CC BY
20
Прогностическая роль экспрессии маркера PBRM1 при светлоклеточном раке почки
а
cv
Д.Г. Заридзе, Н.Н. Мазуренко, С.Д. Бежанова, Д.М. Максимович, О.В. Шаньгина,
В.А. Драудин-Крыленко, А.Ф. Мукерия, В.Б. Матвеев es
ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России; £э
Россия, 115478 Москва, Каширское шоссе, 24 SE
Контакты: Оксана Валентиновна Шаньгина [email protected]
Введение. Светлоклеточный почечно-клеточный рак (скПКР) является наиболее частым гистологическим типом рака этой локализации. Выделяют 16 генов, нарушения которых играют значительную роль в канцерогенезе скПКР. Вторым по частоте генетических нарушений в скПКР после гена-супрессора VHL является ген PBRM1, который мутирует в 40—50 % случаев скПКР. Цель исследования — анализ влияния нарушений экспрессии белка PBRM1 на выживаемость пациентов со скПКР. Материалы и методы. В исследование были включены 137пациентов с впервые выявленным и гистологически верифицированным диагнозом скПКР. Для каждого участника исследования были собраны детальная медицинская информация и данные анкетирования. От всех больных до начала лечения были получены образцы крови и удаленной во время хирургической операции опухолевой ткани. Все пациенты ежегодно прослеживаются в целях получения актуальной информации об их жизненном статусе, динамике заболевания, лечении. Минимальное время прослеживания — 22мес, максимальное — 128мес, среднее — 61,8мес, медиана — 48мес. Иммуногистохимическое (ИГХ) исследование экспрессии PBRM1 было выполнено по стандартной методике c поликлональными кроличьими антителами PB1[N1N2] N-term (GeneTex 100781) в разведении 1:50, проявление проводилось с использованием DAB. Белковый продукт гена PBRM1 дикого типа в норме функционирует и выявляется в ядре. Отсутствие ядерной экспрессии PBRM1 указывает на генетические или эпигенетические нарушения.
Результаты. Специфическая для рака почки выживаемость статистически достоверно ниже у больных, в опухолевых клетках которых нет экспрессии белка PRBM1. Наилучшая 5- (84 %) и 10-летняя (84 %) выживаемость отмечена у больных с диффузной ядерной экспрессией белка PBRM1. Различия в выживаемости этих больных и тех, у которых нет экспрессии белка PBRM1, статистически высоко достоверны (p = 0,004). Нами впервые проведен анализ выживаемости больных скПКР с фокальной ядерной экспрессией PBRM1. У этих пациентов выживаемость ниже, чем у больных с диффузной экспрессией, но выше, чем у больных с отсутствием ядерной экспрессии PBRM1 (p = 0,02). Цитоплазматическая экспрессия PBRM1 на выживаемость не влияет.
Заключение. Таким образом, полученные нами результаты указывают на прогностическую значимость активности гена PBRM1, нарушение функции которого встречается почти в половине случаев скПКР. ИГХ-исследование является адекватным, надежным и доступным методом для определения экспрессии белка PBRM1 и, соответственно, может применяться на практике. Особенно следует отметить благоприятное течение и прогноз болезни у пациентов с I—II стадиями скПКР, у которых сохранена ядерная экспрессия белка PBRM1: 5-летняя выживаемость у них составляет 100 %. Это наблюдение крайне важно для принятия решения по тактике лечения таких больных.
Ключевые слова: светлоклеточный почечно-клеточный рак, выживаемость, экспрессия, ген PBRM1
Для цитирования: Заридзе Д.Г., Мазуренко Н.Н., Бежанова С.Д. и др. Прогностическая роль экспрессии маркера PBRM1 при светлоклеточном раке почки. Онкоурология 2019;15(1):23—31.
DOI: 10.17650/1726-9776-2019-15-1-23-31
Prognostic role of PBRM1 marker expression in clear-cell renal-cell carcinoma
D.G. Zaridze, N.N. Mazurenko, S.D. Bezhanova, D.M. Maksimovich, O.V. Shangina, V.A. Draudin-Krylenko, A.F. Mukeria, V.B. Matveev
N.N. Blokhin National Medical Research Center of Oncology, Ministry of Health of Russia; 24 Kashirskoe Shosse, Moscow 115478, Russia
Background. Clear-cell renal-cell carcinoma (CCRCC) is the most common histological type of cancer of this localization. Changes in 16 genes were identified as significant in carcinogenesis of CCRCC. After VHL suppressor gene, PBRM1 gene is the second by frequency of genetic abnormalities in CCRCC and it is mutated in 40—50 % cases of CCRCC.
The study objective is to analyze the effect of abnormalities in PBRM1 protein expression on survival of patients with CCRCC. Materials and methods. The study included 137 patients with newly diagnosed and histologically confirmed CCRCC. For all study participant, detailed medical history and questionnaire data were acquired. Prior to treatment, blood samples and tumor tissue removed during surgery were obtainedfrom all patients. All patients are annually followed up for current information on their life status, disease dynamics, treatment.
u <
u
CT CS
cv
а
JN
ев
u
в* U
Minimal follow-up time is 22 months, maximal is 128 months, mean is 61.8 months, median is 48 months. Immunohistochemical (IHC) testing of PBRM1 expression was performed using standard technique with polyclonal rabbit antibodies PB1[N1N2] N-term (GeneTex 100781) with 1:50 dilution, DAB staining. Normally, protein product of the wild type PBRM1 gene is functioning and can be detected in the nucleus. Absence of nuclear expression of PBRM1 points to genetic or epigenetic abnormalities.
Results. Renal cancer-specific survival is significantly lower in patients without expression of the PRBM1 protein in tumor cells. The longest 5- (84 %) and 10-year (84 %) survival was observed in patients with diffuse nuclear expression of the PBRM1 protein. Difference in survival of these patients compared to patients without PRBM1 protein expression is statistically significant (p = 0.004). We have performed an analysis of the association between survival of patients with CCRCC andfocal nuclear PBRM1 expression. In these patients, survival is lower than in patients with diffuse expression but higher than in patients without nuclear expression of PBRM1 (p = 0.02). Cytoplasmic expression of PBRM1 doesn't affect survival.
Conclusion. The obtained results point to prognostic value of PBRM1 gene activity which is abnormal in almost half of all CCRCC cases. IHC testing is an appropriate, reliable and affordable method for determination of PBRM1 protein expression and therefore can be used in practice. Favorable course and prognosis in patients with stage I—II CCRCC and preserved nuclear expression of the PBRM1 protein should be noted: 5-year survival for these patients is 100 %. This observation is crucial for making decisions on treatment of these patients.
Key words: clear-cell renal-cell carcinoma, survival, expression, PBRM1 gene
СЭ
cv
For citation: Zaridze D.G., Mazurenko N.N., Bezhanova S.D. et al. Prognostic role of PBRM1 marker expression in clear-cell renal-cell carcinoma. Onkourologiya = Cancer Urology 2019;15(1):23—31.
Введение
Ежегодно в мире регистрируют около 300 тыс. новых случаев рака почки и более 134 тыс. смертей от этого заболевания. В последние годы заболеваемость раком почки в мире ежегодно увеличивается на 3—5 %, а смертность уменьшается [1, 2]. В России в 2017 г. зарегистрированы 13 556 заболевших мужчин и 11 223 женщины, умерли 5180 мужчин и 3206 женщин [3]. Заболеваемость раком почки в России, как и в других странах мира, растет. С 1990 г. заболеваемость данной патологией среди мужчин выросла почти в 4 раза, среди женщин — в 2 раза. В то же время смертность имеет тенденцию к снижению [4, 5]. С учетом значительного роста заболеваемости раком почки исследование прогноза этой патологии в зависимости от различных морфологических, клинических, молекулярных и других параметров весьма актуально.
Наиболее частым (80—85 %) гистологическим типом рака почки является светлоклеточный почечно-клеточный рак (скПКР) [6]. Прогноз при ранних, локализованных формах скПКР (I и II стадии) достаточно благоприятен, и показатели 5-летней выживаемости составляют 70 %, однако при наличии отдаленных метастазов (IV стадия) они не превышают 10 % [2]. Представляется важным определение прогностических молекулярно-генетических маркеров прогресси-рования скПКР.
Выделяют 16 генов, нарушения которых играют значительную роль в канцерогенезе почечно-кле-точного рака. Нарушения гена-супрессора VHL, участвующего в активации VHL-HIF-пути, — раннее и наиболее частое событие в канцерогенезе почечно-клеточного рака [7]. Вторым по частоте генетических нарушений в скПКР является ген РВВМ1 [8, 9]. Этот ген расположен на хромосоме 3 в локусе 3р21
и кодирует белок BAF180 (BRG1-associated factor 180) или PBRM1, который является 2MDa-K0Mn0HeHT0M нуклеосом-ремоделирующего комплекса SWI/SNF. Комплекс SWI/SNF использует аденозинтрифосфат для мобилизации нуклеосом, вызывая вставку или удаление гистонов от хроматина. Таким образом, SWI/SNF вовлечен в регуляцию генов при многих клеточных процессах, включая клеточный цикл, репарацию ДНК, клеточную смерть, метаболизм, контроль клеточной пролиферации, дифференцировки и канцерогенез. Этот комплекс — ключевой регулятор экспрессии генов через ассоциацию с большим числом факторов. Мутации в генах, входящих в комплекс SWI/SNF, выявляют в 20 % опухолей разной локализации [10]. Выяснилось, что нарушения гена VHL недостаточны для активации Н№1^ТАТ3-сигнального пути, так как белок PBRM1 противодействует эффекту потери функции VHL в развитии скПКР [11].
Несмотря на то что нарушения PBRM1 характерны для скПКР, сведения о его прогностической роли недостаточны и противоречивы [12—17]. Наличие мутаций PBRM1 связано с инвазивностью скПКР. Однако связи между мутационным статусом PBRM1 и безрецидивной и общей выживаемостью пациентов не выявлено [12, 14]. В то же время показано, что отсутствие или низкая экспрессия PBRM1 коррелирует с прогрес-сированием заболевания и низкой общей выживаемостью пациентов скПКР [15—17].
По данным баз COSMIC и MutDB, в гене PBRM1 насчитывается 715 мутаций [18], которые выявляют секвенированием по Сэнгеру [12] либо полноэкзом-ным или полногеномным секвенированием нового поколения (NGS) [11, 14, 18]. Однако наиболее часто об инактивации гена PBRM1 судят по результатам анализа экспрессии белкового продукта PBRM1
с использованием иммуногистохимического (ИГХ) метода. При сравнении данных ИГХ- и генетического анализа была выявлена положительная корреляция экспрессии PBRM1 в ядре с наличием гена дикого типа [19], что позволяет использовать ИГХ для определения экспрессии PBRM1 при исследованиях большого количества наблюдений [15—17, 20].
Цель исследования — анализ влияния нарушения экспрессии белка PBRM1 на выживаемость пациентов со скПКР.
Материалы и методы
В исследование были включены 137 пациентов, которые находились на лечении в отделении онко-урологии НМИЦ онкологии им. Н. Н. Блохина с впервые выявленным и гистологически верифицированным диагнозом скПКР. Больные были отобраны из базы данных молекулярно-эпидемиологиче-ского исследования рака почки, проводимого в отделе эпидемиологии и профилактики злокачественных опухолей с 2007 г. по настоящее время. Для каждого участника исследования были собраны детальная медицинская информация и данные анкетирования (медицинский и семейный анамнез, образ жизни, профессиональная занятость и др.). От всех
больных до начала лечения были получены образцы крови и удаленной во время хирургической операции опухолевой ткани. Для изготовления парафиновых блоков фрагменты опухолевой ткани фиксировали в 10 % растворе нейтрального формалина и заливали парафином. Серийные срезы толщиной 3—5 мкм де-парафинизировали по стандартной схеме. ИГХ-ис-следование экспрессии PBRM1 было выполнено по стандартной методике c поликлональными кроличьими антителами PB1[N1N2] N-term (GeneTex 100781) в разведении 1:50, проявление проводилось с использованием DAB. Внутренним положительным контролем служила окраска лимфоцитов, стромаль-ных фибробластов или эндотелиальных клеток на том же срезе. Все пациенты ежегодно прослеживаются в целях получения актуальной информации об их жизненном статусе, динамике заболевания, лечении, причинах смерти.
Статистические методы. Оценивали 5- и 10-летнюю специфическую для рака почки выживаемость (cancer specific survival) методом Каплана—Майера [21]. Метод предполагает разделение пациентов на 2 группы: в 1-ю включены умершие от скПКР, во 2-ю — живые на момент последнего прослеживания и выбывшие из прослеживания (умершие от других
а
JN
CS
U
et
U
« CS
cv
Таблица 1. Распределение пациентов со светлоклеточным почечно-клеточным раком по полу, возрасту и стадии заболевания в зависимости от типа экспрессии PBRM1
Table 1. Distribution of patients with clear-cell renal-cell carcinoma by sex, age and disease stage depending on PBRM1 expression type
Характеристика Ядерная экспрессия Цитоплазматическая экспрессия Cytoplasmic expression Экспрессии нет Всего
Characteristic Nuclear expression No expression Total
Число пациентов, n (%) Number of patients, n (%) 48 (35,0) 18 (13,2) 71 (51,8) 137 (100)
Возраст, n (%): Age, n (%): <60 лет <60 years >60 лет >60 years 24 24 14 4 43 28 81 (59,1) 56 (40,9)
р (X2) 0,12
Стадия, n (%): Stage, n (%): III III-IV 20 28 3 15 20 51 43 (31,4) 94 (68,6)
р (X2) 0,11
Пол, n (%): Sex, n (%): мужской male женский female 33 15 12 6 46 25 91 (66,4) 46 (33,6)
р (X2) 0,90
Таблица 2. Экспрессия белка PBRM1 в исследуемых группах Table 2. PBRM1 protein expression in the studied groups
Тш экспрессии белка PBRM1 Пациенты, умершие от светло-клеточного почечно-клеточно-го рака (n = 50) Цензурированные пациенты (n = 87) Всего Total
НВВвйМ Patients who died of clear-cell renal-cell carcinoma (n = 50) Censored patients (n = 87) щ
Ядерная Nuclear 11 37 48
Цитоплазматическая Cytoplasmic 8 10 18
Нет экспрессии No expression 31 40 71
Нет ядерной экспрессии No nuclear expression 39 50 89
Ядерная (I и II стадии) Nuclear (stage I and II) 1 19 20
Нет ядерной экспрессии (I и II стадии) No nuclear expression (stage I and II) 7 16 23
Ядерная (III и IV стадии) Nuclear (stage III and IV) 10 18 28
Нет ядерной экспрессии (III и IV стадии) No nuclear expression (stage III and IV) 32 34 66
Диффузная ядерная Diffuse nuclear 4 28 32
Фокальная ядерная Focal nuclear 7 9 16
a
JN
CS
U
u
ст
CS
cv
причин, недоступные для контакта). Вторая группа обозначена как «цензурированные наблюдения» (censored observations).
Для сравнения показателей выживаемости пациентов с различной экспрессией PBRM1 использовали log-rank-тест (Savage, Mantel-Cox). Гетерогенность сравниваемых групп оценивали методом х2. Использовали пакет статистических программ STATA [22].
Результаты
Характеристика 137 пациентов с впервые выявленным скПКР представлена в табл. 1. Преобладали мужчины (66,4 %) и пациенты моложе 60 лет (59,1 %), у 68,6 % больных была ГГГ—ГУ стадия скПКР.
Причиной смерти 50 пациентов был скПКР. Во 2-й группе 2 из 87 пациентов умерли от сердечно-сосудистых заболеваний (время прослеживания 26 и 31 мес), 2 — от другой злокачественной опухоли (время прослеживания 30 мес (рак поджелудочной железы) и 111 мес (рак яичников)), 83 пациента были живы на момент последнего прослеживания (2017—2018 гг.). Представленные данные о жизненном статусе больных и причинах смерти основаны на их ежегодном просле-
живании. Минимальное время прослеживания — 22 мес, максимальное — 128 мес, среднее — 61,8 мес, медиана — 48 мес.
Экспрессия белка PBRM1. Белковый продукт гена РВВМ1 дикого типа в норме функционирует и выявляется в ядре. Отсутствие ядерной экспрессии PBRM1 указывает на генетические или эпигенетические нарушения. Ядерная экспрессия белка РВЯМ1 имела место в 48 наблюдениях, цитоплазматическая - в 18 и не зависела от пола, возраста и стадии скПКР (см. табл. 1). Распределение типа экспрессии белка PBRM1 в зависимости от группы наблюдения представлено в табл. 2.
На рис. 1 представлены микрофотографии срезов образцов скПКР, обработанных антителами РВ1 к PBRM1. Выявлено несколько вариантов ИГХ-окра-шивания: а) ядерное диффузное окрашивание, когда экспрессия PBRM1 имеет место почти во всех опухолевых клетках (см. рис. 1а); б) ядерное фокальное окрашивание — ядерная экспрессия исследуемого белка PBRM1 наблюдается не во всех, а только в части клеток (см. рис. 1б); в) отсутствует ядерная экспрессия, однако отмечается диффузное цитоплазматиче-ское окрашивание с антителами РВ1 (см. рис. 1в);
wgff-V
* V- ■
iU
■■ 4 , , " ч ■ t- » '
Л,
л
в
■М&'ЭДЬ
Г1С' ■* ■ -7-Ч il v>»
. *.* - ■ (■, * * .j
■»Я Л, ■ -i* -'
■** ' 4 > ч
. *
,. ■ - v ; -v.- , ; J si* : •' Л • •
a
JN
CS
U
u
ст
CS
cv
■ . 1 'l Ч1' v*V -
- Y' *' •• Ь":".;:.-,^- '
Рис. 1. Клетки светлоклеточного почечно-клеточного рака: а — диффузная ядерная экспрессия PBRM1 (х 400); б — фокальная ядерная экспрессия PBRM1 (х 400); в — диффузное цитоплазматическое окрашивание с антителами PB1 (х 400); г — отсутствие окрашивания с антителами PB1 (х 200)
Fig. 1. Clear-cell renal-cell carcinoma cells: а — diffuse nuclear expression of PBRM1 (х 400); б — focal nuclear expression of PBRM1 (х 400); в — diffuse cytoplasmic staining with PB1 antibodies (х 400); г — absence of staining with PB1 antibodies (х 200)
г) отсутствует как ядерное, так и цитоплазматическое окрашивание (см. рис. 1г).
Все пациенты со скПКР были разделены на 4 подгруппы: 1-я — с ядерной диффузной экспрессией PBRM1, 2-я — с ядерной фокальной экспрессией, 3-я — с цитоплазматической экспрессией и 4-я — с отсутствием экспрессии.
На рис. 2 представлена специфическая для скПКР выживаемость в зависимости от наличия в опухоли диффузной ядерной экспрессии или полного отсутствия экспрессии PBRM1. У больных с диффузной ядерной экспрессией 5- (84 %) и 10-летняя (84 %) выживаемость статистически достоверно (р = 0,004) выше, по сравнению с больными, у которых нет экспрессии белка PBRM1 (5- и 10-летняя выживаемость — 57 и 37 % соответственно).
Выживаемость в 2 группах больных скПКР, в опухолевых клетках которых присутствовала или отсут-
ствовала ядерная экспрессия PBRM1 (фокальная и диффузная), представлена на рис. 3. Показатели 5- и 10-летней выживаемости в группе больных, у которых отсутствовала ядерная экспрессия, составили соответственно 59 и 43 %, в группе с ядерной экспрессией — 77 и 70 % соответственно. Различие в выживаемости между этими 2 группами статистически достоверно (р = 0,03).
У больных с 1—11 стадиями скПКР наличие ядерной экспрессии (диффузной и фокальной) статистически (р = 0,02) достоверно увеличивает показатели 5- и 10-летней выживаемости (рис. 4). В группе из 20 больных с наличием ядерной экспрессии белка PBRM1 1 пациент умер от скПКР в самом конце периода наблюдения, что и объясняет резкое «падение» кривой выживаемости. У больных с ГГГ—ГУ стадиями заболевания ядерная экспрессия PBRM1 на выживаемость не повлияла (графически не представлено).
а
JN
ев
u
СХ U
ст
сэ cv
0
PBRM1
Выживаемость /
Survival 5-летняя/'5-year 10-летняя/70-year
25
100
125
50 75
Время / Time
Нет экспрессии, % / Диффузная ядерная экспрессия, %/ No expression, % Diffuse expression, %
Нет экспрессии, %/ No expression, % 57 37
Диффузная ядерная экспрессия, %/ Diffuse expression, % 84 84
Рис. 2. Выживаемость больных светлоклеточным почечно-клеточным раком с диффузной ядерной экспрессией PBRM1 и полным ее отсутст -вием (р (log-rank) = 0,004)
Fig. 2. Survival of patients with clear-cell renal-cell carcinoma with diffuse nuclear expression of PBRM1 and its absence (р (log-rank) = 0.004)
PBRM1
Выживаемость /
Survival 5-летняя / 5-year 10-летняя / 70-year
25 50 75
Время / Time
- Нет ядерной -
экспрессии, % / No nuclear expression, %
Нет ядерной экспрессии, % / No nuclear expression, % 59 43
100
125
- Есть ядерная экспрессия, % /
Nuclear expression, %
Есть ядерная экспрессия, % / Nuclear expression, % 77 70
Рис. 3. Выживаемость больных светлоклеточным почечно-клеточным раком в зависимости от наличия ядерной (диффузной и фокальной) экспрессии PBRM1 (р (log-rank) = 0,03)
Fig. 3. Survival of patients with clear-cell renal-cell carcinoma depending on the presence of nuclear (diffuse and focal) expression of PBRM1 (р (log-rank) = 0.03)
• («Wit
0
PBRM1
Выживаемость /
Survival 5-летняя / 5-year 10-летняя / 70-year
20 40 60 Время / Time Нет ядерной экспрессии, % / -
No nuclear expression, %
Нет ядерной экспрессии, % /
No nuclear expression, % 74
80
100
Есть ядерная экспрессия, % /
Nuclear expression, %
Есть ядерная экспрессия, % /
Nuclear expression, % 100
Рис. 4. Выживаемость больных светлоклеточным почечно-клеточным раком I—II стадий в зависимости от наличия ядерной (диффузной и фокальной) экспрессии PBRM1 (р (log-rank) = 0,02) Fig. 4. Survival of patients with stage I—II clear-cell renal-cell carcinoma depending on the presence of nuclear (diffuse andfocal) expression of PBRM1 (р (log-rank) = 0.02)
25
100
125
PBRM1
Выживаемость /
Survival 5-летняя / 5-year 10-летняя / 70-year
50 75
Время / Time
Фокальная ядерная -Диффузная ядерная экспрессия, %
экспрессия, % / Focal / Diffuse nuclear expression, %
nuclear expression, % Фокальная ядерная экспрессия, % / Диффузная ядерная экспрессия, % / Focal nuclear expression, % Diffuse nuclear expression, %
62 84
50 84
Рис. 5. Выживаемость больных светлоклеточным почечно-клеточ-ным раком в зависимости от вида ядерной экспрессии PBRM1 (р (log-rank) = 0,02)
Fig. 5. Survival of patients with clear-cell renal-cell carcinoma depending on the type of nuclear expression ofPBRM1 (р (log-rank) = 0.02)
0
0
Анализ результатов экспрессии белка PBRM1 в цитоплазме опухолевых клеток не выявил ее связи с выживаемостью больных скПКР. Показатели 5- и 10-летней выживаемости больных с цитоплазма-
тической экспрессией составили 66 и 53 % соответственно, что статистически не отличается от таковых (57 и 37 %) у больных с полным отсутствием экспрессии РВВМ1 (графически не представлено).
На рис. 5 представлена группа из 48 больных скПКР с ядерной экспрессией РВЯМ1, из которых в 32 случаях наблюдалось диффузное ядерное окрашивание, а в 16 — фокальное. Общая 5- и 10-летняя выживаемость больных с диффузной ядерной экспрессией статистически достоверно выше, чем у пациентов с фокальной ядерной экспрессией (р = 0,02). У больных с диффузной ядерной экспрессией 5- и 10-летняя выживаемость составляет 84 %, а у больных с фокальной экспрессией — 62 и 50 % соответственно.
Обсуждение
Белковый продукт PBRM1 дикого типа функционирует в ядре, и его ИГХ-выявление — надежный метод для определения отсутствия нарушений гена РВЯМ1 [15—17, 19]. Простота и доступность метода позволяют использовать его для анализа большого числа пациентов со скПКР [17, 20]. Потеря экспрессии РВЯМ1 достоверно чаще встречается при скПКР, чем при папиллярном, хромофобном или онкоцитар-ном почечно-клеточном раке [23]. Частота мутаций гена РВЯМ1 в скПКР варьирует от 29 [12] до 57 % [24], причем данные по разным когортам пациентов различаются. Скорее всего, это объясняется тем, что скПКР представлен несколькими молекулярно-генетически-ми подтипами, один из которых выступает в качестве «драйверного» гена РВЯМ1 [25].
Отсутствие экспрессии белка PBRM1 встречается примерно в 70 % случаев скПКР и коррелирует с поздними стадиями заболевания (р <0,0001), низкими уровнем дифференцировки опухоли (р = 0,0002) и выживаемостью пациентов (р = 0,025) [15]. Показано, что экспрессия белка PBRM1 с высокой степенью достоверности связана с локальной прогрессией опухоли (р <0,001), стадией заболевания (р <0,001) и размером опухоли (р = 0,002). Таким образом, отсутствие ядерной экспрессии PBRM1 является плохим прогностическим признаком. Пятилетняя выживаемость пациентов с экспрессией ядерного белка достоверно выше (87,3 %), чем у пациентов со скПКР, в опухолевых клетках которых белок PBRM1 отсутствует (66,7 %) (р = 0,048) [16]. У пациентов со сниженной экспрессией отмечена меньшая как специфическая для рака почки выживаемость (р <0,001), так и выживаемость без прогрессирования (р <0,001). Многофакторный анализ с включением в модель доказанных прогностических факторов показал, что отсутствие экспрессии PBRM1 является независимым от других факторов прогностическим маркером низкой выживаемости без прогрессирования (р = 0,007). У больных с I и II стадиями, но не с III и IV, отсутствие ядерной экспрессии PBRM1 связано со значительно меньшей как специфической для рака почки выживаемостью, так и выживаемостью без прогрессирования. В обоих случаях различия в показателях выживаемости больных
в зависимости от ядерной экспрессии белка PBRM1 статически достоверны (р <0,001). При многофакторном анализе с включением факторов, влияющих на прогноз, различия в специфической для рака почки выживаемости и выживаемости без прогрессирования в зависимости от экспрессии РВЯМ1 у больных с I и II стадиями сохранились (р = 0,038 и 0,003 соответственно) [17].
В то же время в ряде исследований связи активности РВМЯ1 с выживаемостью больных скПКР не обнаружено, независимо от того, оценивалась ли экспрессия белка PBMR1 методом ИГХ или изучался мутационный статус РВЯМ1 [12, 13, 20].
В представленной работе ядерная экспрессия PBRM1 в опухолевых клетках скПКР выявлена в 48 (35 %) случаях. Соответственно в 65 % опухолей ядерная экспрессия PBRM1 отсутствовала, что согласуется с данными, полученными в других исследованиях. Отсутствие ядерной экспрессии PBRM1, по опубликованным данным, наблюдается в 55—70 % случаев скПКР [15, 19, 25, 26]. Отсутствие экспрессии гена может быть обусловлено как его мутациями, так и эпигенетическими нарушениями регуляции экспрессии. Необходимо отметить, что в нашем исследовании не выявлено разницы в ядерной экспрессии белка PBRM1 в зависимости от стадии заболевания. Однако специфическая для рака почки выживаемость пациентов с I—II стадиями достоверно коррелировала с экспрессией PBRM1 (р = 0,02), в отличие от пациентов с III—IV стадиями (р = 0,27). Полученные данные подтверждают предположение о том, что на поздних стадиях прогрессии вклад гена РВЯМ1 маскируется нарушениями других генов [10, 20].
Нами выявлена неоднородность группы из 48 больных с ядерной экспрессией PBRM1. У 32 пациентов с диффузной ядерной экспрессией отмечены наилучшие показатели 5- (84 %) и 10-летней (84 %) выживаемости, которые достоверно отличаются (р = 0,004) от таковых у больных с отсутствием экспрессии PBRМ1 (57 и 37 % соответственно). У 16 пациентов наблюдалась фокальная ядерная экспрессия, т. е. экспрессия имела место лишь в части опухолевых клеток, и их 5- и 10-летняя выживаемость статистически достоверно ниже (63 и 50 % соответственно; р = 0,02), чем у больных с диффузной ядерной экспрессией РВЯМ1 (84 и 84 % соответственно), но выше, чем у пациентов с отсутствием экспрессии PBRM1 (57 и 37 % соответственно).
Описанные в нашей работе 2 типа ядерной экспрессии PBRM1, а именно диффузная и фокальная, указывают на внутриопухолевую гетерогенность скПКР и могут рассматриваться как субклональное нарушение. В опубликованных работах клональные нарушения, связанные с мутациями гена РВЯМ1, выявлены в 50—60 % случаев скПРК. Реже встречаются субклональные нарушения [26—28], причем
а
см
ев
и
в* и
ст
сэ см
а
JN
CS
U
в* U
ст
CS
cv
клональные и субклональные нарушения, как и в нашей работе, могут быть выявлены ИГХ-методом [28]. Нами впервые проведен анализ выживаемости больных скПКР с фокальной ядерной экспрессией РВЯМ1. У этих пациентов выживаемость ниже, чем у больных с диффузной экспрессией, но выше, чем у больных с отсутствием ядерной экспрессии PBRM1.
В некоторых опубликованных работах встречается описание цитоплазматической экспрессии PBRM1. Однако больные с таким типом экспрессии белка PBRM1 при анализе выживаемости авторами не учитывались [15, 19, 23]. Проведенный нами анализ 18 случаев скПКР показал, что экспрессия продукта PBRM1 в цитоплазме не влияет на выживаемость: показатели выживаемости этих больных не отличались от таковых у больных с отсутствием экспрессии PBRM1.
Заключение
Таким образом, нами описаны и проанализированы данные по влиянию разных типов экспрессии PBRM1 в опухолевых клетках скПКР на специфическую для рака почки выживаемость. Полученные результаты указывают на прогностическую значимость активности гена РВЯМ1, нарушение функции которого встречается почти в половине случаев скПКР. ИГХ-исследование является адекватным, надежным и доступным методом для определения экспрессии и, соответственно, может применяться на практике. Особенно следует отметить благоприятное течение и прогноз болезни у пациентов с I—II стадиями скПКР, у которых сохранена ядерная экспрессия белка PBRM1: 5-летняя выживаемость у них составляет 100 %. Это наблюдение крайне важно для принятия решения по тактике лечения таких больных.
ЛИТЕРАТУРА / REFERENCES
1. Siegel R.L., Miller K.D., Jemal A. Cancer Statistics. CA Cancer J. Clin 2016;66(1):7-30. DOI: 10.3322/caac.21332.
PMID: 26742998.
2. Scelo G., Larose T.L. Epidemiology and Risk Factors for Kidney Cancer. J Clin Oncol 2018;29:JCO2018791905. DOI: 10.1200/ JCO.2018.79.1905. PMID: 30372394.
3. Злокачественные новообразования в России в 2017 году (заболеваемость и смертность). Под ред. А.Д. Каприна, В.В. Старинского, Г.В. Петровой. М.: МНИОИ им. ПА. Герцена - филиал ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России, 2018. 250 с. [Malignant tumors in Russia in 2017 (morbidity and mortality). Eds.: A.D. Kaprin, V.V. Starinskiy,
G.V. Petrova. Moscow: MNIOI im. P.A. Gertsena - filial FGBU "NMIRTS" Minzdrava Rossii, 2018. 250 p. (In Russ.)].
4. Заридзе Д.Г., Максимович Д.М. Профилактика злокачественных новообразований. Успехи молекулярной онкологии 2017;4(2):8-25. DOI: 10.17650/2313-805X-2017-4-2-8-25. [Zaridze D.G., Maksimo-vich D.M. Prevention of malignant neoplasms. Uspekhi molekulyarnoy onkologii = Advances in molecular oncology 2017;4(2):8-25. (In Russ.)].
5. Заридзе Д.Г., Мукерия А.Ф., Шаньги-на О.В., Матвеев В.Б. Молекулярная эпидемиология рака почки. Онкоуро-логия 2018;14(3):107-19. DOI: 10.17650/1726-9776-2018-14-3-107-119. [Zaridze D.G., Mukeriya A.F., Shan'gina O.V., Matveev V.B. Molecular epidemiology of renal cancer. Oncourologiya = Cancer Urology 2018;14(3):107-19. (In Russ.)].
6. Moch H., Cubilla A.L., Humphrey P.A. et al. The 2016 WHO classification of tu-
mours of the urinary system and male genital organs-part A: renal, penile, and testicular tumours. Eur Urol 2016;70(1):93-105. DOI: 10.1016/j.euru-ro.2016.02.029. PMID: 26935559.
7. Linehan W.M., Walther M.M., Zbar B. The genetic basis of cancer of the kidney. J Urol 2003;170(6 Pt 1):2163-72.
DOI: 10.1097/01.ju.0000096060.92397.ed. PMID: 14634372.
8. Varela I., Tarpey P., Raine K. et al. Exome sequencing identifies frequent mutation of the SWI/SNF complex gene PBRM1 in renal carcinoma. Nature 2011;469(7331):539-42. DOI: 10.1038/ nature09639 PMID: 21248752.
9. Scelo G., Riazalhosseni Y., Greger L. et al. Variation in genomic landscape of clear cell renal cell carcinoma across Europe. Nat Commun 2014;29(5):5135.
DOI: 10.1038/ncomms6135. PMID: 25351205.
10. Liao L., Testa J.R., Yang H. The roles of chromatin-remodelers and epigenetic modifiers in kidney cancer. Cancer Genet 2015;208(5):206-14. DOI: 10.1016/j.can-cergen.2015.02.008. PMID: 25873528.
11. Nargund A.M., Pham C.G., Dong Y. et al. The SWI/SNF Protein PBRM1 restrains VHL-loss-driven clear cell renal cell carcinoma. Cell Rep 2017;18(12):2893-906. DOI: 10.1016/j.celrep.2017.02.074. PMID: 28329682.
12. Hakimi A.A., Chen Y.B., Wren J. et al. Clinical and pathologic impact of select chromatin-modulating tumor suppressors in clear cell renal cell carcinoma. Eur Urol 2013;63(5):848-54. DOI: 10.1016/j.euru-ro.2012.09.005. PMID: 23036577.
13. Sato Y., Yoshizato T., Shiraishi Y. et al. Integrated molecular analysis of clear-cell renal cell carcinoma. Nat Genet
2013;45(8):860-7. DOI: 10.1038/ng.2699. PMID: 23797736.
14. Kapur P., Pena-Llopis S., Christie A. Effects on survival of BAP1 and PBRM1 mutations in sporadic clear-cell renal-cell carcinoma: a retrospective analysis with independent validation. Lancet Oncol 2013;14(2):159-67. DOI: 10.1016/S1470-2045(12)70584-3. PMID: 23333114.
15. Pawlowski R., Mühl S.M., Sulser T. et al. Loss of PBRM1 expression is associated with renal cell carcinoma progression. Int J Cancer 2013;132(2):E11-7.
DOI: 10.1002/ijc.27822. PMID: 22949125.
16. da Costa W.H., Rezende M., Carneiro F.C. et al. Polybromo-1 (PBRM1), a SWI/SNF complex subunit is a prognostic marker
in clear cell renal cell carcinoma. BJU Int 2014;113(5b):E157-63. DOI: 10.1111/ bju.12426. PMID: 24053427.
17. Nam S.J., Lee C., Park J.H., Moon K.C. Decreased PBRM1 expression predicts unfavorable prognosis in patients with clear cell renal cell carcinoma. Urol Oncol 2015;33(8):340.e9-16. DOI: 10.1016/j. urolonc.2015.01.010. PMID: 26003625.
18. Piva F., Giulietti M., Occhipinti G. et al. Computational analysis of the mutations in BAP1, PBRM1 and SETD2 genes reveals the impaired molecular processes in renal cell carcinoma. Oncotarget 2015;6(31):32161-8. DOI: 10.18632/on-cotarget.5147. PMID: 26452128.
19. Pena-Llopis S., Vega-Rubin-de-Celis S., Liao A. et al. BAP1 loss defines a new class of renal cell carcinoma. Nat Genet 2012;44(7):751-9. DOI: 10.1038/ng.2323. PMID: 22683710.
20. Joseph R.W., Kapur P., Serie D.J. et al. Clear cell renal cell carcinoma subtypes identified by BAP1 and PBRM1 expression.
J Urol 2016;195(1):180—7. DOI: 10.1016/j. juro.2015.07.113. PMID: 26300218.
21. Kaplan E.L., Meier P. Nonparametric estimation from incomplete observations.
J Amer Stat Assoc 1958;53:457-81.
22. Stata Statistical Software. Release 14.0. College Station, TX: Stata Corporation.
23. Ho T.H., Kapur P., Joseph R.W. et al. Loss of PBRM1 and BAP1 expression is less common in non-clear cell renal cell carcinoma than in clear cell renal cell carcinoma. Urol Oncol 2015;33(1):23.e9-14. DOI: 10.1016/j.urolonc.2014.10.014. PMID: 25465300.
24. Eckel-Passow J.E., Serie D.J., Cheville J.C. et al. BAP1 and PBRM1 in metastatic
clear cell renal cell carcinoma: tumor heterogeneity and concordance with paired primary tumor. BMC Urol 2017;17(1):19. DOI: 1186/s12894-017-0209-310. PMID: 28327121.
25. Casuscelli J., Vano Y., Fridman W.H., Hsieh J.J. Molecular classification of renal cell carcinoma and its implication in future clinical practice. Kidney Cancer 2017;1(1):3-13. DOI: 10.3233/KCA-170008. PMID: 30334000.
26. Gerlinger M., Horswell S., Larkin J. et al. Genomic architecture and evolution of clear cell renal cell carcinomas defined by multiregion sequencing. Nat Genet 2014;46(3):225-33.
DOI: 10.1038/ng.2891. PMID: 24487277.
27. Sankin A., Hakimi A.A., Mikkilineni N. et al. The impact of genetic heterogeneity on biomarker development in kidney cancer assessed by multiregional sampling. Cancer Med 2014;3(6):1485-92.
DOI: 10.1002/cam4.293. PMID: 25124064.
28. Jiang W., Dulaimi E., Devarajan K. et al. Intratumoral heterogeneity analysis reveals hidden associations between protein expression losses and patient survival
in clear cell renal cell carcinoma. Oncotarget 2017;8(23):37423-34. PMID: 28445125.
a
JN
CS
U
u
Вклад авторов
Д. Г. Заридзе: разработка дизайна исследования, анализ обзора публикаций по теме статьи, получение данных, анализ полученных данных, написание текста рукописи;
Н.Н. Мазуренко: разработка дизайна экспериментальной части исследования, обзор публикаций по теме статьи, анализ полученных данных, написание текста рукописи;
C.Д. Бежанова: проведение иммуногистохимического исследования образцов опухолевой ткани; Д.М. Максимович: статистический анализ полученных данных;
О.В. Шаньгина, А.Ф. Мукерия: разработка дизайна эпидемиологической части исследования, организация и контроль сбора данных для исследования, прослеживание больных, анализ полученных данных;
В.А. Драудин-Крыленко: сбор эпидемиологической и медицинской информации у больных, получение опухолевой ткани, хранение и обработка базы данных;
В.Б. Матвеев: организация и контроль сбора данных для исследования, написание текста рукописи. Authors' contributions
D.G. Zaridze: developing the research design, analysis of the review of publications on the topic of the article, obtaining data, analysis of the obtained data, article writing;
N.N. Mazurenko: design of experimental part of the study, reviewing of publications of the article's theme, analysis of the obtained data, article writing; S.D. Bezhanova: immunohistochemical testing of tumor tissue samples; D.M. Maksimovich: statistical analysis of the data;
O.V. Shangina, A.F. Mukeria: design of epidemiological part of the study, organization and management of data accumulation, patient follow up, analysis of the obtained data;
V.A. Draudin-Krylenko: gathering of epidemiological and medical information from patients, tumor tissue acquisition, database storage and processing; V.B. Matveev: organization and management of data accumulation, article writing.
« CS
cv
ORCID авторов/ORCID of authors
Д.Г. Заридзе/D.G. Zaridze: https://orcid.org/0000-0002-2824-3704
Н.Н. Мазуренко/N.N. Mazurenko: https://orcid.org/0000-0003-4767-6983
С.Д. Бежанова/S.D. Bezhanova: https://orcid.org/0000-0001-7336-9210
Д.М. Максимович/D.M. Maksimovich: https://orcid.org/0000-0001-7560-5088
О.В. Шаньгина/O.V. Shangina: https://orcid.org/0000-0003-2431-068X
В.А. Драудин-Крыленко/V.A. Draudin-Krylenko: https://orcid.org/0000-0003-2205-8345
A.Ф. Мукерия/A.F. Mukeria: https://orcid.org/0000-0007-6847-9795
B.Б. Матвеев/V.B. Matveev: https://orcid.org/0000-0001-7748-9527
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов. Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.
Финансирование. Исследование проведено без спонсорской поддержки. Financing. The study was performed without external funding.
Информированное согласие. Все пациенты подписали информированное согласие на участие в исследовании. Informed consent. All patients gave written informed consent to participate in the study.
Статья поступила: 29.01.2019. Принята к публикации: 28.02.2019. Article received: 29.01.2019. Accepted for publication: 28.02.2019.
