CC BY
44
БИО
ПРЕПАРАТЫ
Проблемы оценки подлинности и специфической активности препаратов аллергенов
Радунская С.Ф., Лавренчик Е.И., Невская Л.В, Мосягин В.Д., Иванов В.Б.
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва
Problems associated with assessment of identity and specific activity of allergen preparations
Radunskaya S.F., Lavrenchik E.I., Nevskaya L.V., Mosyagin V.D., Ivanov V.B.
Federal State Budgetary Institution «Scientific Center for Expertise of Medical Application Products»
of the Ministry of Health of the Russian Federation, Moscow
Выпускаемые за рубежом препараты аллергенов стандартизуются в единицах, отражающих степень суммарной аллергенной активности (специфической активности, биологической активности) препаратов. Однако до настоящего времени в разных странах используются различные подходы к стандартизации препаратов аллергенов, что затрудняет сравнительную оценку аллергенной активности препаратов различных производителей. Так в США препараты аллергенов стандартизуются в BAU (Bioequivalent Allergy Unit - биоэквивалентная аллергенная единица), в европейских странах - в BU (Biological Units - биологические единицы), IU (International Unit -международная единица), IR (Index of reactivity - индекс реактивности) и др. Большинство зарубежных производителей для количественной калибрации активности аллергенов применяют методы in vitro (например, ИФА-ингибирование) с использованием охарактеризованного внутреннего референсного препарата (стандартного препарата). Препараты аллергенов, выпускаемые отечественными производителями, стандартизуются в единицах белкового азота PNU (Protein nitrogen Unit). Однако данный показатель, характеризующий количественно содержание белка в аллергенном материале, не отражает истинную аллергенную активность препарата, не гарантирует ее константность в различных сериях, создает сложности в подборе доз препарата при проведении специфической иммунотерапии. Аллергенная активность отечественных препаратов аллергенов устанавливается по результатам кожного тестирования (метод in vivo) на чувствительных к конкретному аллергену пациентах. Однако данный метод не позволяет количественно оценить аллергенную активность препарата. Для оценки подлинности отечественных аллергенов в настоящее время вместо метода in vivo (кожное тестирование) вводится метод in vitro на основе ИФА. Данный метод был разработан в 2011 г. в лаборатории аллергенов ГИСКим. Л.А. Тарасевича. Стандартизация отечественных препаратов аллергенов в единицах аллергенной активности, использование современных методов in vitro для оценки их подлинности и аллергенной активности являются залогом качества препаратов, безопасности и эффективности их применения.
Ключевые слова: аллергены, экспертиза, качество, стандартизация, аллергенная активность, специфическая активность, единицы активности, подлинность, стандартный препарат.
Библиографическое описание: Радунская С.Ф., ЛавренчикЕ.И., НевскаяЛ.В., Мосягин В.Д., Иванов В.Б. Проблемы оценки подлинности и специфической активности препаратов аллергенов // Биопрепараты. 2013. № 2. С. 14-17.
Foreign allergen preparations are standardized using the units, which demonstrate their degree of total allergenic activity (specific activity, biological activity). However, until now different approaches to standardization of allergen preparations have been used in different countries, which complicates the comparative assessment of allergenic activity of preparations produces by different manufacturers. For example, in the USA the allergen preparations are standardized in BAU (Bioequivalent Allergy Unit), in European countries - in BU (Biological Units), IU (International Unit), IR (Index of reactivity), etc. The majority of foreign manufacturers apply «in vitro» methods (e.g., ELISAinhibition) for quantitative calibration of allergen activity using the characterized internal reference preparation (standard preparation). The allergen preparations produced by domestic manufacturers are standardized in PNU (Protein nitrogen Unit). But this parameter, which reflects quantitative protein content in allergenic material, does not demonstrate true allergenic activity of the preparation, does not guarantee its consistency in different batches and creates difficulties for dose selection during the course of specific immunotherapy. Domestic allergen preparations
( Обзор
Review
activity is determined by the skin test (method «in vivo») in patients, sensitive to a specific allergen. However, this method does not demonstrate quantitative allergenic activity of the drug. At present, the «in vitro» method, based on ELISA is introduced to assess the identity of domestic allergens, instead of «in vivo» (skin test) method. This method was developed in 2011 in the laboratory of allergens (State Scientific-Research Institute for Standardization and Control of Medicinal Immunobiological Products named after L.A. Tarasevich). Standardization of domestic allergen preparations in units of allergenic activity, the use of modern «in vitro» methods for the assessment of their identity and allergenic activity are essential conditions that assure quality of products, safety and efficacy of their application. Key words: allergens, expert evaluation, quality, standardization, allergenic activity, specific activity, activity units, identity, standard preparation.
Bibliographic description: Radunskaya S.F., Lavrenchik E.I., Nevskaya L.V., Mosyagin V.D., Ivanov V.B. Problems associated with assessment of identity and specific activity of allergen preparations // Biopreparation (Biopharmaceuticals). 2013. № 2. P. 14-17.
Для корреспонденции:
Мосягин В.Д. - начальник управления экспертизы аллергенов, цитокинов и других иммуномодуляторов Центра экспертизы и контроля МИБП ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России.
Адрес: ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России,
119002, Москва, пер. Сивцев Вражек, 41 e-mail: vdmosjagin@yandex.ru
Статья поступила 11.04.2013 г, принята к печати 22.05.2013 г
С середины прошлого века по настоящее время во всем мире наблюдается неуклонный рост атопических болезней (бронхиальная астма, поллинозы, аллергический ринит, крапивница, отек Квинке, аллергический конъюнктивит и др.), патогенетическую основу которых составляют 1дЕ-опосредованные аллергические реакции [5, 10]. В диагностике и последующей терапии этих заболеваний важнейшее значение имеет наличие качественных препаратов аллергенов [20].
Препараты аллергенов являются иммунобиологическими лекарственными препаратами, содержащими аллергенный экстракт, получаемый из материалов природного происхождения или с помощью ДНК-технологии. Аллергенные экстракты состоят из протеинов и гликопротеинов, содержат основные и второстепенные аллергены, а также и неаллергенные компоненты [1, 2].
Препараты аллергенов для диагностики и лечения аллергических заболеваний используются в мировой практике более 100 лет. Многочисленные двойные слепые плацебо-контролируемые исследования с использованием водных аллергенов и аллергоидов показали их эффективность [7, 9, 14].
Производственный выпуск аллергенов в России осуществляется с 1967 года. В настоящее время выпуск аллергенов осуществляют ФГУП «НПО «Микроген» Минздрава России (пыльцевые аллергены и аллергоиды) и ОАО «Биомед» им. И.И. Мечникова (бытовые, эпидермальные и пищевые аллергены). Для отечественных аллергенов характерны традиционные водно-солевые инъекционные формы и аллергоиды - модифицированные аллергены, обработанные формальдегидом. К концу 2012 г. в Российской Федерации зарегистрировано 68 отечественных препаратов аллергенов и аллергоидов. Аллергоиды, конъюгированные с иммуномодулятором полиоксидонием, - аллерготропины
(разработка ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России) прошли клинические исследования и находятся на стадии подготовки документации к регистрации [4].
Аллергены иностранных производителей выпускаются как в водно-солевых формах, так и депонированных на различных носителях (гидроокись алюминия, фосфат кальция), в виде капель и таблеток для пе-роральной терапии. Отдельно выпускаются диагностические аллергены для проведения кожных тестов. В настоящее время в Российской Федерации зарегистрировано 20 препаратов зарубежных производств («СеваФарма» а.о., Чешская республика, АО «Сталлер-жен» , Франция, «Лофарма С.п.А», Италия).
Одной из важнейших мер по обеспечению качества выпускаемых препаратов аллергенов является их стандартизация. Стандартизация позволяет производителю гарантировать стабильность аллергенной активности препарата и ее соответствие указанным дозам, от этого в конечном итоге будет зависеть эффективность специфической иммунопрофилактики [12, 20].
В соответствии с требованиями регуляторных органов ряда стран, позицией ВОЗ, Комитета по стандартизации аллергенов при международном Союзе иммунологических обществ, основных производителей и исследователей препараты аллергенов должны стандартизоваться по суммарной аллергенной активности, содержанию главных аллергенов [11, 13, 18, 19].
Для стандартизации аллергенов зарубежные производители используют различные единицы. Например, в США применяется биоэквивалентная аллергенная единица BAU, в европейских странах - биологические единицы BU, международная единица IU, индекс реактивности IR и др. [18-20]. Все указанные единицы стандартизации отражают степень суммарной аллергенной активности препаратов.
С5
ПРЕПАРАТЫ
Для количественной калибрации активности аллергенов большинство зарубежных производителей применяют методы in vitro, определяющие IgE-ответ например, ИФА-ингибирование. Особенностью этих методик является наличие в них этапа инкубации разных концентраций исследуемого аллергена со специфичной к нему сывороткой крови, содержащей высокую концентрацию IgE-антител. Истощенную сыворотку затем наносят на сорбированный аллерген. При учете реакции интенсивность окрашивания будет обратно пропорциональна концентрации аллергена, инкубированного с сывороткой [11-13]. Аллергенную активность исследуемого аллергена выражают в условных единицах, вычисляемых относительно международного эталона или внутреннего референсного препарата (стандартного препарата). Использование стандартного препарата является одним из необходимых условий обеспечения выпуска производителем качественного препарата [13, 17, 18, 20].
Стандартный препарат аллергена должен быть охарактеризован по антигенному и аллергенному профилям, содержанию главных аллергенов при помощи методов, таких как изоэлектрическое фокусирование, гель-электрофорез, IgE-иммуноблотинг, перекрестный радиоиммуноэлектрофорез, радиоаллергосорбент-ный тест (РАСТ) и др. Уровень аллергенной активности стандартных препаратов устанавливают исключительно в тестах in vivo с помощью кожных проб (прик-тест), назальных или иных тестов. Активность стандартных препаратов должна быть подтверждена иммунологическими методами [8, 13, 15, 16].
Препараты аллергенов, выпускаемые отечественными производителями, стандартизуются по содержанию единиц белкового азота PNU в определенном объеме экстракта аллергена. Однако данный показатель, характеризующий количественно содержание белка в аллергенном материале (1 PNU равна 0,00001 мг белкового азота в 1 мл), не отражает точную информацию о специфической активности и потенциальной терапевтической эффективности препарата. Белки, содержащиеся в аллергенном материале, могут иметь различную природу и свойства. На величину азотометрического показателя PNU могут влиять биологически инертные белки и неспецифические аллергены [2]. Отсутствие информации о специфической активности препарата создает сложности в подборе его доз при проведении специфической иммунотерапии, затрудняет прогнозирование реакции пациента и эффективности терапии.
Специфическая активность отечественных препаратов аллергенов устанавливается по результатам кожного тестирования (метод in vivo) с учетом гиста-минового эквивалента на пациентах, в анамнезе которых есть указания на аллергические заболевания и у которых ранее подтверждены положительные кожные пробы с контролируемым наименованием аллергена. При этом аллергены должны вызывать положительную кожную реакцию у таких лиц и не вызывать ее у лиц контрольной группы (не сенсибилизированных пациентов). Однако метод оценки специфической активности препаратов путем постановки кожных проб не всегда применим. Так, оценка с помощью кожных проб специфической активности депонированных
аллергенов невозможна из-за того, что в их состав входит гидроокись алюминия или фосфат кальция. В соответствии с действующим законодательством в обращение не допускаются незарегистрированные лекарственные средства [6]. Исходя из этого, на этапе регистрации новых препаратов аллергенов, новых комбинаций аллергенов, препаратов, произведенных в других лекарственных формах, в новой дозировке воспроизведение методики оценки специфической активности образцов указанных препаратов путем кожных проб практически не возможна. Кроме того, данный метод не позволяет количественно оценить специфическую активность препарата, определение объема реакции не является до настоящего времени общепринятым и стандартизованным.
Другим важным методом оценки качества препаратов аллергенов является определение их подлинности. В Европейской Фармакопее и рекомендациях ВОЗ не указываются конкретные методики оценки данного показателя. На выбор производителей предлагается целый ряд лабораторных методов: изоэлектрофокусирование, электрофорез, иммуноблотинг, ИФА, РАСТ и др. [13, 20].
Для отечественных аллергенов показатель «Подлинность» до настоящего времени отдельно не определялся, в нормативной документации давалась только ссылка на специфическую активность препарата. С конца 2012 года в нормативную документацию препаратов аллергенов производства ФГУП «НПО «Микроген» Минздрава России вносятся изменения - для оценки подлинности аллергенов вводится метод in vitro на основе ИФА. Данный метод для оценки подлинности отечественных аллергенов был разработан в 2011 г. в лаборатории аллергенов ГИСК им. Л.А. Тарасевича [3].
Заключение
Использование в клинической практике аллергенов, стандартизованных в единицах аллергенной активности, рекомендовано ВОЗ и регуляторными органами ряда стран [11, 17, 19, 20]. Стандартизация препаратов аллергенов имеет важнейшее значение для улучшения их качества, гарантирует константность аллергенной активности препаратов, ее соответствие указанным дозам.
Отечественная технология получения и стандартизации аллергенов должна быть приведена в соответствие с современным мировым уровнем. Необходим переход с методов in vivo (кожное тестирование) на современные методы in vitro при оценке качества препаратов аллергенов по показателям «Подлинность» и «Специфическая активность». Для количественной калибровки специфической активности препаратов аллергенов отечественные производства должны располагать банком стандартных препаратов из международных эталонов и/или внутренних референсных препаратов, охарактеризованных по биологической активности методами in vivo, такими как кожные пробы.
Выполнение данных условий позволит повысить качество выпускаемых препаратов аллергенов, обеспечить эффективность и безопасность их применения для диагностики и лечения аллергических заболеваний.
( Обзор
Review
Литература:
1. Аллергология и иммунология / Под ред. Р.М. Хаито-
ва, Н.И. Ильиной. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. 656 с.
2. Медуницын Н.В. Вакцинология. 3-е изд., перераб. и
доп. М.: Триада-Х, 2010. 512 с.
3. Оценка подлинности аллергенов методом иммуно-
ферментного анализа (ИФА): методические рекомендации. М.: ФГБУ «ГИСК им. Л.А. Тарасевича» Минздравсоцразвития России, 2011. 18 с.
4. Петров Р.В., Хаитов Р.М., Федосеева В.Н. и др. Раз-
работка пыльцевых аллерговакцин (аллерготропи-нов) // Аллергия, астма и клиническая иммунология. 2003. Т. 7, № 9. С. 9-14.
5. Пыцкий В.И., Адрианова Н.В., Артомасова А.В. Ал-
лергические заболевания. 3-е изд., перераб. и доп. М.: Триада-Х, 1999. 470 с.
6. Федеральный закон от 12.04.2010 № 61-ФЗ «Об об-
ращении лекарственных средств».
7. Calderon M.A., Alves B., Jacobson M., Hurwitz B.,
Sheikh A., Durham S. Allergen injection immunotherapy for seasonal allergic rhinitis // Cochrane Database Syst. Rev. 2007. Jan. 24 (1). CD001936.
8. Chapman M.D., Ferreira F., Villalba M., Cromwell O., et
al. The European Union CREATE Project: a model for international standardization of allergy diagnostics and vaccines // J. Allergy Clin Immunol. 2008. V. 122, N 5. P. 882-889.
9. Colas C., Monzon S., Venturini M., Lezaun A. Double-
blind, placebo-controlled study with a modified therapeutic vaccine of Salsola kali (Russian thistle) administered through use of a cluster schedule // J. Allergy Clin Immunol. 2006. V. 117, N 4. P. 810-816.
10. Crameri R. Allergy vaccines: dreams and reality // Expert Rev Vaccines. 2007. N 6(6). P. 991-999.
11. Dreborg S., Frew A. Allergen standardization and skin tests. EAACI Position Paper //Allergy. 1993. V. 48, Suppl. 14. P. 49-82.
12. European Formulary of Allergen Extract / Ed. by D. Gelis. Gelis’s Sci. Publ. Corinth. 1995. 175 p.
13. European Pharmacopoeia 7.0 01/2010:1063 Allergen product.
14. Garcia-Robaina J.C., Sanchez I., de la Torre F., Fernandez-Caldas E., Casanovas M. Successful management of mite-allergic asthma with modified extracts of Dermatophagoides pteronyssinus and Dermatophagoides farinae in a double-blind, placebocontrolled study // J. Allergy Clin Immunol. 2006. V. 118, N 5. P. 1026-1032.
15. Gleich G., Larson I., Jones R., Baer H. Measurement of the potency of allergy extracts by their inhibitory capacities in the radioallergosorbent test // J. Allergy Clin Allergol. 1974. V. 53. P. 158-169.
16. Nelson H.S. The use of standardized extracts in allergen immunotherapy // J. Allergy Clin Immunol. 2000. V.106. P. 41-45.
17. Norman P.S. WHO-IUIS International standards: advantages of these extracts// Regulatory control and standartization of allergenic extracts / Ed. by Kurth R., Haustein D. (Seventh international Paul Ehrlich seminar). Stuttgart: Gustav Fisher Verlag, 1994. P. 59-64.
18. Ree R. van, Chapman M.D., Ferreira F., Vieths S., Bryan D., Cromwell O., et al. The CREATE project: development of certified reference materials for allergenic products and validation of methods for their quantification // Allergy. 2008. V. 63, N 3. P. 310-326.
19. The use of standardized allergen extracts. Position Statement. American Academy of Allergy, Asthma and Immunology (AAAAI) // J. Allergy Clin Immunol. 1997. V. 99. P. 583-586.
20. WHO position paper. Allergen immunotherapy: therapeutic vaccines for allergic diseases // Allergy. 1998. V.53, Suppl. № 44. P. 1-42.
O7
