CC BY
21УДК 636.5.033, 612.112.71 DOI 10.33632/1998-698Х.2021-1-50-56
ПРОФИЛЬ КРОВИ ЦЫПЛЯТ КРОССА РОСС-308 ПОСЛЕ ВАКЦИНАЦИИ ПРОТИВ ЭЙМЕРИОЗА
Фролова О.А., Макаров А.В.
ФГБОУ ВО "Красноярский ГАУ", Россия, г. Красноярск, e-mail: kristal_o@bk.ru,
Большую часть жизненного цикла эймерии гаплоидны за исключением короткой диплоидной фазы во время полового размножения. Половая фаза может ускорить появление генетического разнообразия, открывая возможность для перекрестного оплодотворения и последующей независимой хромосомной сегрегации и рекомбинации. На сегодняшний день многие фундаментальные вопросы, связанные с глобальным распространением и генетической изменчивостью Eimeria остаются без ответа. В рамках изучения последствий совместного действия вакцин против эймериоза кур в одном организме в связи с существующим риском восстановления патогенности вакцинных штаммов эймерий при использовании разных вакцин в условиях одного хозяйства исследовано влияние на профиль крови цыплят вакцин "Эймериавакс 4М", препарата сравнения "Вакцина 1", и сочетанной иммунизации смесью этих вакцин. Выявлено в лейкоформуле крови в возрасте 21 день во 2 опытной группе (вакцина "Эймериавакс 4М") статистически значимое (P<0,05) увеличение количества псевдоэозинофилов на 8,21 % и уменьшение количества лимфоцитов на 10,43 % по сравнению с интактной группой. В возрасте 35 дней - в 3 опытной группе, вакцинированной смесью вакцин "Вакцина 1"+"Эймериавакс 4М", по сравнению с интактной группой обнаружено статистически значимое (P<0,05) увеличение количества псевдоэозинофилов на 8,15 % и уменьшение количества лимфоцитов на 7,36 %. Полученные данные не выходят за рамки нормативных значений, но укладываются в ожидаемую реакцию иммунной системы цыплят при комплементации генов патогенности гибридных форм вакцинных штаммов эймерий. Во избежание рисков комплементации следует обеспечивать систему биозащиты на птицефабриках, исключающую контакт штаммов эймерий из разных вакцин.
Ключевые слова:
лейкоцитарная формула.
эймериоз, цыплята-бройлеры, вакцинация, комплементация генов,
Введение. Определение лейкоцитарной формулы крови - основное лабораторное исследование соотношения разных видов лейкоцитов, определяемое при подсчете их в окрашенном мазке крови под микроскопом для количественной и качественной оценки этих форменных элементов. Результаты этого анализа являются высокоинформативными и могут быть использованы для диагностики и контроля лечения многих заболеваний, а также могут служить основанием для назначения других исследований. Известно, что лейкоциты, или белые кровяные тельца, играют большую роль в защитных и восстановительных процессах. Их главные функции: фагоцитоз, продукция антител, разрушение и удаление токсинов белкового происхождения, участие в иммунологических и аллергических реакциях [0].
Исследование морфологических особенностей и функциональной активности
лейкоцитов крови птиц позволяет точнее характеризовать процессы жизнедеятельности организма в условиях разнообразных по антигенному составу вакцинаций против паразитарных, вирусных и бактериальных болезней, широко применяемых в промышленном птицеводстве [0]. Исследования проведены в 2020-2021 гг. на кафедре анатомии, патологической анатомии и хирургии Института прикладной биотехнологии и ветеринарной медицины, и в научно-исследовательском испытательном центре (НИИЦ) ФГБОУ ВО "Красноярский ГАУ".
Целью наших исследований является изучение влияния вакцинации против эймериоза кур двумя разными живыми аттенуированными вакцинами и смесью этих вакцин на лейкоцитарную формулу крови цыплят-бройлеров кросса Росс-308.
Задачи исследования: изучить лейкоцитарную формулу крови цыплят-бройлеров, вакцинированных против эй-мериоза вакцинами "Эймериавакс 4М", препаратом сравнения "Вакцина 1", а также смесью этих вакцин.
Новизна исследования состоит в изучении действия сочетанной иммунизации живыми аттенуированными вакци-нами против эймериоза на лейкоцитарную формулу крови цыплят-бройлеров.
В научной литературе нет работ "обосновывающих отсутствие рисков повышения патогенности вакцинных штам-мов при их смешивании друг с другом" [0]. В связи с тем, что существует риск восстановления патогенности вакцинных штаммов эймерий при использовании разных вакцин в условиях одного хозяйства и факт передачи генов патогенности при половом размножении эймерий не опровергнут методами полногеномного секвенирования, то изучение последствий совместного действия вакцин против эймериоза в одном организме являя-ется актуальным.
Материалы и методы. Объектом исследования являлись цыплята-бройлеры кросса Росс-308. Для эксперимента было сформировано по принципу аналогов 4 группы цыплят: интактный контроль (n=15), 1 группа - опытная (n=10) иммунизирована вакциной "Вакцина 1" 1 доза/гол; 2 группа -опытная (n=10) - вакциной "Эймериавакс 4М" ("EimeriaPtyLimited", Австралия) 1 доза/ гол; 3 группа - опытная (n=10) - смесью вакцин "Вакцина 1" 0,5 дозы/гол. и "Эймериавакс 4М" 0,5 дозы/гол. Цыплята опытных групп иммунизированы вакцинами per os в возрасте 14 дней.
В возрасте 21 и 35 дней у цыплят всех групп брали пробы крови утром натощак из подкрыльцовой вены в пробирки с литий гепарином с соблюдением правил асептики, перемешивали, не вспенивая. Для подсчета лейкограммы [0] делали мазки крови [0] и окрашивали по Паппенгейму [0]. Лейкоцитарную формулу определяли четырехпольным способом с использованием счетчика для учета лейкоцитов путём подсчета 100 клеток в окрашенных мазках крови под световым микроскопом с иммерсионной системой. Результат выражали в процентах.
Статистическую обработку, полученных в ходе экспериментальных исследований данных, проводили с помощью пакета анализа программы Microsoft Office Excel [0]. Статистическую значимость различий выяв-
ЖУРНАЛ ДЛЯ ПРОФЕСС
ляли с помощью методов вариационной и непараметрической статистики, с определением средних величин и их простых ошибок (М±т), ^критерия Манна-Уитни [0, 0]. Различия считали статистически значимыми, если вероятность случайности не превышала 5 % (Р<0,05).
Результаты исследований. Извест-но, что клетки крови птиц отличаются от таковых у млекопитающих. Лейкоциты птиц несколько меньшего размера, базофилы - клетки круглой формы, ядро имеет несколько сегментов, окрашивается в темно-фиолетовый цвет. У молодых клеток ядро округлое, вытянутое, палочковидное. Цитоплазма мелкозернистая, гранулы темно-фиолетовые. Эозинофилы -круглые клетки, ядра по форме, как у базофилов. Окрашиваются в темно-фиолетовый цвет с розовыми круглыми гранулами. Псевдоэозинофилы различают: с круглыми гранулами, которые напоминают эозинофилы, юные формы: они крупнее эозинофилов, гранулы красные, размытые по краям, ядра окрашены слабее и имеют менее выраженный рисунок, в подавляющем большинстве с палочковидной грануляцией в цитоплазме, гранулы окрашены интенсивное, ядра более пикнотичны, может быть два ядра, расположенных у полюсов клетки. Лимфоциты -клетки с круглыми ядрами, окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, цитоплазма синего цвета, иногда содержит азурофильные зернышки. Моноциты - крупные клетки с ядром бобовидной или лопастной формы фиолетово-дымчатого цвета, цитоплазма серовато-голубая, окружает ядро широким слоем, азурофильная зернистость пылевидная [0].
Лейкограммы крови цыплят контрольной и опытных групп представлены в таблице 1 и на рисунках 1, 2.
Как можно заметить из лейкоцитарной формулы, у цыплят в возрасте 21 день наблюдали сильное смещение клеток в сторону агранулоцитов, тогда как к 35 дню наблюдали снижение таковых с увеличением числа гранулоцитов.
В лейкограмме крови цыплят 2й опытной группы, вакцинированных вакциной "Эймериавакс 4М", статистически значимо ^<0,05) в возрасте 21 день увеличилось количество псевдоэозинофилов с 15,79±2,39 % в контроле до 24,00±1,85 % в опыте (на 8,21 %) и уменьшилось количество лимфоцитов - с 83,43±2,63 % в контроле до 73,00±1,53 % в опыте (на 10,43 %). В лейко-грамме крови цыплят 3й опытной группы,
вакцинированных смесью вакцин "Вакцина 1"+"Эймериавакс 4М", статистически значимо (P<0,05) в возрасте 35 дней увеличилось количество псевдоэозинофилов с 35,55±
1,60 % в контроле до 43,70±0,79 % в опыте (на 8,15 %) и уменьшилось количество лимфоцитов - с 61,36±1,88 % в контроле до 54,00±1,17 % в опыте (на 7,36 %).
Таблица 1 - Лейкоцитарная формула крови цыплят-бройлеров после вакцинации против эймериоза
(М±т), %
Группа цыплят-бройлеров кросса Росс-308
Интактная 1я опытная 2я опытная 3я опытная
Показатель Возраст (контроль) "Вакцина 1" Эймериавакс 4M Смесь вакцин
n=15 n=10 n=10 n=10
21 день 1,50±0,50 1,00±0,00 1,25±0,25 1,33±0,34
Базофилы 35 дней 1,80±0,58 1,25±0,25 1,00±0,00 1,00±0,00
21 день 0,00±0,00 2,33±0,88 1,78±0,15 1,60±0,25
Эозинофилы 35 дней 2,71±0,89 2,00±0,38 2,13±0,29 1,86±0,40
21 день 15,79±2,39 21,30±2,21 24,00±1,85* 18,70±1,24
Псевдоэозинофилы
35 дней 35,55±1,60 34,80±1,39 38,89±1,87 43,70±0,79*
21 день 83,43±2,63 77,30±2,39 73,00±1,53* 79,70±1,49
Лимфоциты 35 дней 61,36±1,88 62,60±1,55 59,56±2,42 54,00±1,17*
Моноциты 21 день 1,00±0,00 1,00±0,00 1,17±0,17 1,00±0,00
35 дней 1,20±0,20 1,17±0,17 1,20±0,20 1,25±0,25
*Статистически значимые различия (U-критерий Манна-Уитни) по сравнению с контролем (P<0,05)
Лейкограмма крови цыплят в возрасте 21 день, %
Моноциты
Лимфоциты
псевдоэозинофилы Эозинофилы Базофилы
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90
■ Смесь ■ Эймериавакс 4М ■ Вакцина 1 ■ Контроль
Рисунок 1 Лейкограмма крови цыплят в возрасте 21 день, % Данные взяты из таблицы 1,
представляют средние значения
Лейкограмма крови цыплят в возрасте 35 дней, %
Моноциты Лимфоциты Псевдоэозинофилы Эозинофилы
Базофилы ■
0 10 20 30 40 50 60 70
■ Смесь ■ Эймериавакс 4М ■ Вакцина 1 Контроль
Рисунок 2 Лейкограмма крови цыплят в возрасте 35 дней, % Данны е взяты из таблицы 1,
представляют средние значения
Во всех группах цыплят в возрасте 35 дней по сравнению с возрастом 21 день количество базофилов, эозинофилов и моноцитов находилось, примерно, на постоянном уровне, количество псевдоэозинофилов увеличилось: в контрольной группе на 19,76 %, в группе, вакцинированной "Вакциной 1" - на 13,50 %, в группе, вакцинированной вакциной "Эймериавакс 4М" - на 14,89 %, в группе, вакцинированной смесью этих вакцин - на 25,00 %, а количество лимфоцитов уменьшилось: в контрольной группе на 22,07 %, в группе, вакцинированной "Вакциной 1" - на 14,70 %, в группе, вакцинированной вакциной "Эймериавакс 4М" - на 13,44 %, в группе, вакцинированной смесью этих вакцин - на 25,70 %.
Обсуждение результатов. Лейкоциты служат важным звеном иммунологической защиты. Благодаря их фагоцитарной активности, участию в клеточном и гуморальном иммунитете реализуются антимикробные, антитоксические, антителообра-зующие и другие компоненты иммунологических реакций. Так как гибридные формы эймерий могут появиться во время фазы их полового размножения, то для проявления феномена комплементации генов патоген-ности необходимы несколько генерации эй-мерий в одном организме после вакцинации смесью двух разных вакцин. В нашем эксперименте в возрасте 21 день у цыплят развивается уже второе поколение эймерий и вероятность проявления феномена комплементации возрастает. В возрасте 35 дней это
ЖУРНАЛ ДЛЯ ПРОФЕССИ
уже 3-4 генерация и именно на этом этапе цыплята могут реинвазироваться патогенными гибридными формами. В это время мы и наблюдаем статистически значимый прирост удельной доли псевдоэозинофилов в крови цыплят опытной группы, вакцинированной смесью вакцин с 35,55±1,60 % в контроле до 43,70±0,79 % в опыте (на 8,15 %).
Ю.Ю. Довгий с соавторами [0] утверждают, что у кур при эймериозе в лёгкой форме в лейкограмме по сравнению с контролем отмечается увеличение эозинофи-лов, сегментоядерных нейтрофилов и уменьшение лимфоцитов.
По мере роста и развития цыплят-бройлеров происходит формирование защитных функций крови. Лейкограмма здоровых кур (не бройлеров) по А.А. Кудрявцеву [0] содержит базофилы 1,0-3,0 %, эозинофилы 6,0-10,0 %, псевдоэозинофилы 24,0- 30,0 %, лимфоциты 52,0-60,0 %, моноциты 10,014,0 %. Несмотря на то, что полученные нами данные не выходят за рамки нормативных значений, следует избегать смешивания вакцин против эймериоза кур на одной птицеводческой площадке и при переходе с одной вакцины на другую использовать химические (синтетические) кокцидиоста-тики, которые резко снижают численность кокцидий, блокируют выход паразитов во внешнюю среду и создают высокий уровень защиты внутренних органов птицы. Также необходимо проводить обработку помещений дезинфицирующими средствами с 3 ОТ ПРОФЕССИОНАЛОВ
антикокцидийным эффектом и первый месяц тщательно исключать перенос ооцист эйме-рий персоналом между птичниками.
Заключение. В ходе исследований выявлено в лейкограмме крови цыплят-бройлеров кросса Росс-308 на седьмой день после иммунизации против эймериоза кур во 2й опытной группе (вакцина "Эймериавакс 4М") в возрасте 21 день статистически значимое (Р<0,05) увеличение количества псевдоэо-зинофилов на 8,21 % и уменьшение количества лимфоцитов на 10,43 % по сравнению с интактной (контрольной) группой.
В возрасте 35 дней (через двадцать один день после сочетанной вакцинации против эймериоза кур, период 3-4 генерации эй-мерий в организме цыплят) в лейкограмме
крови цыплят 3й опытной группы, иммунизированных смесью вакцин "Вакцина 1 "+"Эймериавакс 4М", по сравнению с интактной группой обнаружено статистически значимое (Р<0,05) увеличение количества псевдоэозинофилов на 8,15 % и
уменьшение количества лимфоцитов на 7,36 %.
Данные изменения лейкограммы крови укладываются в ожидаемую реакцию иммунной системы цыплят при комплементации генов патогенности гибридных форм вакцинных штаммов эймерий. Во избежание рисков комплементации следует обеспечивать систему биозащиты на птицефабриках, исключающую контакт штаммов эймерий из разных вакцин.
Литература
1. Андреева, Ю.Н. Кокцидиоз: вопросы диагностики, лечения и профилактики / Ю.Н. Андреева, Е.А. Сканчева, Т.Г. Титова [и др.] // БИО. - 2017. - № 2(197). - С. 30-33.
2. Бессарабов, Б.Ф. Клинические и лабораторные методы исследования сельскохозяйственной птицы при незаразных болезнях / Б.Ф. Бессарабов, Л.В. Клетикова, С.А. Алексеева [и др.]. - М., ЗооВетКнига. - 2015. - С. 67-68.
3. Довгий, Ю.Ю. Распространение эймериоза кур, кроликов и нутрий и методы лечения / Ю.Ю. Довгий, А.А. Кушнирова, В.А. Корячков [и др.] // Ученые записка УО ВГАВМ. - 2014. -Т. 50. - Вып. 2. - Ч. 1. - С. 74-76.
4. Гусаков, В.К. Подсчет форменных элементов крови у кур. Учебно-методическое пособие / В.К. Гусаков, Е.Н. Кудрявцева, А.В. Островский - Витебск. - 2002.
5. Карпуть, И.М. Гематологический атлас сельскохозяйственных животных. - Мн: Ураджай, 1986.
6. Лебедько, Е.Я. Биометрия в MSExcel: Учебное пособие / Е.Я. Лебедько, А.М. Хохлов, Д.И. Барановский [и др.] // СПб.: Издательство "Лань". - 2018.
7. Меркулов, Г.А. Курс патологогистологической техники. Четвертое издание. - Медгиз. Ленинградское отделение. - 1961. - С. 191.
8. Общие и специальные методы исследования крови птиц промышленных кроссов. -Екатеринбург - Санкт-Петербург: Уральская ГСХА, НПП "АВИВАК", 2009.
9. Статистика социальных наук. U-критерий Манна-Уитни [Электронный ресурс]. / URL: https://www.socscistatistics.com/tests/mannwhitney/default2.aspx (дата обращения: 29.10.2021).
10. Степанов, В.Г. Применение методов непараметрической статистики в исследованиях сельскохозяйственной биологии и ветеринарной медицины: Учебное пособие. СПб.: Издательство "Лань". - 2019. - С. 27-32.
11. Царев, П.Ю. Морфофункциональная характеристика лейкоцитов крови кур, привитых против болезни Гамборо и гемофилёза / П.Ю. Царев, Н.В. Донкова, Е.Г. Турицына // Ветеринарная патология. - 2016. - № - 4 (58). - С. 10-16.
BLOOD PROFILE OF CROSS R0SS-308 CHICKEN AFTER VACCINATION AGAINST EMERIOSIS
Frolova O. Makarov A.
Krasnoyarsk State Agrarian University, Russian Federation, е-mail: kristal_o@bk.ru
Most of the life cycle of Eimeria is haploid with the exception of a short diploid phase during sexual reproduction. The sexual phase can accelerate the emergence of genetic diversity, opening up the possibility for cross fertilization and subsequent independent chromosomal segregation and recombination. Today, many fundamental questions related to the global distribution and genetic variation of Eimeria remain unanswered. As part of the study of the effects of the combined action of vaccines against eimeriosis of chickens in one organism in connection with the existing risk of restoring the pathogenicity of vaccine strains of eimeria when using different vaccines in the same farm, the effect on the blood profile of chickens of the vaccines "Aymeriawax 4M", the reference drug "Vaccine 1" and co-immunization with a mixture of these vaccines. A statistically significant (P<0.05) increase in the number of pseudo-eosinophils by 8.21% and a decrease in the number of lymphocytes by 10.43% in comparison with the intact group was revealed in the leukoformula of blood at the age of 21 days in the 2nd experimental group (vaccine "Aymeriavax 4M") ... At the age of 35 days - in experimental group 3 vaccinated with a mixture of vaccines "Vaccine 1" + "Aymeriavax 4M", compared with the intact group, a statistically significant (P<0.05) increase in the number of pseudo-eosinophils by 8.15% and a decrease in the number of lymphocytes was found by 7.36%. The data obtained do not go beyond the normative values, but fit into the expected response of the immune system of chickens during the complementation of pathogenicity genes of hybrid forms of vaccine strains of Eimeria. To avoid risks of complementation, a biosecurity system in poultry farms should be provided that excludes contact of Eimeria strains from different vaccines.
Key words: eimeriosis, broiler chickens, vaccination, gene complementation, leukocyte formula.
References
1. Andreeva, Yu.N. Coccidiosis: issues of diagnosis, treatment and prevention / Yu.N. Andreeva, E.A. Skancheva, T.G. Titova [et al.] // BIO. - 2017. - No. 2 (197). - P. 30-33.
2. Bessarabov, B.F. Clinical and laboratory methods for the study of agricultural poultry in non-communicable diseases / B.F. Bessarabov, L.V. Kletikova, S.A. Alekseeva [and others]. - M., ZooVetBook. - 2015. - P. 67-68.
3. Dovgy, Yu.Yu. The spread of eimeriosis in chickens, rabbits and nutria and methods of treatment / Yu.Yu. Dovgy, A.A. Kushnirov, V.A. Koryachkov [et al.] // Scientific note of the UO VGAVM. - 2014. - T. 50. - Issue. 2. - Part 1. - P. 74-76.
4. Gusakov, V.K. Calculation of blood corpuscles in chickens. Study guide / V.K. Gusakov, E.N. Kudryavtseva, A.V. Ostrovsky - Vitebsk. - 2002.
5. Karput. I.M. Hematological atlas of farm animals. - Mn: Urajay, 1986.
6. Lebedko. E. Ya. Biometrics in MSExcel: Textbook / E.Ya. Lebedko, A.M. Khokhlov, D.I. Baranovsky [et al.] // St. Petersburg: Publishing House "Lan". - 2018.
7. Merkulov, G.A. Course of pathologic-histological technique. Fourth edition. - Medgiz. Leningrad branch. - 1961 .- P. 191.
8. General and special methods of blood analysis of industrial crosses. - Yekaterinburg - St. Petersburg: Ural State Agricultural Academy, NPP "AVIVAK", 2009.
9. Social science statistics. Mann-Whitney U-criterion [Electronic resource]. / URL: https://www.socscistatistics.com/tests/mannwhitney/default2.aspx (date accessed: 10/29/2021).
10. Stepanov, V.G. Application of methods of nonparametric statistics in agricultural biology and veterinary medicine research: Textbook. SPb .: Publishing house "Lan". - 2019 .- P. 27-32.
11. Tsarev, P.Yu. Morphofunctional characteristics of blood leukocytes in chickens vaccinated against Gumboro disease and hemophilia / P.Yu. Tsarev, N.V. Donkova, E.G. Turitsyna // Veterinary pathology. - 2016. - No. - 4 (58). - P. 10-16.
