CC BY
25
УДК 612.63:611.633 Т.Н. БЕБНЕВА1' 2, Г.Б. ДИККЕ3
1Российский университет дружбы народов Минобрнауки, г. Москва
Национальный медицинский исследовательский центр эндокринологии МЗ РФ, г. Москва,
3Академия медицинского образования им. Ф.И. Иноземцева, г. Санкт-Петербург
Прогностическое значение экспрессии белков Ki-67 и p16 у беременных женщин, инфицированных ВПЧ, в оценке течения интраэпителиальных поражений шейки матки
Контактная информация:
Бебнева Тамара Николаевна — кандидат медицинских наук, доцент кафедры акушерства, гинекологии и репродуктивной медицины
факультета повышения квалификации медицинских работников, врач НМИЦЭ
Адрес: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 21, корп. 3, тел.: +7-916-518-19-64, e-mail: bebn@mail.ru
Цель исследования — определить экспрессию Ki-67 и p16 у беременных женщин, инфицированных ВПЧ и их роль в диагностике и прогнозе цервикальной неоплазии тяжелой степени.
Материал и методы. Дизайн: открытое наблюдательное неинтервенционное когортное клиническое исследование. Обследовано 26 беременных женщин, инфицированных ВПЧ, в возрасте от 23 до 31 лет. Методы: общеклинические, тест «Квант-21» для определения типов ВПЧ и количественной нагрузки, цитологическое исследование, определение экспрессии белков Ki-67 и p16 иммуноцитохимическим методом.
Результаты. Показано, что с увеличением тяжести поражения ШМ увеличивалась доля пациенток с онкомаркерами (с 20% при NILM до 100% при HSIL), причем интенсивность экспрессии Ki-67/p16 была средней (2+) у 25% пациенток с LSIL и высокой (3+) — у 100% с HSIL. Более высокая статистически значимая вирусная нагрузка была выявлена для группы ДНК ВПЧ А9 (16, 31, 33, 35, 52, 58 типы) при обнаружении онкомаркеров по сравнению с их отсутствием, подтвержденная моделью логит-регрессии с чувствительностью 100% и специфичностью 89%.
Выводы. Ввиду отсутствия однозначного мнения о том, в какой мере изменения экспрессии Ki-67 и p16 отражают информацию об эволюции CIN во время беременности, необходимо проведение дальнейших исследований для получения данных, позволяющих осуществлять соответствующую интерпретацию выявленных феноменов. Ключевые слова: беременность, вирус папилломы человека, заболевания шейки матки, Ki-67 и p16.
(Для цитирования: Бебнева Т.Н., Дикке Г.Б. Прогностическое значение экспрессии белков Ki-67 и p16 у беременных женщин, инфицированных ВПЧ, в оценке течения интраэпителиальных поражений шейки матки. Практическая медицина. 2020. Т. 18, № 6, С. 24-29)
DOI: 10.32000/2072-1757-2020-6-24-29
T.N. BEBNEVA12, G.B. DIKKE3
1Russian University of Peoples Friendship of the Ministry of Education and Science, Moscow 2National Medical Research Center of Endocrinology of the Ministry of Health of Russia, Moscow 3Academy of Medical Education named after F.I. Inozemtsev, Saint Petersburg
Predictive value of Ki-67 and p16 protein expression in pregnant women infected with HPV for assessing the course of intraepital lesions of cervix
Contact details:
Bebneva T.N. — PhD (medicine), Associate Professor of the Department of Obstetrics, Gynecology and Reproductive Medicine Address: 21 Miklukho-Maklay St., building 3, Russian Federation, Moscow, 117198, tel.: +7-916-518-19-64, e-mail: bebn@mail.ru
The purpose — to determine the expression of Ki-67 and p16 in pregnant women infected with HPV, and their role in the diagnosis and prognosis of severe cervical neoplasia.
Material and methods. Design: open-label observational non-interventional cohort clinical study. We examined 26 pregnant women infected with HPV, aged 23 to 31 years. Methods: general clinical nethods, Kvant-21 test for determining HPV types and quantitative load, cytological examination, determination of the expression of Ki-67 and p16 proteins by immunocytochemical method.
Results. It was shown that with an increase of the cervical lesion severity, the proportion of patients with tumor markers increased (from 20% with NILM to 100% with HSIL), and the intensity of Ki-67/p16 expression was moderate (2+) in 25% of patients with LSIL and high (3+) in 100% of patients with HSIL. A higher statistically significant viral load was detected for the HPV A9 DNA group (16, 31, 33, 35, 52, 58 types) upon detection of tumor markers compared with their absence, confirmed by a logit regression model with a sensitivity of 100% and a specificity of 89%.
Conclusion. Due to the lack of an unambiguous opinion about the extent to which changes in the expression of Ki-67 and p16 reflect information about the CIN evolution during pregnancy, further research is needed to obtain data that would allow for an appropriate interpretation of the revealed phenomena.
Key words: pregnancy, human papillomavirus, cervical diseases, Ki-67 and p16.
(For citation: Bebneva T.N., Dikke G.B. Predictive value of Ki-67 and p16 protein expression in pregnant women infected with HPV for assessing the course of intraepital lesions of cervix. Practical medicine. 2020. Vol. 18, № 6, P. 24-29)
Инфицированность вирусами папилломы человека (ВПЧ) у беременных женщин обнаруживается в широком диапазоне — от 5,5 до 65% и зависит от региона проживания, возраста и других факторов [1]. Распространенность цервикальной интра-эпителиальной неоплазии (CIN) составляет от 1,3 до 2,7 на 1000 беременностей, а заболеваемость раком шейки матки (РШМ) — 0,1-12 на 10 000 беременностей [2]. Исследователи утверждают, что РШМ является самым частым новообразованием среди злокачественных заболеваний у беременных [3].
Однако отмечается, что во время беременности прогрессирование CIN до инвазивной стадии РШМ происходит редко (у 9,6% пациенток) и часто подвергается регрессу в послеродовом периоде (у 46,8%) [4]. В исследовании M. Mailath-Pokorny et al. уровень прогрессирования CIN был низким (3,9%), и прогрессирования до инвазивного рака не наблюдалось [4]. В тоже время вопрос о том, может ли беременность ускорить прогрессирова-ние рака, все еще остается спорным [3]. Некоторые ученые обнаружили, что уровни эстрогена, прогестерона и хорионического гонадотропина человека во время беременности положительно коррелируют с ВПЧ 16 и 18 типов, что косвенно указывает на то, что беременность может способствовать прогресси-рованию РШМ [5].
При изучении белков Ki-67 и p16INK4a (p16) установлено, что экспрессия этих молекул коррелирует с гистологической стадией и инфициро-ванностью женщин ВПЧ высокого канцерогенного риска (ВПЧ ВКР), что позволяет рассматривать их в качестве потенциальных биомаркеров РШМ, ассоциированного с ВПЧ [6]. Однако у беременных женщин прогностическая роль Ki-67 и p16 не изучалась, что послужило основанием для настоящего исследования.
Цель исследования — определить экспрессию Ki-67 и p16 у беременных женщин, инфицированных ВПЧ, и их роль в диагностике и прогнозе цер-викальной неоплазии тяжелой степени.
Материал и методы исследования
Дизайн исследования: открытое наблюдательное неинтервенционное когортное клиническое исследование. В исследовании приняли участие 26 беременных женщин, инфицированных ВПЧ, в возрасте от 23 до 31 лет. Все пациентки, включенные в исследование, дали информированное согласие на участие в нем.
При создании протокола исследования учитывались положения Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации (пересмотр 2008 г.), а также документа «Международные этические рекомендации по проведению биомедицинских исследований с участием людей». Протокол исследования одобрен этическим комитетом ФГАОУ РУДН.
Отбор пациенток проводился в соответствии с критериями включения и исключения. Критерии включения: возраст пациенток — 18-45 лет, беременность. Критерии исключения: тяжелые соматические заболевания, резус-отрицательная кровь, преэклампсия, угроза прерывания беременности, психические заболевания и когнитивные расстройства, злокачественные новообразования любой локализации.
Применялись общеклинические методы исследования (изучение жалоб и анамнеза, объективное и акушерское обследование); лабораторные методы включали тестирование на ВПЧ методом полиме-разной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени (тест «Квант-21»), цитологическое исследование мазков экто- и эндоцервикса по Папани-колау с оценкой по классификации Бетесда (пересмотра 2001 г.).
Количественные значения вирусной нагрузки ВПЧ проводилась с помощью набора реагентов «Квант-21». Их интерпретация выполнялась следующим образом: 103 копий / 105 клеток — клинически малозначимая вирусная нагрузка с минимальным риском развития РШМ; 103-105 копий /1 05 клеток — клинически значимая вирусная нагрузка с высоким риском развития дисплазии и РШМ; > 105 / 105 клеток — нагрузка ВПЧ с повышенным риском тяжелой дисплазии.
Определение уровня экспрессии маркеров Ю-67 и р1б проводилось иммуноцитохимическим методом. Исследуемый материл — соскоб с поверхности эндоцервикса. Уровень экспрессии Ю-67 определяли с использованием поликлональных антител (М1В 1), а для оценки экспрессии р16 — монокло-нальных антител (РС 10 и DO 7, DAKO LSABrKit, Дания). Подсчет индексов пролиферации Ю-67 и р16 проводился с использованием морфометрической окулярной сетки Автандилова в 20 полях зрения, увеличение х 400, при этом учитывалось 500 клеток. Количество положительных клеток оценивали в зонах, содержащих их максимальное количество. Для р1б учитывались только интенсивно окрашенные черно-коричневого цвета ядра, а для Ю-67 — позитивно окрашенные ядра любой степени интен-
Таблица 1. Общая медико-социальная характеристика участниц исследования
Table 1. General medical and social characteristic of the research participants
сивности. Интерпретация полученных результатов ИГХ-реакции: случаи, в которых процент окрашенных клеток был меньше или равен 2%, считались «отрицательными». Случаи, в которых индекс ме-чения был меньше или равен 25%, оценивались как 1+, от 26 до 50% — как 2+, от 51 до 75% — как 3+, от 76 до 100 % — как 4+.
Статистический анализ полученных данных осуществляли при помощи пакета программ Statistica 6.0 — использовали методы описательной статистики. Количественные показатели представляли в виде Ме (25%Q-75%Q), где Ме — медиана, а 25%Q-75%Q — интерквартильный размах показателя. Закон распределения признаков оценивали при помощи критерия Колмогорова — Смирнова, он оказался отличным от нормального. Для показателей, характеризующих качественные призна-
ки, указывали абсолютное число и относительную величину в процентах (%) (Боровиков В.П., 1998). Проверку статистической значимости различий количественных показателей, отличающихся от нормального распределения, проводили при помощи непараметрических критериев. Анализ различий в независимых выборках выполняли с помощью и-критерия Манна — Уитни. Различия качественных признаков анализировали при помощи критерия х2. Различия считали статистически значимыми при р < 0,05.
Результаты
Средний возраст обследованных пациенток составил 29,2 ± 3,3 года. Срок беременности при включении в исследование составил в среднем 10,3 ± 0,9 недель и колебался в пределах от 8 до 14 недель. Общая клиническая характеристика обследованных пациенток представлена в табл. 1.
Гинекологические заболевания в анамнезе отмечались с частотой 1,3 ± 0,6 на одну беременную. Среди них наиболее часто встречались бактериальный вагиноз (38,5%, 10/26), кандидозный вуль-вовагинит (19,2%, 5/26), микоплазменная инфекция (15,4%, 4/26), гиперпластические процессы (11,5%, 3/26). Из экстрагенитальных заболеваний в анамнезе отмечались болезни желудочно-кишечного тракта — 29,1% (25/86), сердечно-сосудистой системы — 16,3 (14/86), нарушения жирового обмена — 12,8% (11/86), остальные — от 3 до 5 случаев в выборке.
Первоначально среди обследуемых пациенток определяли серотипы ВПЧ. Из ВПЧ ВКР наиболее часто в данной когорте пациенток выделялись типы 16, 52 и 56. По лидирующим генотипам можно сделать заключение, что преобладали единичные штаммы (р < 0,001): у 19 носительниц выделялся один генотип (73,1% из 26 женщин с ВПЧ ВКР), у 7 — выделены вирусы двух генотипов. ВПЧ 18 и 45 типов в данной выборке были представлены по одному наблюдению.
Результаты количественного изучения вирусной нагрузки представлены в табл. 2.
Оценены уровни онкомаркеров белков Ю-67 и р16. Из 26 проб 3 были признаны невалидными, остальные 23 пробы распределились следующим
Таблица 2. Количественные характеристики вирусной нагрузки, lg ВПЧ ВКР / 105 клеток (n = 26)
Table 2. Quantitative characteristics of voral load, lg HPV high cancerogenic risk / 105 cells (n = 26)
Типы ВПЧ Среднее значение Минимальное значение Максимальное значение SD
Кол-во ДНК ВПЧ А9 (16, 31, 33, 35, 52, 58 типы) 5,36 3,56 9,05 1,63
Кол-во ДНК ВПЧ А7 (18, 39, 45, 59, 68 типы) 5,01 2,79 7,02 1,71
Кол-во ДНК ВПЧ А5-А6 (51, 56 типы) 5,51 2,85 8,19 2,35
Кол-во ДНК ВПЧ сумм. (1д/105 клеток) 5,46 2,85 9,05 1,64
Кол-во ДНК ВПЧ 16 типа 4,55 2,11 7,24 1,60
СУММ 1д ВПЧ / 105 клеток 5,53 2,92 8,30 1,44
Показатели n = 26 %
Замужем 6 23,1
Не были ранее замужем 11 42,3
Разведены 9 34,67
Курение 14 53,9
Употребление алкоголя 6 23,1
Менархе до 14 лет 20 76,9
Менархе в 14 и старше 6 23,1
Нарушение менструальной функции 5 19,2
Коитархе до 18 лет 16 61,5
Коитархе в 18 лет и старше 10 38,5
Первобеременные 12 46,1
Повторно беременные 14 53,9
Примечание: ДНК ВПЧ 18 и 45 типов выделены по одному случаю для каждого из генотипов. Note: DNA HPV of types 18 and 45 are singled out as one case for each genotype.
Таблица 3. Тяжесть изменений в цитологической картине в зависимости от наличия онкомар-керов, n = 23 (n, %)
Table 3. Severity of changes in the cytological status depending on the presence of oncomarkers, n = 23 (n, %)
Цитологическая картина Всего* Онкомаркеры обнаружены** Онкомаркеры не обнаружены** р
NILM 15 (65,2) 3 (20) 12 (80) 0,003
ASCUS 3 (13,0) 1 (33,3) 2 (66,7) 1,01
LSIL 4 (17,4) 2 (50) 2 (50) 0,48
HSIL 1 (4,4) 1(100) 0 0,92
Всего 23 (100) 7(30,4) * 16 (69,6) * 0,02
Примечание: * — доля рассчитана от общего количества пациенток в группе обследованных, ** — доля рассчитана от количества пациенток с соответствующим поражением ШМ.
Note: * — share of the total number of patients in the studied group, ** — share of the number of patients with the corresponding cervical lesion.
образом: у 16 из 23 (69,6%) женщин онкомаркеры не выявлены, у 7 (30,4%) — выявлены (р = 0,02) (табл. 3).
Из табл. 3 видно, что с увеличением тяжести поражения ШМ увеличивалась доля пациенток с онко-маркерами с 20% при 1тм до 100% при HSIL.
Соотношение между интенсивностью экспрессии онкомаркеров Ю-67/р16 и степенью поражения ШМ представлено в табл. 4.
При анализе экспрессии Ю-67/р16 слабое окрашивание (1+) наблюдалось у 5 (21,7%) пациенток. Диффузно-положительное окрашивание 2+ и 3+ наблюдалось у 2 (8,8%, р = 0,05) — по одному случаю при LSIL(25%, 1/3) и HSIL(100%, 1/1) соответственно.
При нормальной цитологической картине (ЫКМ) частота отрицательных результатов окрашивания на онкомаркеры была статистически значимо выше по сравнению с положительным окрашиванием — 80 против 20%, р = 0,003.
Кроме того, выявлены различия в уровнях вирусной ДНК в зависимости от наличия онкомаркеров (табл. 5).
Более высокая статистически значимая вирусная нагрузка была выявлена для групп ДНК ВПЧ А9 (16, 31, 33, 35, 52, 58 типы) и ДНК ВПЧ А7 (18, 39, 45, 59, 67 типы) при обнаружении онкомаркеров по сравнению без них. Построенная модель логит-регрессии, представленная на рис. 1, описывает ассоциацию количества ДНК ВПЧ А9 и выявления онкомаркеров (Х2 = 8,64; р = 0,003; чувствитель-
ность — 100%, специфичность — 89%).
Таким образом, с увеличением тяжести поражения ШМ увеличивается доля пациенток с онкомар-керами (с 20% при 1тм до 100% при HSIL), причем интенсивность экспрессии Ю-67/р16 является средней (2+) у 25% пациенток с LSIL и высокой (3+) у 100% с HSIL. Более высокая статистически значимая вирусная нагрузка определяется в группе ДНК ВПЧ А9 (16, 31, 33, 35, 52, 58 типы) при обнаружении онкомаркеров по сравнению с их отсутствием, подтвержденная моделью логит-регрессии с чувствительностью 100% и специфичностью 89%. Однако малое число наблюдений в данном исследования следует считать ограничением для интерпретации полученных результатов.
Обсуждение
Согласно результатам проспективных клинических испытаний, высокая вирусная нагрузка ВПЧ ВКР может быть маркером прогрессирования предраковых состояний [7]. Количественные характеристики вирусной нагрузки в настоящем исследовании имели среднее значение 5,53 1д ВПЧ ВКР/105 клеток с наибольшим показателем для 16 типа - 5,55 1д ВПЧ ВКР/105 клеток. Высокая вирусная нагрузка, по данным Л.И. Короленковой (2011), отмечается у 89% беременных [8].
В литературе отмечается, что наблюдается большой разброс количественных значений вирусной нагрузки ВПЧ 16 от цитологической нормы до степени Сш 2. Так, по данным исследователей из Нидер-
Таблица 4. Соотношение между выраженностью экспрессии онкомаркеров Ki-67 и p16 и степенью поражения шейки матки, n = 23
Table 4. Correlation between the expression of oncomarkers Ki-67 and p16 and the degree of cervical lesion, n = 23
Ki-67/p16 NILM, n (%) ASCUS, n (%) LSIL, n (%) HSIL, n (%) Всего, n = 23
- 12 (80,0) 2 (66,7) 2 (50,0) 0 (0,0) 16 (69,6)
1 + 3 (20,0) 1 (33,3) 1 (25,0) 0 (0,0) 5 (21,7)
2 + 0 (0,0) 0 (0,0) 1 (25,0) 0 (0,0) 1 (4,4)
3 + 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 1(100) 1 (4,4)
Всего 15 (100) 3 (100) 4 (100) 1(100) 23 (100)
Таблица 5. Сравнительный анализ содержания вирусной ДНК в зависимости от наличия онко-маркеров, n = 23 (lg/105 клеток M (SD)
Table 5. Comparative analysis of the content of viral DNA depending on the presence of oncomarkers, n = 23 (lg/105 cells M (SD)
Параметры оценки вирусной ДНК Онкомаркеры обнаружены, n = 9 Онкомаркеры не обнаружены, n = 14 р
Кол-во ДНК ВПЧ А9 6,13 (1,71) 4,1 (0,32) 0,01
Кол-во ДНК ВПЧ А7 5,46 (1,47) 2,8 (0,32) 0,001
Кол-во ДНК ВПЧ А5 (51 тип) 5,52 (1,79) 5,5 (1,54) 0,97
Кол-во ДНК ВПЧ 16 типа 5,84 (1,23) 4,25 (1,17) 0,2
Кол-во ДНК ВПЧ сумм. 6,09 (1,42) 4,79 (1,12) 0,02
Примечание: А9 — 16, 31, 33, 35, 52, 58 типы; А7 — 18, 39, 45, 59, 67 типы. Note: А9 — types 16, 31, 33, 35, 52, 58; А7 — types 18, 39, 45, 59, 67.
ландов (P. Snijders et al., 2006), диапазон вирусной нагрузки ВПЧ 16 составляет от 0,6 до 11,6 копий/ клетку. В той же публикации выявленный диапазон ВПЧ 31 составлял 3,3-23,4, а ВПЧ 33 — 10,9-83,7. В другой публикации диапазон по ВПЧ 16 отмечается от 0,02 до 4,19 копий/клетку. Видимо, по причине значительных расхождений в количественном диапазоне в руководствах лишь упоминается необходимость определения вирусной нагрузки, но значения не приводятся. Необходимо иметь в виду, что разные типы онкогенных ВПЧ характеризуются различными диапазонами вирусной нагрузки. Согласно результатам исследования M. Marks et al. (2011), хотя численные значения вирусной нагрузки ВПЧ 16 не были связаны с элиминацией вируса, но ее уменьшение более чем на 2 порядка между 2 посещениями врача (6-12 месяцев) стало полезным прогностическим фактором элиминации вируса, то есть диагностики транзиторной инфекции [9]. В более ранней работе шведских исследователей (N. Ylitalo et al., 2000) отмечается, что методом количественной ПЦР продемонстрирована последовательно нарастающая вирусная нагрузка ВПЧ 16 уже за 13 лет до постановки диагноза РШМ. Эти же авторы констатируют, что примерно у 25% женщин
Рисунок 1. Ассоциация количества ДНК ВПЧ ВКР А9 и выявления белков-онкомаркеров Ki-67 и p16
Figure 1. Association of the amount of DNA HPV high cancerogenic risk A9 and the detection of oncomarker proteins Ki-67 and p16
с высокой вирусной нагрузкой до 25-летнего возраста в течение 15 лет развивался РШМ.
Оценка уровня экспрессии белка Ki-67 характеризует интенсивность клеточной пролиферации и используется для определения выраженности роста определенных популяций клеток, при этом доля Ki-67-позитивных опухолевых клеток обычно коррелирует с клиническим течением заболевания [10]. Уровень p16 коррелирует с повышенной экспрессией онкогенной мРНК вируса папилломы человека E6/E7 [11]. Мета-анализ семи исследований с участием 2628 небеременных пациенток показал чувствительность и специфичность определения экспрессии Ki-67/p16 для сортировки аномальных результатов цитологического мазка 91 и 64% соответственно при CIN3 и РШМ и, как утверждают авторы, может быть надежным вспомогательным методом для их выявления [12].
Однако сообщения о возможности применения этих маркеров в клинической практике при ведении беременных с выявленной CIN в доступной литературе единичны. Нами у беременных выявлены онкомаркеры Ki-67 и p16 у 30,4% (7/23, р = 0,02) и у 69,6% (16/23) они отсутствовали. Показано, что с увеличением тяжести поражения ШМ увеличивалась доля пациенток с онкомаркерами с 20% при NILM до 100% при HSIL. При анализе экспрессии Ki-67/p16 слабое окрашивание (1+), наблюдалось у 5 (21,7%) пациенток. Диффузно-положитель-ное окрашивание 2+ и 3+ наблюдалось у 2 (8,8%, p = 0,05) — по одному случаю при LSIL (25%, 1/3) и HSIL (100%, 1/1) соответственно.
При нормальной цитологической картине (NILM) частота отрицательных результатов окрашивания на онкомаркеры была статистически значимо выше по сравнению с положительным окрашиванием — 80 против 20%, р = 0,003. Выявление онкомарке-ров у женщин с NILM может свидетельствовать о наличии ложноотрицательных результатов цитологического исследования и требует дополнительного обследования. Полученные данные совпадают с указанием в литературе на частоту ложноотрица-тельных результатов до 27% [13]. Диагностические характеристики цитологического исследования для обнаружения CIN1+ по сравнению с гистологическим диагнозом по данным H. Nishio et al. (2018) составляют: чувствительность — 95,2%, специфичность — 32,1% [14].
При анализе проведенных другими авторами исследований обращает на себя внимание тот факт,
что экспрессия Ki-67 и p16 у беременных наблюдается в менее глубоких слоях плоского эпителия CIN, чем у небеременных женщин. В отличие от позитивного окрашивания для Ki-67 и p16 у небеременных женщин с CIN2-3, у беременных выраженность окраски существенно варьирует и ниже, чем у небеременных. Соответственно, корреляция между экспрессией Ki-67/p16 и степенью ClN более выражена у небеременных женщин, в то время как у беременных корреляция со степенью дисплазии низкая. Эти результаты, по мнению авторов, могут указывать на то, что беременность препятствует экспрессии клеточных белков, участвующих в регуляции клеточного цикла, а также процессу канцерогенеза, вызванного ВПЧ ВКР [15].
В то же время выявлены различия в уровнях вирусной ДНК в зависимости от наличия онкомарке-ров. Более высокая статистически значимая вирусная нагрузка была отмечена для групп ДНК ВПЧ А9 (16, 31, 33, 35, 52, 58 типы) - 6,13 (1,71) - при наличии онкомаркеров, р = 0,01 против 4,1 (0,32) при их отсутствии и ДНК ВПЧ А7 (18, 39, 45, 59, 67 типы) — 5,46 (1,47) против 2,8 (0,32) соответственно, р = 0,001. Логит-регрессионная модель описала достоверную ассоциацию количества ДНК ВПЧ А9 и выявления белков-онкомаркеров (Х2 = 8,64; р = 0,003). Ученые утверждают, что усиленная экспрессия p16 напрямую связана с онкогенной активностью ВПЧ ВКР, что совпадает с результатами настоящего исследования: в работе N. Izadi-Mood et al. (2012), в 10% из проанализированных образцов нормальных тканей ШМ было обнаружено положительное окрашивание на p16, значительное увеличение избыточной экспрессии этого белка наблюдалось в 82% случаев при CIN1, в 90% — при CIN2-3 или РШМ [16]. По мнению Y. Li. et al. (2019), сочетание оценки нагрузки ДНК ВПЧ с интенсивностью окрашивания Ki-67 и p16 может повысить чувствительность диагностики поражения CIN и предсказать исход CIN2 с большей вероятностью у пациентов с инфекцией ВПЧ16 и/или 58 типов [17].
Ввиду отсутствия однозначного мнения о том, в какой мере изменения экспрессии Ki-67 и p16 отражают информацию об эволюции CIN во время беременности, необходимо проведение дальнейших исследований для получения данных, позволяющих осуществлять соответствующую интерпретацию выявленных феноменов.
Выводы
Увеличение тяжести поражения ШМ характеризуется присутствием онкомаркеров Ki-67/p16, причем интенсивность их экспрессии увеличивается со средней (2+) у пациенток при LSIL и до высокой (3+) приHSIL.
При обнаружении онкомаркеров Ki-67/p16 по сравнению с их отсутствием отмечается более высокая статистически значимая вирусная нагрузка для группы ДНК ВПЧ А9 (16, 31, 33, 35, 52, 58 типы), подтвержденная моделью логит-регрессии с чувствительностью 100% и специфичностью 89%. Это свидетельствует о возможности использования этих маркеров в прогнозе прогрессирования поражений шейки матки. Однако малое число наблюдений в данном исследовании следует считать ограничением для интерпретации полученных результатов и требует дальнейшего изучения.
Бебнева Т.Н.
https://orcid.Org//0000-0003-1095-2008. Дикке Г.Б.
https://orcid.Org//0000-0001-9524-8962.
ЛИТЕРАТУРА
1. Niyibizi J., Zanre N., Mayrand M.-H., Trottier H. The association between adverse pregnancy outcomes and maternal human papillomavirus infection: A systematic review protocol // Systematic Reviews. - 2017. - Vol. 6 (1). - P. 56. DOI: 10.1186/s13643-017-0443-5
2. Al-Halal H., Kezouh A., Abenhaim H. Incidence and obstetrical outcomes of cervical intraepithelial neoplasia and cervical cancer in pregnancy: A population-based study on 8.8 million births // Arch Gynecol Obstet. - 2012. - Vol. 287 (2). DOI: 10.1007/s00404-012-2475-3
3. Beharee N., Shi Z., Wu D., Wang J. Diagnosis and treatment of cervical cancer in pregnant women // Cancer Med. - 2019. -Vol. 8 (12). - P. 5425-5430. DOI: 10.1002/cam4.2435
4. Mailath-Pokorny M., Schwameis R., Grimm C., Reinthaller A., Polterauer S. Natural history of cervical intraepithelial neoplasia in pregnancy: postpartum histo-pathologic outcome and review of the literature // BMC Pregnancy Childbirth. - 2016. - Vol. 16. - P. 74. DOI: 10.1186/s12884-016-0861-8
5. Shiping Z., Lushan Z.Q. et al. Progress in diagnosis and treatment of pregnancy complicated with cervical cancer // J Pract Med. - 2018. - Vol. 25 (4). - P. 400-402.
6. Hellman K., Lindquist D., Ranhem C., Wilander E., Andersson S. Human papillomavirus, p16(INK4A), and Ki-67 in relation to clinicopathological variables and survival in primary carcinoma of the vagin // Br J Cancer. - 2014. - Vol. 110 (6). - P. 1561-1570. DOI: 10.1038/bjc.2014.32
7. Xi L.F., Hughes J.P., Castle P.E. et al. Viral load in the natural history of human papillomavirus type 16 infection: a nested case-control study // J Infect Dis. - 2011. - Vol. 203 (10). - P. 1425-1433. DOI:10.1093/infdis/jir049
8. Короленкова Л.И., Брюзгин В.В. Тяжелые цервикальные ин-траэпителиальные неоплазии (CIN 2-3 / преинвазивный рак) и микрокарцинома шейки матки у беременных // Акушерство и гинекология. - 2011. № 5. - С. 68-74.
9. Marks M., Gravitt P.E., Utaipat U. et al. Kinetics of DNA load predict HPV 16 viral clearance // J ClinVirol. - 2011. - Vol. 51 (1). -P. 44-49. DOI: 10.1016/j.jcv.2011.01.011
10. Calil L.N., Edelweiss M.I., Meurer L. et al. p16 INK4a and Ki67 expression in normal, dysplastic and neoplastic uterine cervical epithelium and human papillomavirus (HPV) infection // Pathol. Res. Pract. - 2014. - Vol. 210. - P. 482-487.
11. Tornesello M.L., Buonaguro L., Rossi G.P., Buonaguro F.M. Viral and cellular biomarkers in the diagnosis of cervical Intraepithelial neoplasia and cancer // Biomed. Res. Int. - 2013. - 519619. DOI: 10.1155/2013/519619
12. Chen C.C., Huang L.W., Bai C.H., Lee C.C. Predictive value of p16/Ki-67 immunocytochemistry for triage of women with abnormal Papanicolaou test in cervical cancer screening: a systematic review and meta-analysis // Ann Saudi Med. - 2016. - Vol. 36 (4). -P. 245-251. DOI: 10.5144/0256-4947.2016.245
13. Castillo M., Astudillo A., Clavero O., Velasco J., Ibanez R., de Sanjose S. Poor Cervical Cancer Screening Attendance and False Negatives. A Call for Organized Screening // PLoS One. - 2016. -Vol. 11 (8). - P. e0161403. DOI: 10.1371/journal.pone.0161403
14. Nishio H., Iwata T., Nomura H., Morisada T., Takeshima N., Takano H., Sasaki H., Nakatani E., Teramukai S., Aoki D. Liquid-based cytology versus conventional cytology for detection of uterine cervical lesions: a prospective observational study // Jpn J Clin Oncol. -2018. - Vol. 48 (6). - P. 522-528. DOI: 10.1093/jjco/hyy050
15. Ciavattini A., Sopracordevole F., Di Giuseppe J. et al. Cervical intraepithelial neoplasia in pregnancy: Interference of pregnancy status with p16 and Ki-67 protein expression // Oncol. Lett. - 2017. -Vol. 13 (1). - P. 301-306. DOI: 10.3892/ol.2016.5441
16. Izadi-Mood N., Asadi K., Shojaei H. et al. Potential diagnostic value of P16 expression in premalignant and malignant cervical lesions // J Res Med Sci. - 2012. - Vol. 17 (5). - P. 428-433.
17. Li Y., Liu J., Gong L. et al. Combining HPV DNA load with p16/ Ki-67 staining to detect cervical precancerous lesions and predict the progression of CIN1-2 lesions // Virol J. - 2019. - Vol.16. - P. 117. DOI: 10.1186/s12985-019-1225-6
Источник финансирования: исследование проведено при поддержке Программы РУДН «5-100».
