CC BY
25
Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием «АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ГЕМАТОЛОГИИ И ТРАНСФУЗИОЛОГИИ»,
посвященная 85-летию Российского научно-исследовательского Санкт-Петербург института гематологии и трансфузиологии_6-7 июня 2017 г.
Мотыко Е. В., Мартынкевич И. С., Полушкина Л. Б., Мартыненко Л. С., Иванова М. П., Цыбакова Н. Ю., Клеина Е. В., Раджабова А. М., Шуваев В. А., Волошин С. В., Чечеткин А. В.
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии» Федерального медико-биологического агентства, г. Санкт-Петербург
ПРОГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ МУТАЦИЙ У БОЛЬНЫХ ОСТРЫМИ МИЕЛОИДНЫМИ ЛЕЙКОЗАМИ
Введение. Современные методы молекулярной диагностики позволяют выявить большое количество мутаций в различных генах, играющих важную роль в патогенезе острого миело-идного лейкоза (ОМЛ). Совместно с цитогенети-ческими аберрациями, мутации генов являются мощными прогностическими маркерами у больных ОМЛ и могут быть использованы при выборе тактики лечения пациентов. Данные мутации также целесообразно использовать в качестве мишеней для таргетных препаратов.
Цель. Целью данного исследования являлось оценить роль молекулярно-генетических аберраций в диагностике и прогнозировании течения острых миелоидных лейкозов.
Материалы и методы. В исследование включено 100 пациентов: 96 с de novo ОМЛ и 4 со вторичными ОМЛ из предшествующих МДС или лимфомы. Возраст больных составил от 18 до 84 лет (медиана 55 лет), среди них 47 мужчин и 53 женщины. Скрининг мутаций в генах DNMT3A, IDH1 и IDH2 проводили методом полимеразно-цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени с дальнейшим анализом кривых плавления. Мутации в генах FLT3, CKIT и NPM1 анализировали с помощью ПЦР, в гене NRAS с помощью секвенирования. Цитогене-тические препараты окрашивали стандартным GTG дифференциальным методом.
Результаты. Мутации в генах FLT3, CKIT, NRAS, DNMT3A, IDH1, IDH2 и NPM1 были обнаружены у 57/100 (57,0 %) больных ОМЛ. Всего было выявлено 94 мутации: 24 (24,0 %) — FLT3-ITD, 8 (8,0 %) — FLT3-TKD, 2 (2,0 %) — в CKIT (D816V), 11 (11,0 %) — в NRAS, 13 (13,0 %) — в DNMT3A, 5 (5,0 %) — в IDH1 (также у 8/100 пациентов был обнаружен полиморфизм rs11554137 в гене IDH1), 4 (4,0 %) — в IDH2 и 27 (27,0 %) — в NPM1. У 28 больных обнаружены одиночные мутации и у 29 пациентов мутации носили сочетанных характер, при этом наиболее часто встречалась комбинация FLT3-ITD + /NPM1 + (у 9 больных). Наиболее часто (p = 0,001) мутации детектировались у па-
циентов с нормальным кариотипом (НК) (40/53), тогда как в группе с неблагоприятным кариотипом только 2/11 больных имели мутации. При анализе возрастных особенностей, показано, что существенно чаще мутации обнаруживались у пациентов в возрасте 60-69 лет. Мы обнаружили, что мутации FLT3-ITD типичны для больных с М2 вариантом (ФАБ) (р = 0,044), FLT3-TKD — с М1 (р = 0,001), DNMT3A и №М1 — для М5 (р = 0,004 и р = 0,105, соответственно), полиморфизм Г811554137 в ГОН1 — для М4 (р = 0,001) и СКГГ, NRAS — для CBF-ОМЛ. Мутации FLT3-ITD, FLT3-TKD и в гене DNMT3A ассоциировались с повышенным уровнем лейкоцитов в периферической крови в дебюте заболевания (р = 0,001, р = 0,012, р = 0,001, соответственно). Мы также оценили прогностический потенциал найденных мутаций. Сравнительный анализ общей (ОВ) и безрецидивной выживаемости (БРВ) у больных с и без мутаций показал существенное неблагоприятное влияние мутаций FLT3-ITD (р = 0,001, р = 0,021), FLT3-TKD при сравнении с пациентами с генотипом FLT3-ITD- (р = 0,040, р = 0,044), в гене DNMT3A (р = 0,034, р = 0,039), полиморфизма ге11554137 в гене ГОН1 (р = 0,045, р = 0,004). Мутации в гене CK.IT были связаны с высоким риском рецидива. В группе больных с благоприятным прогнозом мы детектировали тенденцию к понижению ОВ и БРВ (р = 0,203, р = 0,143) у пациентов с мутациями в гене NRAS. Больные с мутациями в гене NPM1 показали лучшую ОВ и БРВ (р = 0,001, р = 0,017, соответственно) по сравнению с пациентами без мутации, тогда как больные с генотипом NPM1 + / FLT3-ITD + были отнесены к группе промежуточного прогноза.
Выводы. Мутации в генах FLT3, NRAS, DNMT3A, ГОН1/2 и №М1 — довольно частые события у больных ОМЛ. Большинство обнаруженных мутаций имеют значительно более высокую частоту встречаемости в группе больных с НК. В то же время почти все найденные мутации имеют сильное влияние на прогноз: неблагоприятное (в генах FLT3, DNMT3A и по-
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XIII, № 3, 2017
лиморфизм 1554137 в ГОН1) и благоприятное (в гене NPM1). Мутации в отдельных генах (СК1Т, NRAS) оказывают негативное влияние на БРВ и ОВ у больных с благоприятным карио-типом. Наличие двух или более мутаций у одного больного может оказывать влияние на прогноз
(№М1 + /РЕТ3-ГГО + по сравнению с №М1 + / FLT3-ITD-). Разработка нового подхода к классификации ОМЛ, с учетом цитогенетических аберраций и сочетанной встречаемости различных мутаций, позволит выбрать оптимальную современную терапию.
Назарова Е. Л., Минаева Н. В., Хоробрых М. Н., Зорина Н. А., Шардаков В. И., Демьянова В. Т., Парамонов И. В.
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства», Киров
РОЛЬ ПОЛИМОРФИЗМА ТОЛЛ-ПОДОБНЫХ РЕЦЕПТОРОВ В ПРОГНОЗЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ У БОЛЬНЫХ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ ПОСЛЕ АУТОЛОГИЧНОЙ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК
Введение. В настоящее время толл-подобные рецепторы (Toll-like receptors — TLRs) являются предметом активного изучения при различных опухолевых заболеваниях, в том числе, гемобла-стозах. Это связано не только с участием этих рецепторов в общих механизмах иммунологической защиты, но и с рядом других факторов. К ним относится то, что многие опухолевые клетки способны экспрессировать различные функционально активные TLRs, и взаимодействие этих рецепторов со своими лигандами обычно сопровождается продукцией цитокинов, участвующих в патогенезе гемобластозов. Одним из заболеваний, в патогенезе, которого ведущая роль принадлежит нарушению иммунного (цитокинового) статуса, является множественная миелома (ММ). Однако в научной литературе практически отсутствуют исследования по вовлечению генетических факторов, в частности полиморфизма генов TLRs в развитие заболевания. Определение мутационного статуса данных генов у пациентов с ММ, как на начальном этапе, так и при прогрессировании заболевания может позволить усовершенствовать систему стратификации рисков.
Цель. Оценка влияния полиморфизма генов толл-подобных рецепторов на характер течения и прогноз множественной миеломы у пациентов после аутологичной трансплантации гемопоэти-ческих стволовых клеток.
Материалы и методы. Среди пациентов с ММ, которым была выполнена аутологич-ная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (аутоТГСК) в КНИИГиПК с августа 2006 г. по декабрь 2016 г., исследования проведены у 21 больного с медианой возраста 51 год
(48-56 мес.). Среди них наблюдалось восемь мужчин (38,1 %) и 13 женщин (61,9 %), получивших в среднем шесть индукционных циклов химиотерапии (5-7) до проведения аутоТГСК, которая была выполнена через девять месяцев от начала лечения (7-13 мес.). Среди пациентов были выделены две группы: в первую вошли 15 человек, у которых достигнутая после аутоТГСК ремиссия заболевания (очень хорошая частичная и полная), сохранялась до конца периода наблюдения. Вторую группу составили шесть пациентов — один с ранним (11 мес.) и пять с поздним рецидивом ММ в период 15-42 мес. после ау-тоТГСК. Генотипирование вариабельных локу-сов пяти генов TLR (TLR2, 3, 4, 6, 9) проводили методом полимеразной цепной реакции с аллель-специфичными праймерами (НПФ «Ли-тех», г. Москва), входящими в состав комплекта реагентов «SNP-экспресс», на амплификаторе «Терцик» (ООО «ДНК технология», г. Москва) и с электрофоретической детекцией продуктов реакции в агарозном геле. Распределение генотипов по каждому полиморфному локусу проверяли на соответствие равновесию Харди-Вайнберга с помощью точного теста Фишера. Для сравнения частот аллелей между различными группами использовали критерий %2 Пирсона с поправкой Йэйтса на непрерывность. Дополнительно оценивали показатель отношения шансов — odds ratio (OR) с вычислением границ 95 %-го доверительного интервала (95 %CI). Различия считали достоверными при р < 0,05.
Результаты. Медиана периода наблюдения за пациентами составила 18 месяцев (6-119 месяцев). Двухлетняя общая выживаемость (ОВ) была достигнута в 80 % случаев, 5-летняя ОВ —
