CC BY
3
9. Шумская И. И. // Токсикология новых промышленных химических веществ. — М., 1969. — Вып. 11. — С. 39— 47.
10. Мапвоп М. // ВгЦ. 37. — Р. 317—366.
Л. таиэ! Мес1. — 1980
Уо1
Поступила 26.01.88
УДК 57.082.25:[612.112.91.015.3:577.121.7
Е. А. Венглинская, А. П. Парахонский
ПРИМЕНЕНИЕ ЦИТОХИМИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ДЛЯ ОЦЕНКИ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ
Кубанский медицинский институт, Краснодар
Содержание животных в условиях вивария может приводить к значительным изменениям их реактивности, возникновению ряда заболеваний, часть из которых протекает в скрытой форме [7, 10]. Надежным критерием для лабораторного контроля качества животных является оценка их резистентности [1, 9], в том числе путем выявления неспецифического симптомокомплекса, проявляющегося эффектом лабилизации наружных и лизосомальных мембран лейкоцитов и приводящего к нарушению жизнедеятельности клетки
[3, 5].
Таблица 1
Нормативные интралейкоцитарные цитохимические показатели здоровых лабораторных животных {М ± т)
Показа-
Возраст тели, усл. ед. Зима Весна Лето Осень
Белые крысы-самцы (п = 986) Период полового созревания
1 МП 225+4 200±3 230+2 215+3
КБ 80+1 70±2 100+2 75+1
ГЛ 34+2 20+2 40+1 30+1
2 МП 222+3 210+1 240+1 219+2
КБ 101+2 80+2 125+1 83+1
ГЛ 45+1 35+2 55+3 47+1
Репродуктивный период
3
4
МП
КБ
ГЛ
МП
КБ
ГЛ
222+2 103+2
235 ±4 122+2 74 ±2
216+3 80±3 36+3 207+2 90+1 60+1
235±2 135 ±4 60+2 255+ 1 140+3 82+3
220±3
84+1
45+4
84+2 80+1
Кролики (п = 153) Репродуктивный период
3 МП 213+4 194+5 225+2
КБ 280+2 230+1 300+3
ГЛ 72+1 54±2 854-4
4 МП 245+5 173+4 2054-5
КБ 291+4 169±2 310+3
ГЛ 80+3 60±1 95+2
215+4 276+4 64+3
295+1 85+3
Примечание. Возрастные периоды по [7]; 1, 2, 3, 4 — возраст животных: инфантильный, ювенильный, молодой, зрелый соответственно.
Эти наблюдения послужили основанием для разработки способа оценки резистентности организма, основанного на учете индивидуальных количественных отклонений показателей энергетической и бактерицидной систем нейтрофилов крови от конкретного числового выражения нор- ^ мы. Изменения значимы (р<0,001), если откло- -нения от нормы составляют не менее 30 %, т. е. достоверно выходят за пределы размаха физиологических колебаний. Животные с такими показателями составляют группу риска и выбраковываются.
Наблюдения проведены в течение 12 мес на 986 неинбредных белых крысах-самцах различных возрастных периодов и 153 половозрелых кроликах породы шиншилла. Кровь для исследования брали утром до кормления у крыс из хвостовой, а у кроликов из краевой вены уха. Функциональную активность лейкоцитов оценивали по тесту с нитротетразолиевым синим (НСТ-тест) с учетом завершенности фагоцитоза [5, 6]. Содержание гликогена (ГЛ) и свободного лизосомального бактерицидного катионного белка (КБ) определяли люминесцентно-цитохимическими методами [2, 12], активность миелопероксидазы (МП) выявляли бензидиновым способом [5]. Моделирова- , ние у кроликов артрита различной этиологии про-изводили методом [3]. Проведены также морфо-логические, а у кроликов и рентгенологические исследования. Статистическую обработку данных осуществляли с использованием программируе-
Таблица 2
Содержание и активность компонентов бактерицидной и энергетической систем лейкоцитов крови белых крыс-самцов
Показатели, Центили
усл. ед. рэ Р,о Р2Б Рьо Р7Ь Рэо Р 97
МП КБ ГЛ 150 65 20 ОНП 180 70 26 НП 216 82 30 ПНН 222 90 36 Н 230 103 45 ПВН 270 150 60 ВП 290 201 75 ОВП
П римечание. Расчет центилей [8]. Р50 принят за норму с физиологическими колебаниями Р2Б и Р75. ОНП — очень низкий показатель; НП — низкий показатель; ПНН — показатель ниже нормы; Н — норма; ПВН — показатель выше нормы; ВП — высокий показатель; ОВП — очень вы-
сокий показатель.
Я
Таблица 3
Показатели метаболической и фагоцитарной активности лейкоцитов
1*1 Животные
Показатели здоровые группа риска
ФЧ ) 2,80±0,10 '1,00-1-0,01
ИП \ усл. ед 2,10±0,20 0,71 ±0,02
ИТФ J - 0,4
НСТ-ПЛ, % 12,0=ьЗ,0 42,0=t2,0
Примечание. ФЧ—фагоцитарное число, ИП—индекс переваривания, ИТФ—индекс торможения фагоцитоза. Фагоцитоз подавлен при ИТФ<0,8[3]. НСТ-ПЛ—НСТ-позитивные лейкоциты.
мого микрокалькулятора [И]. Для оценки состояния организма широко используется метод сравнения с физиологической нормой различных параметров, при этом значительные отклонения от нормы служат важным показателем повышенного риска заболевания [13—15].
Нормативные показатели исследуемых компонентов приведены в табл. 1.
У здоровых животных изученные показатели являются относительно жесткими константами, подверженными сезонным и возрастным изменениям [5].
При определении кондиционности 500 половозрелых неинбредных крыс-самцов, отобранных для хронического эксперимента, установлено, что у 20 % из них показатели не соответствовали физиологической возрастной и сезонной норме (табл. 2). Математический анализ полученных результатов позволил выделить животных с измененными параметрами в группу повышенного риска.
Углубленные исследования у животных этой группы (я=100) выявили следующие изменения: достоверное (р<0,001) снижение способности лейкоцитов завершать фагоцитоз, сочетающееся с увеличением метаболической активности (табл. 3). Данные изменения, очевидно, лежат в основе угнетения защитного потенциала лейкоцитов и снижения противоинфекционной резистентности организма [3, 6, 16]. Выявленный дисбаланс м.ежду количеством активных лейкоцитов и их способностью к завершенному фагоцитозу является ранним показателем срыва механизмов противоинфекционной резистентности и изменения физиологической реактивности организма [3, 4, 6].
На вскрытии у животных группы риска обнаружены изменения в легких, печени, кишечнике,
селезенке, характерные для начального периода развития воспалительного процесса. Обращало на себя внимание то, что клинически выраженных признаков заболевания у животных не обнаружено.
Иммуноцитохимические, морфологические, рентгенологические исследования, проведенные на 103 кроликах с асептическим, инфекционным или аллергическим артритом, показали, что изменения в энергетической и бактерицидной системах лейкоцитов крови обнаруживаются до появления клинических признаков артрита. Проведенное исследование подтвердило сигнальное значение и надежность рекомендуемых алгоритмов для выявления животных группы риска и их выбраковки.
• 9 *
Литература
1. Авербах М. М., Мороз А. М., Апт А. СНиколенко В. К. Иммуногенетика инфекционных заболеваний. — М., 1985.
2. Венглинская Е. А., Рукавцов Б. И., Шубич М. Г. // Лаб. дело. — 1976. — № 5. — С. 270—273.
3. Венглинская Е. А. Естественный иммунитет при аллергическом воспалении: Экспериментальное исследование: Автореф. дис. ... д-ра мед. наук. — М., 1980.
4. Венглинская Е. А., Бжассо К. М., Бжассо Э. Ш. // Вопр. ревмат. — 1981. — № 2. — С. 33—35.
5. Венглинская Е. А., Бжассо К. И., Мажара Н. Ф. Цитохимические исследования нейтрофилов в клинике детских болезней: Метод. рекомендации. — Краснодар, 1985.
6. Дуглас С. Д., Куи П. Г. Исследование фагоцитоза в клинической практике:" Пер. с англ. — М., 1983.
7. Западшок И. П., Западнюк В. И., Захария Е. А., За-паднюк В. В. Лабораторные животные: Разведение, содержание, использование в эксперименте. — Киев,
1983.
8. Сепетлиев Д. Статистические методы в научных медицинских исследованиях: Пер. с болг.—М., 1968.
9. Сиоотинин Н. И. Эволюция резистентности и реактивности организма. — М., 1981.
10. Трахтенберг И. М., Сова Р. Е., Шефтель В. О., Оники-енко Ф. А. Показатели нормы у лабораторных животных в токсикологическом эксперименте. — М., 1978.
11. Францевич Л. И. Обработка результатов биологических экспериментов на микроЭВМ «Электроника БЗ-21». — Киев, 1980.
12. Хачатуров Е. И., Смирнова Е. А. //Изв. АН СССР: Сер. биол. — 1966. — № 9. — С. 900—905.
13. Collins Р. Р. // Amer. J. med. Technol: — 1975. — Vol. 41. —Р. 175—179.
14. Eistain Е. L., Holland T. A., Haessler Н\ А. //Annual Conference of English and Biology, 27th: Proceedings. — Philadelphia, 1974.— Vol. 16. — P. 82—85.
15. Kramer M. // Methode in information Medicine. — Berlin, 1975. — P. 124—129.
16. Peil /.//Verallgemeinerungen gegenbauers Morphol. Jahrb. — 1974. — Bd 126. — S. 832—853.
Поступила 17.07.87
- *• * i ' Я • i JM * i w~f
?
