CC BY
33
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION.
NATURAL SCIENCE. 2017. No. 4-2
УДК 618.16-006.61-091.8 Б01 10.23683/0321-3005-2017-4-2-96-103
ПРОГНОСТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ НЕКОТОРЫХ ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ У БОЛЬНЫХ РАКОМ ВУЛЬВЫ
© 2017 г. Г.А. Неродо1, И.А. Новикова1, Е.Ю. Златник1, Е.М. Непомнящая1, Е.А. Дженкова 1, В.А. Иванова1, Е.В. Вереникина1, Е.П. Ульянова1, Ю.Т. Таджибаева2
1Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, Ростов-на-Дону, Россия, 2Ташкентский институт усовершенствования врачей, Ташкент, Узбекистан
PROGNOSTIC SIGNIFICANCE OF SOME IMMUNOHISTOCHEMICAL MARKERS IN PATIENTS WITH VULVAR CANCER
G.A. Nerodo1, I.A. Novikova1, E. Yu. Zlatnik1, E.M. Nepomnyashchaya1, E.A. Dzhenkova1, V.A. Ivanova1, E.V. Verenikina1, E.P. Ulianova1, Yu.T. Tadzhibaeva2
1Rostov Research Institute of Oncology, Rostov-on-Don, Russia, 2Tashkent Institute for Advanced Medical Education, Tashkent, Uzbekistan
Неродо Галина Андреевна - доктор медицинских наук, профессор, член-корреспондент РАН, главный научный сотрудник, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, ул. 14-я линия, 63, г. Ростов-на-Дону, 344037, Россия, e-mail: rnioi@list.ru
Новикова Инна Арнольдовна - кандидат медицинских наук, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, ул. 14-я линия, 63, г. Ростов-на-Дону, 344037, Россия, e-mail: novikovainna@yahoo. com
Златник Елена Юрьевна - доктор медицинских наук, профессор, главный научный сотрудник, лаборатория иммунофеноти-пирования опухолей, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, ул. 14-я линия, 63, г. Ростов-на-Дону, 344037, Россия, e-mail: elena-zlatnik@mail.ru
Непомнящая Евгения Марковна - доктор медицинских наук, профессор, главный научный сотрудник, лаборатория имму-нофенотипирования опухолей, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, ул. 14-я линия, 63, г. Ростов-на-Дону, 344037, Россия, e-mail: rnioi@list.ru
Дженкова Елена Алексеевна - доктор биологических наук, доцент, ученый секретарь, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, ул. 14-я линия, 63, г. Ростов-на-Дону, 344037, Россия, e-mail: enikipelova@mail.ru
Иванова Виктория Александровна - доктор медицинских наук, профессор, врач-онколог, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, ул. 14-я линия, 63, г. Ростов-на-Дону, 344037, Россия, e-mail: rnioi@list.ru
Вереникина Екатерина Владимировна - кандидат медицинских наук, заведующая отделением онкогинекологии, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, ул. 14-я линия, 63, г. Ростов-на-Дону, 344037, Россия, email: rnioi@list.ru
Galina A. Nerodo - Doctor of Medicine, Professor, Corresponding Member, RAS, Main Researcher, Rostov Research Institute of Oncology, 14-ya Liniya St., 63, Rostov-on-Don, 344037, Russia, e-mail: rnioi@list.ru
Inna A. Novikova - Candidate of Medicine, Rostov Research Institute of Oncology, 14-ya Liniya St., 63, Rostov-on-Don, 344037, Russia, e-mail: novikovainna@yahoo.com
Elena Yu. Zlatnik - Doctor of Medicine, Professor, Main Researcher, Laboratory of Tumors Immunophenotyping, Rostov Research Institute of Oncology, 14-ya Liniya St., 63, Rostov-on-Don, 344037, Russia, e-mail: elena-zlatnik@mail.ru
Evgenia M. Nepomnyashchaya - Doctor of Medicine, Professor, Main Researcher, Laboratory of Tumors Immunophenotyp-ing, Rostov Research Institute of Oncology, 14-ya Liniya St., 63, Rostov-on-Don, 344037, Russia, e-mail: rnioi@list.ru
Elena A. Dzhenkova - Doctor of Biological Sciences, Associate Professor, Scientific Secretary, Rostov Research Institute of Oncology, 14-ya Liniya St., 63, Rostov-on-Don, 344037, Russia, email: enikipelova@mail.ru
Viktoriya A. Ivanova - Doctor of Medicine, Professor, Oncologist, Rostov Research Institute of Oncology, 14-ya Liniya St., 63, Rostov-on-Don, 344037, Russia, e-mail: rnioi@list.ru
Ekaterina V. Verenikina - Candidate of Medicine, Head of On-cogynecology Department, Rostov Research Institute of Oncology, 14-ya Liniya St., 63, Rostov-on-Don, 344037, Russia, e-mail: rnioi@list.ru
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION. NATURAL SCIENCE. 2017. No. 4-2
Ульянова Елена Петровна - научный сотрудник, лаборатория иммунофенотипирования опухолей, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, ул. 14-я линия, 63, г. Ростов-на-Дону, 344037, Россия, e-mail: uljanova_elena@lenta.ru
Таджибаева Юлдуз Таджибаевна - доктор медицинских наук, профессор, кафедра онкологии, Ташкентский институт усовершенствования врачей, ул. Паркетская, 51, г. Ташкент, 100007, Республика Узбекистан, e-mail: tatyana.koshkina.58@bk.ru
Elena P. Ulianova - Researcher, Laboratory of Tumors Immuno-phenotyping, Rostov Research Institute of Oncology, 14-ya Liniya St., 63, Rostov-on-Don, 344037, Russia, e-mail: uljanova_elena@lenta. ru
Yulduz T. Tadzhibaeva - Doctor of Medicine, Professor, Department of Oncology, Tashkent Institute for Advanced Medical Education, Parketskaya St., 51, Tashkent, 100007, Republic of Uzbekistan, e-mail: tatyana.koshkina.58@bk.ru
Для определения возможной роли иммунологического микроокружения опухоли в поддержании длительности ремиссии проведено иммуногистохимическое исследование лимфоцитарно-макрофагальной инфильтрации, а также маркеров пролиферации, апоптоза и неоангиогенеза в опухолевой ткани 126 больных раком вульвы с длительным (свыше 2 лет) и коротким периодом (менее 2 лет) ремиссии. В строме и паренхиме опухолевой ткани выявлено наличие лимфоцитарно-макрофагальной инфильтрации различной степени выраженности, с преобладанием в ней Т-лимфоцитов. У больных с длительной ремиссией отмечено преобладание С08+-клеток в ткани злокачественной опухоли, тогда как более высокий уровень опухолевой инфильтрации СБ4+-Т-лимфоцитов ассоциировался с более короткой ремиссией и неблагоприятным прогнозом. Процессы пролиферации и неоангиогенеза при раке вульвы имели выраженные различия у больных с длительной и кратковременной ремиссией. При короткой ремиссии экспрессия факторов пролиферации ki-67 и апоптоза p53 в несколько раз превышала показатели больных с длительной ремиссией, а уровень клеток, экспрессирующих фактор неоангиогенеза CD34, был статистически достоверно выше. Выявленные различия экспрессии ki-67, p53, CD34, а также количества CD3+-, CD4+-, CD8+- и CD20+-лимфоцитов в ткани первичной плоскоклеточной карциномы вульвы позволили прогнозировать течение опухолевого процесса и развитие рецидива в ранние или отдаленные сроки.
Ключевые слова: рак вульвы, лимфоцитарно-макрофагальная инфильтрация, маркеры пролиферации, апоптоза и нео-ангиогенеза, прогноз.
We conducted an immunohistochemical study of lymphocyte and macrophage infiltration, as well as of markers of proliferation, apoptosis and neoangiogenesis in tumor tissue of 126 vulvar cancer patients with a long (over 2 years) and short (less than 2 years) remission in order to determine a possible role of immunologic microenvironment of tumors in remission maintaining. Stroma and parenchyma of tumor tissues demonstrated lymphocyte and macrophage infiltration of various degrees with the predominance of T-lymphocytes. CD8+ cells prevailed in tumor tissue of patients with a long remission period (over 2 years), while a higher level of CD4+ Т-lymphocytic infiltration was associated with a short remission (less than 2 years) and a poor prognosis. Processes ofproliferation and neoangiogenesis in vulvar cancer had significant differences in patients with prolonged and short remission periods. Expression of the ki-67 proliferation factor and p53 apoptosis factor in the short remission period was several times higher than in the prolonged period, and levels of cells expressing the CD34 neoangiogenesis factor were significantly higher as well. The observed differences in expression of ki-67, p53 and CD34 and in levels of CD3+, CD4+, CD8+ and CD20+ lymphocytes in tissues of primary squamous cells carcinoma of the vulva allowed prognosis of the disease course and the development of early or late recurrences.
Keywords: vulvar cancer, lymphocyte and macrophage infiltration, markers of proliferation, apoptosis and neoangiogenesis, prognosis.
Введение
Рак наружных половых органов составляет до 8 % общего показателя заболеваемости всеми злокачественными опухолями женских гениталий и занимает 4-е место после рака тела матки, шейки матки и яичников. Данное заболевание в основном выявляется у пожилых женщин, находящихся в менопаузе, и чаще всего возникает в возрасте 60-70 лет. Поэтому рак вульвы представляет собой не только онкологическую, но и геронтологическую проблему. В связи с ростом числа долгожительниц актуальность данной проблемы возрастает.
В настоящее время отмечается увеличение заболеваемости раком наружных половых органов. Несмотря на визуальную доступность своевременной
диагностики этого заболевания, малосимптомное течение болезни в ранней стадии приводит к поздней обращаемости, а потому более 50 % больных поступают в лечебные учреждения в III - IV стадии опухолевого процесса, когда эффективность проводимого лечения значительно снижена, а наличие некомпенсированных сопутствующих заболеваний делает вообще невозможным проведение радикального лечения. В силу особенностей анатомно-топографического строения наружных половых органов с чрезвычайно богато развитой сетью лимфатических сосудов рак данной локализации является заболеванием весьма агрессивным, так как обладает выраженной склонностью к быстрому росту, раннему метастазированию и рецидивирова-нию (до 30^60 %) [1-3].
ISSN 0321-3005 ИЗВЕСТИЯ ВУЗОВ. СЕВЕРО-КАВКАЗСКИЙ РЕГИОН._ЕСТЕСТВЕННЫЕ НАУКИ. 2017. № 4-2
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION. NATURAL SCIENCE. 2017. No. 4-2
Практически к моменту установления диагноза у 45^60 % больных обнаруживаются метастазы в регионарных лимфатических узлах. Несмотря на усовершенствование хирургического метода лечения с выполнением сверхрадикальных операций, а также применение в комбинации лучевых воздействий, результаты лечения больных раком вульвы все еще остаются неудовлетворительными [4, 5], и, по сводным данным 84 ведущих мировых онкологических центров, 5-летняя выживаемость составляет лишь 50,5 %.
Таким образом, увеличение заболеваемости раком наружных половых органов, тяжесть клинического течения, быстрота рецидивирования, частота метастазирования в регионарные лимфоузлы и низкая эффективность существующих методов лечения являются основанием для изучения патогенеза данного заболевания и поиска прогностических факторов эффективности лечения. Опухолевое микроокружение - один из факторов, определяющих прогноз заболевания. Роль инфильтрации опухоли иммунокомпетентными клетками неоднозначна, в литературе есть данные о том, что они могут способствовать не только ее регрессии, но и росту [6]. Гетерогенность состава лимфоцитарно-макрофагального инфильтрата, находящегося вблизи опухоли, можно рассматривать как отражение различия биологических свойств опухолевых клеток, способствующих его формированию [7]. Как указано в литературе, состав лимфоидного инфильтрата и его функциональная активность являются факторами независимого прогноза: при наличии высокого содержания в ткани опухоли и перифо-кальной зоне колоректального рака CD8+-лимфоцитов 5 -летняя выживаемость больных составила 86,2 %, а рецидивы возникали у 4,8 % больных, тогда как на фоне низкого содержания этих клеток данные показатели составили 27,5 и 75 % соответственно [8]. Большое число CD8+-цитотоксических лимфоцитов коррелирует с ухудшением показателей выживаемости при лимфоме Ходжкина [9], плоскоклеточном раке анального канала, но является фактором благоприятного прогноза при раке эндометрия [10], яичников [11-13]. Установлено, что снижение уровня Т-клеточной инфильтрации опухоли имеет определенную связь с регионарным метастазированием или наличием микрометастазов. В некоторых работах прослеживается положительная корреляция между Т-кле-точной инфильтрацией опухоли (включая СD4+- и СD8+-Т-лимфоциты) и положительным клиническим прогнозом, однако, судя по данным авторов, это относится к HLA-DR П-позитивным опухолям [14]. В других исследованиях подчеркивается однозначно позитивная прогностическая роль инфиль-
трации CD8+-T-клетками как предшественниками цитотоксических Т-лимфоцитов - эффекторов адаптивного иммунитета [15].
Цель настоящего исследования - оценка экспрессии и прогностической значимости лимфоци-тарно-макрофагальных маркеров, а также маркеров пролиферации, апоптоза и неоангиогенеза в ткани плоскоклеточной карциномы вульвы.
Материал и методы исследования
Иммуногистохимическое (ИГХ) исследование рака вульвы проводили на срезах с парафиновых блоков 126 пациентов, окрашивание - по стандартной методике. С парафиновых блоков готовили срезы толщиной 3-4 мкм на ротационном микротоме Accu-Cut SRM 200 фирмы Sakura (Япония). Срезы наносили на высокоадгезивные стекла и высушивали вертикально в термостате при температуре 37 °С в течение ночи. Депарафинизацию и регидратацию проводили через серию ксилола и спиртов по стандартной методике, «демаскировку» антигенов - в PT-LinkThermo. Протокол включал в себя предварительный нагрев до 65 °С, восстановление антигена в течение 20 мин при температуре 97 °С и дальнейшее охлаждение до 65 °С. Затем стекла промывались в течение 1^3 мин TBS-буфером (Dako) и помещались в автостейнер ThermoScientific для окрашивания в автоматическом режиме. В работе использованы первичные мышиные моноклональные антитела ki-67 для определения пролиферативной активности; p53 -апоптоза, CD31 и CD34 - неоангиогенеза. Для визуализации применялась система детекции Re-vealBiotin-FreePolyvalent DAB. Для маркеров ki-67 и p53 оценивали ядерную локализацию окрашивания с учетом количества положительных опухолевых клеток в зонах с максимальным их содержанием. Для маркеров CD31 и CD34 определяли количество сосудов в каждом поле зрения препарата. ИГХ-исследование иммунокомпетентных клеток, инфильтрирующих опухоль вульвы, проводили аналогично; определяли уровни лимфоцитов с маркерами Т- и В-лимфоцитов (CD3+ и CD20+), макрофагов (CD68+), CD4+-, CD8+-клеток (табл. 1). Результаты ИГХ-исследования анализировали ретроспективно с учетом последующей продолжительности жизни больных.
Для оценки маркеров применяли следующие критерии:
1. При морфологическом и ИГХ-исследовании наличие лимфоцитарно-макрофагальной инфильтрации оценивали в строме и паренхиме опухолевой ткани, а также в перифокальной зоне; остальные показатели - только в опухоли. Результаты
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION. NATURAL SCIENCE. 2017. No. 4-2
определения количества макрофагов (CD68+) и ных полях зрения с применением светового микро-субпопуляций Т-лимфоцитов - Т-хелперно-индук- скопа ZeissAxioImagerM2 под увеличением х40 и торных (CD4+) и Т-цитотоксических (CD8+) - оце- выражали в процентах. нивали полуколичественно на 10 случайно выбран-
Таблица 1
Панель антител для ИГХ-исследования опухолей больных раком вульвы / Panel of antibodies for IHC study of tumors in vulvar cancer patients
Антитело Клон Фирма Разведение Буфер для «демаскировки антигенов»
Антиген ki-67, пролиферативная активность (ядерное окрашивание) H3060 Spring Biosience 1:200 10 ммоль Tris, 1 мМ EDTA (рН 6,0)
Нормальный и мутантный тип p53 (ядерное окрашивание) DO-7 DAKO 1:100 10 ммоль Tris, 1 мМ EDTA (рН 9,0)
CD68 (цитоплазматическое окрашивание) KP 1 DAKO RTU 10 ммоль Tris, 1 мМ EDTA (рН 9,0)
CD3 (мембранное окрашивание) SP7 Thermo Scientific 1:150 10 ммоль Tris, 1 мМ EDTA (рН 6,0)
CD20 (мембранное окрашивание) L26 Cell Marque 1:500 10 ммоль Tris, 1 мМ EDTA (рН 8,0)
CD4 (мембранное окрашивание) IF 6 DCS 1:40 10 ммоль Tris, 1 мМ EDTA (рН 9,0)
CD8 (мембранное и цитоплазматическое окрашивание C8/1448 DAKO RTU 10 ммоль Tris, 1 мМ EDTA (рН 9,0)
CD34 (мембранное окрашивание эндотелиальных клеток) QBEnd-10 DAKO 1:150 10 ммоль Tris, 1 мМ EDTA (рН 9,0)
CD31 1А10 Thermo Scientific 1:50 10 ммоль Tris, 1 мМ EDTA (рН 6,0)
2. Для оценки пролиферативной активности (ПА) опухоли подсчитывали количество ki-67-положительных опухолевых клеток, приходящихся на 200^300 опухолевых. Индекс ki-67 определяли по формуле: ПА= число ki-67 положительных клеток х100/общее количество клеток. Маркеры ПА расценивались на основе наиболее часто употребляющегося способа оценки: 0-20 % - низкая ПА, 21-50 % - умеренная, 51-100 % - высокая.
3. Опухоль считали отрицательной по р53, если в ткани опухоли отсутствовала ядерная реакция с антителами или количество окрашенных клеток было менее 25 %; положительной по р53, если было окрашено более 25 % ядер опухолевых клеток.
4. Для оценки ангиогенеза в опухолях использовали индекс внутриопухолевой микрососудистой плотности (intratumor microvessel density - MVD). Микрососуды окрашивали антителом CD34. Количество сосудов определяли в каждом поле зрения препарата при использовании объектива х40 с использованием программы AxioVs40 v-4.8.1.0.
5. Интенсивность реакций, локализованных в цитоплазме и на мембранах клеток, оценивали полуколичественным способом по шкале от 0 до 3 баллов, учитывая выраженность реакции и ее локализацию: 0 - отсутствие реакции; 1 - слабая; 2 -умеренная; 3 - сильная реакция.
Результаты исследования
Под наблюдением находилось 126 больных раком вульвы в возрасте от 27 до 85 лет, 57 из кото-
рых после лечения были с кратковременной ремиссией, 69 - с длительной. Больные раком вульвы с кратковременной ремиссией находились в возрасте от 46 до 85 лет, средний возраст - 67 лет. Среди них в I стадии было 15,8 % больных, во II - 21, в III -47,4 и в IV - 15,8, т.е. в ранних стадиях было 36,8 -менее половины больных, а в поздних стадиях -63,2 %, т.е. с распространённым злокачественным процессом было почти 2/3 больных. По гистологической структуре у всех был выявлен плоскоклеточный рак: у 30 % имел место высокодифферен-цированный, у 70 - умеренно и низкодифференци-рованный (40 и 30 %). Длительность ремиссии у больных этой группы была от 5 до 20 мес., в среднем 11 мес. Ни у одной из пациенток этой группы ДНК ВПЧ обнаружен не был.
Возраст больных в группе с длительной ремиссией колебался от 27 до 71 года, средний возраст - 48 лет. В I стадии было 38,5 % больных, во II - 53,8, в III - 7,7, т.е. в ранних стадиях было 92,3 % больных, а среди больных с короткой ремиссией всего 36,8 % (более чем в 2 раза меньше); больных с запущенными формами заболевания с длительной ремиссией было лишь 7,7 % по сравнению с 63,2 % в группе с короткой ремиссией. По гистологической структуре у всех пациенток данной группы был выявлен плоскоклеточный рак, преимущественно высоко- и умеренно дифференцированный с преобладанием первого (60 %). Низкая степень дифференцировки опухоли у больных данной группы отсутствовала. Длительность ремиссии составила от 3 до 18 лет, в среднем - 8 лет. Среди больных в группе с длительной
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION.
ремиссией у 54 % отмечено наличие ДНК ВПЧ (в основном 16-го и 18-го типов). Все больные подверглись комплексному лечению в соответствии со стадией заболевания. Для определения возможной роли иммунологического микроокружения опухоли в эффективности лечения и поддержании длительной ремиссии было проведено ретроспективное морфологическое исследование лимфоцитарной инфильтрации и ИГХ-исследование рака вульвы у больных обеих подгрупп.
Морфологическое исследование опухоли вульвы выявило наличие в ней лимфоцитарной
NATURAL SCIENCE. 2017. No. 4-2
инфильтрации от незначительной с одиночно рассеянными лимфоцитами до очаговых скоплений по типу формирования лимфоидных фолликулов. По данным ИГХ-исследования, в лимфо-цитарных инфильтратах обнаружено присутствие как В-, так и Т-лимфоцитов с преобладанием последних.
Сравнительная характеристика факторов локального клеточного иммунитета при раке вульвы у больных, у которых впоследствии развилась ремиссия различной длительности, представлена в табл. 2.
Таблица 2
Результаты ИГХ-исследования, %, при раке вульвы у больных с различной длительностью ремиссии: числитель - длительная, знаменатель - кратковременная / Results of IHC study in vulvar cancer in patients with various
remission durations
Иммунокомпетентные клетки, инфильтрирующие опухоль Неоангиогенез Пролиферация
Т-лимфоциты (CD3+) CD4+ CD8+ В-лимфоциты (CD20+) Макрофаги (CD68+) CD31 CD34 ki-67 p53
95,3±9,7 * 85,7±6,6 *| 41,9±4,9* 67,5±9,7* Т 52,4±6,1* 17,3±3Д*| 6±1,7 13±2,4*Т 76,0±5,1 76,4±12,1 3,36±0,39 3,97±0,62 3,25±0,43* 5,47±1,31*Т 8,7±4,1* 85±5,0*Т 14,2±2,8* 71,4±5,1*Т
Примечание. * - статистически достоверные различия между группами (р<0,05).
Как видно из табл. 2, в ткани первичной опухоли больных с коротким периодом ремиссии экспрессия Ы-67 и р53 по отношению к больным с длительной ремиссией была статистически достоверно выше (р<0,05). При количественной оценке внутриопухолевой микрососудистой плотности выявлено, что среднее количество сосудов микро-циркуляторного русла в поле зрения при короткой ремиссии было выше, чем при длительной; результаты экспрессии CD34 были статистически достоверны (р<0,05).
У больных с длительной ремиссией уровень Т-лимфоцитов в опухоли был выше (р<0,05), содержание В-лимфоцитов - ниже, чем у больных с кратковременной ремиссией, а количество макрофагов - одинаковым.
Обращает на себя внимание разнонаправлен-ность содержания основных субпопуляций Т-клеток, инфильтрирующих опухоль: так, количество CD8+-лимфоцитов было статистически значимо выше, а уровень CD4+-клеток - ниже в опухолях больных, впоследствии продемонстрировавших длительную ремиссию. Показатели этой группы для CD4+ составляли 41,9±4,9 %, для CD8+ -52,4±6,1, тогда как в группе больных с кратковременной ремиссией - 67,5±9,7 и 17,3±3,2 соответственно; в обоих случаях р<0,05.
Преобладание в опухоли CD8+-клеток, являющихся предшественниками ЦТЛ и способных проявлять цитотоксичность, наблюдается преимущественно в опухолях с низкой пролиферативной активностью и с менее интенсивными процессами неоангиогенеза, чем в высокопролиферирующих карциномах вульвы.
Такой лимфоцитарный состав, по-видимому, более благоприятным образом отражается на эффекте лечения и длительности ремиссии, а также взаимосвязан с некоторыми факторами позитивного прогноза, что описано для других опухолей, например, для рака молочной железы [15], рака пищевода [8] и др.
Присутствие в опухолях больных, вышедших после проведенного лечения в непродолжительную ремиссию, высокого количества CD4+-Т-клеток можно объяснить возможным превалированием среди них иммуносупрессивных и проонкогенных Тге§8-клеток (CD4+CD25+FoxP3+), в том числе проявляющих такие виды активности через стимуляцию неоангиогенеза и пролиферации. Подобные результаты были описаны при исследовании других опухолей. Так, сопоставление лимфоцитарного состава образцов ткани первичных и рецидивных сарком мягких тканей позволило установить, что процентное содержание CD3+CD8+-лимфоцитов
ISSN 0321-3005 ИЗВЕСТИЯ ВУЗОВ. СЕВЕРО-КАВКАЗСКИЙ РЕГИОН._ЕСТЕСТВЕННЫЕ НАУКИ. 2017. № 4-2
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION. NATURAL SCIENCE. 2017. No. 4-2
в ткани первичных опухолей статистически достоверно выше, чем в ткани рецидивных, а количество Тregs, напротив, в них ниже [16]. По данным литературы, рак пищевода характеризуется усилением инфильтрации опухоли Т-регуляторными лимфоцитами (Tregs) при более распространенных стадиях заболевания [17]; сходные данные приводятся в литературе для рака поджелудочной и молочной желез [18-20], рака яичников [21, 22].
Ранее нами было показано, что в опухолях больных раком вульвы при развитии длительной ремиссии после такого лечения исходный уровень Т-лимфоцитов оказался выше за счет СБ8+-клеток, а содержание СБ4+-лимфоцитов - ниже, чем в опухолях больных, вышедших в кратковременную ремиссию [23].
Для факторов локального иммунитета опухолей исследуемых нами групп выявлены не только различия, но и общие черты в виде выраженной инфильтрации CD68+-макрофагами, в незначительно большем количестве в ткани больных с коротким периодом ремиссии, составившим 80,4±12,1 и 76±5,1 для больных с длительным периодом ремиссии. Инфильтрация CD68+-макрофагами в исследуемых группах была представлена как в строме, так и в зонах сплошного опухолевого роста. Так, в строме и паренхиме опухоли определялась выраженная диффузная инфильтрация макрофагами в виде густого очагового скопления и диффузно-рассеянного при различной длительности безрецидивного периода. Механизмы раннего рецидивиро-вания рака вульвы, по всей вероятности, были взаимообусловлены пролиферативными характеристиками опухолевых клеток и иммунологическими особенностями микроокружения, прежде всего Т-клеточного.
Заключение
Таким образом, проведенное исследование выявило ряд значимых особенностей ИГХ-маркеров у больных с раком вульвы. Процессы пролиферации и неоангиогенеза при раке вульвы имели выраженные различия у больных с длительной и кратковременной ремиссией. При короткой ремиссии экспрессия факторов пролиферации Ы-67 и апопто-за р53 в несколько раз превышала показатели больных с длительной ремиссией, а уровень клеток, экспрессирующих фактор неоангиогенеза СБ34, также был статистически достоверно выше. Выявленные различия экспрессии Ы-67, р53, СБ34, а также количества CD3+-, СБ4+-, СБ8+- и СБ20+-лимфоцитов в ткани первичной плоскоклеточной карциномы вульвы позволили прогнозировать те-
чение опухолевого процесса и развитие рецидива в ранние или отдаленные сроки.
Литература
1. Неродо ГА., Непомнящая Е.М., Неродо ЕА. Клиническое течение рака вульвы у больных репродуктивного возраста // Креативная хирургия и онкология. 2012. № 3. С. 61-66.
2. НеродоЕ.А., ИвановаВА., Неродо Г.А., Мироненко Т.В. Клиническая характеристика больных с рецидивами рака вульвы // Сиб. онкол. журн. 2011. Приложение № 1. С. 85.
3. Турчак А.В. Рецидивы рака вульвы и результаты их терапии (20-летний опыт) // Онкология. 2009. Т. 11 (4). С. 312-313.
4. Неродо Г.А., Иванова В.А., Неродо Е.А. Сроки возникновения рецидивов рака вульвы и их прогностические факторы // Современные проблемы науки и образования. 2013. № 1. URL: http://www.science-education.ru/107-8442 (дата обращения: 11.04.2015).
5. Неродо Е.А., Неродо Г.А., Иванова В.А. Анализ сроков появления рецидивов и безрецидивной выживаемости у больных раком вульвы // Рос. мед. журн. 2014. № 2. С. 18-21.
6. Бережная Н.М., Чехун В.Ф. Иммунология злокачественного роста. Киев : Наукова думка, 2005. 790 с.
7. Перельмутер В.М., Вторушин С.В., Одинцов Ю.Н., Завьялова М.В., Слонимская Е.М., Савенкова О.В. Особенности воспалительной инфильтрации в строме инвазивного протокового рака молочной железы при развитии рецидивов // Сиб. онкол. журн. 2010. № 5 (41). С. 11-16.
8. Кит О.И., Шапошников А.В., Златник Е.Ю., Ники-пелова Е.А., Новикова И.А. Местный клеточный иммунитет при аденокарциноме и полипах толстой кишки // Сиб. мед. обозрение. 2012. № 4 (76). С. 11-16.
9. Asano N., Asano N., Oshiro A., Matsuo K. Prognostic significance of T-cell or cytotoxic molecules phenotype in classical Hodgkin's lymphoma: a clinicopathologic study // J. Clin. Oncol. 2006. Vol. 24. P. 4626-4633.
10. De Jong R.A., Leffers N., Boezen H.M. Presence of tumor-infiltrating lymphocytes is an independent prognostic factor in type I and II endometrial cancer // Gynecol. Oncol. 2009. Vol. 114. P. 105-110.
11. Lefferrs N., Gooden M.J., de Jong R.A. Prognostic significance of tumor-infiltrating T-lymphocytes in primary and metastatic lesions of advanced stage ovarian cancer // Cancer Immunol. Immunother. 2009. Vol. 58. P. 449-459.
12. Златник Е.Ю., Неродо ГА, Новикова ИА., Бахтин А.В., Закора Г.И., Селютина О.Н., Арджа А.Ю. Молекулярные и клеточные факторы локального иммунитета в асцитической жидкости при раке яичника // Молекулярная медицина. 2016. Т. 14, № 3. С. 39-42.
13. Златник Е.Ю., Неродо ГА, Бахтин А.В., Новикова ИА, Мкртчян Э.Т., Арджа А.Ю. Характеристика общего и локального клеточного иммунитета у больных раком яичника // Междунар. журн. эксперим. образования. 2014. № 1. С. 72-75.
14. Летягин В.П., Тупицын Н.Н., Артамонова Е.В. Варианты иммунофенотипа рака молочной железы и их клиническое значение для прогноза // Материалы VII Рос. он-кол. конгресса. М., 2003. С. 50-53.
15. Шамилов Ф.А. Субпопуляции интратуморальных лимфоцитов при раке молочной железы // Онкология. 2012. № 2. С. 50-53.
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION. NATURAL SCIENCE. 2017. No. 4-2
16. Златник Е.Ю., Непомнящая Е.М., Новикова И.А. Характеристика факторов локального иммунитета у больных саркомами мягких тканей // Современные проблемы науки и образования. 2016. № 3. URL: https://www.science-education.ru/ru/article/view?id=24621 (дата обращения: 23.09.2017).
17. Kono K., Kawaida H., Takahashi A. CD4+CD25 high regulatory T cells increase with tumour stage in patients with gastric and oesophageal cancers // Cancer Immunol. Immunoth-er. 2006. Vol. 5. P. 1064-1071.
18. Liyanage U.K., Moore T.T., Joo H.G. Prevalence of regulatory T cells is increased in peripheral blood and tumor microenvironment of patients with pancreas or breast adenocarcinoma // J. Immunol. 2002. Vol. 169. P. 2756-2761.
19. Bates G.J., Fox S.B., Han C. Quantification of regulatory T cells enables the identification of high-risk breast cancer patients and those at risk of late relapse // J. Clin. Oncol. 2006. Vol. 24. P. 5373-5380.
20. De Kruijf E.M., Van Nes J.G., Sajet A. The predictive value of HLA class I tumor cell expression and presence of in-tratumoral Tregs for chemotherapy in patients with early breast cancer // Clin. Cancer. Res. 2010. Vol. 16 (4). P. 1272-1280.
21. Curiel T.J., Coukos G., Zou L. Specific recruitment of regulatory T cells in ovarian carcinoma fosters immune privilege and predicts reduced survival // Nat. Med. 2004. Vol. 10. P. 942-949.
22. Zhang L., Conejo-Gracia J.R., Katsaros D. Intratumoral T cells, recurrence, and survival in epithelial ovarian cancer // N. Engl. J. Med. 2003. Vol. 348. P. 203-213.
23. НеродоГА., НовиковаИА., ЗлатникЕ.Ю., ИвановаВ.А., Ульянова Е.П. Прогностическое значение лимфоцитарной инфильтрации у больных раком вульвы // Политем. сетевой электр. науч. журн. Куб. гос. аграр. ун-та. 2017. № 125. С. 827-839. DOI 10.21515/1990-4665-125-056.
References
1. Nerodo G.A., Nepomnyashchaya E.M., Nerodo E.A. Klinicheskoe techenie raka vul'vy u bol'nykh reproduktivnogo voz-rasta [Clinical course of vulvar cancer in patients of reproductive age]. Kreativnaya khirurgiya i onkologiya. 2012, No. 3, pp. 61-66.
2. Nerodo E.A., Ivanova V.A., Nerodo G.A., Mironenko T.V. Klinicheskaya kharakteristika bol'nykh s retsidivami raka vul'vy [Clinical characteristics of patients with relapses of vulvar cancer]. Sib. onkol. zhurn. 2011, suppl. № 1, p. 85.
3. Turchak A.V. Retsidivy raka vul'vy i rezul'taty ikh tera-pii (20-letnii opyt) [Relapses of vulvar cancer and the results of their therapy (20 years of experience)]. Onkologiya. 2009, vol. 11 (4), pp. 312-313.
4. Nerodo G.A., Ivanova V.A., Nerodo E.A. Sroki voz-niknoveniya retsidivov raka vul'vy i ikh prognosticheskie faktory [The timing of the occurrence of recurrences of vulvar cancer and their prognostic factors]. Sovremennye problemy nauki i obrazovaniya. 2013, No. 1. Available at: http://www. science-education.ru/107-8442 (accessed 11.04.2015).
5. Nerodo E.A., Nerodo G.A., Ivanova V.A. Analiz srokov poyavleniya retsidivov i bezretsidivnoi vyzhivaemosti u bol'nykh rakom vul'vy [Analysis of the timing of the occurrence of relapse and relapse-free survival in patients with vulvar cancer]. Ros. med. zhurn. 2014, No. 2, pp. 18-21.
6. Berezhnaya N.M., Chekhun V.F. Immunologiya zlo-kachestvennogo rosta [Immunology of malignant growth]. Kiev: Naukova dumka, 2005, 790 p.
7. Perel'muter V.M., Vtorushin S.V., Odintsov Yu.N., Zav'yalova M.V., Slonimskaya E.M., Savenkova O.V. Osoben-nosti vospalitel'noi infil'tratsii v strome invazivnogo proto-kovogo raka molochnoi zhelezy pri razvitii retsidivov [Especially inflammatory infiltration in the stroma of invasive breast cancer in the development of relapses]. Sib. onkol. zhurn. 2010, No. 5 (41), pp. 11-16.
8. Kit O.I., Shaposhnikov A.V., Zlatnik E.Yu., Nikipelova E.A., Novikova I.A. Mestnyi kletochnyi immunitet pri adenokart-sinome i polipakh tolstoi kishki [Local cellular immunity in adenocarcinoma and polyps of the colon]. Sib. med. obozrenie. 2012, No. 4 (76), pp. 11-16.
9. Asano N., Asano N., Oshiro A., Matsuo K. Prognostic significance of T-cell or cytotoxic molecules phenotype in classical Hodgkin's lymphoma: a clinicopathologic study. J. Clin. Oncol. 2006, vol. 24, pp. 4626-4633.
10. De Jong R.A., Leffers N., Boezen H.M. Presence of tumor-infiltrating lymphocytes is an independent prognostic factor in type I and II endometrial cancer. Gynecol. Oncol. 2009, vol. 114, pp. 105-110.
11. Lefferrs N., Gooden M.J., de Jong R.A. Prognostic significance of tumor-infiltrating T-lymphocytes in primary and meta-static lesions of advanced stage ovarian cancer. Cancer Immunol. Immunother. 2009, vol. 58, pp. 449-459.
12. Zlatnik E.Yu., Nerodo G.A., Novikova I.A., Bakhtin A.V., Zakora G.I., Selyutina O.N., Ardzha A.Yu. Molekulyarnye i kletochnye faktory lokal'nogo immuniteta v astsiticheskoi zhidkosti pri rake yaichnika [Molecular and cellular factors of local immunity in ascites fluid in ovarian cancer]. Mole-kulyarnaya meditsina. 2016, vol. 14, No. 3, pp. 39-42.
13. Zlatnik E.Yu., Nerodo G.A., Bakhtin A.V., Novikova I.A., Mkrtchyan E.T., Ardzha A.Yu. Kharakteristika obshchego i lokal'nogo kletochnogo immuniteta u bol'nykh rakom yaichni-ka [Characteristics of general and local cellular immunity in patients with ovarian cancer]. Mezhdunar. zhurn. eksperim. obrazovaniya. 2014, No. 1, pp. 72-75.
14. Letyagin V.P., Tupitsyn N.N., Artamonova E.V. [The variants of immunophenotype of breast cancer and their clinical significance for prognosis]. Materialy VIIRos. onkol. kon-gressa [Materials of VII. Oncol. Congress]. Moscow, 2003, pp. 50-53.
15. Shamilov F.A. Subpopulyatsii intratumoral'nykh lim-fotsitov pri rake molochnoi zhelezy [Subpopulations of intra-tumoral lymphocytes in breast cancer]. Onkologiya. 2012, No. 2, pp. 50-53.
16. Zlatnik E.Yu., Nepomnyashchaya E.M., Novikova I.A. Kharakteristika faktorov lokal'nogo immuniteta u bol'nykh sarkomami myagkikh tkanei [Characteristics of local immunity factors in patients with soft tissue sarcomas]. Sovremennye problemy nauki i obrazovaniya. 2016, No. 3. Available at: https://www. science-education.ru/ru/article/view?id=24621 (accessed 23.09.2017).
17. Kono K., Kawaida H., Takahashi A. CD4+CD25 high regulatory T cells increase with tumour stage in patients with gastric and oesophageal cancers. Cancer Immunol. Immunother. 2006, vol. 5, pp. 1064-1071.
18. Liyanage U.K., Moore T.T., Joo H.G. Prevalence of regulatory T cells is increased in peripheral blood and tumor microenvironment of patients with pancreas or breast adenocar-cinoma. J. Immunol. 2002, vol. 169, pp. 2756-2761.
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION.
NATURAL SCIENCE.
2017. No. 4-2
19. Bates G.J., Fox S.B., Han C. Quantification of regulatory T cells enables the identification of high-risk breast cancer patients and those at risk of late relapse. J. Clin. Oncol. 2006, vol. 24, pp. 5373-5380.
20. De Kruijf E.M., Van Nes J.G., Sajet A. The predictive value of HLA class I tumor cell expression and presence of intratumoral Tregs for chemotherapy in patients with early breast cancer. Clin. Cancer. Res. 2010, vol. 16 (4), pp. 12721280.
21. Curiel T.J., Coukos G., Zou L. Specific recruitment of regulatory T cells in ovarian carcinoma fosters immune privi-
lege and predicts reduced survival. Nat. Med. 2004, vol. 10, pp. 942-949.
22. Zhang L., Conejo-Gracia J.R., Katsaros D. Intratumoral T cells, recurrence, and survival in epithelial ovarian cancer. N. Engl. J. Med. 2003, vol. 348, pp. 203-213.
23. Nerodo G.A., Novikova I.A., Zlatnik E.Yu., Ivanova V.A., Ul'yanova E.P. Prognosticheskoe znachenie limfotsitarnoi infil'tratsii u bol'nykh rakom vul'vy [Prognostic value of lymphocytic infiltration in patients with vulvar cancer]. Politem. setevoi elektr. nauch. zhurn. Kub. gos. agrar. un-ta. 2017, No. 125, pp. 827-839. DOI 10.21515/1990-4665-125-056.
Поступила в редакцию /Received
б сентября 2017 г. /September б, 2017
