CC BY
19УДК: 618.14-006.882-07-036 ПРОГНОЗИРОВАНИЕ РАЗВИТИЯ ГЕСТАЦИОННОЙ ТРОФОБЛАСТИЧЕСКОЙ НЕОПЛАЗИИ
Маматова Малика Рустамовна Наджмитдинова Дилбархон Абдуллажон кизи
Андижанский государственный медицинский институт
В этом исследовании оценивалась экспрессия белка CLIC-1 иммуногистохимическим методом при гестационной трофобластической болезни, а также его диагностическая ценность в прогнозировании злокачественного процесса. В исследование было включено 20 пациентов с диагнозом гестационная трофобластическая болезнь. Наблюдались более высокие уровни иммунореактивности CLIC-1 в трофобластических клетках у пациенток с гестационной трофобластической неоплазией по сравнению с пациентками с пузырным заносом. Уровень активности CLIC-1 повышается в злокачественно-трансформированных клетках хориокарциномы и экспрессируется в ядре и цитоплазме трофобластических клеток. Таким образом, CLIC-1 может служить прогностическим маркером, позволяющим на ранней стадии выявлять злокачественную трансформацию.
Ключевые слова: гестационная трофобластическая болезнь, пузырный занос, хориокарцинома, иммуногистохимия, CLIC-1.
THE PREDICTION OF DEVELOPMENT OF GESTATIONAL TROPHOBLASTIC
NEOPLASIA
This study evaluated the expression of the CLIC-1 protein by immunohistochemical method in gestational trophoblastic disease, as well as its diagnostic value in predicting the malignant process. The study included 20 patients with gestational trophoblastic disease. There were higher levels of CLIC-1 immunoreactivity in trophoblastic cells in patients with gestational trophoblastic neoplasia compared with patients with hydatidiform mole. The level of CLIC-1 activity increases in malignantly transformed choriocarcinoma cells and is expressed in the nucleus and cytoplasm of trophoblastic cells. Thus, CLIC-1 can serve as a prognostic marker that allows detecting malignant transformation at an early stage.
Key words: gestational trophoblastic disease, hydatidiform mole, choriocarcinoma, immunohistochemistry, CLIC-1.
GESTATSION TROFOBLASTIK NEOPLAZIYANING RIVOJLANISHINI PROGNOZLASH
Ushbu tadqiqotda CLIC-1 proteinining ekspressiyasi gestatsion trofoblastik kasalligida immunogistokimyoviy usul bilan baholandi va malignizatsiya jarayonini prognozlashda uning diagnostik ahamiyati o'rganildi. Tadqiqot gestatsion trofoblastik kasalligi bilan kasallangan 20 ta bemorni o'z ichiga olgan. Yelbo'g'oz bo'lgan bemorlarga nisbatan gestatsion trofoblastik neoplazisi bo'lgan bemorlarda trofoblastik hujayralardagi CLIC-1 ning yuqori darajadagi immunoreaktivligi kuzatildi. CLIC-1 faoliyat darajasi horiokarsinoma hujayralarida ko'tariladi va trofoblastik hujayralarning yadro va sitoplazmasida ekspressiyalanadi. Shunday qilib, CLIC-1 erta bosqichda yomon sifatli o'zgarishlarni aniqlash imkonini beradi va prognostik marker bo'lib xizmat qilishi mumkin.
Kalit so'zlar: gestatsion trofoblastik kasalligi, yelbo'g'oz, horiokarsinoma, immunogistokimyo, CLIC-1.
Актуальность. Гестационная трофобластическая болезнь (ГТБ) является термином, объединяющим группу патологических состояний, ассоциированных с беременностью, развивающиеся в результате аномальной клеточной пролиферации трофобласта после оплодотворения. [1,6]. Включает доброкачественные формы: пузырный занос (ПЗ, полный или частичный) и злокачественные формы: инвазивный пузырный занос, трофобластическую опухоль плацентарной площадки, эпителиоидную трофобластическую опухоль и хориокарциному (ХК). [2,3]. Наиболее часто встречаемые в клинической практике трофобластические опухоли - полный и частичный пузырный занос (ПЗ). В современных классификациях эти патологические процессы отнесены к доброкачественным. [2,3,4,6]. Вместе с тем, Европейское общество лечения трофобластической болезни и Международное общество по изучению трофобластической болезни предложили относить полный и частичный ПЗ к предраковым состояниям и регистрировать как стадию 0 злокачественных трофобластических опухолей. В последнем руководстве European Society for Medical Oncology (ESMO) 2013 года по диагностике, лечению и наблюдению больных с трофобластической болезнью полный и частичный ПЗ уже отнесены к предраковым состояниям [1,2,3]. Причина повышенного внимания онкологов к ПЗ обусловлена тем, что последний может инициировать все известные в настоящее время злокачественные трофобластические опухоли (ЗТО): хориокарциному (ХК), связанную с беременностью, опухоль плацентарного площадки и эпителиоидную трофобластическую опухоль [2,3,8].
Человеческий хорионический гонадотропин в (р-ХГЧ) в настоящее время используется как биомаркер для ГТБ. Мониторинг р-ХГЧ является основным методом оценки процесса трансформации из доброкачественного в злокачественные формы заболевания [2,3]. Однако не существует никакого диагностического метода, чтобы предсказать это преобразование.
Учитывая, что 20% полных ПЗ и 5% частичных ПЗ прогрессируют до ГТН, всегда существует большая озабоченность по поводу прогнозирования и ранней диагностики этого перехода. Сообщалось о многих исследованиях в области ПЗ и факторов, предсказывающих ее прогрессирование до ГТН, включая, например, оценку гистопатологических особенностей молярных беременностей, уровня свободной субъединицы р-ХГЧ, оценки маркера Ki67 и CA-125, а также уровня теломеразы в образцах тканей ПЗ. В разных исследованиях было изучено влияние генов PCNA, MMP, nm23, P16, HFC-1, DAPK, E-Cadberic, BCL-2, Rb и mdm2 на эволюцию и переход к ГТН [28]. Роль этих генов как онкогенов была также подтверждена при других формах рака; однако их роль при прогрессировании ПЗ до ГТН - тема для дальнейших исследований.
В последнее время белок CLIC1 получил широкое распространение среди исследователей. Семейство генов CLIC включает по крайней мере 5 членов, недавно идентифицированных от CLIC1 до CLIC5 [10]. Функции белка CLIC1 варьируются от ионного гомеостаза до регуляции клеточного объема, трансэпителиального транспорта и регулирование электрической возбудимости. Также CLIC1 был предложен в качестве нового потенциального прогностического и терапевтического средства при карциноме желудка. Другое исследование обнаружило, что повышенная экспрессия CLIC1 сильно коррелировала с лимфатическим метастазированием узлов, лимфатической и периневральной инвазией и плохой выживаемостью. Было предположено, что сверхэкспрессия CLIC1 модулирует деление клеток и / или передачу сигналов против апоптоза, приводящая к клеточной трансформации [9].
Цель исследования: изучить прогностическую значимость маркера CLIC-1 в развитии гестационной трофобластической неоплазии.
Материалы и методы. В исследование было включено 20 пациентов с диагнозом ГТБ, которые обратились в гинекологическое отделении Андижанского областного перинатального центра. Обследуемые пациентки были разделены на 2 группы: 1 группа - 10 женщин с доброкачественным ПЗ, 2 группа - 10 женщин со злокачественной трансформацией, которые нуждались в химиотерапии.
Весь материал был получен при первичной эвакуации содержимого матки. После выскабливания всем пациентам были проведены еженедельные измерения уровня р-ХГЧ. В случае постепенного снижения и полного исчезновения уровня р-ХГЧ в сыворотке крови пациентки были классифицированы как ПЗ без осложнений; пациентки со стабильным или повышающимся уровнем р-ХГЧ считались больными ГТН и направлялись на химиотерапию.
Возраст пациентов в стадии ремиссии колебался от 23 до 42 лет (в среднем 30,1 года), а возраст пациентов со злокачественно-трансформированными формами колебался от 25 до 50 лет (в среднем 34,5 года).
ИГХ окрашивание для оценки экспрессии онкогена CLIC-1 проводили на парафиновых блоках, приготовленных из полученного материала. Ткани, фиксированные формалином, заливали парафином, разрезали на слои толщиной 5 мкм и устанавливали на стеклах с адгезивным составом. Для иммуногистохимии, срезы депарафинизировали и регидратировали. После этого они были промыты в фосфатно-солевом буфере и заблокированы кроличьей сывороткой (Пекин ZhongShan Biotechnology Co) на 2 часа. Затем их инкубировали в течение ночи при 4°C с поликлональным антителом CLIC1 (разведение 1: 200). Срезы окрашивались гематоксилином и закреплялись покровным стеклом.
Иммуногистохимическая оценка и статистический анализ.
Срезы исследовались под мощным (х400) световым микроскопом. Было выбрано по пять полей на раздел случайным образом, а изображения были сняты с помощью цифровой камеры. Срезы оценивали в соответствии с интенсивностью окрашивания клеток трофобласта следующим образом: 0 - отсутствие реактивности, 1 -наличие как отрицательных, так и слабо-положительных клеток, 2 - слабое окрашивание, 3 -умеренное окрашивание и 4 - сильное окрашивание. Разделы также оценивались в соответствии с процентным соотношением CLId-окрашенных клеток трофобласта следующим образом: 0 - отсутствие положительных клеток, 1 - положительные клетки от 1% до 20%, 2 - от 21% до 50%, 3 - 51% до 80% и 4 - от 81% до 100% положительных клеток. Образцы считались положительными, когда обе эти оценки составляли 2 или больше 2. Сумма двух оценок дает окончательную оценку от 0 до 8. Статистический анализ данных проводился с использованием программного обеспечения SPSS Version 11.0 и непараметрического U-критерия Манна-Уитни, при этом значения учитывались при P < 0,05.
Результаты. Среднее число беременностей у всех обследуемых женщин составило 2,47 (диапазон 1-9). Клинические проявления ПЗ представлены в Таблице 1.
Таблица 1
Клиническая картина пациенток с ПЗ
Симптом Число женщин %
Вагинальное кровотечение 10 100%
Увеличение размеров матки 8 80%
Ранние токсикозы беременности 5 50%
Тека-лютеиновые кисты 3 30%
После оценки эвакуированных продуктов беременности и в соответствии с первичной гистологической диагностикой 8 пациенток (80%) были признаны полным ПЗ и у 2 пациенток (20%) был частичный ПЗ.
Из 10 пациентов с ГТН, 9 пациентов имели оценку Всемирной организации здравоохранения <7, а одна пациентка имели оценку > 7 [5].
Чтобы исследовать функцию белка ШС1 и его потенциальной роли в развитии ГТБ, мы провели иммуногистохимию, чтобы определить его клеточную локализацию в клетках ПЗ и хориокарциномы. ШС1 был слабо экспрессирован в цитоплазме и ядрах некоторых трофобластов в образцах ПЗ. В образцах хориокарциномы уровень экспрессии ШС1 был повышен по сравнению с образцами ПЗ (рис. 1), а также белок СЫС1 был высоко экспрессирован в ядрах почти всех цитотрофобластов.
Результаты иммуноокрашивания 10 ПЗ и 10 образцов хориокарциномы были расчитаны с помощью системы оценки окрашивания. Данные приведены в таблице 2. Полные ПЗ, которые в последствие развились в ГТН, показали значительно более высокие уровни экспрессии ШС1, чем у тех, кто не подвергся злокачественной трансформации (Р G 0,01). Уровень экспрессии ШС1 в образцах хориокарциномы был выше, чем в образцах ПЗ (Р G 0,01).
Таблица 2
Экспрессия ШС! при полном ПЗ и хориокарциноме
Группа Возраст Количество CLIC1
Пузырный занос 30,1 10 3,88 (0,51)
Хориокарцинома 34,5 10 6,60 (0,52)
а б
Рисунок !. Локализация белка ШС! в ткани ПЗ (а) и хориокарциномы (б).
Выводы. Мы наблюдали более высокие уровни иммунореактивности СЫС-1 в трофобластических клетках у пациенток с ГТН по сравнению с пациентками с ПЗ. Уровень активности ШС1 повышается в злокачественно-трансформированных клетках хориокарциномы и экспрессируется в ядре и цитоплазме трофобластических клеток. Мы предполагаем, что он играет аналогичную роль в инвазивности ПЗ.
Таким образом, ШС1 может служить прогностическим маркером, позволяющим на ранней стадии выявлять злокачественную трансформацию ПЗ. Результаты настоящего исследования обеспечивают основу для разработки прогностических маркеров, что может помочь раннему прогнозу ГТН. Необходимы дополнительные эксперименты для подтверждения ШС1 в качестве биомаркера и подтверждения его клинической эффективности.
Литература:
1. Berek JS. Berek & Novak's Gynecology, 14th edn. Philadelphia, PA: Lippincott Williams & Wilkins, 2007; 37: 1582-1604.
2. Behtash N, Hasanzadeh M, Hanjani P. Complete remission of an unusual location of metastatic GTN: A case report. Cancer Ther 2005; 2: 575-577.
3. Makovitzky J, Radtke A, Shabani N, Friese K, Gerber B, Mylonas I. Invasive hydatidiform mole: Immunohistochemical labelling of inhibin/activin subunits, Ki67, p53 and glycodelin A in a rare case. Acta Histochem 2009; 111:360-365.
4. Xue WC, Khoo US, Ngan HY et al. Minichromosome maintenance protein 7 expression in gestational trophoblastic disease: Correlation with Ki67, PCNA and clinicopathological parameters. Histopathology 2003; 43: 485-490.
5. . FIGO Oncology Committee. FIGO staging for gestational trophoblastic neoplasia 2000. Int J Gynecol Obstet 2002; 77: 285-287.
6. Menczer J, Schreiber L, Berger E, Golan A, Levy T. Assessment of Her-2/neu expression in hydatidiform moles for prediction of subsequent gestational trophoblastic neoplasia. Gynecol Oncol 2007; 104: 675-679.
7. Soper JT. Staging and evaluation of gestational trophoblastic disease. Clin Obstet Gynecol 2003; 46: 570-578.
8. Yazaki-Sun S, Daher S, de Souza Ishigai MM, Alves MT, Mantovani TM, Mattar R. Correlation of c-erbB-2 oncogene and p53 tumor suppressor gene with malignant transformation of hydatidiform mole. J Obstet Gynaecol Res 2006; 32: 265-272.
9. Friedli M, Guipponi M, Bertrand S, et al. Identification of a novel member of the CLIC family, CLIC6, mapping to 21q22.12. Gene. 2003;320:31Y40.
10. Chen CD, Wang CS, Huang YH, et al. Overexpression of CLCI1 in human gastric carcinoma and its clinicopathological significance. Proteomics. 2007;7:155Y167.
