению цитотоксичности.
Эти наблюдения, а также литературные данные о взаимодействии положительно заряженных групп фрагментов сигнального белка ОгЬ-2 с отрицательно заряженными фосфатными группами участков рецепторов являются предпосылками для продолжения поиска.
Предполагается модификация исследуемого фрагмента за счет дополнительного введения в него аминокислот основного характера аргинина и лизина и при необходимости удлинения аминокислотной последовательности.
ПРОЛОНГИРОВАННАЯ И МНОГОКУРСОВАЯ ФОТО ДИНАМИЧЕСКАЯ ТЕРАПИЯ.
В. В. Соколов, В. И. Чиссов, Е.В. Филоненко, Д. Г. Су хин, Е.С. Карпова, Л. В. Телегина, Р. И. Якубовская Московский научно-исследовательский онкологический институт им. П.А.Герцена.
В МНИОИ им. П.А. Герцена в 1993 году были начаты ние фотосенсибилизатора и фракционирование световой исследования по разработке и клиническому применению дозы с ежедневным повторением сеансов ФДТ в течение 7 -методов пролонгированной (ПрФДТ) и многокурсовой 10 и более дней. Целью многократного низкодозного све-(МкФДТ) ФДТ. ПрФДТ предполагает однократное введе- тового воздействия является усиление апоптоза, селектив-
Ш/том1/2003
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
42
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ПРЕПАРАТОВ
ной резорбции и деструкции как поверхностно расположенной, так и интрамуральной части опухоли при минимальных повреждениях окружающей нормальной ткани. Основным условием для ПрФДТ является использование фотосенсибилизатора, способного длительно удерживаться в опухолевой ткани (фотосенс). В течение последних двух лет для потенциирования ПрФДТ используется ИК лазер-индуцированная термотерапия. С использованием данных методик, проведено лечение 161 больного (480 опухолей) с множественным опухолевым поражением кожи (базальноклеточный рак с поражением всех слоев дермы - 73 пациента; плоскоклеточный рак - 3; метастатическое поражение кожи - 85 (метастазы меланомы - 21, метастазы рака молочной железы - 64). Полная регрессия получена при ПрФДТ базальноклеточного рака кожи в 68% наблюдений, метастазах меланомы - в 42%), метастазах рака молочной железы - в 21%), частичная регрессия - в 22%, в 28%> и в 48%) соответственно. Срок наблюдения от 1 до 7 лет.
При МкФДТ введение фотосенсибилизатора и сеанс светового воздействия повторяются с интервалом от 1 недели до 3 месяцев в зависимости от типа препарата и выраженности терапевтического эффекта предшествующего курса ФДТ. Цель МкФДТ: у больных с ранней и малой опухолевой патологией - полная регрессия; у инкурабельных больных с распространенными опухолями - частичная деструкция опухоли, стимуляция апоптоза и ряда факторов
противоопухолевого иммунитета, которые могут приводить к стабилизации опухолевого процесса. Для МкФДТ используются преимущественно фотосенсибилизаторы, которые быстро метаболизируются и выводятся из организма (фотогем, протопорфирин IX, радахлорин). При применении МкФДТ в группе больных с остаточной опухолью после первого курса ФДТ рака I ст. (44 пациента с опухолями головы и шеи (7), бронхов (3), пищеварительного тракта (32), свода влагалища (2)) удалось добиться полной регрессии у 39% пациентов (срок наблюдения от 1 до 9 лет); при использовании адъювантной МкФДТ (33 больных раком мочевого пузыря) удалось достичь удлинения сроков безрецидивного периода у всех пациентов; в группе больных с местно-распространенными опухолями (13 больных раком пищевода) применение МкФДТ привело к стабилизации опухолевого процесса и улучшению качества жизни.
Наши исследования и многолетние наблюдения за больными не выявили усиления или появления токсических реакций, связанных с многократным введением фотосенсибилизатора, либо с продолжительным световым воздействием на опухоль и окружающие ткани. Таким образом, полученные результаты ФДТ с использованием указанных методик показывают целесообразность продолжения их дальнейшей разработки и клинического применения.
ВЫСОКОАФФИННЫЕ АгАДРЕНОРЕЦЕПТОРЫ (ArAR) -МОЛЕКУЛЯРНАЯ МИШЕНЬ СПЕЦИФИЧЕСКОГО СВЯЗЫВАНИЯ ТЕРАФТАЛА
Т.Н. Солнцева, Т.А. Сидорова, Г. К. Герасимова. Российский онкологический научный центр РАМН им. H.H. Блохина
Исследование фармакологических свойств терафтала -натриевая соль окси-4,5 карбокси фталоцианина Со+2(Т) в эксперименте и клинике выявило наряду с его противоопухолевым эффектом ряд дополнительных свойств и, в частности, гипотензивное действие. Это позволило нам предположить, что эффект терафтала реализуется в клетке через рецепторы нейромедиаторов плазматической мембраны путем вмешательства в регуляцию сигнальных путей и внутриклеточный метаболизм. Для проверки данной гипотезы было необходимо идентифицировать на мембране клеток терафтал-связывающие сайты, определить их кинетические параметры и доказать возможную принадлежность этих сайтов к одному из классов природных рецепторов нейромедиаторов: a-AR, b-AR, м-холино-R (mAChR).
Материалы. В работе была использована культура клеток гепатомы крысы McARA7777. Терафтал-лио (ФГУП “ГНЦ “НИОПИК”, РОНЦ РАМН); DL-пропранояол (Pro), празозин (Pz), хинуклидинилбензилат (QNB) - специфические блокаторы (b,-b2)AR; a,-AR и mAChR, соответственно. 3Н-терафтал (0,4мК/мг); 3Н-дигидроальпренелол (3Н-DHA,70 К/ммоль);
3Н- Pz (ЗОК/ммоль); 3Н- QNB(12,3 К/ммоль).
Методы. Кинетические параметры связывания терафтала с плазматической мембраной опухолевых клеток определяли радиолигандным методом по конкуренции меченого и холодного терафтала. Константу диссоциации (Kd) и максимальное число рецепторов на клетку (Втах) расчитывали по методу Скэтчарда, исходя из предположения, что один рецептор связывает 1 молекулу лиганда. О наличии общих мест связывания терафтала и нейромедиаторов судили по отсутствию аддитивности при их совместном
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
добавлении к клеткам.
Результаты. На поверхности клеток гепатомы обнаружено несколько популяций терафтал-связывающих сайтов, характеризующихся значениями Kd и Втах в диапазонах:
Kd = (5х10'9-2х10'б)М и Втах= (2-20)х105мест/клетку. По конкуренции 3Н-терафтала с холодными лигандами-нейроблокаторами и отсутствию аддитивности в их связывании установлено, что эти места одновременно являются местами связывания адренергических и мускарино-вых холинергических блокаторов, а сродство этих сайтов к терафталу, Pz, Pro и QNB примерно одинаково. Показано, что терафтал в условиях насыщения мечеными лигандами высокоаффинных адренергических и холинергических рецепторов конкурирует только с 3Н- Pz (не уступая последнему в сродстве к aa,-AR). Кинетические характеристики связывания терафтала и Pz следующие:
2xl0'nM<Kd Pz~KdT£2xl0-I0M;
9х 103мест/клетку<Втах£25х103мест/клетку.
Выводы. 1. Специфическими высокоаффинными сайтами связывания терафтала с поверхностью клеток гепатомы 7777 являются природные aa,-AR со следующими характеристиками :
2xl0-nM<Kd Pz~KdT£2xl0->°M,
9х103мест/клетку<Втах£25х103мест/клетку.
2. Места связывания терафтала с Kd в даипазоне (5х10'9-2х10_6)М лишены избирательности в отношении специфических блокаторов aa,-AR, (b,-b2)AR и mAChR и связывают их с тем же сродством, что и терафтал.
Работа поддержана грантом Правительства г.Москвы
№1/том1/2003
