CC BY
79
УДК 619:616-07:616.981.42:636.22/28
ПРИМЕНЕНИЕ РОЗ-БЕНГАЛ ПРОБЫ
ПРИ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ПОСТВАКЦИНАЛЬНОй
ДИАГНОСТИКЕ БРУЦЕЛЛЕЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Л.В. ДЕГТЯРЕНКО1, доктор ветеринарных наук, зав. сектором
О.Д. СКЛЯРОВ2, доктор ветеринарных наук, зав. отделом
И.Н. КАЛИКИН3, кандидат ветеринарных наук, директор
1Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных, ул. Лермонтова, 93, Омск, 644001, Россия
2Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов, Звенигородское шоссе, 5, Москва, 123022, Россия
3БУОО «Омская областная ветеринарная лаборатория», ул. 10 лет Октября, 203А, Омск, 644031, Россия
E-mail: vniibtg@rambler.ru
Резюме. При обследовании на бруцеллез крупного рогатого скота из благополучныххозяйств, иммунизированного вакциной из штамма B. abortus 82, определены показатели роз-бенгал пробы (РБП) с оценкой три креста лишь у 14-и гол. (0,1%). Отрицательные показатели реакции иммунодиффузии (РИД), отсутствие положительно реагирующих животных в высоких титрах реакции агглютинации (РА), реакции связывания комплемента (РСК), реакции непрямой агглютинации (РНГА), наличие в сыворотке крови у 100,0% коров с низкими титрами S-бруцеллезных ком-плементсвязывающихантител свидетельствовало о благополучии хозяйств по бруцеллезу. Через 2, 3, 4, 5 мес. после вакцинации РБП с оценкой три креста не регистрировали. Во всех неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах показатели РБП с оценкой три креста отмечены у 42,9% от общего количества реагировавших животных. Наиболее высокую чувствительность при диагностике больных бруцеллезом животных наблюдали при использовании РНГА - 70,5% реагирующих, на втором месте - РБП с оценкой три креста - 52,4%. Достоверность показаний РБП подтверждена их совпадением с комплексом РА+РСК+РНГА в высоких титрах и РИД. Значительное различие в качественном проявлении РБП у здоровых иммунизированных вакциной из штамма 82 и больных бруцеллезом животных позволяет использовать ее как дифференцирующий тест при проведении контроля эпизоотической обстановки по бруцеллезу и оздоровительных мероприятий через 2 мес. и в последующие сроки после иммунизации. Ключевые слова: роз бенгал проба, экспресс-тесты, бруцеллез, штамм B.abortus 82
Для цитирования: Дегтяренко Л.В., Скляров О.Д., Каликин И.Н. Применение роз бенгал-пробы при дифференциальной поствакцинальной диагностике бруцеллеза крупного рогатого скота // Достижения науки и техники АПК. 2015. Т.29. №4. С. 67-69.
В ветеринарной практике из-за необходимости массовой диагностики животных на бруцеллезную и нфекци ю предпочтительно применение экспресс-методов, доступных по цене, простых в исполнении, обеспечивающих объективную постановку диагноза и максимальное выявление эпизоотически опасных животных.
Вместе с тем, широкое применение в системе про-тивобруцеллезных мероприятий слабоагглютиногенной вакцины из штамма В. abortus82 диктует необходимость проведения дифференциальной диагностики вакцинированных и больных бруцеллезом животных [1].
В РФ для диагностики бруцеллеза у непривитых вакцинами против этого заболевания крупного рогатого скота, овец, свиней, оленей используют роз-бенгал пробу (РБП), диагностическая ценность которой подтверждена многими исследователями [2, 3, 4 и др.].
С целью повышения чувствительности реакции проводятся исследования по разработке новых технологий приготовления антигена для РБП [5, 6].
Однако при диагностике бруцеллеза крупного рогатого скота РБП используют, в основном, при рекогносцировочных исследованиях в комплексе с реакцией агглютинации (РА) и реакцией связывания комплемента (РСК) [7].
Вместе с тем в доступных источниках литературы мы не обнаружили сведений о степени выраженности РБП при исследовании сыворотки крови крупного рогатого скота и овец в естественных очагах бруцеллезной инфекции, а также о возможности использования этого экспресс-теста для дифференциальной диагностики бруцеллеза в стадах крупного рогатого скота, иммунизированного вакциной из штамма В. abortus 82.
Цель наших исследований - изучение возможности и целесообразности применения РБП при обследовании крупного рогатого скота, иммунизированного вакциной из штамма B. abortus 82.
Условия, материалы и методы. Изучение диагностической значимости и характера проявления РБП в сравнительном аспекте с РА, РСК и реакцией иммунодиффузии (РИД) проводили при обследовании 505 гол. непривитого противобруцеллезными вакцинами крупного рогатого скота и 448 гол. овец частного сектора из пяти районов Омской области, в которых произошли острые вспышки бруцеллезной инфекции.
При этом РА и РСК с единым бруцеллезным антигеном, РИД с ОПС-антигеном ставили по общепринятым методикам. При постановке РБП степень выраженности реакции оценивали в крестах: от одного до трех.
Изучение диагностической значимости проводили при обследовании 10855 гол. крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма В. abortus 82, из пятнадцати благополучных по бруцеллезу хозяйств и 30227 животных из шести неблагополучных пунктов Омской области в разные сроки после иммунизации, в том числе и ранние - 2, 3, 4 и 5 мес.
Наличие R-бруцеллезных антител в сыворотке крови иммунизированного крупного рогатого скота определяли в РСК с использованием R-бруцеллезного антигена ВНИИБТЖ [8].
При исследовании сыворотки крови крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма B. abortus 82, дополнительно к РА, РСК и РИД применяли реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА).
В неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах, наряду с испытанием РБП, проводили оздоровление крупного рогатого скота от инфекции. При этом по разработанной ранее схеме дифференциальной оценки больными бруцеллезом, которые подлежали удалению из стада, считали особей, реагировавших в высоких титрах РА (200 МЕ и выше), РСК (1:20 и выше), РНГА (1:400 и выше) и РИД.
Животных, реагирующих только в низких титрах с единым антигеном РА (50-100 МЕ) и РСК (1:5-1:10), относили к больным или здоровым по результатам постановки РСК с R-бруцеллезным антигеном ВНИИБТЖ. При этом нереаги-рующих с R-антигеном в РСК считали больными и удаляли из стада, а имеющих R-комплементсвязывающие антитела в сыворотке крови оставляли для воспроизводства.
Таблица 1. результаты серологических исследований сыворотки крови крупного рогатого скота в
неблагополучных по бруцеллезу гуртах
Название района, хозяйства Число проб Реагировали положительно Совпали показатели РБП с:
РА+РСК+ РИД+РБП РБП РА РСК РИД РА РСК РИД
всего I + ++ +++
Щербакульский, с. Чадск 179 20 16 1 2 13 6 19 8 6 16 8
Исилькульский, ОПХ «Боевое» 326 73 51 4 17 30 35 62 32 27 32 24
Итого* 505 93 67 5 19 43 41 81 40 33 48 32
18,4 13,3 1,0 3,8 8,5 8,1 16,0 7,9 49,3 71,6 47,8
*в числителе - абсолютное число; в знаменателе - проценты.
результаты и обсуждения. При исследовании сыворотки крови крупного рогатого скота в естественных очагах бруцеллезной инфекции наиболее высокой диагностической ценностью отличалась РСК, чувствительность РБП была ниже на 2,7% (табл. 1), РА и РИД - в 2 раза. Необходимо отметить, что из общего числа реагировавших в РБП диагностическую оценку реакции на три креста имело наибольшее количество животных - 64,2%, два креста - 28,3%, оценку на один крест регистрировали лишь у 7,4%. Самую высокую степень совпадения позитивных показателей обнаружили у РБП и РСК - 71,6%.
При исследовании сыворотки крови овец неблагополучных по бруцеллезу отар наиболее высокую чувствительность продемонстрировала РБП - 26,8% реагировавших, РСК уступала ей на 0,7% (табл. 2). Как и при бруцеллезе крупного рогатого скота среди овец, реагирующих в РБП, преобладали особи с диагностической оценкой реакции на три креста - 66,6%, выраженность РБП на два креста имели 21,0%, РБП с оценкой один крест регистрировали у 11,6% животных. Наиболее высокую степень совпадений позитивных показателей при обследовании неблагополучных по бруцеллезу отар овец РБП имела с РСК - из 120 реагировавших в РБП животных в 80,0% случаев диагностировали комплементсвязывающие антитела.
Совпадение показателей РБП и РСК при обследовании овец и крупного рогатого скота на бруцеллез, по нашему мнению, можно объяснить участием в этих реакциях одних и тех же классов и подклассов иммуноглобулинов - IgM и IgG1.
Достоверность показаний РБП подтверждает высокий процент совпадений ее результатов и положительных реакций в РИД.
Диагностическая ценность РБП при обследовании неблагополучных по бруцеллезу отар проявилась в способности выявлять больных животных дополнительно к показаниям РА, РСК и РИД - 15 гол., или 3,3% от общего количества обследованных овец.
При обследовании 10855 гол. крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма B. abortus 82, из благополучных по бруцеллезу хозяйств, агглютинины и гемагглютинины определяли в сыворотке крови в низких диагностических титрах соответственно у 17 (0,2%) и 42 (0,4%) животных.
S-комплементсвязывающие антитела в титре 1:51:10 диагностировали в разные сроки после иммунизации, в том числе ранние, у 444 гол. (4,1%).
Отрицательные показатели РИД, как и отсутствие положительно реагирующих в высоких титрах РА, РСК, РНГА, свидетельствовали о благополучии хозяйств по бруцеллезу.
В сыворотке крови 100,0% животных с наличием S-бруцеллезных антител к единому антигену в РСК диагностировали R-бруцеллезные антитела с помощью R-бруцеллезного антигена ВНИИБТЖ, в связи с чем, серопозитивные реакции по итогам дифференциации мы отнесли к поствакцинальным.
Анализ данных, полученных при исследовании сыворотки крови в РБП, показал, что на введение вакцины из штамма B. abortus 82 в тесте реагирует довольно значительное количество животных - 304 гол. (2,8%). Из них больше всего было с оценкой один крест - 166 гол., два креста отмечены у 124 гол. На три креста РБП оценена только в 14 случаях (0,1%) Причем всех животных, реагировавших на три креста, диагностировали в оздоровленных ранее от бруцеллеза хозяйствах: СПК «Нива» Павлоградского района и СПК «Комсомольский» Одесского района.
Следует подчеркнуть, что в ранние сроки после иммунизации вакциной из штамма B. abortus 82 (2, 3, 4 и 5 мес.) реакции в РБП с оценкой три креста не отмечали.
Из 444 особей, реагировавших в РСК с единым бруцеллезным антигеном, в сыворотке крови 225 гол. (50,7%) обнаруживали агглютинины в РБП с оценкой на один и два креста, а также R-комплементсвязывающие антитела, то есть реакции носили поствакцинальный характер.
Изучение диагностической ценности РБП в сравнительном аспекте с другими тестами при обследовании крупного рогатого скота неблагополучных по бруцеллезу хозяйств показало, что из общего количества животных с серопози-тивными показателями в РБП (1491 гол.) оценку реакции на три креста имели 640 гол., или 42,9%.
Наибольшее количество положительно реагирующих регистрировали в РСК - 2226 гол. (7,3% от обследованного поголовья), с помощью РНГА диагностировали в 1,9 раза меньше животных (1138 гол.), позитивные показатели РА и РИД были равнозначны - 483 гол. (1,6%).
В результате дифференциации серопозитивных реакций у 2697 животных, диагностированных комплексом РА+РСК+РНГА+РБП+РИД по разработанным нами крите-
Таблица 2. результаты серологических исследований сыворотки крови мелкого рогатого скота в неблагополучных по бруцеллезу отарах
Название хозяйства, района, Число проб Реагировали положительно Совпали показатели РБП с:
РА+РСК+ РИД+РБП РБП РА РСК РИД РА РСК РИД
всего | + | ++ +++
Щербакульский, с. Чадск 263 61 54 5 10 39 23 53 38 17 38 32
Одесский, КЗ «Благодаровский» 104 14 20 55 10 10 12 7 10 12 7
Любинский, д.Замелетеново 81 54 46 4 11 31 38 52 45 34 46 42
Итого* 448 129 120 14 26 80 71 117 90 61 96 81
28,8 26,8 3,1 5,8 17,9 15,8 26,1 20,1 50,8 80,0 67,5
*в числителе - абсолютное число; в знаменателе - процент.
риям эпизоотической оценки животных по бруцеллезу, к больным отнесли 1220 гол. (45,2%); к здоровым, с реакцией на вакцину из штамма В. abortus 82, - 1477 гол. (54,8%).
Среди больных бруцеллезом животных (1220 гол.) больше всего реагирующих установлено с помощью РНГА - 860 гол. (70,5%), второе место по чувствительности занимала РБП с оценкой три креста - 640 гол. (52,4%). Несколько ниже, в сравнении с РБП на три креста, были показатели РСК, с помощью которой диагностировали 611 (50,1%) больных бруцеллезом животных с высокой концентрацией комплементсвязывающих антител из выявленных комплексным методом. Преципитины обнаружили в сыворотке крови только у 483 гол. (39,6%).
Агглютинины в титре 200 МЕ и выше установлены в сыворотке крови 279 (22,8%) больных бруцеллезом животных, или меньше, чем реагирующих в высокихтитрах РСК (611 гол.), в 2 раза и более. Это, на наш взгляд, связано с преобладанием хронического течения бруцеллезной инфекции на фоне иммунизации слабоагглютиногенными вакцинами.
Достоверность показаний РБП подтверждается их совпадением с результатами комплекса диагностических тестов РА+РСК+РНГА в высоких титрах и РИД. Так, из 1424 гол. крупного рогатого скота, реагировавших в РБП, в 825 случаях (57,9%) установлены агглютинины, гемагглютинины и комплементсвязывающие антитела в высоких титрах сыворотки крови, характерных для больных бруцеллезом животных.
Необходимо отметить, что из 640 животных с показателями РБП на три креста серопозитивные реакции в РА установлены у 344 гол. (53,7%), РСК - у 504 (78,7%), РНГА - у 529 гол. (82,6%). Позитивные показатели РИД с ОПС-антигеном, как одного из достоверных дифференциальных тестов, в 341 случае (70,6%) совпали у обследованных животных с РБП на три креста.
Безусловно, среди животных, у которых РБП оценена на один и два креста, в неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах могут быть больные особи. Так, из 470 гол. крупного рогатого скота, имевших в РБП оценку на два креста, в 73 случаях (15,5%) РИД с ОПС-антигеном была положительной. Однако в связи с тем, что в благополучных по бруцеллезу хозяйствах у крупного рогатого скота, иммунизированного вакциной из штамма В. abortus 82, мы также диагностированы в разные сроки после вакцинации реакции в РБП с оценкой один и два креста, определять в неблагополучных гуртах эпизоотический статус по бруцеллезу у животных, реагирующих в РБП с аналогичной оценкой, необходимо только при использовании комплекса тестов: РА, РСК, РНГА, РИД в соответствии с разработанной схемой дифференциальной диагностики.
выводы. В естественных очагах бруцеллезной инфекции среди реагирующего в РБП крупного рогатого скота оценка три креста установлена у 64,2% животных, среди овец - у 66,0%.
В благополучных по бруцеллезу хозяйствах у крупного рогатого скота, иммунизированного вакциной из штамма В. abortus 82, показатели РБП с оценкой три креста в основном не регистрируются, в неблагополучных по бруцеллезу гуртах из общего количества реагирующих в РБП диагностическую оценку три креста имели 42,9% животных.
Значительные различия в качественном проявлении РБП у здоровых, иммунизированных вакциной из штамма В. abortus 82 и больных бруцеллезом животных позволяют использовать ее в качестве дифференцирующего теста при проведении контроля эпизоотической обстановки по бруцеллезу и оздоровительных мероприятий через 2 мес. после иммунизации и в последующие сроки. При этом животных с диагностической оценкой РБП на три креста необходимо считать больными бруцеллезом.
Литература.
1. Косилов И.А. Бруцеллез сельскохозяйственных животных. Новосибирск: РПО СО РАСХН, 1992. 260 с.
2. Чернышева М.И., Объедков Г.А. Новые методы диагностики зоонозных инфекций. Минск: Ураджай, 1982. С. 120-122.
3. Гандара Б., Желудков М.М., Чернышева М.И. Оценка эффективности методов лабораторной диагностики бруцеллеза //ЖМЭИ. 1994. № 4. С. 55-59.
4. Erganis O. et al. Comparison of rose bengal plate test antigens prepared from Brucella abortus, Brucella melitensis and Brucella suis // Bul.veter.Inst. in Pulawy. 2005. V.49. №2. P. 165-167.
5. Патент 2163141 РФ, МПК G01N33/569. Способ изготовления бруцеллезного антигена для роз-бенгал пробы (РБП) /Н.В. Мельник, Н.Д. Скичко, Н.И. Зенов, А.С. Тройнин, О.С. Алкеева , А.В. Каськов; заявитель и патентообладатель: Н.В. Мельник, Н.Д. Скичко, Н.И. Зенов, А.С. Тройнин, О.С. Алкеева, А.В. Каськов. № 2000119188/13; заявл. 20.07.2000; опубл. 20.02.2001.
6. Патент 2488119 РФ, МПК G01N33/531. Способ получения бруцеллезного антигена для роз-бенгал пробы (РБП)/ Л.В. Дегтяренко, И.Н. Каликин, О.Д. Скляров; заявитель и патентообладатель: Всерос. науч.ин-тбруцеллеза и туберкулеза животных. № 2011140308/10; заявл. 04.10.2011; опубл. 20.07.2013, Бюл. № 20
7. Наставление по диагностике бруцеллеза животных (утв. Департаментом ветеринарии Минсельхоза России 29.09.2003 г.). М.: ООП ФГУП «ВО Минсельхоза России», 2004. 63 с.
8. Дегтяренко Л.В., Косилов И.А. Испытание R и RS-антигенов РСК-РДСК на животных после применения вакцины из штамма B. abortus 82 // Профилактика заболеваний сельскохозяйственных животных в Сибири и на Дальнем Востоке. Новосибирск: РПО СО ВАСХНИЛ, 1978. С. 58-62.
THE uSE OF ROSE-BENGAL TEST IN THE DIFFERENTIAL POSTVACCINAL DIAGNOSTICS
OF CATTLE BRuCELLOSIS
L.V. Degtyarenko1, O.D. Sklyarov2, I.N. Kalikin3
'All-Russian Research Institute of Brucellosis and Tuberculosis of Animals, Lermontova str., 93, Omsk, 644001, Russia 2All-Russian State Center of Quality and Standardization of Medicines for Animals and Feed, Zvenigorodsky highway, 5, Moscow, 123022, Russia
3Omsk Regional Veterinary Laboratory, 10 years of October str., 203A, Omsk, 644031, Russia
Summary. The indices of Rose-Bengal Test (RBT) with rating of three crosses were determined in 14 head only (0.1 %) during the inspection of cattle from the free farms for brucellosis. The cattle were immunized with a vaccine from strain B. abortus 82. The negative indicators of immunodiffusion test (IDT), the lack of positively reacting animals in high titers of agglutination test (AT), complement fixation test (CFT), indirect hemagglutination reaction (IHR), the presence of S-brucellosis compliment-binding antibodies in the serum of 100.0 % of cows with low titers were the evidences of the well-being of farms for brucellosis. In 2, 3, 4, 5 months after vaccination RBT with rating of three crosses was not registered. Through the all problem farms the indices of RBT with rating of the three crosses were noted at 42.9 % of the total number of reacted animals. The highest sensitivity in the diagnosis of brucellosis was noted for IHR - 70.5 % reactive animals, the next was RBT with rating of three crosses - 52.4 %. The reliability of RBT was confirmed by the coincidence of its indicators with complex RA+CFT+IHR in high titers and IDT. The significant differences in the qualitative expression of RBT in healthy animals immunized with vaccine from strain 82 and ill animals make it possible to use it as a differentiating test during the control of the epizootic situation of brucellosis and sanitary activity in 2 months and subsequent periods after immunization. Keywords: Rose-Bengal test, express tests, brucellosis, strain B. abortus 82.
Author Details: L.V. Degtyarenko, Dr. Sc. (Vet.), Head of Sector (e-mail: vniibtg@rambler.ru); O.D. Sklyarov, Dr. Sc. (Vet.), Head of Division; I.N. Kalikin, Cand. Sc. (Vet.), Director
For citation: Degtyarenko L.V., Sklyarov O.D., Kalikin I.N. The use of rose-bengal test in the differential postvaccinal diagnostics of cattle brucellosis. Dostizheniya nauki i tekhniki APK. 2015. T.29. №4. pp. 67-69 (In Russ)
