CC BY
6УДК 619:616.988.5.636.2
ПРИМЕНЕНИЕ РАСТИТЕЛЬНО-ТКАНЕВОГО ПРЕПАРАТА В СОЧЕТАНИИ
С АЭРОЗОЛЕМ ЭЛЕКТРОХИМИЧЕСКОГО А КТИВИРОВАННОГО РАСТВОРА АНОЛИТА НЕЙТРАЛЬНОГО ПРИ АССОЦИАЦИИ ИНФЕКЦИЙ РЕСПИРАТОРНОГО ТРАКТА И РАНЕВЫХ ИНФЕКЦИЙ ДИСТАЛЬНОГО ОТДЕЛА КОНЕЧНОСТЕЙ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Алексеев А.Д., кандидат ветеринарных наук;
Петрова О.Г., доктор ветеринарных наук, профессор;
Барашкин М.И., доктор ветеринарных наук, профессор; Мильштейн И.М., кандидат ветеринарных наук; Москвин В.Д., аспирант; ФГБОУ ВО «Уральский государственный аграрный университет».
Одной из причин, способствующей развитию раневых инфекций дис-тального отдела конечностей у КРС, являются респираторные инфекции. Комплексная профилактика раневых инфекций дистального отдела конечностей КРС должна включать в себя обязательную профилактику респираторных инфекций.Для комплексной профилактики микстинфекции нами предложено использование ЭХА (электрохимически активированного) раствора анолита нейтрального (АНК+) в виде мелкодисперсного аэрозоля
APPLICATION OF A PLANT-TISSUE PREPARATION IN COMBINATION WITH AEROSOL OF ELECTROCHEMICAL ACTIVATED SOLUTION OF ANOLITE NEUTRAL IN ASSOCIATION OF RESPIRATORY TRACT INFECTIONS AND WOUND INFECTIONS OF THE DISTAL PART OF THE LIMBS OF CATTLE
Alekseev A.D., Candidate of Veterinary Sciences;
Petrova O.G., Doctor of Veterinary Sciences, Professor;
Barashkin M.I., Doctor of Veterinary Sciences, Professor;
Milstein I.M., Candidate of Veterinary Sciences;
Moskvin V.D., Post-graduate student; FSBEI HE «Urals state agrarian university».
Respiratory infections are one of the reasons contributingto the developmentof wound infections of the distal extremities in cattle. Comprehensive prevention of wound infections of the distal part of the extremities of cattle should include mandatory prevention of respiratory infections. For the complex prevention of mixed infections, we proposed the use of an ECA (electrochemically activated) solution of neutral anolyte (ANK +) in the form of a fine aerosol in combination with the use of a plant-tissue preparation «Vidoral», (Patent
156
в сочетании с применением растительно-тканевого препарата «Видо-рал», (Патент RU 2 625 022 C2 от 11.07.2017, правообладатель ФГБУ ВО УрГАУ) обладающего иммуномо-дулирующими свойствами.
Ключевые слова: острые респираторные инфекции крупного рогатого скота, раневые инфекции дистально-го отдела конечностей крупного рогатого скота.
RU 2 625 022 C2 dated 11.07.2017, copyright holder of FSBEI HE«Urals state agrarian university») possessing immunomodulatory properties.
Key words: Acute respiratory infections of cattle, wound infections of the distal extremities of cattle.
Введение. Респираторные инфекции крупного рогатого скота занимают в нозологической картине второе место после заболеваний пищеварительной системы и наносят огромный экономический ущерб, который в Российской Федерации по нашим оценкам составляет несколько миллиардов рублей в год. Очень часто респираторные патологии у высокопродуктивных коров осложняются раневыми инфекциями дистального отдела конечностей, к которым относятся прежде всего некробактериоз, стрептококкоз и стафилококкоз, которые также приносят хозяйствам экономические потери за счет снижения продуктивности животных и выбраковки высокопродуктивных коров.
Одной из причин, способствующей развитию раневых инфекций дисталь-ного отдела конечностей у КРС, являются респираторные инфекции. По нашим многолетним наблюдениям, все хозяйства в которых регистрировались вспышки некробактериоза были неблагополучны по респираторным инфекциям крупного рогатого скота, таким как ИРТ, ВД-БС, ПГ-3 и РСИ.
Комплексная профилактика раневых инфекций дистального отдела конечностей КРС должна включать в себя обязательную профилактику респираторных инфекций.
Для комплексной профилактики микстинфекции нами предложено использование ЭХА (электрохимически активированного) раствора анолита нейтрального (АНК+) в виде мелкодисперсного аэрозоля в сочетании с применением растительно-тканевого препарата «Видорал», (Патент RU 2 625 022 C2 от 11.07.2017, правообладатель ФГБУ ВО УрГАУ) обладающего иммуномодули-рующими свойствами.
Материал и методы исследований. Использовали эпизоотологический, клинический, бактериологический, биохимический, гематологический методы исследований.
Оценка противомикробной эффективности анолита нейтрального (АНК+) проводилась на базе ГБУСО «Свердловская областная ветеринарная лаборатория».
Для оценки противомикробной эффективности анолита нейтрально-
157
го (АНК+) использовались музейные штаммы бактериальных культур: EscherichiacoliATCC 25922, Salmonellatyphimurium, EnterococcusfaecalisATCC 29212, Proteusmirabilis № 3177, Listeriamonocytogenes, Staphylococcus-aureusATCC 6538-P, Pseudomonasaeruginosa CCM 1960.
Для получение достоверного результата лабораторные испытания проводились согласно актуальной и действующей в лаборатории нормативной документации.
Биохимические исследования проводили согласно актуальным методикам, используемым в настоящее время в ветеринарных лабораториях.
Оценка специфической эффективности растительно- тканевого иммуно-модулятора «Видорал» (патент № RU 2 625 022 от 14.07.2015 г. ФГБОУ ВО УрГАУ) была проведена в соответствии с «Правилами доклинических исследований безопасности и эффективности фармакологических веществ», «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ», методическими указаниями по определению безопасности и эффективности биологических активных добавок к пище.
Статистическую обработку цифровых данных проводили с использованием стандартных прикладных программ MiсrosoftWord и Excel, включающим подсчет средних величин (М), средней ошибки (m) среднеквадратических отклонений выборки (о) на ПК.
Результаты и обсуждение. Респираторные инфекции крупного рогатого скота занимают в нозологической картине второе место после заболеваний пищеварительной системы [1] и наносят огромный экономический ущерб, который в Российской Федерации по нашим оценкам составляет несколько миллиардов рублей в год. Очень часто респираторные патологии у высокопродуктивных коров осложняются раневыми инфекциями дистального отдела конечностей, к которым относятся прежде всего некробактериоз, стрептококкоз и стафилококкоз, которые также приносят хозяйствам экономические потери за счет снижения продуктивности животных и выбраковки высокопродуктивных коров [4,5,8].
По современным представлениям ацидоз рубца и метаболический ацидоз являются следствием кормления крупного рогатого скота преимущественно консервированными кислыми кормами, такими, как силос и сенаж [3, 5, 6, 11, 16].Многие целлюлозолитические бактерии (Ruminococcus и др.) и грибы (семейство Neocallimasticaceae) также чувствительны к подкислению среды. При угнетении их роста уменьшается целлюлазная активность содержимого рубца. Желудочно-кишечный тракт коровы перестает переваривать клетчатку, и усвоение рациона резко снижается. На следующей стадии подкисленная среда угнетает ту бактерию, которая начала этот процесс. Streptococcusbovis замещается молочнокислыми бактериями рода Lactobacillus, более устойчивыми к кислой среде (рН меньше). В таких условиях в рубце появляется опасная бактерия Fusobacteriumnecrophorum, которая может проникать через стенку рубца
158
в кровь, а также другие микроорганизмы, способные к синтезу токсинов.
Вместе с тем погрешности в кормлении не являются единственным этиологическим фактором, приводящим к ацидозу, так рядом авторов установлено, что на фоне возникновения респираторной патологии, вызванной вирусными и бактериальными агентами, у крупного рогатого скота развивается ацидоз [2,5,6,7].
Основным патологическим фактором, вызываемым острыми респираторными заболеваниями (ОРЗ) КРС инфекционной этиологии являются бронхиты, трахеиты и пневмонии. При поражении респираторного тракта в организме животных возникает гипоксия, что ведет к возникновению эндогенной интоксикации, приводящей к ацидозу рубца [2,7]. В результате ацидоза в кровь поступают сосудистоактивные вещества (эндотоксины бактерий, гистамин, лактат) [5,6,11,16],за счет одновременного расширения артериол и сжатия венул повреждается эндотелий сосудов, наблюдается перфузия из сосудов в окружающие ткани жидкости крови, нарушается кровоток в микроциркуляторном русле [16].
Немаловажную роль в нарушении циркуляции крови в мелких кровеносных сосудах играют циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК), представляющие собой комплекс «антиген-антитело». Образование ЦИК - один из факторов нормального ответа иммунитета организма на внедрение патогена. Вместе с тем, повышенная концентрация ЦИК, возникающая при большой антигенной нагрузке на организм или при нарушении механизмов элиминации ЦИК из организма, ведет к патологическим изменениям в тканях и органах животных, что обусловлено высокой биологической активностью ЦИК. Большинство ЦИК быстро удаляется из циркулирующей крови благодаря ретикулогистиоцитарной системе, которая объединяет различные гетерогенные группы клеток организма, в частности купферовские клетки, способные к активному фагоцитозу. ЦИК обладают как иммуностимулирующими, так и иммуносупрессивными свойствами. Наиболее патогенными являются ЦИК, способные активировать систему комплемента и реагировать с клетками крови, имеющими рецепторы для связывания иммуноглобулинов или комплемента. Основной механизм повреждающего действия ЦИК является комплемент- и нейтрофилозависимым. ЦИК, связанные с комплементом, проявляют хемотаксические свойства, что ведет к скоплению нейтрофилов в очагах поражения и выходу из них гидролитических ферментов, разрушающих ткани организма. Вместе с тем ЦИК могут вызывать патологию и независимо от присутствия нейтрофилов и комплемента [9]. Мелкие ЦИК могут накапливаться в различных органах и тканях, вызывать воспалительный процесс и повреждение биологических структур. Чаще иммунные комплексы откладываются в эндотелии кровеносных сосудов, почечных клубочках, суставах, что, соответственно, проявляется клиническими признаками заболевания суставов [10].
У крупного рогатого скота в первую очередь поражаются сосуды дисталь-ного отдела конечностей, что ведет к нарушению трофики кожи конечностей и копытец, развивается ламинит, при этом копытный рог слабо кератинизирован и не может противостоять агрессивным механическим и химическим факторам
159
внешней среды [11,16]. Поврежденные копытца являются воротами инфекции для возбудителей некробактериозаFusobacteriumnecrophorum, стафилококко-за Staphylococcusspp., стрептококкоза Streptococcusspp. и других патогенов [4,7,11,16]. Кроме того, благоприятные условия для развития микстинфекции создаются за счет снижения общей резистентности организма, что отмечается как при респираторной патологии, так и при патологии дистального отдела конечностей [4].
Таким образом, одной из причин, способствующей развитию раневых инфекций дистального отдела конечностей у КРС, являются респираторные инфекции. По нашим многолетним наблюдениям, все хозяйства в которых регистрировались вспышки некробактериоза были неблагополучны по респираторным инфекциям крупного рогатого скота, таким как ИРТ, ВД-БС, ПГ-3 и РСИ.
Комплексная профилактика раневых инфекций дистального отдела конечностей КРС должна включать в себя обязательную профилактику респираторных инфекций.
Для комплексной профилактики микстинфекции нами предложено использование ЭХА (электрохимически активированного) раствора анолита нейтрального (АНК+) в виде мелкодисперсного аэрозоля в сочетании с применением растительно-тканевого препарата «Видорал», (Патент RU 2625022 C2 от 11.07.2017, правообладатель ФГБУ ВО УрГАУ) обладающего иммуномодули-рующими свойствами.
Преимущество аэрозольного применения анолита нейтрального (АНК+) заключается в том, что мелкодисперсный аэрозоль способен при вдыхании попадать в более глубокие отделы респираторного тракта и там оказывать свое бактерицидное и вирулицидное действие [13,14,15,17].
Оценка противомикробной эффективности анолита нейтрального (АНК+) проводилась на базе ГБУСО «Свердловская областная ветеринарная лаборатория».
Для оценки противомикробной эффективности анолита нейтрального (АНК+) использовались музейные штаммы бактериальных культур: EscherichiacoliATCC 25922, Salmonellatyphimurium, EnterococcusfaecalisATCC 29212, Proteusmirabilis № 3177, Listeriamonocytogenes, Staphylococcus-aureusATCC 6538-P, Pseudomonasaeruginosa CCM 1960.
Для получение достоверного результата лабораторные испытания проводились согласно актуальной и действующей в лаборатории нормативной документации.
Для определения противомикробного действия использовались методы определения бактерицидной эффективности: качественный тест, количественный тест, определялась антимикробная активности в твердых формах, определялась противомикробная активность препарата в отношении воды [12,13].
Качественный тест. Маркер-культурой для некокковых и неспорообразу-ющих бактерий является Escherichiacoli. Для проведения качественного те-
160
ста были взяты штаммы бактериальных культур EschericЫacoH, для определения бактерицидной активности в отношении грамотрицательных бактерий SalmoneПatypЫmurium, ProteшmiraЫПs и Pseudomonasaerugmosa. Маркерной тест-культурой для определения бактерицидной активности в отношении споровой микрофлоры является Staphylococcusaureus, дополнительно для проверки воздействия на грамположительные бактерии были взяты штаммы культур Listeriamonocytogenes и Enterococcusfaecalis.
Таблица 1. Результаты качественного теста
Тест-культура
EschericЫacoП SalmoneПatypЫmurшm Enterococcusfaecalis Listeriamonocytogenes Proteusmirabilis Staphylococcusaureus Pseudomonasaeruginosa
Время учета, час. Время учета, час. Время учета, час. Время учета, час. Время учета, час. Время учета, час. Время учета, час.
24 48 24 48 24 48 24 48 24 48 24 48 24 48
Анолит нейтральный (АНК+)
Контроль стерильности сред
Контроль роста культуры + + + + + + + + + + + + + +
Из каждой бактериальной культуры приготавливалась одномиллиардная взвесь на основе 0,9 % физиологического раствора, согласно оптическому стандарту мутности № 10 (109 КОЕ/см3), после чего по 0,5 мл получившейся взвеси каждой культуры приливалось к 4,5 мл анолита. Для обеззараживания взвеси выдерживалась экспозиция 5 минут. Получившийся раствор взвеси и анолита нейтрального (АНК+) после экспозиции в количестве 0,5 мл добавлял-
161
ся к 4,5 мл нейтрализатора. Для нейтрализации анолита нейтрального (АНК+) выдерживалась экспозиция 5 минут.
Получившийся обработанный материал высевался на мясопептонный бульон (МПБ) и мясопептонный агар (МПА). Среды с посевом термостатирова-лись при температуре 37 °С, учет роста микроорганизмов производился через 24 и 48 часов.
Для контроля роста культуры анолит нейтральный (АНК+) был заменен стерильной дистиллированной водой. Для контроля стерильности сред и растворов бактериальные тест-культуры были заменены стерильной дистиллированной водой.
В результате проведенного качественного теста можно сделать вывод, что анолит нейтральный (АНК+) обладает высокой бактерицидной активностью при коротком времени экспозиции в высоких разведениях, как в отношении грампо-ложительных, так и в отношении грамотрицательных бактерий. [13, 14, 15, 17].
Количественный тест. Для проведения качественного теста были взяты штаммы бактериальных культур Escherichiacoli, а для определения бактерицидной активности в отношении грамотрицательных бактерий Salmonellatyphimurium, Proteusmirabilis и Pseudomonasaeruginosa. Маркерной тест-культурой для определения бактерицидной активности в отношении споровой микрофлоры является Staphylococcusaureus, дополнительно для проверки воздействия на грамположительные бактерии были взяты штаммы культур Listeriamonocytogenes и Enterococcusfaecalis.
Из каждой бактериальной культуры приготавливалась одномиллиардная взвесь на основе 0,9 % физиологического раствора, согласно оптическому стандарту мутности № 10 (109 КОЕ/см3), после чего по 0,5 мл получившейся взвеси каждой культуры приливалось к 4,5 мл анолита нейтрального (АНК+). Для обеззараживания взвеси выдерживалась экспозиция 5 минут. Получившийся раствор взвеси и анолита нейтрального (АНК+) после экспозиции в количестве 0,5 мл добавлялся к 4,5 мл нейтрализатора. Для нейтрализации анолита нейтрального (АНК+) выдерживалась экспозиция 5 минут.
Обработанный материал в количестве 1 мл переносился в чашку Петри, заливался 12 мл расплавленного МПА, охлажденного до 45 °С. Содержимое чашки тщательно перемешивалось. После застывания агара, чашки термоста-тировали при 37 °С. Учет роста колоний проводился через 48 и 72 часа.
Для контроля стерильности сред расплавленный МПА заливался в чашку со стерильной дистиллированной водой. Для контроля обсемененности воздуха использовались две открытые чашки Петри с МПА и молочно-солевым агаром (МСА) при 20 минутной экспозиции.
По результатам количественного теста можно сделать вывод, что анолит нейтральный (АНК+) обладает высокой бактерицидной активностью как в отношении грамположительных, так и в отношении грамотрицательных бактерий.
Определение антимикробной активности в твердых формах. Маркер-куль-
162
турой для некокковых и неспорообразующих бактерий является EschericЫacoH Для проведения качественного теста были взяты штаммы бактериальных культур EschericЫacoП, для определения бактерицидной активности в отношении грамотрицательных бактерий SalmoneПatypЫmurium, ProteшmiraЫПs и Pseudomonasaeruginosa. Маркерной тест-культурой для определения бактерицидной активности в отношении споровой микрофлоры является Staphylococcusaureus, дополнительно для проверки воздействия на грампо-ложительные бактерии были взяты штаммы культур Listeriamonocytogenes и EnterococcшfaecaПs.
Таблица 2. Результаты количественного теста
Тест-культура
• 3 3 СЛ 13 Listeriamonocytogenes Л И В Pseudomonasaeruginosa
Escherichiaco § £ а Л Й о е 13 сл и и о о о о 2 <а М Proteusmirabil И О о о о Л & -м сл
Время Время Время Время Время Время Время
учета, учета, учета, учета, учета, учета, учета,
час. час. час. час. час. час. час.
48 72 48 72 48 72 48 72 48 72 48 72 48 72
Анолит
нейтральный (АНК+), КОЕ/мл 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Контроль
стерильности сред, КОЕ/мл 0
Контроль
микробной обсеменен- рост на МПА отсутствует, рост на МСА отсутствует
ности воздуха
Из каждой бактериальной культуры приготавливалась одномиллиардная взвесь на основе 0,9 % физиологического раствора, согласно оптическому стандарту мутности №10 (109 КОЕ/см3). Для эксперимента были взяты чашки
163
Петри с заранее приготовленными лунками в МПА. Взвесь культуры шпателем наносилась на поверхность агара, для подсушивания культур чашки Петри помещались в термостат при температуре 37 °С и выдерживалась в течение 10 минут. В лунку вносился анолит нейтральный (АНК+) таким образом, чтобы он не соприкасался с нанесенной культурой и не выливался за края лунки.
Чашки термостатировались при температуре 37 °С в течение суток. Для контроля эксперимента проводился контроль роста культуры, контроль стерильности среды и контроль обсемененности воздуха. Для контроля роста, в чашку с нанесенной бактериальной культурой не вносился анолит нейтральный (АНК+). Для контроля стерильности сред, на агар не наносилась бактериальная тест-культура. Для контроля обсемененности воздуха использовались две открытые чашки Петри с МПА и МСА при 20 минутной экспозиции.
Таблица 3. Определение антимикробной активности анолита
в твердых формах
Тест-культура
В Й 'С и и <Ц Й <Ц ад о ty о о Й и и Й <Ц — Й и О ¡3 'ад S £ и
о о ¡3 S ¿3 а ! Й о S сл Л и О о 1 S и Й О о о
(D -а о и Ш о о 2 ш 45 to СЛ Й £ о — Л £ -м сл О В о ТЗ Й <Ц и
Время Время Время Время Время Время Время
учета, учета, учета, учета, учета, учета, учета,
час. час. час. час. час. час. час.
24 24 24 24 24 24 24
Анолит нейтральный (АНК+) 24 21 25 23 21 23 20
Контроль
стерильности сред
Контроль роста культуры + + + + + + +
контроль обсеме-ненности воздуха рост на МПА отсутствует, рост на МСА отсутствует
Для учета антимикробной активности анолита нейтрального (АНК+) были замерены зоны подавления роста микроорганизмов, чувствительных к действию анолита. Можно сделать вывод, что анолит обладает высокой бакте-
164
рицидной активностью в отношении широкого спектра возбудителей бактериальных заболеваний. Эффективно применение анолита нейтрального (АНК+) в качестве бактерицидного препарата, в том числе для мультирезистентных микроорганизмов.
Определение антимикробной активности анолита к БГКП в водной среде. Для определения антимикробной активности была взята бактериальная культура-маркер для некокковых и неспорообразующих бактерий Escherichiacoli штамма АТСС 25922.
Из культуры приготавливалась одномиллиардная взвесь на основе 0,9 % физиологического раствора, согласно оптическому стандарту мутности № 10 (109 КОЕ/см3).
Для эксперимента были использованы 2 колбы, емкостью 1000 см3. Колбы, наполненные 900 см3 воды, предварительно обработанные взвесью тест-культур в количестве 0,1 см3, обрабатывались анолитом нейтральным (АНК+) в соотношении 1 часть анолита нейтрального (АНК+) на 9 частей воды. Одна колба выдерживалась при экспозиции в 30 минут, вторая 60 минут. Обработанную воду исследовали на наличие БГКП методом мембранных фильтров.
В воронку фильтровальной установки устанавливался фильтровальный диск, далее наливалась проба в объеме 300 см3 и пропускалась через этот диск-фильтр. Фильтр, не переворачивая, фламбированным пинцетом переносился на чашки Петри с дифференциально-диагностической питательной средой Эндо. Чашки инкубировались в термостате при температуре 37 °С, учет результатов производился через 24 часа, при отсутствии роста через 48 часов.
В качестве контроля использовали не обработанную анолитом нейтральным (АНК+) воду. Для контроля обсемененности воздуха использовались две открытые чашки Петри с МПА и МСА при 20 минутной экспозиции.
Таблица 4. Определение антимикробной активности анолита нейтрального (АНК+) в отношении БГКП в водной среде
Тест-культура Время учета, час. Анолит нейтральный (АНК+) Контроль Контроль обсеме-ненности воздуха
Время экспозиции
30 минут 60 минут 30 минут 60 минут
Escherichiacoli ATCC 25922 24 - - + + МПА рост отсутствует
48 - - + + МСА рост отсутствует
165
Исследование антимикробной активности анолита нейтрального (АНК+) в отношении БГКП в водной среде показали, что препарат не теряет своих бактерицидных свойств при обеззараживании больших объемов жидкого материала, а также является универсальным противомикробным препаратом не только из-за широты спектра действия, но и из-за возможности обеззараживания различных типов объектов.
Оценка эффективности применения аэрозолей препарата анолит нейтральный (АНК+) в сочетании с растительно-тканевым препаратом «Видорал» для профилактики ОРВИ и заболеваний дистального отдела конечностей КРС.
Опыт проводился в одном из животноводческих хозяйств Урало-Сибирского региона неблагополучном по ОРВИ (ИРТ, РСИ, ВД-БС, ПГ-3), стафи-лококкозу, стрептококкозу и некробактериозу. В хозяйстве от больных животных были выделены Fusobacteriumnecrophorum, Staphylococcusepidermidis и Streptococcuszooepidemicus.
Для опыта было сформировано 4 группы - две группы телят 6-месячного возраста (опытная группа № 1 и контрольная группа № 1) по 10 голов в каждой и две группы коров 2 лактации (опытная группа № 2 и контрольная группа № 2) в каждой группе по 10 голов.
Условия кормления, содержания и ухода за животными опытных и контрольных групп были идентичными.
Животные опытных групп подвергались воздействию мелкодисперсного аэрозоля препарата анолит нейтральный (АНК+), распыляемого при проведении аэрозольной обработки в помещении, животные опытных групп находились в другом помещении.
Коровам опытной группы № 2 и контрольной группы № 2 была введена вакцина против некробактериоза конечностей крупного рогатого скота инак-тивированная ассоциированная «Нековак», в соответствии с инструкцией по применению вакцины, коровам опытной группы № 2 в течение 5 дней подкожно вводился препарат «Видорал» в дозе 0,025 мл/кг живой массы.
Кровь у телят опытной группы № 1 и контрольной группы № 2 брали на исследование перед опытом и через 20 дней. Кровь для исследования брали у коров опытной группы № 2 и контрольной группы № 2 до начала опыта работы и через 15 суток после окончания курса «Видорала».
Аэрозоль распыляли, в присутствии животных, в вентилируемом помещении при помощи аэрозольного распылителя «Ультраспреер Р-60М» (производитель ООО «Растер», г. Екатеринбург). Расход препарата составил 300 мл/м2.
Изменение микробной обсемененности окружающей среды оценивали путем смывов с поверхностей стен и пола. Смывы производились до обработки и после обработки при экспозиции 30 минут. Качество обработки воздуха определяли методом осаждения в чашки Петри с мясопептонным агаром (МПА). Для этого ставили чашки Петри с МПА на 15 минут при экспозиции 15 минут, 30 минут и 6 часов [12,13,17].
166
Таблица 5. Оценка эффективности обработки поверхностей препаратом анолит с применением аэрозольного распылителя «Ультраспреер Р-60М»
Поверхности Микробиологический показатель Количество микроорганизмов, тыс./м3, КОЕ
До обработки После обработки при экспозиции 30 минут
Пол КМАФАнМ 280±13,4 70±1,2*
Плесени 5±0,2 0
Стены КМАФАнМ 86±0,1 12±0,3*
Плесени 10±0,9 2*
Примечание: *Данные достоверны. Р<0,05
Как видно из результатов, представленных в таблице 5 после обработки мелкодисперсным аэрозолем анолита нейтрального (АНК+) с экспозицией 30 минут количество КМАФАнМ на полу, снизилось в 4 раза, на стене 7,17 раз, количество плесени на полу снизилось до нуля, на стене в 5 раз, что говорит об эффективности проведенной обработки.
Таблица 6. Оценка эффективности обработки воздуха препаратом анолит нейтральный (АНК+) с применением аэрозольного распылителя
«Ультраспреер Р-60М»
Микробиологиче ский показатель Количество микроорганизмов, тыс./м3, КОЕ
До обработки После обработки
Через 15 минут экспозиции Через 30 минут экспозиции Через 6 часов экспозиции
КМАФАнМ 366±12,3 165±1,4* 82±1,18 4±0,7*
Плесени 15±1,3 5 ±0,6 2±0,4* 0
Примечание: *Данные достоверны. Р<0,05
Результаты в таблице 6 показывают, что при экспозиции 15 минут количество КМАФАнМ в воздухе снизилось в 2,2 раза, плесени в 3 раза, при экспозиции 30 минут количество КМАФАнМ снизилось в 4,46 раза, плесени в 7,5 раз от первоначального уровня, при экспозиции 6 часов количество КМАФАнМ сократилось в 91,5 раз, количество плесени снизилось до нуля.
Оценку воздействия аэрозоля анолита на телят проводили по изменению гематологических и биохимических показателей крови. Кровь у животных брали на исследование перед опытом и через 20 дней.
167
Таблица 7. Влияние аэрозоля анолита нейтрального (АНК+) на гематологические показатели телят
Показатель Норма До опыта После опыта
Опытная группа№ 1 Контрольная группа № 1 Опытная группа № 1 Контрольная группа № 1
Эритроциты, 1012 /л 5,-7,5 7,0±1,3 7,3±0,5 8,5±0,6* 7,6±0,5
Гемоглобин, г/л 90-120 112±17,5 106±4,4 118±2,5 108±5,3
Тромбоциты, 109/л 100-800 454,9±12,8 457,3±18,1 532,2±12,8* 498,5±13,1
Лейкоциты, 109 /л 4,5-12 8,7±1,4 8,9±2,2 8,8±1,3 8,6±2,8
Лимфоциты, 109 /л 2,5-7,5 6,5±1,01 6,2±1,0 6,6±1,6 6,3±1,2
СОЭ, мм/час 0,5-1,0 0,92±0,1 0,91±0,3 0,95±0,2 0,98±0,1
Примечание:*Данные достоверны. Р<0,05
Как видно из таблицы 7, количество эритроцитов в опытной группе № 1 увеличилось на 21,4 %, гемоглобина на 5,4 %, в контрольной группе № 1 на 4,1 % и 1,9 % соответственно. Можно предполагать, что аэрозольное применение препарата анолит нейтральный (АНК+) оказывает стимулирующее воздействие на эритропоэз. Остальные показатели изменялись в пределах физиологической вариабельности, что свидетельствует об отсутствии токсического эффекта при аэрозольном применении препарата.
Таблица 8. Влияние аэрозоля анолита нейтрального (АНК+)
на биохимические показатели крови телят
Показатель Норма До опыта После опыта
Опытная группа № 1 Контрольная группа № 1 Опытная группа № 1 Контрольная группа № 1
Общий белок, г/л 70-82 65,5±4,7 66,5±5,5 66,8±2,0 66,1±3,46
Мочевина, ммоль/л 2-5,5 3,4±0,6 3,2±0,5 2,5±0,8 3,4±0,4
Кальций, ммоль/л 2,2-3,1 3,6±0,1 3,3±0,4 3,0±0,2 2,9±0,2
Фосфор, ммоль/л 1,4-2,8 2,9±0,3 2,5±0,3 2,8±0,4 2,2±0,3
АЛТ, Ед./л 7-35 6,4±8,47 5,5±9,98 2,1±0,2 4,4±0,8
АСТ, Ед./л 45-101 70,1±3,94 61,8±1,7 70,8±2,5 78,6±1,6
Примечание: *Данные достоверны. Р<0,05
168
В опытной группе № 1 до начала опыта содержание кальция было выше физиологической нормы, по окончании опыта оно снизилось на 16,7 % до физиологичных пределов, содержание мочевины в сыворотке крови снизилось на 26,5 %, АЛТ на 67,1 %, что свидетельствует о нормализации минерального обмена, функций печени и почек, в то время как в контрольной группе № 1 концентрация кальция снизилась на 12,1 %, АЛТ на 20 %, содержание мочевины увеличилось на 6,2 %. Остальные показатели изменялись в пределах физиологической вариабельности, что свидетельствует об отсутствии токсического эффекта при аэрозольном применении анолита.
За время опыта у 3 телят контрольной группы № 1 были выявлены клинические признаки ОРВИ. В опытной группе № 1 за счет повышения общей резистентности организма телят заболеваний респираторного тракта вирусной этиологии не выявлено.
Таблица 9. Влияние аэрозольной обработки с применением анолита
нейтрального (АНК+) на заболеваемость телят ОРВИ
Показатель Опытная группа № 1 Контрольная группа № 1
Заболело телят, голов 0 3
Заболеваемость ОРВИ, % 0 30
Как видно из таблицы № 9 в опытной группе № 1 заболеваний телят ОРВИ не зарегистрировано, в то время как в контрольной группе № 1 заболеваемость ОРВИ составила 30 %.
Таблица 10. Влияние растительно-тканевого препарата «Видорал» на гематологические показатели телят
Показатель Норма До опыта После опыта
Опытная группа Контрольная группа Опытная группа Контрольная группа
Эритроциты, млн/л 5,-7,5 5,71±1,32 5,67±0,46 5,93±1,21 5,79±1,32
Гемоглобин, г% 9,69±0,55 9,67±1,44 11,58±1,53* 9,68±1,93
Лейкоциты, 109 /л 4,5-12 7,69±1,41 7,75±1,12 1,80±1,39* 3,50±2,78
Общий белок, г/л 4,81±1,01 4,67±1,05 4,67±1,86 4,5±1,92
Примечание: *Данные достоверны. Р<0,05
169
Эри^эоциты, млн/мл Гемоглобин, г%
■ Опытная группа до опыта
■ Опытная группа после опыта
Лейкоциты, 109/мл Общий белок, г/л
■ Контрольная группа до опыта
■ Контрольная группа после опыта
Рисунок 1. Влияние препарата «Видорал» на гематологические показатели
крупного рогатого скота.
Как видно из данных, представленных на рисунке 1, количество эритроцитов в крови коров опытной группы выросло на 3,9 %, в контрольной на 2,1 %, концентрация гемоглобина в опытной группе повысилась на 19,5 %, что свидетельствует об усилении эритропоэза, количество лейкоцитов снизилось, 76,3 % что является признаком снижения воспалительных реакций в организме коров.
Были исследованы титры антител в сыворотке крови коров к Fusobacteriumnecrophorum, Staphylococcusepidermidis и Streptococcus-zooepidemicus.
Таблица 11. Влияние аэрозоля анолита нейтрального (АНК+) в сочетании с растительно-тканевым препаратом «Видорал» на напряженность иммунитета коров к некробактериозу.
Группа Титрык Fusobacterium necrophorum, log2
до опыта после опыта
Опытная группа № 2 3 9
Контрольная группа № 2 3 3
Примечание: *Данные достоверны. Р<0,05 Таблица 12. Влияние аэрозоля анолита нейтрального (АНК+) в сочетании с растительно-тканевым препаратом «Видорал» на сероконверсию коров к стрептококкозу и стафилококкозу
Группа Титрык Staphylococcus epidermidis, log2 Титрык Streptococcus zooepidemicus, log2
до опыта после опыта до опыта после опыта
Опытная группа № 2 2 8 2 7
Контрольная группа № 2 2 2 2 2
Примечание: *Данные достоверны. Р<0,05
170
ю
9
5 7
6 5 4 3 2 1 О
<
3
3 ✓iX 3
*
5 К 2
до опыта
после опыта
> Титры к Fusobacterium necrophorum в опытной группе N2 2,log2
> Титры к Fusobacterium necrophorum в контрольной группе N2 2,log2
> Титры к Staphylococcus epidermidis в опытно? группе № 2, log2
9 Титры к Staphylococcus epidermidfe в контрольной группе N2 2, log2
> Титры к Streptococcus zooepidemicus в опытной группе № 2, log2
А Титры к Streptococcus zooepidemicus в контрольной группе № 2, log2
Рисунок 2. Влияние анолита нейтрального (АНК+) при применении совместно с растительно-тканевым препаратом «Видорал» на напряженность иммунитета коров к некробактериозу, и сероконверсию к стафилококкозу и стрептококкозу
Как видно из представленных данных, в опытной группе № 2 при применении вакцины «Нековак» совместно с растительно-тканевым препаратом «Видорал» поствакцинальные антитела к Fusobacteriumnecrophorum выросли на 6 log2, кроме того, за счет сероконверсии и повышения неспецифической резистентности, в опытной группе на 6 log2 выросли титры антител к Staphylococcusepidermidis и на 5 log2 к Streptococcuszooepidemicus, в то время как в контрольной группе титры остались без изменений. Можно утверждать, что «Видорал» стимулирует гуморальный иммунитет[1], следствием чего является увеличение выработки антител, в том числе поствакцинальных. Таким образом, применение вакцины «Нековак» совместно с растительно-тканевым препаратом «Видорал» повышает протективное действие вакцины.
Осложнений или побочных эффектов при применении аэрозолей анолита нейтрального (АНК+) установлено не было.
Выводы. Анолит нейтральный (АНК+) обладает бактерицидным, фунги-цидным и вирулицидным действием. [13,14,15,17] При аэрозольном применении нормализует обменные и иммунометаболические процессы в организме телят, за счет снижения контаминации окружающей среды патогенной и условно-патогенной микрофлорой, снижается микробная нагрузка на организм
171
телят и как следствие, повышается общая резистентность.
При применении аэрозоля анолита нейтрального (АНК+) совместно с растительно-тканевым препаратом «Видорал» при вакцинации вакциной «Не-ковак», поствакцинальные антитела к Fusobacteriumnecrophorum выросли на 6 кроме того, за счет сероконверсии и повышения неспецифической резистентности, в опытной группе № 2 на 6 выросли титры антител к Staphylococcusepidermidis и на 5 к Streptococcuszooepidemicus, в то время как в контрольной группе № 2 титры остались без изменений. Можно утверждать, что аэрозольное применение анолита нейтрального (АНК+) совместно с растительно-тканевым препаратом «Видорал» стимулируют гуморальный иммунитет, следствием чего является увеличение выработки антител, в том числе поствакцинальных. Таким образом, применение анолита нейтрального (АНК+) совместно с растительно-тканевым препаратом «Видорал» при вакцинации вакциной «Нековак» повышает протективное действие вакцины.
Мы рекомендуем аэрозольное применение анолита нейтрального (АНК+) совместно с растительно-тканевым препаратом «Видорал» для комплексной профилактики микстинфекции респираторного тракта и дистального отдела конечностей крупного рогатого скота за счет нормализации обменных процессов и повышения общей резистентности организма животных.
Список использованных источников:
1. Алексеев А.Д. Применение растительно-тканевой композиции для профилактики острых респираторных вирусных инфекций крупного рогатого скота/Алексеев А.Д., Петрова О.Г.//Ветеринария и кормление. -2017 - 3 - с. 8-9.
2. Алехин Ю.Н. Функциональное состояние преджелудков на разных этапах развития бронхопневмонии и в посттерапевтический период у телят./ Алехин Ю.Н., Жуков М.С., Лебедева А.Ю.//Ветеринария, зоотехния и биотехнология. - 2016 - 11 - с. 13-19.
3. Балаш А., Батиз Г., Бридл Е., Чаки Т., Гомбош III, Кюртфалви А. Содержание, кормление и важнейшие ветеринарные вопросы при разведении голштино-фризской породы скота. Перевод с венгерского. Венгрия. Agrota. 1994, 238 с.
References:
1. Alekseev A.D. The use of a plant-tissue composition for the prevention of acute respiratory viral infections in cattle / Alekseev A.D., Petrova O.G. // Veterinary medicine and feeding. - 2017 - 3 - p. 8-9.
2. AlekhinYu.N. The functional state ofthe proventricles at different stages of development of bronchopneumonia and in the post-therapeutic period in calves./AlekhinYu.N., Zhukov M.S., LebedevaA.Yu.// Veterinary medicine, animal science and biotechnology. -2016 - 11 - p.13-19.
3. Balash A., Batiz G., Bridle E., Chaki T., Gombos III, Kurtfalvi A. Maintenance, feeding and the most important veterinary issues in breeding Holstein-Friesian cattle. Translated from Hungarian. Hungary. Agrota. 1994, 238 p.
4. Barashkin M.I. Features of the
172
4. Барашкин М.И. Особенности эпизоотологии инфекционных болезней дистальных отделов конечностей крупного рогатого скота при промышленных технологиях содержания./Ба-рашкин М.И., Петрова О.Г.//Аграрный вестник Урала. - 2016 - 3(145) - с. 2831.
5. Евглевский Ал.А. Нарушения кислотно-основного состояния в организме коров: причины, последствия, пути решения./Евглевский Ал.А., Ев-глевская Е.П., Михайлова И.И., Ванина Н.В., Ерыженская Н.Ф., Сулейманова Т.А.//Ветеринарная патология - 2017 -1 с. 53-58.
6. Евглевский Ал.А. Скира В.Н., Евглевская Е.П., Ванина Н.В., Михайлова И.И., Сулейманова Т.А., Пере-верзева Ю.А. Метаболический ацидоз у высокопродуктивных коров: причины, последствия, профилактика. Ветеринария. 2017. № 5, с. 45-48.
7. Золотарев А.И., Черниц-кий А.Е., Рецкий М.И. Кислотно-основное состояние и газовый состав крови у телят при бронхите. Ветеринария. 2013. № 7. С. 47-52.
8. Красноперов А.С. Заболевания копытец у крупного рогатого скота./ Красноперов А.С., Марьин Е.М., Забродин Е.А., Барашкин М.И., Мильштейн И.М., Пряничников В.П., Тетерев Н.Н.//БИО - 2020 - 7(238) - с. 26-33.
9. Магер С.Н., Дементьева Е.С. Физиология иммунной системы. СПб.: Лань. 2014. 192 с.
10. Мейл Д. Иммунология. Перевод с англ. М.: Логосфера. 2007. 586 с.
11. Мельник Н.В. Некробактериоз животных. Лечение и профилактика./ Мельник Н.В., Самуйленко А.Я., Мель-
epizootology of infectious diseases of the distal extremities of cattle in industrial technologies of keeping./Barashkin M.I., Petrova O.G.// Agrarian Bulletin of the Urals. - 2016 - 3 (145) - p. 28-31.
5. Evlevsky Al.A. Violations of the acid-base state in the body of cows: causes, consequences, solutions. / Evlevsky Al.A., Evlevskaya E.P., Mikhailova I.I., Vanina N.V., Eryzhenskaya N.F., Suleimanova T. A. // Veterinary pathology - 2017 - 1 -p. 53-58.
6. Evlevsky Al.A. Skira V.N., Evlevskaya E.P., Vanina N.V., Mikhailova I.I., Suleimanova T.A., PereverzevaYu.A. Metabolic acidosis in highly productive cows: causes, consequences, prevention. Veterinary medicine. 2017. No. 5, p. 45-48.
7. Zolotarev A.I., Chernitskiy A.E., Retskiy M.I. Acid-base state and gas composition of blood in calves with bronchitis. Veterinary medicine. 2013. No. 7. S. 47-52.
8. Krasnoperov A.S. Hoof diseases in cattle. / Krasnoperov A.S., Maryin E.M., Zabrodin E.A., Barashkin M.I., Milshtein I.M., Pryanichnikov V.P., Teterev N.N. / / BIO - 2020 - 7 (238) -p. 26-33.
9. Mager S.N., Dementyeva E.S. Physiology of the immune system. SPb .: Lan. 2014.192 s.
10. Mail D. Immunology. Translation from English. M .: Logosphere. 2007.586 p.
11. Melnik N.V. Necrobacteriosis of animals. Treatment and prevention. / Melnik N.V., SamuilenkoA.Ya., Melnik R.N., Grin S.A., Klyukina V.I. and others, ed. acad. RAS SamuylenkoA.Ya. / Krasnodar: KubSAU - 2018 - 279 p.
173
ник Р.Н., Гринь С.А., Клюкина В.И. и др. под ред. акад. РАН Самуйленко А.Я./Краснодар: КубГАУ - 2018 - 279 с.
12. Одегов Е.С. Режимы дезинфекции при болезнях легких крупного рогатого скота/Одегов Е.С., Петрова О.Г.// Материалы Международной научно-практической «Актуальные проблемы сохранения и развития биологических ресурсов» Екатеринбург: февраль - 2015 - с. 267-269.
13. Петрова О.Г. Микробиологическое тестирование дезинфицирующего средства «Нейтральный ано-лит». / Петрова О.Г., Барашкин М.И. Мильштейн И.М., Кудряшова Е.Р., Колобкова Н.И.//Вестник биотехнологии. - 2020 - 1(22) - с.20.
14. Петрова О.Г. Микробиологическое тестирование дезинфицирующего средства, полученного методом электрохимической активации с целью профилактики бактериальных и инвазионных инфекций животных./Петро-ва О.Г., Барашкин М.И., Усевич В.М., Мильштейн И.М.// MEDICUS - 2020 -6(36) - с. 15-28.
15. Петрова О.Г. Экспериментальное обоснование эффективности импортозамещающего дезинфекционного средства анолит (АНК+) в ветери-нарии./Петрова О.Г., Барашкин М.И, Мильштейн И.М., Патрушев С.В.// Аграрный вестник Урала. - 2018 -12(179) - с. 22-26.
16. Самоловов А.А., Лопатин С.В. Хромота - отражение системных метаболических болезней молочного скота. Инновации и продовольственная безопасность. 2017. № 2(2). С. 76-80.
17. Усевич В.М. Значение эффективности и безопасности химических
12. Odegov ES. Modes of disinfection for diseases of the lungs of cattle / Odegov E.S., Petrova O.G.// Materials of the International scientific and practical "Actual problems of conservation and development of biological resources" Yekaterinburg: February - 2015 - p. 267-269.
13. Petrova O.G. Microbiological testing of the disinfectant «Neutral anolyte». / Petrova O.G., Barashkin M.I., Milshtein I.M., Kudryashova E.R., Kolobkova N.I.// Bulletin of biotechnology. - 2020 - 1 (22) - p. 20.
14. Petrova O.G. Microbiological testing of a disinfectant obtained by the method of electrochemical activation in order to prevent bacterial and invasive infections of animals. / Petrova O.G., Barashkin M.I., Usevich V.M., Milshtein I.M. // MEDICUS - 2020 - 6 ( 36) -p. 15-28.
15. Petrova O.G. Experimental substantiation of the effectiveness of the import-substituting disinfectant anolyte (ANK +) in veterinary medicine. / Petrova O.G., Barashkin M.I., Milshtein I.M., Patrushev S.V.// Agrarian Bulletin of the Urals. - 2018 - 12 (179) - p. 22-26.
16. Samolovov A.A., Lopatin S.V. Lameness is a reflection of systemic metabolic diseases in dairy cattle. Innovation and food security. 2017. No. 2 (2). S. 76-80.
17. Usevich V.M. The value of the effectiveness and safety of chemicals by the method of electrochemical activation for disinfection of livestock buildings / Usevich V.M., Petrova O.G. // Scientific research of the 21st century - scientific network edition - 2019 - No. 2 - pp. 132139.
174
средств методом электрохимической активации для дезинфекции животноводческих помещений / Усевич В.М., Петрова О.Г.//Научные исследования 21 века - научное сетевое издание -2019 - № 2 - с.132-139.
Сведения об авторах:
Алексеев Анатолий Дмитриевич -кандидат ветеринарных наук, доцент кафедры инфекционной и незаразной патологии ФГБОУ ВО «Уральский государственный аграрный университет», e-mail: alekseev.urgau@mail.ru, 620075, Россия, г. Екатеринбург, ул. Карла Либкнехта, 42.
Петрова Ольга Григорьевна -доктор ветеринарных наук, профессор, профессор кафедры инфекционной и незаразной патологии ФГБОУ ВО «Уральский государственный аграрный университет», e-mail:super. kafedra2013@yandex.ru, 620075, Россия, г. Екатеринбург, ул. Карла Либк-нехта, 42.
Барашкин Михаил Иванович -доктор ветеринарных наук, профессор, заведующий кафедрой хирургии, акушерства и микробиологии ФГБОУ ВО «Уральский государственный аграрный университет», e-mail:dekanatvet@yandex.ru, 620075, Россия, г. Екатеринбург, ул. Карла Либкнехта, 42.
Мильштейн Игорь Маркович -кандидат ветеринарных наук, доцент кафедры хирургии, акушерства и микробиологии ФГБОУ ВО «Уральский государственный аграрный университет», e-mail:4u4@bk.ru, 620075, Рос-
Information about the authors:
Alekseev Anatoliy Dmitrievich -Candidate of Veterinary Sciences, Associate Professor of the Department of Infectious and Non-infectious Pathology FSBEI HE «Urals state agrarian university», e-mail:alekseev. urgau@mail.ru, 42, Karl Liebknecht Str., Yekaterinburg, 620075, Russia.
PetrovaOlga Grigorevna - Doctor of Veterinary Science, Professor, Professor of the Department of Infectious and Non-infectious Pathology FSBEI HE «Urals state agrarian university», e-mail: super.kafedra2013@yandex.ru, 42, Karl Liebknecht Str., Yekaterinburg, 620075, Russia.
Barashkin Mikhail Ivanovich -Doctor of Veterinary Sciences, Professor, Head of the Department of Surgery, Obstetrics and Microbiology FSBEI HE«Urals state agrarian university», e-mail:dekanatvet@yandex.ru, 42, Karl Liebknecht Str., Yekaterinburg, 620075, Russia.
Milshtein Igor Markovich -Candidate of Veterinary Sciences, Associate Professor of the Department of Surgery, Obstetrics and Microbiology FSBEI HE«Urals state agrarian university», e-mail: 4u4@bk.ru, 620075, 42, Karl Liebknecht Str., Yekaterinburg, 620075, Russia.
175
сия, г. Екатеринбург, ул. Карла Либкнехта, 42.
Москвин Владислав Дмитриевич - аспирант кафедры инфекционной и незаразной патологии ФГБОУ ВО «Уральский государственный аграрный университет», е-таП^1оЛ@таП.ги, 620075, Россия, г. Екатеринбург, ул. Карла Либкнехта, 42.
Moskvin Vladislav Dmitrievich -post-graduate student of the Department of Infectious and Non-infectious Pathology FSBEI HE«Urals state agrarian university», e-mail: vsloth@ mail.ru, 42, Karl Liebknecht Str., Yekaterinburg, 620075, Russia.
176
