Прогностическая значимость определений уровней цитокинов периферической крови у больных с цервикальными неоплазиями Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

ИММУНОЛОГИЯ

иммунология

© О. С. АБРАМОвСКИХ, 2012

УдК 618.146-018.7-022:578.827.1]-078.33

О. С. Абрамовских

прогностическая значимость определения уровней цитоКинов периферической крови у Больных с цервикальными неоплазиями

ГОУ БПО Челябинская государственная медицинская академия Росздрава

Проведено изучение уровней цитокинов периферической крови у 156 больных с цервикальными интраэпителиальными неоплазиями (ЦИН) I, II, III степени, ассоциированными с вирусом папилломы человека. У больных с ЦИНI степени уровни цитокинов не претерпевали существенных изменений. Развитие ЦИН II степени сопровождалось повышением уровней интерферона у, интерлейкина 10 и фактора некроза опухоли а. Тяжелая дисплазия характеризовалась снижением уровней указанных цитокинов. Полученные результаты свидетельствуют о важной роли цитокинов, определяющих развитие иммунного ответа как клеточного, так и гуморального типа в прогрессии неопластического процесса, обусловленного папил-ломавирусной инфекцией.

Ключевые слова: цервикальная интраэпителиальная неоплазия, дисплазия шейки матки, цитокины, интер-лейкин 10, фактор некроза опухоли а

O.S. Abramovskih

THE PROGNOSTIC SIGNIFICANCE OF ESTIMATION OF LEVELS OF PERIPHERAL BLOOD CYTOKINES

IN PATIENTS WITH CERVICAL NEOPLASMS

The article deals with the results of .study of levels of peripheral blood cytokines in 156patients with cervical intra epithelial neoplasia stage I, II and III associated with human papilloma virus. The levels of cytokines didn't undergo significant alterations in patients with cervical intra epithelial neoplasia stage I. The progress of cervical intra epithelial neoplasia stage II was accompanied with increasing of levels of interferon (y), interleukin 10 and tumor necrosis factor (a). The severe dysplasia was characterized by decreasing of levels of cytokines mentioned above. The study results testify the important role ща cytokines determining the progression of neoplastic process conditioned by papilloma virus infection.

Key words: cervical intra epithelial neoplasia, cervix dysplasia, cytokines, interleukin 10, tumor necrosis factor

Вирус папилломы человека высокого канцерогенного риска (ВПЧ ВКР), бесспорно, считается инициирующим фактором в генезе цервикальной интраэпителиальной неоплазии (ЦИН) и рака шейки матки, заболеваемость которым занимает одно из первых мест в мире [10, 17, 19]. Инфицирование ВПЧ ВКР является необходимым, но недостаточным условием для развития цервикальной неопластической патологии [8, 9]. Вирусом заражаются 8 из 10 женщин, ведущих активную половую жизнь, но в течение 6-24 мес у 80% он уходит из организма самостоятельно, без какого-либо лечения, не вызывая заболеваний. Только у нескольких процентов женщин с хронической папилломавирусной инфекцией может развиться рак шейки матки [20]. Постоянное носительство ВПЧ ВКР приводит сначала к возникновению легкой, затем умеренной и, наконец, тяжелой дисплазии шейки матки, которая заканчивается развитием инвазивного рака [3, 8, 22]. Риск развития онкологической патологии во многом зависит от состояния иммунной реактивности организма [7, 9, 15, 21, 23, 24].

Центральную роль в регуляции иммунного ответа, направленного против инфекционных и неопластических процессов, играют цитокины, которые обладают широким спектром биологической активности и являются медиаторами

Для корреспонденции:

Абрамовских Ольга Сергеевна, ст. науч. сотр. НИИ иммунологии Адрес: 454092, Челябинск, ул. Воровского, 64 Телефон: 8 (902) 868-62-23 E-mail:[email protected]

межклеточного взаимодействия, регулирующими ряд физиологических функций и поддержание нарушенного гомеоста-за [2]. Цитокины, образующиеся при первичном иммунном ответе, имеют локальный характер действия с участием различных типов клеток крови, эндотелия, эпителия и соединительной ткани [12]. Определение в периферической крови высоких уровней цитокинов свидетельствует о нарушении принципа локальности функционирования цитокиновой сети, что может наблюдаться при персистирующих инфекционных, аутоиммунных процессах, онкологических заболеваниях, сопровождающихся генерализованной активацией клеток иммунной системы [13].

Цель исследования - изучение уровней цитокинов периферической крови у больных с ЦИН I, II, III степени, ассоциированными с ВПЧ ВКР.

Материалы и методы. Проведено изучение уровней цитокинов периферической крови у 156 больных с ЦИН (средний возраст 27,2 ± 1,84 года), у которых предварительно методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени были выявлены один или несколько типов ВПЧ ВКР (типы 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59). В соответствии с целью исследования все обследованные были разделены на 3 группы: 1 -я группа - 40 больных с ЦИН I степени (ЦИН I, или легкая дисплазия); 2-я группа - 38 больных с ЦИН II степени (ЦИН II, или умеренная дисплазия); 3-я группа - 38 больных с ЦИН III степени (ЦИН III, или тяжелая дисплазия). Диагноз был установлен врачами акушерами-гинекологами женской консультации ГКБ № 8 Челябинска на основании данных клинических, кольпоскопических и гистологических методов исследования.

КЛИНИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА, № 3, 2012

уровни цитокинов (в пг/мл) в периферической крови у больных с цервикальными неоплазиями (X ± m)

Показатель Контрольная группа (n = 40) Больные с

ЦИН I (n = 40) ЦИН II (n = 38) ЦИН III (n = 38)

ИФН-у, 21,11 ± 0,62 21,93 ± 1,15 23,67 ± 0,46 20,64 ± 0,99

Р1 = 0,02 p3 = 0,008

ИЛ-4, 1,74 ± 0,25 1,02 ± 0,17 1,42 ± 0,09 1,21 ± 0,10

ИЛ-10, 4,77 ± 0,48 6,26 ± 0,69 7,86 ± 0,37 5,32 ± 1,02

p1 = 0,001 p3 = 0,001

p2 = 0,049

ФНОа, 1,10 ± 0,10 1,52 ± 0,18 5,32 ± 2,29 1,19 ± 0,11

p1 = 0,001 p3 = 0,001

p2 = 0,02

Примечание. p - статистическая достоверность различий показателей: p - у больных с ЦИН и в контрольной группе; p2 - у больных с ЦИН II и ЦИН I; p3 - у больных с ЦИН III и ЦИН II.

Контрольную группу составили 40 женщин без клинико-морфологических изменений на шейке матки и иной гинекологической патологии с ВПЧ ВКР в цервикальном канале.

Материалом для выделения и последующей амплификации ДНК ВПЧ ВКР послужили соскобы эпителия цер-викального канала, взятые одноразовыми цитощетками до начала курса лечения. В качестве метода выявления ДНК ВПЧ ВКР использовали полимеразную цепную реакцию с гибридизационно-флюоресцентной детекцией в режиме реального времени при помощи диагностического набора "Амплисенс ВПЧ ВКР - СКРИН-ТИТР РКГ" производства ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора (Москва).

Для определения уровней цитокинов (интерферона у -ИНФ-у, интерлейкина (ИЛ) 4, 10, фактора некроза опухоли а - ФНОа) в периферической крови методом иммунофермент-ного анализа были использованы соответствующие тест-системы ООО "Цитокин" (Санкт-Петербург).

Полученные результаты исследования обработаны общепринятыми методами вариационной статистики с использованием пакета прикладных программ Statistica 6.0. При анализе количественных признаков оценку достоверности различий между группами проводили с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни.

Результаты и обсуждение. Изменения уровней цитоки-нов относительно значений в контрольной группе установлены только в группе больных с ЦИН II и выражалась в повышении уровня ИФН-у, ИЛ-10 и ФНОа в периферической крови (см. таблицу).

У больных с легкой и тяжелой дисплазией изменений уровней цитокинов относительно контрольных показателей не зарегистрировано.

При межгрупповом сравнении у больных с ЦИН II относительно больных с легкой дисплазией выявлены повышение уровней ИЛ-10 и ФНОа.

У больных с тяжелой дисплазией при сравнении с изучаемыми показателями у больных с ЦИН II определяется снижение уровней ИФН-у, ИЛ-10 и ФНОа.

Достоверных изменений уровня ИЛ-4 у больных с ЦИН не установлено, однако определялась тенденция к снижению этого показателя во всех изучаемых группах больных.

Так как ИФН-у считается иммунным интерфероном, синтез которого осуществляется иммунокомпетентными клетками в ходе развернутого иммунного ответа [6], его повышенные уровни отражают специфический клеточный ответ на присутствие ВПЧ ВКР у больных с умеренной дисплазией.

Активация клеток и усиление продукции провоспали-тельных цитокинов являются необходимыми в начальных

фазах воспаления, однако становятся проблемными, если степень активации перестает быть адекватной, когда первоначально защитный механизм перерастает в патологический [4, 11]. Несмотря на то что ИФН-у оказывает прямое антивирусное и иммуностимулирующее действие, при определенных обстоятельствах он может быть иммуносупрессо-ром и фактором, способствующим персистенции вирусной инфекции [14]. Гиперпродукция ФНОа у больных с ЦИН II является одним из основных механизмов активации инфекционного процесса при его переходе из латентного состояния в фазу клинических проявлений и свидетельствует о прогрессировании заболевания [1]. У больных с умеренной дисплазией установлено и повышение уровня ИЛ-10, который может отражать регуляторную роль цитокинов Т-хелперов 2-го типа в ингибировании пролонгированного воспалительного ответа [2, 5].

Развитие тяжелой дисплазии сопровождается кардинально противоположными изменениями - понижением уровней ИФН-у, ИЛ-10 и ФНОа. Снижение уровня ИФН-у может быть связано как с истощением противовирусных механизмов защиты при тяжелой дисплазии, так и с имму-носупрессивным действием онкобелка Е7 ВПЧ ВКР [16, 18]. Изменение уровней ФНОа и ИЛ-10 свидетельствует о недостаточной активности клеточного звена, нарушении функционального профиля фагоцитов и неэффективной работе гуморального компонента иммунной системы у больных с ЦИН III, что в свою очередь может способствовать персистенции ВПЧ ВКР и инициировать дальнейшую прогрессию заболевания [5].

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о важной роли цитокинов, определяющих развитие как клеточного, так и гуморального типа иммунного ответа, в прогрессии неопластического процесса шейки матки, обусловленного папилломавирусной инфекцией.

ЛИТЕРАТУРА

1. Зима А. П., Рязанцева Н. В., Новицкий В. В. и др. // Иммунология. - 2007. - Т. 28, № 6. - С. 357-361.

2. Кетлинский С. С., Симбирцев А. С. Цитокины. - 2008.

3. Кисина В. И., Кубанов А.А. // Вестн. дерматол. - 2005. - № 4. - С. 29-32.

4. Кнорринг Г. Ю. // Цитокины и воспаление. - 2005. - Т. 4, № 4. -С. 45-49.

5. Кубанов А. А. // Вестн. дерматол. - 2005. - № 2. - С. 9-14.

6. Мейл Д., Брострофф Дж., Рот Д. Б., Ройтт А. Иммунология. -М., 2007.

7. Молочков В. А., Киселев В. И., Рудых И. В., Щербо С. Н. Папил-ломавирусная инфекция. Клиника, диагностика, лечение: Пособие для врачей. - М., 2005.

8. Прилепская В. Н., Роговская С. И., Кондриков Н. И., Сухих Г. Т. Папилломавирусная инфекция: диагностика, лечение и профилактика. - М., 2007.

9. Роговская С. И. // Гинекология. - 2003. - Т. 5, № 5. - С. 195-198.

10. Роговская С. И. Папилломавирусная инфекция у женщин и патология шейки матки: в помощь практикующему врачу. - М., 2008.

11. Серебренникова С. Н., Семинский И. Ж. // Сиб. мед. журн. -2008. - № 6. - С. 5-8.

12. Симбирцев А. С. // Цитокины и воспаление. - 2002. - № 1. - С. 9-16.

13. Сухих Г. Т., Ванько Л. В. // Акуш. и гин. - 2006. - Приложение. -С. 17-24.

14. ЧуринаЕ. Г., Уразова О. И., Новицкий В. В. и др. // Бюл. сиб. мед.

- 2009. - № 4. - С. 112-118.

15. Alves D. B., Tozetti I. A., Gatto F. A. et al. // Rev. Soc. Bras. Med. Trop. - 2010. - Vol. 43, N 4. - P. 425-429.

16. Beglin M., Melar-New M., Laimins L. J. // Interferon Cytokine Res.

- 2009. - Vol. 29, N 9. - P. 629-635.

17. Bosch F. X., de Sanjose S. // Dis. Markers. - 2007. - Vol. 23, N 4. - P. 213-227.

18. Bottley G., Watherston O. G., Hiew Y. L. et al. // Oncogene. - 2008.

- Vol. 27, N 12. - P. 1794-1799.