Научная статья на тему 'Прогнозирование и экспериментальное Определение примесей и продуктов деструкции в фармацевтической композиции гипотензивного действия'

Прогнозирование и экспериментальное Определение примесей и продуктов деструкции в фармацевтической композиции гипотензивного действия Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

CC BY
189
64
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Журнал
Фармация и фармакология
WOS
Scopus
ВАК
CAS
Ключевые слова
ДЕСТРУКЦИЯ / ВЕРАПАМИЛ / ЛИЗИНОПРИЛ / ПРОГНОЗИРОВАНИЕ / ВЭЖХ-МС АНАЛИЗ / DESTRUCTION / VERAPAMIL / LISINOPRIL / FORECASTING / HPLC-MS ANALYSIS

Аннотация научной статьи по фундаментальной медицине, автор научной работы — Компанцева Евгения Владимировна, Бабьяк Анна Валерьевна, Мудрецова Юлия Викторовна, Глушко Александр Алексеевич

В работе представлены результаты определения посторонних примесей верапамила гидрохлорида и лизиноприла дигидрата с использованием методов компьютерного моделирования и высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с масс-спектрометрией (ВЭЖХ-МС). Прогнозирование и расчет термодинамических характеристик веществ проведены с помощью метода RM1 и программы HyperChem. Масс-спектрометрический анализ проведен на квадрупольном масс-анализаторе в режиме регистрации положительных ионов в диапазоне m/z 100-1000.В результате исследования установлено, что описанные в нормативных документах посторонние примеси верапамила и лизиноприла являются продуктами деструкции веществ. Прогнозирование продуктов разложения лизиноприла дигидрата полностью подтвердилось данными хроматограмм ионного тока и масс-спектрами веществ. Однако в случае с верапамилом результаты моделирования продуктов деструкции совпали с результатами ВЭЖХ-МС анализа только для двух из четырех спрогнозированных веществ.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по фундаментальной медицине , автор научной работы — Компанцева Евгения Владимировна, Бабьяк Анна Валерьевна, Мудрецова Юлия Викторовна, Глушко Александр Алексеевич

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

FORECASTING AND EXPERIMENTAL DETERMINATION OF DESTRUCTION IMPURITIES AND IN THE PHARMACEUTICAL COMPOSITION OF THE HYPOTENSIVE ACTION

Determination results of impurities verapamil hydrochloride and lisinopril dihydrate using computer modeling and HPLC coupled with mass spectrometry (HPLC-MS) reported in this article. Prediction and calculation of the thermodynamic characteristics of the substances carried by the method of RM1 and programs HyperChem. Mass spectrometric analysis was performed on a quadrupole mass analyzer in the recording mode of the positive ions within the range m / z 100-1000. The study found that described in the regulations extraneous verapamil and lisinopril are the products of degradation of materials. Prediction of degradation products of lisinopril dihydrate fully confirmed the data of the ion current chromatograms and mass spectra of the substances. However, in the case of verapamil simulation results coincided with the degradation products by HPLC-MS analysis for two of the four predicted substances.

Текст научной работы на тему «Прогнозирование и экспериментальное Определение примесей и продуктов деструкции в фармацевтической композиции гипотензивного действия»

УДК 615.225.2.015.21:004.94

ПРОГНОЗИРОВАНИЕ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРИМЕСЕЙ И

ПРОДУКТОВ ДЕСТРУКЦИИ В ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ КОМПОЗИЦИИ ГИПОТЕНЗИВНОГО

ДЕЙСТВИЯ

©2013 Компанцева Е.В., Бабьяк А.В., Мудрецова Ю.В., Глушко А.А. annav.babyak@gmail.com

Пятигорский медико-фармацевтический институт - филиал ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России,

г. Пятигорск

В работе представлены результаты определения посторонних примесей верапамила гидрохлорида и лизи-ноприла дигидрата с использованием методов компьютерного моделирования и высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с масс-спектрометрией (ВЭЖХ-МС). Прогнозирование и расчет термодинамических характеристик веществ проведены с помощью метода RM1 и программы HyperChem. Масс-спектрометрический анализ проведен на квадрупольном масс-анализаторе в режиме регистрации положительных ионов в диапазоне m/z 100-1000.В результате исследования установлено, что описанные в нормативных документах посторонние примеси верапамила и лизиноприла являются продуктами деструкции веществ. Прогнозирование продуктов разложения лизиноприла дигидрата полностью подтвердилось данными хроматограмм ионного тока и масс-спектрами веществ. Однако в случае с верапамилом результаты моделирования продуктов деструкции совпали с результатами ВЭЖХ-МС анализа только для двух из четырех спрогнозированных веществ.

Ключевые слова: деструкция, верапамил, лизиноприл, прогнозирование, ВЭЖХ-МС анализ.

Введение

Определение примесей и продуктов деструкции лекарственных веществ (ЛВ) является актуальной и важной задачей, т.к. эти показатели во многом обусловливают качество фармацевтических препаратов. Важность и необходимость контроля чистоты обусловлена ещё и тем, что присутствие посторонних примесей в ЛВ не только снижает их фармакологическое действие, но и часто делает их опасными для здоровья человека.

Нормирование предела содержания примесей (в том числе продуктов деструкции) лекарственного препарата является обязательным при составлении нормативной документации на ЛВ. В связи с этим при разработке новой фармацевтической композиции гипотензивного действия, содержащей верапамила гидрохлорид и лизиноприла дигидрат, необходимо было разработать методики определения примесей и возможных продуктов деструкции исследуемых веществ.

В настоящее время все больший интерес вызывает возможность компьютерного моделирования процессов синтеза, деструкции лекарственных веществ, прогнозирование их фармакологической активности [1]. Определенный интерес представляет прогнозирование методами компьютерных технологий и экспериментальное подтверждение полученных результатов.

Цель представленной работы заключается в прогнозировании и определении посторонних примесей и продуктов деструкции верапамила и лизиноприла с использованием методов компьютерного моделирования и высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с масс-спектрометрией.

Материалы и методы

Создание компьютерных моделей молекул лекарственных веществ и возможных продуктов их деструкции, а также расчет значений энтропий (AS) и энтальпий(ДН) образования соединений проводили с использованием компьютерной программы HyperChem. Геометрию полученных молекул оптимизировали с помощью метода RM1 [2].

ВЭЖХ-МС анализ проводили, используя водные растворы верапамила гидрохлорида и лизино-прила дигидрата в концентрации 1 мг/мл. При этом часть образцов подвергали деструкции путем термического воздействия (60° и 120°С) согласно работе Н.А. Эпштейна [3, 4].

Анализ образцов верапамила и лизиноприла проводили на жидкостном хроматографе Ultimate -3000 (Dionex, США) с масс-селективным детектором. Условия ВЭЖХ:градиентный режим элюирования; колонка длиной 15 см с сорбентом Силасорб С18;скорость потока подвижной фазы 0,3 мл/мин;объем вводимой пробы - 20 мкл; детектирование осуществляли при длине волны 230 нм. В качестве подвижной фазы при анализе образца верапамила гидрохлорида использовали смесь ацетонитрил (от 20 до 50%) -2% раствор муравьиной кислоты (от 80 до 50%); при анализе образца лизиноприла дигидрата - ацетонитрил (от 10 до 50%) - 2% раствор муравьиной кислоты (от 90 до 50%). Время анализа для лизиноприла дигидрата и верапамила гидрохлорида составляло 30 и 45 мин соответственно. Масс-спектрометрический анализ осуществляли на квадрупольном масс-анализаторе типа «ионная ловушка»

(Вгикег, Германия), оснащенном источником ионов с электрораспылительной ионизацией, автосампле-ром и программным обеспечением обработки данных Dataanalysis в режиме регистрации положительных ионов. Напряжение на капилляре и противоэлектроде составляло 4,0 кВ и - 500 В соответственно. Давление на распылителе составляло 1 атм. Скорость потока газа-осушителя (азот) - 5 л/мин. Температура в камере ионизации - 220°С. Сканирование по полному ионному току проводили в диапазоне т^ 100-

Результаты и их обсуждение

Используя методы компьютерных технологий для расчета термодинамических характеристик веществ, были спрогнозированы возможные пути разложения верапамила гидрохлорида и лизиноприла дигидрата [5]. Согласно полученным данным, исследуемые вещества подвергаются деструкции по следующим направлениям:

Схема реакции 4

Расчеты, проведенные с помощью программы Нурег^ет, указывают на то, что процесс деструкции лизиноприла в первую очередь связан с образованием дикетопиперазина (схема реакции 2). Разложение верапамила теоретически первоначально связано с уменьшением углеводородной цепи (схема реакции 4).

Наличие спрогнозированных продуктов деструкции исследуемых веществ, а также возможных примесей иного характера, изучали методом ВЭЖХ-МС. На первом этапе в режиме положительной ионизации снимали масс-спектры исходных растворов верапамила и лизиноприла. В ходе эксперимента выявили, что образец лизиноприла не содержит предполагаемых продуктов деструкции, однако на хроматограмме ионного тока обнаружили примеси с молекулярными массами (М.м.) 387,47 и 405,49, которые соответствуют по М.м. веществам, указанным в ОФС 42-0252-07:дикетопиперазину и изомеру лизиноприла - лизиноприл) (рис. 1).

При анализе исходного раствора верапамила (рис. 2) было подтверждено наличие вещества с М.м 440,48, которая соответствует примеси В, указанной в ФС 42-0224-07: (а{-2[[2[-3,4-

диметоксифенил)этил]метиламино]этил}-3,4-диметокси-а-(1-метилэтил) - фенилацетонитрил моногидрохлорид. Такую же М.м. имеет и спрогнозированный нами норверапамил.

Однако результаты термодинамических расчетов показывают, что процесс N-деметилирования и, соответственно, образование норверапамила является маловероятным. Ввиду этого логично предположить, что обнаруженное на масс-спектре вещество с М.м. 440,58, соответствует примеси В, моделирование и образование которой подтверждается расчетами термодинамических величин.

1000.

Lisinopril

COOH

Схема реакции 1

+ H2O

Lisinopril NH2

H2^(CH2)4

Схема реакции 2

OCH3

OCH3

Verapamil

Схема реакции 3

W„ ГГН, xOCH3

H3CON^^4_^“och3

CH3

OCH3

OCH3

Verapamil

Рисунок 1 - Хроматограммы ионного тока (а, в) и масс-спектры (б, г) выделенных примесей

лизиноприла дигидрата

а) Вещество с М.м.= 440,58

б) Вещество с М.м.= 440,58

Рисунок 2 - Хроматограмма ионноготока (а) и масс-спектр (б) выделенной примеси верапамила

гидрохлорида

Следующим этапом был анализ образцов исследуемых веществ, подвергшихся термическому разложению. В опытном образце деструктурированного раствора лизиноприла нами были обнаружены примеси (помимо дикетопиперазина) с М.м. 308,37 и 115,13, соответствующими М.м. спрогнозированных продуктов деструкции: 6-амино-2-(1-карбокси-3-фенилпропиламино) гексановой кислоты, пирроли-дин-2-карбоновой кислоты, а также примесь с М.м. 179, соответствующей таковой 2-амино-4-фенил бу-тановой кислоты, указанной в ФС 42-0252-07 (рис.3).

Сигнал ионного тока вещества с М.м. 387,47, соответствующей дикетопиперазину, после термической деструкции раствора лизиноприла усилился, что подтверждает результаты компьютерного моделирования процесса разложения лекарственного вещества. Образование 2-амино-4-фенил бутановой кислоты, согласно данным термодинамических расчетов, не представлялось реальным вследствие низкой вероятности протекания процесса гидролиза по вторичной аминогруппе. Это подтверждается и низкой интенсивностью сигнала соединения по сравнению с другими обнаруженными веществами (рис. 3, д), и обнаружением его в растворе, подвергшемуся агрессивному термическому воздействию (120 °С, 48 ч).

В растворе верапамила, подвергнутого деструкции, интенсивность сигнала обнаруженной примеси с М.м.=440,58, соответствующей примеси В, значительно выше, чем в исходном растворе. При этом пик вещества на выделенном участке хроматограммы ионного тока неоднороден (рис. 4, а,б), что может быть связано с несовершенными условиями анализа и вероятностью регистрации сразу нескольких веществ-изомеров. В любом случае, учитывая интенсивность сигнала, подтверждается предположение, что указанные вещества являются продуктами разложения верапамила гидрохлорида.

В растворе верапамила, который подвергался термическому воздействию, также было обнаружено вещество 2-(3,4-диметоксифенил)-2-изопропил-5-(метиламино)пентанитрил (рис. 4, в,г), образование которого было спрогнозировано, но согласно термодинамическим расчетам являлось маловероятным. Данное соединение также представлено как примесь F верапамила гидрохлорида в Британской фармакопее 2009 г.

а) Вещество с М.м.= 308,37

б) Вещество с М.м.= 308,37

Рисунок 3 -Хроматограммы ионного тока (а, в, д) и масс-спектры(б, г, е) выделенных веществ де-структурированного раствора лизиноприла дигидрата

а) Примесь с М.м.=440,58

б) Примесь с М.м.=440,58

Рисунок 4 - Хроматограммы ионного тока (а, в) и масс-спектры (б, г) выделенных веществ деструкту-

рированного раствора верапамила гидрохлорида

Полученные данные с использованием программ компьютерного моделирования и метода ВЭЖХ-МС анализа были сведены в общую таблицу, позволяющую систематизировать и наглядно представить результаты исследований (таблица 1).

С помощью прогнозирования и ВЭЖХ-МС анализа установлено, что примеси, указанные в ФС на верапамила гидрохлорид и лизиноприла дигидрат, очевидно, являются продуктами деструкции веществ (табл. 1). Результаты исследования разложившегося образца лизиноприла подтверждают данные термодинамических расчетов об образовании в процессе разложения вещества 6-амино-2-(1-карбокси-3-фенилпропиламино)гексановой кислоты и пирролидин-2-карбоновой кислоты. Однако в случае верапа-

мила наблюдается некоторое расхождение теоретического моделирования и результатов эксперимента методом ВЭЖХ-МС. Так образование 2-(3,4-диметоксифенил)-2-изопропил-5-

(метиламино)пентанитрила, согласно смоделированной схеме реакции, термохимически невозможно, но практически представлено с помощью хроматограммы ионного тока и масс-спектра. Наличие 5-((3,4-ди-метоксифенилэтил)(метил)амино-2-(3,4-диметокси-фенил)-2-изопропил-пентановой кислоты обосновано теоретическими расчетами, но не выявлено в процессе хроматографирования, так как, вероятно, для ее получения следует проводить деструкцию в более жестких условиях.

Таблица 1 - Результаты прогнозирования и ВЭЖХ-МС анализа примесей/продуктов деструкции лизиноприла дигидрата и верапамила гидрохлорида в образцах, подвергнутых деструкции

Лекарственное вещество Исследуемые соединения М.м. Примеси, согласно ФС Определение веществ методами

Компьютерное моделирование ВЭЖХ-МС анализ

предполагаемые схемы реакций термодина- мический расчет

Й s д § s & § s з s Дикето пиперазин 387,47 + + + +

6-амино-2-(1 -карбокси-3 - фенилпропиламино)гексановая кислота 308,37 - + + +

Пирролидин-2 -карбоновая кислота 115,13 - + + +

2 -амино -4 -фенилбутановая кислота 179 + + - +

R,S,S - лизиноприл 405,49 + + + +

Э р о л х о & s г § s м C3 ар е m (а{ -2[[2 [-3,4-диметоксифенил)-этил] метиламино] этил }-3,4-диметокси-а-(1 -метилэтил) -фенилацетонитрил моногидрохлорид (примесь В) 440,58 + + + +

Норверапамил 440,58 - - - -

2-(3,4-диметоксифенил)-2-изопропил-5 -(метиламино) -пентанитрил 290,4 - + - +

5-((3,4-диметоксифенилэтил)-(метил)амино-2-(3,4-диметоксифенил)-2-изопропилпентановая кислота 473,6 - + + -

Выводы

В ходе исследования, согласно данным компьютерного моделирования и ВЭЖХ-МС анализа, установлено, что описанные в ФС посторонние вещества в образцах лизиноприла дигидрата и верапамила гидрохлорида являются продуктами деструкции ЛВ. Прогнозирование продуктов разложения лизиноприла дигидрата полностью подтвердилось данными хроматограмм ионного тока и масс-спектрами веществ. Результаты моделирования примесей - продуктов деструкции верапамила гидрохлорида (норве-рапамил и примесь В) также совпали с экспериментальными данными. Однако результаты прогнозирования двух продуктов деструкции верапамила (2-(3,4-диметоксифенил)-2-изопропил-5-(метиламино)пентанитрила, 5-((3,4-диметоксифенилэтил)-(метил)амино-2-(3,4-диметоксифенил)-2-изопропилпентановой кислоты)не совпали с таковыми при ВЭЖХ-МС анализе. Таким образом, наиболее оптимальным является совместное использование расчетных программ компьютерного моделирования и экспериментальных лабораторных исследований с помощью химических и физико-химических методов анализа.

Литература

1. Погребняк А.В. Молекулярное моделирование и дизайн биологически активных веществ. - Ростов-на-Дону: СКНЦ ВШ, 2003. - 232 с.

2. Gerd B. Rocha.RM1: A reparameterization of AM1 for H, C, N, O, P, S, F, Cl, Br, and I // J. of Computational Chemistry. - 2006. - Vol. 27, №10. - P. 1101-1111.

3. Компанцева Е.В. Использование метода тонкослойной хроматографии для определения верапамила гидрохлорида, лизиноприла дигидрата и продуктов их деструкции при совместном присутствии // Научные ведомости Белгородского государственного университета. - 2012.-Т.135,№16.-С.123-127.

4. Эпштейн Н.А. Оценка пригодности (валидация) ВЭЖХ методик в фармацевтическом анализе (обзор) // Хим.-фармац. журн. - 2004. - Т.38, №4. - С. 40-56.

5. Бабьяк А.В. Расчет термодинамических характеристик и прогнозирование процессов деструкции верапамила гидрохлорида и лизиноприла дигидрата // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр.- Пятигорск, 2012.- Вып. 67. - С. 210-213.

***

Компанцева Евгения Владимировна - доктор фармацевтических наук, профессор кафедры фармацевтической химии Пятигорского медико-фармацевтического института - филиала ГБОУ ВПО ВолгГМУ. Область научных интересов: фармацевтический анализ синтетических лекарственных веществ и биологически активных веществ в лекарственном растительном сырье, стандартизация лекарственных средств. E-mail: dskompanceva@mail.ru

Бабьяк Анна Валерьевна - аспирант кафедры фармацевтической химии Пятигорского медикофармацевтического института - филиала ГБОУ ВПО ВолгГМУ. Область научных интересов: фармацевтический анализ, стандартизация лекарственных средств, гипотензивные лекарственные средства. E-mail: annav.babyak@gmail.com (автор для переписки)

Мудрецова Юлия Викторовна - аспирант кафедры фармацевтической химии Пятигорского медико-фармацевтического института - филиала ГБОУ ВПО ВолгГМУ. Область научных интересов: фармацевтический анализ лекарственных веществ растительного и синтетического происхождения. E-mail: mydraya.yuliya@yandex. ru

Глушко Александр Алексеевич - кандидат фармацевтических наук, преподаватель кафедры физической и коллоидной химии Пятигорского медико-фармацевтического института - филиала ГБОУ ВПО ВолгГМУ. Область научных интересов: компьютерная химия, разработка программного обеспечения для молекулярного моделирования, молекулярный докинг, молекулярная динамика. E-mail: saha-omega@yandex. ru

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.