ПРОФИЛИРОВАНИЕ B-ЛИМФОЦИТОВ ПАЦИЕНТОВ С АУТОИММУННОЙ ПУЗЫРЧАТКОЙ Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

УДК 577.151.45

Профилирование B-лимфоцитов пациентов с аутоиммунной пузырчаткой

В. А. Абрикосова1, Ю. А. Мокрушина1,2, Л. А. Овчинникова1, Е. Н. Ларина1, С. С. Терехов1, М. Н. Баранова1, Я. А. Ломакин1, Д. С. Балабашин1, Т. В. Бобик1, Е. Н. Калиберда1, В. Д. Кнорре1, М. В. Шпилевая3, Т. К. Алиев1,2, Д. Г. Дерябин3, А. Э. Карамова3, А. А. Кубанов3, М. П. Кирпичников1,4, И. В. Смирнов1,5*

1Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук, Москва, 117997 Россия

2Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова, химический факультет, Москва, 119991 Россия

Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии Минздрава России, Москва, 107076 Россия

4Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова, биологический факультет, Москва, 119234 Россия

Национальный медицинский исследовательский центр эндокринологии Минздрава России,

Москва, 117292 Россия

*E-mail: smirnov.mx.ibch@gmail.com

Поступила в редакцию 20.12.2022

Принята к печати 10.03.2023

DOI: 10.32607/actanaturae.11890

РЕФЕРАТ Аутоиммунная пузырчатка - тяжелое социально значимое заболевание, обусловленное появлением антител к десмоглеину 3-го типа. Пузырчатка встречается преимущественно у пациентов старше 18 лет, а летальность при этом заболевании может достигать 50% в зависимости от возраста пациента и ряда других факторов. На сегодняшний день отсутствует высокоселективная или персонализированная терапия пузырчатки. Одним из известных средств терапии пузырчатки является ритук-симаб - анти-CD20-антитело, которое приводит к истощению В-лимфоцитов в периферической крови. Для селективной элиминации B-лимфоцитов у пациентов с пузырчаткой целесообразно использовать специфические иммунолиганды, выбор которых основан на определении уровня аутоантител к различным фрагментам десмоглеина. В представленной работе установлено, что доля аутореактивных B-клеток у пациентов с диагностированной пузырчаткой составляет 0.09-0.16%, обнаружена положительная корреляция между уровнем антител к различным фрагментам десмоглеина и количеством аутореактивных B-клеток.

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА десмоглеин, пузырчатка, таргетная терапия, иммунолиганды.

ВВЕДЕНИЕ

Вульгарная пузырчатка - наиболее распространенная форма буллезных дерматозов, при которой на видимо неизмененной коже и/или слизистых оболочках возникают пузыри с серозным содержимым и тонкой вялой покрышкой, которые после вскрытия образуют длительно незаживающие болезненные эрозии.

По данным официального государственного статистического наблюдения ежегодно в Российской Федерации выявляют 1.9-2.4 новых случая пузырчатки на 100000 взрослого населения (18 лет и старше), а распространенность этого заболева-

ния варьирует от 4.8 до 6.3 случая на 100000 населения [1].

Ключевую патогенетическую роль в развитии пузырчатки играют аутоантитела класса ^С, направленные против основного структурного белка десмо-сом многослойного плоского эпителия - десмоглеина 3 типа (Dsg3) [2]. В результате взаимодействия ау-тоантител с внеклеточными доменами десмоглеина происходит разрушение десмосом с последующим развитием акантолиза (дегенеративного изменения шиповатого слоя эпидермиса, проявляющегося разрушением межклеточных мостиков и приводящего к образованию интраэпидермальных пузырей) [3].

Основной метод терапии пузырчатки в настоящее время состоит в длительном применении системных кортикостероидов в виде монотерапии или в комбинации с другими иммуносупрессивными препаратами, что вызывает ряд серьезных нежелательных эффектов и неэффективно при резистентных к системной терапии глюкокортикостероидами (ГКС) формах заболевания [4].

С целью снижения курсовых доз ГКС разрабатываются препараты моноклональных антител, позволяющие проводить таргетную терапию пузырчатки и других аутоиммунных заболеваний, воздействуя на клетки-продуценты аутоантител (В-лимфоциты). Первый и пока единственный подобный препарат, рекомендованный к применению в клинической практике при пузырчатке - ритукси-маб, действующим началом которого являются химерные моноклональные антитела к CD20-антигену В-лимфоцитов [5]. Однако серьезную проблему при использовании ритуксимаба представляет системное подавление как патологических (аутореак-тивных), так и нормальных В-лимфоцитов, что ведет к формированию системного иммунодефицита, связанного с недостатком циркулирующих иммуноглобулинов. Описан ряд случаев использования специфических иммуноактивных агентов для направленной элиминации патологических лимфоцитов [6, 7]. Специфичность терапии определяется эффективностью взаимодействия иммуноактивного препарата с целевой популяцией аутореактивных В-клеток. Существуют данные о различиях в уровне специфических антител к разным доменам дес-моглеина у пациентов с диагностированной пузырчаткой [8, 9]. Этот факт может быть использован для увеличения специфичности иммунотерапии при адресной доставке иммуноактивных агентов, имеющих в своем составе заданный вариант фрагмента десмоглеина. В качестве одного из вариантов терапии предложен метод иммуносорбции, основанный на элиминации из крови больных пузырчаткой аутореактивных антител с помощью высокоселективных иммуносорбентов [10]. Таким образом, возникает необходимость в определении корреляции уровня антител и количества аутореактивных В-клеток к фрагментам десмоглеина и определении профиля специфичности аутореактивных В-клеток у пациентов с пузырчаткой.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Рекомбинантный полноразмерный внеклеточный фрагмент Dsg3 (ЕС1-ЕС5) человека и одиночные домены ЕС1, ЕС2, ЕС3-ЕС4, слитые с Fc-фрагментом IgG1 человека, были получены в системе экспрессии клеток линии СНО с использованием генетических

конструкций на основе вектора pcDNA3.4 (Thermo Scientific, США). Рекомбинантные белки очищали из культуральной среды на колонке MabSelect SuRe (GE Healthcare, США). Чистоту белков подтверждали методами эксклюзионной хроматографии и электрофореза.

Суммарный уровень антител к Dsg3 в сыворотках пациентов был охарактеризован с использованием тест-системы «Набор реагентов для определения антител IgG к десмоглеину 3» (оригинальное название - Anti-Desmoglein 3 ELISA IgG; Euroimmun; Германия) и выражен в относительных единицах активности (RU/мл) по значениям оптического поглощения референсной сыворотки из комплектации набора. Полученные рекомбинантные белки использовали для оценки иммунореактивности сывороток больных обычной пузырчаткой двухэтапным конкурентным иммуноферментным анализом (ИФА) [11]. Dsg3, а также его фрагменты EC1, EC2, EC3-EC4, слитые с Fc-фрагментом IgG1 человека, в концентрации 1 мкг/мл, а также бычий сывороточный альбумин (БСА) в той же концентрации для контроля неспецифического связывания сорбировали в лунках полистиролового планшета (Greiner Bio-One GmbH, Германия) в течение ночи при +4°C. После удаления сорбционных объемов лунки отмывали 1 раз фосфатно-солевым буфером (PBS) и блокировали 0.1% раствором казеина. После блокировки лунки однократно отмывали фосфатно-солевым буфером, содержащим 0.005% Tween-20 (PBST). Исследуемые сыворотки крови разводили в соотношении 1 : 100 в PBS, содержащем 1% БСА и инкубировали в течение 18 ч в термостатируемом шейкере при +24°С и скорости 200 об/мин. После завершения инкубации образцы исследуемых сывороток в полном объеме переносили в лунки планшета из комплекта референсной тест-системы для повторной оценки непрореагировавших антител в отношении полноразмерного Dsg3. В дополнительные лунки вносили калибровочные образцы с активностями 20 и 200 RU/мл и инкубировали в том же режиме как описано выше (18 ч, +24°С, 200 об/мин). После инкубации планшет промывали 3 раза раствором PBST и вносили антитела к каппа и лямбда легким цепям антител человека, конъюгированных с пероксида-зой хрена. В планшет из комплекта референсной тест-системы вносили входящий в набор конъюгат кроличьих антител к полноразмерному IgG человека. После 60 мин инкубации (+24oC, 200 об/мин) лунки планшета промывали 3 раза, добавляли субстратный раствор (тетраметилбензидин, ТМБ) и инкубировали в темноте в течение 30 мин. Реакцию останавливали, добавляя 4 н раствор фосфорной кислоты, оптическое поглощение (ОП) в лунках

14 | ACTA NATURAE | ТОМ 15 № 1 (56) 2023

>-<:

• Антиген (Ag) Fc-фрагмент

• Биотин

■ Streptavidin-Cy5

■ Streptavidin-PE

В-клетки (CD19+)

BCR

В-клетка

(J

Ад+/" > Ад+/+

. А*." Л J «у Ад-у- .»'•J ■' Ад-/+

Streptavidin-PE

Рис. 1. Схема анализа профиля антигенспецифичности B-клеток с использованием метода «двойной положительной» окраски

регистрировали при длине волны 450 нм (ОП450) на планшетном спектрофотометре. На основе ОП калибровочных образцов с активностями 20 и 200 RU/мл референсного планшета строили калибровочную кривую, позволяющую определить активность каждой исследуемой сыворотки в относительных единицах активности (RU/мл). Полученные результаты использовали для расчета доли (%) аутореак-тивных антител, специфически взаимодействующих с отдельными эпитопами молекулы Dsg3 и выявляемых при постановке конкурентного ИФА:

[1 - (APos - Ar) / (APos - ANeg)] X100,

где Ar - активность сыворотки после преинкубации в планшете с иммобилизированным белком-эпито-пом; Apos - активность сыворотки после преинкубации с Dsg3 в референсной тест-системе; ANeg - активность после преинкубации с БСА.

В данном исследовании использовали образцы венозной крови, полученные от трех пациентов с клинически и лабораторно верифицированным диагнозом "L10.0 Пузырчатка обыкновенная". Все пациенты дали письменное информированное согласие на участие в исследованиях, работа проведена с соблюдением действующих правовых и этических норм.

Количество аутореактивных B-клеток оценивали методом проточной цитометрии с использованием биотинилированных рекомбинантных белков - субдоменов EC1, ЕС2, EC3 и EC4, слитых с константным доменом иммуноглобулина человека.

Мононуклеарные клетки периферической крови больных и здоровых доноров выделяли в градиенте плотности фиколла (Ficoll-Paque PLUS (GE Healthcare)). Клетки отмывали, подсчитывали, ре-суспендировали в фосфатно-солевом буфере c добавлением агента, блокирующего Fc-рецепторы

(Human Seroblock, Bio-Rad, США), 0.5% БСА и 2 мМ EDTA (2 миллиона клеток в 100 мкл раствора) и инкубировали в течение 30 мин во льду. Для формирования тетрамерного комплекса очищенные и химически биотинилированные с использованием Sulfo-NHS-LC-Biotin реагента (Thermo Fisher Scientific, США) препараты антигенов EC1-Fc, EC2-Fc, EC3-4-Fc и Dsg3-Fc смешивали со Streptavidin-PE (Invitrogen, США) и Streptavidin-Cy5 (Abcam, Великобритания) в молярном соотношении 4 : 1 и инкубировали в течение 30 мин при +4°С в темноте. Тетрамерный иммунокомплекс со Streptavidin-PE добавляли к окрашиваемым клеткам до концентрации 4 нМ, тетрамерный иммунокомплекс со Streptavidin-Cy5 - до концентрации 10 нМ, инкубировали в течение 15 мин при +4°С и постоянном помешивании. Далее к анализируемым пробам добавляли флуоресцентные антитела анти-CD45-APC-Cy7 (в разведении 1 : 300 (Sony, США)), антитела анти-CD19-PE-Cy7 (в разведении 1 : 1000 (Biolegend, США)) и флуоресцентный маркер мертвых клеток SYTOXTMGreen (в разведении 1 : 1000 (Biolegend, США)). Инкубировали дополнительно в течение 30 мин при +4°С в темноте. Далее образцы отмывали 0.5 мл PBS с 2 мМ EDТА. Интенсивность флуоресценции оценивали с помощью проточного флуориметра ACEA Novocyte (ACEA Biosciences, США).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Количество аутореактивных к десмоглеину 3 B-клеток определяли в венозной крови пациентов с диагностированной пузырчаткой (П1-П3), в качестве контрольного образца использовали кровь здорового донора (ЗД). Из всех образцов выделяли мононуклеарные клетки для последующего окрашивания и цитометрического анализа (рис. 1).

Таблица 1. Результаты иммуноферментного анализа сывороток пациентов с пузырчаткой с использованием полноразмерного десмоглеина и его фрагментов в качестве антигена, выраженные в RU/мл

Л

Антиген П1 П2 П3

Dsg3 700 20 1500

ЕС1 588 - 300

ЕС2 203 - 450

ЕС3-4 98 - 750

Отдельно отбирали сыворотку крови для определения уровня антител к Dsg3 и его фрагментам (табл. 1).

Как видно из представленных в табл. 1 данных, пациенты имели различный профиль антительного ответа на полноразмерный белок и домены десмо-глеина 3. При этом у пациента П2 был констатирован только слабый иммунный ответ на полноразмерный Dsg3, равный диагностически значимому пороговому значению 20 RU/мл, а пациенты П1 и П3 характеризовались выраженным иммунным ответом, по-разному распространяющимся на дис-тальные (ЕС1, ЕС2) или проксимальные (ЕС3-4) внеклеточные домены этого белка.

Для поиска корреляции между уровнями антител к различным вариантам десмоглеина и количеством антигенспецифических аутореактивных В-клеток проведено окрашивание фракции мононуклеаров иммуноактивными лигандами и специфическими антителами к поверхностным антигенам В-клеток -CD19. Ранее было показано, что количество антигенспецифических В-клеток находится в пределах 0.05-0.5% от всего пула В-лимфоцитов [12]. В ходе исследования применяли методику создания те-трамерной формы иммунолиганда с использованием молекулы стрептавидина, конъюгированного с флуоресцентным красителем (рис. 1). При этом одна молекула комплекса взаимодействует с несколькими молекулами В-клеточного рецептора, повышая авидность лиганда и, как следствие, увеличивая эффективность окрашивания. Другой ключевой особенностью было использование подхода «двойной положительной» окраски. В этом случае использовали два стрептавидин-антигенных комплекса, содержащих различные флуоресцентные метки: фикоэритрин (РЕ) и цианиновый краситель Су5. Такой подход позволил существенно снизить степень неспецифического окрашивания В-клеток. Представленный в данной работе принцип окрашивания может применяться для эффективного вы-

13

00

и

"О

>

и

"О 1= й

CD19

Dsg3+/-0.14% Dsg3+/+ 0.05%

Dsg3-/:'¿ffi 99 67% Щ,- Dsg3-/+ 0.14%

и

I

с

со тз

С >

Dsg 3-Рс

Dsg3+/-0-50% Dsg3+/+ 0,11%

Ж 11 'й;дз-/-. 99.26% Ц^; Dsg3-/+ 0.13%

0 ' 10 г 10 1 10 4 10 4 10 6 10 Streptavidin-PE

Dsg3+/-0.31% Dsg3+/+ 0.09%

¡Я Dsg3-/+ 0.23%

Ч 1 10 3 10 3 Ю 4 Ю * 10 " 10 Streptavidin-PE

Dsg3+/-0.45% Dsg3+/+ 0.17%

:«1Й1 Dsg3-/- 99.07% Ш: ' Dsg3-/+ 0.31%

Streptavidin-PE

10 ' 10 1 10 4 10 * 10 1 10 8 10 т Streptavidin-PE

Рис. 2. Выбор параметров (А) и цитометрический анализ B-клеток, специфичных к полноразмерному Dsg3 (Б). Параметры граничных условий для графика в координатах Streptav¡d¡n-Cy5 и Streptav¡d¡n-PE выбирали таким образом, чтобы количество положительных событий в сегменте с «двойным положительным» сигналом (+/+) составляло 0.05% в контрольном образце (здоровый донор, ЗД)

явления В-клеток к любым идентифицированным антигенам, в том числе при поиске антител к возбудителям вирусных инфекций. Финальная схема окрашивания/анализа каждого образца включала: (^ выделение области по размеру клеток; (п) выделение области, соответствующей живым лейкоцитам, после совместного окрашивания красителем SYTOXTMGreen и анти-CD45-APC-Cy7; (ш) выделение области одиночных клеток; выделение области CD19+ В-клеток; (V) оценку двойных положительных антигенспецифических В-клеток (рис. 2).

Б

16 | АСТА ^ТийАЕ | ТОМ 15 № 1 (56) 2023

Рис. 3. Цитоме-трический анализ B-клеток, специфичных к субдоменам десмоглеина 3 Б^ (А), EC2 (Б) и БС3-4 (В). Параметры граничных условий для графика в координатах Streptavidin-Cy5 и Streptavidin-PE выбирали таким образом, чтобы количество положительных событий в сегменте с «двойным положительным» сигналом (+/+) составляло 0.05% в контрольном образце (здоровый донор, ЗД)

А

ЕС1-Fc

ЕС2-Fc

ЕС3-4-Fc

Д

З

и

"О

>

О

а <и

ЕС 1 +/- ЕС1+/+

0.28% 0.05%

' ЬС^ 'Ж ЕС1-/+

99.56% 0.10%

о1 ю2 иа ю4 ю5 ю6 ю Streptavidin-PE

ЕС1+/- ЕС1+/+

0.61% 0.12%

ЕС1-/+

99.14% Ш : ; 0.12%

о 1 ю 1 10 3 10 * 10 5 10 6 10 Streptavidin-PE

и

>

О

а щ

ЕС2+/-0.07% ЕС2+/+ 0.05%

щ ЕС2-/+ 0.32%

0 1 10' 10 3 1» 1 10 5 10 6 10 Streptavidin-PE

ЕС2+У-0.12% ЕС2+У+ 0.1В%

Ж 1 ' ЕС2-/-99.22% Щ ■■" ЕС2-/+ 0.50%

и _

т> > -

С

а

Streptavidin-PE

ЕСЗ-4+/- ЕСЗ-4+/+

0.33% 0.05%

¡¡■¡к

• . ЕСЗ-4-/+

99.38% Щ-; 0.24%

0 1 10 2 10 3 10 4 10 5 10 е 10 Streptavidin-PE

ЕСЗ-4+/- ЕСЗ-4+/+

0.87% 0.11%

■1 ■ -. ■ г.чж

Ш

ЕСЗ-4-/-^' ЕСЗ-4-/+

98.83% Щ; 0.18%

0 1 10 2 10 3 10 4 10 3 10 ® 10 Streptavidin-PE

Б

В

2 П

>У

и

-

с

-д ,

> 5

и

3 П

ЕС1+/- 0.54% ЕС1+/+ 0.05%

■ЕС1-/+ 0.12%

1 10 1 10 5 10 * 10 5 10 е 10 Streptavidin-PE

ЕС 1 +/-0.72% ЕС1+/+ 0.11%

98.98% - ЕС1-/+ 0.19%

1 10 3 10 3 10 4 1С а 10 6 10 Streptavidin-PE

ЕС2+/- ЕС2+/+

0.07% 0.13%

ш ^ О

с

> та

И щ ¡л ¡мШ

ЕС2-/- ш^Г : ЕС2-/+

- 99.40% Щу 0.41%

" 1С 10 г 10 5 10 * 10 : 10 6 10 Streptavidin-PE

ЕС2+/- ЕС2+/+

0.18% 0.15%

ш ^ и

С

тз

■> та

"о. ...Др..

¡л

ГС? ЕС2-/+

- 98.94% ¿К 0.74%

1С 1 10 2 10 3 10 4 10 5 10 с 10

Streptavidin-PE

-с

-д,

> 5

и

ЕСЗ-4+/-0.50% ЕСЗ-4+/+ 0.10%

в ЕСЗ-4-/+ 0.23%

0 10 г 10 1 10 4 10 * Ю * 10 Streptavidin-PE

ЕСЗ-4+/-0.42% ЕСЗ-4+/+ 0.16%

99.31% 'Я" ЕСЗ-4-/+ 0.21%

Streptavidin-PE

Согласно результатам, представленным на рис. 2Б, наибольшая доля В-клеток, специфичных к полноразмерному десмоглеину, обнаружена у пациента П3, наименьшая - у пациента П2, что в целом соотносится с результатами ИФА (табл. 1). Доля В-клеток, специфичных к различным доменам десмоглеина, у всех пациентов также различалась (рис. 3).

У пациента П1 выявлено наибольшее количество В-клеток, специфичных к домену ЕС2

(0.16%), при этом количество клеток к доменам ЕС1 и ЕС3-4 ниже - 0.12 и 0.11% соответственно. У пациента П2 отсутствовали ЕС1-специфичные клетки (на уровне контроля), при этом доля клеток к доменам ЕС2 и ЕС3-4 составила 0.13 и 0.10%. У пациента П3 доля В-клеток, специфичных ко всем доменам, была сравнимой с долей у пациента П1, однако наибольшей была доля В-клеток, специфичных к доменам ЕС2 и ЕС3-4 (0.15 и 0.16%).

ТОМ 15 № 1 (56) 2023 | АСТА ^ТИЙАЕ | 17

с

\ D IX

га" С

<и

I

га <и s х и <и т s -fr ZS

<и □

и

I

<и

I

<

1000 -

500

• Dsg3-Fc

• EC1-Fc EC2-Fc EC3-4-Fc

П3

П1

П2

—г

0.05

0.1

I 1 1 1

0.15

0.2

Антигенспецифические В-клетки, %

Рис. 4. Анализ профиля специфичности антител и В-клеток. Образцы, проанализированные на полноразмерный десмоглеин 3 и его домены, отмечены цветом. Линиями соединены значения, относящиеся к одному и тому же пациенту

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, анализ профиля специфичности антител и В-клеток показал в целом положительную корреляцию между титром специфических антител

в крови и долей антигенспецифических B-клеток (£>ис. 4).

При этом доля аутореактивных B-клеток у пациентов с пузырчаткой составила 0.09-0.16%. Также обнаружен заметный уровень неспецифического окрашивания у здорового донора (0.05%), однако использование «двойного положительного» подхода к окрашиванию клеток позволило детерминировать профиль антигенспецифичности B-клеток у пациентов с пузырчаткой. Полученные результаты важны для разработки стратегии персонализированной терапии пузырчатки цитотоксическими иммунолигандами на основе рекомбинантных доменов десмоглеина, слитых с константным доменом иммуноглобулина человека. Вероятно, что пациент П2 будет нечувствителен к терапии EC1-Fc, в то же время можно ожидать элиминацию аутореактивных B-клеток при использовании EC2-Fc и EC3-4-Fc у пациентов П1 и П3 соответственно. Применение профилирования B-лимфоцитов у пациентов с аутоиммунными заболеваниями, в частности обыкновенной пузырчаткой, открывает широкие перспективы в выборе стратегии персонализированной терапии. •

Исследование выполнено в рамках Соглашения

№ 05.607.21.0325 (уникальный идентификатор проекта RFMEFI60719X0325). Результаты исследований по дифференциальному окрашиванию и анализу количества аутореактивных B-клеток к фрагментам десмоглеина 3 получены за счет средств гранта РФФИ (проект № 20-04-60468).

0

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Александрова Г.А., Кубанов А.А., Мелехина Л.Е., Богданова Е.В., Поликарпов А.В., Огрызко Е.В., Голубев Н.А., Пронина Т.В., Гладких Т.Е., Гринчева А.В. Ресурсы и деятельность медицинских организаций дерматовенерологического профиля. Заболеваемость инфекциями, передаваемыми половым путем, заразными кожными заболеваниями и болезнями кожи: статистические материалы. М.: Министерство здравоохранения Российской Федерации, 2015. 212 с.

2. Satyam A., Khandpur S., Sharma V.K., Sharma A. // Immunol. Invest. 2009. V. 38. № 6. P. 498-509.

3. Неггего^ома^ J.E., 1гамо P., Benitez D., Lozano F., Herrero C., Mascaro J.M., Jr. // Acta Derm. Venereоl. 2010. V. 90. № 4. P. 401-405.

4. Leventhal J.S., Sanchez M.R. // J. Drugs Dermatol. 2012. V. 11. № 10. P. 1200-1206.

5. Sorce M., Arico M., Bongiorno M.R. // Dermatol. Ther. 2008. V. 21. № S1. P. S6-S9.

6. Stepanov A.V., Belogurov A.A., Jr., Ponomarenko N.A., Stremovskiy O.A., Kozlov L.V., Bichucher A.M., Dmitriev

S.E., Smirnov I.V., Shamborant O.G., Balabashin D.S., et al. // PLoS One. 2011. V. 6. № 6. P. e20991.

7. Степанов A.B., Белогуров A.A., Kothapalli P., Шамборант О.Г., Кнорре В.Д., Телегин Г.Б., Овсепян A.A., Пономаренко H.A., Деев С.М., Kaveri S.V. и др. // Acta Naturae. 2015. Т. 7. № 2. С. 79-85.

8. Cho A., Caldara A.L., Ran N.A., Menne Z., Kauffman R.C., Affer M., Llovet A., Norwood C., Scanlan A., Mantus G., et al. // Cell Rep. 2019. V. 28. № 4. P. 909-922. e1-e6.

9. Müller R., Svoboda V., Wenzel E., Gebert S., Hunzelmann N., Müller H.-H., Hertl M. // Exp. Dermatol. 2006. V. 15. № 8. P. 606-614.

10. Абрамова Т.В., Шпилевая М.В., Кубанов А.А. // Acta Naturae. 2020. Т. 12. № 2. С. 63-69.

11. Кубанов А.А., Дерябин Д.Г., Шпилевая М.В., Карамо-ва А.Э., Никоноров А.А., Ларина Е.Н., Алиев Т.К., Долгих Д.А., Бобик Т.В., Смирнов И.В. и др. // Бюл. эксп. биол. мед. 2021. Т. 171. № 4. С. 490-495.

12. Franz B., May K.F., Jr., Dranoff G., Wucherpfennig K. // Blood. 2011. V. 118. № 2. P. 348-357.

18 | ACTA NATURAE | ТОМ 15 № 1 (56) 2023