CC BY
44
УДК 54.062:543.062:543.42.062:543.421/.424
ПРИМЕНЕНИЕ ПРОИЗВОДНОЙ СПЕКТРОФОТОМЕТРИИ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НОВОГО БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОГО СОЕДИНЕНИЯ ПРОИЗВОДНОГО ХИНАЗОЛИНА В ТАБЛЕТКАХ
Волокитина Д.С., Лазарян Д.С., Волокитин С.В.
Пятигорский медико-фармацевтический институт, г. Пятигорск, Российская Федерация.
Аннотация. Изучена возможность использования производной спектрофотометрии в ультрафиолетовой области для количественного определения нового биологически активного соединения производного хиназолин-4(3Н)-она в таблетках. Разработана методика определения и проведена ее валидационная оценка.
Ключевые слова: биологически активное соединение, хиназолин, производная спектрофотометрия, валидация, критерии приемлемости.
На кафедре фармацевтической и токсикологической химии Волгоградского государственного медицинского университета синтезировано новое биологически активное соединение (БАС) ноотропного действия [3,4] - производное хиназолин-4(3Н)-она: 3-[2-(2-Метилфениламино)-2-оксоэтил]-хиназолин-4(3Н)-он (лабораторный шифр: УМА-10-13). Для внедрения в медицинскую практику необходимо создание лекарственных форм указанного соединения и разработка методик их анализа. В лаборатории твердых лекарственных форм кафедры технологии лекарств Пятигорского медико-фармацевтического института была разработана твердая дозированная лекарственная форма - таблетки УМА-10-13 по 100 мг. Средняя масса таблетки - 0,320 г.
Цель работы. Разработка методики количественного определения УМА-10-13 в таблетках методом спектрофотометрии в ультрафиолетовой области.
Материалы и методы. В качестве объекта исследования использовались перекристаллизованные и хроматографически очищенные образцы субстанции УМА-10-13, предоставленные разработчиками. Было использовано аналитическое оборудование: спектрофотометр СФ-104 (с использованием сервисного пакета программ «и'У^п 5»), весы аналитические ВЛ-124, а также мерная посуда 1 класса точности.
Результаты и обсуждение. Спектрофотометриче-ский метод, широко используемый в анализе лекарственных средств, является одним из самых простых и точных методов. Однако при анализе лекарственных форм следует учитывать присутствие вспомогательных веществ поглощающих электромагнитное излучение при выбранной аналитической длине волны, что может влиять на результаты анализа.
С целью оценки влияния вспомогательных веществ анализируемых таблеток (коллидон СЬ, ПЭГ-6000) на поглощение УМА-10-13 мы измерили их УФ-спектры в области 210 - 280 нм. На рисунке 1 представлены спектры поглощения раствора УМА-10-13 (10 мкг/мл) и соответствующего раствора плацебо.
Спектр поглощения УМА-10-13 области от 210 до 280 нм имеет две полосы поглощения с максимумами при 226 и 265 нм. Более подходящей для количественного определения УМА-10-13 на наш взгляд является вторая полоса поглощения, так как находится в сравнительно селективной области спектра и является более пологой по сравнению с полосой с максимумом при 226 нм [1]. В тоже время при данной длине волны на результаты измерений значительное влияние оказывает аналитический сигнал плацебо, что приводит к систематической погрешности при количественном определении УМА-10-13 в таблетках.
Как известно метод производной спектрофотомет-рии позволяет проводить определение основного действующего вещества в присутствии светопоглощаю-щих примесей [1,2]. В основе производной спектрофо-тометрии лежит изменение формы спектральной кривой при её дифференцировании по длине волны. При этом второе дифференцирование позволяет устранить влияние линейного фона. Обработку спектров поглощения растворов УМА-10-13 и плацебо для построения их вторых производных (сР-Л/дй?) проводили при помощи программного обеспечения спектрофотометра «UУWin 5». Так как зависимость поглощения раствора плацебо от длины волны в районе 265 нм имеет линейный характер, её вторая производная при указанной длине волны равна нулю (рисунок 2).
Далее нами была изучена линейность зависимости между величиной второй производной спектра поглощения модельных смесей таблеточной массы (при длине волны 265 нм) и концентрацией УМА-10-13 в области 0,005-0,035 мг/мл. Результаты определений приведены в табл. 1. Методом наименьших квадратов были рассчитаны параметры линейной зависимости:
А
1,200
\ ^ 1
— сч 21 5 нм
Рис. 1. Спектр поглощения раствора VMA-10-13 (1) и раствора плацебо (2)
угловой коэффициент (Ь) и свободный член (а), их стандартные отклонения ^ь и Sa) и полуширины доверительных интервалов (ЛЬ и Да), остаточное стандартное отклонение ^о), коэффициент корреляции (г). Полученные значения параметров линейной зависимости соответствуют критериям приемлемости принятым согласно рекомендациям [5].
1
|
2 1 265 нм
2ЩШ
Длина ва^Щм]
Рис. 2. Вторая производная спектра поглощения раствора УМА-10-13 (1) и раствора плацебо (2)
Результаты определения зависимости второй производной (dA/dI2) от концентрации VMA-10-13
Таблица 1
Концентрация (C), мг/мл (Xj) dA/dk2 (yj) Параметры линейной зависимости у = bx + a
0,00551 -0,00463 b = -0,76549
0,01102 -0,00845 Sb = 0,01497
0,01653 -0,01278 Ab = 0,03848
0,02204 -0,01750 a = -0,00030
0,02755 -0,02133 sa = 0,00037
0,03306 -0,02625 Aa = 0,00095
0,03857 -0,02928 So = 0,00044
r = 0,99904
у = = -0,7655x - 0,0003
Критерии и] риемлемости параметров линейной зависимости
Требования для ГЛФ (В = ±5%) Полученные значения Вывод
|a| <Да=(95%, n-2) • sa 0,00030 < 0,00095 Выполняется
r > 0,99810 0,99904 > 0,99810 Выполняется
Выполнение неравенства: свободный член уравнения линейной зависимости меньше или равен его доверительному интервалу (а<Да=^95%;5) доказывает отсутствие систематической погрешности методики. Коэффициент корреляции (г > 0,997) является показателем жесткости линейной связи между величинами х и у.
На основании проведенных исследований нами была разработана методика количественного определения УМА-10-13 в таблетках: около 0,15 г порошка растертых таблеток (точная навеска) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл этанола 96%, помещают на ультразвуковую баню на 15 мин, доводят объем раствора тем же растворителем до метки, перемешивают и фильтруют через фильтр
«Миллипор» с диаметром пор 0,45 мкм. 1,0 мл полученного фильтрата помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора до метки этанолом 96% и перемешивают.
Параллельно готовят раствор стандартного образца: 0,05 г РСО УМА-10-13 (точная навеска) разводят по той же схеме разведения этанолом 96%.
Измеряют спектры поглощения испытуемого и стандартного растворов на регистрирующем спектрофотометре в диапазоне 210 - 280 нм. По полученным спектрам рассчитывают вторые производные при 265 нм. Содержание УМА-10-13 в одной таблетке (Х) рассчитывают по формуле:
А" -ап-Р А 0-а
А" - вторая производная оптической плотности испытуемого раствора;
А"0 - вторая производная оптической плотности раствора стандартного образца;
а - масса навески порошка растертых таблеток;
ао - масса навески стандартного образца;
Р - средняя масса одной таблетки
Руководствуясь принципом параллельного определения валидационных характеристик прецизионность (сходимость) и правильность методики оценивали одновременно для девяти модельных образцах в интервале концентраций 80-120%.
Сходимость и правильность методики определяли по рассчитанным значениям среднего (.2), стандартного отклонения RSD, относительного доверительного интервала (Д. и систематической погрешности (8), которые приведены в табл. 2. Как следует из данных таблицы спектрофотометрическая методика количественного определения УМА-10-13 в таблетках с допусками содержания основного вещества (В) ±5% (тах АА&' = 1,6%) не имеет статистически значимой систематической погрешности, характеризуется достаточной прецизионностью и является корректной.
Также при разработке методики нами были исследованы факторы, которые влияют на результаты анализа, таким образом, проводилась оценка робастности методики. При изучении стабильности растворов во времени определено, что оптическая плотность растворов остается стабильной в течение 24 часов.
Таблица 2
Определение параметров правильности и прецизионности методики количественного определения УМА-10-13 в модельных смесях таблеточной массы
№ Навеска модельной смеси, г Введено VMA-10-13, мг (Xi) сРЛШ Найдено VMA-10-13, мг (Yi) Найдено, % (Zi =Yr100/Xi)
1 0,1589 39,7 -0,00619 39,6 99,66
2 0,1575 39,4 -0,00623 39,8 101,20
3 0,1523 38,1 -0,00595 38,1 99,95
4 0,1591 49,7 -0,00781 50,0 100,47
5 0,1582 49,4 -0,00771 49,3 99,75
6 0,1603 50,1 -0,00783 50,1 99,97
7 0,1597 59,9 -0,00937 59,9 100,07
8 0,1615 60,6 -0,00955 61,1 100,86
9 0,1581 59,3 -0,00929 59,4 100,22
Среднее, 2 (%) 100,24
Стандартное отклонение, S 0,51
Относительное стандартное отклонение, (%) 0,51
Относительный доверительный интервал, Д2 = 1(95%, п-1)• ЕББ. 1,18
Систематическая погрешность, 8 = \2 - 100\ 0,24
Критерий статистической незначимости, Д2/'N9 0,39
Критерии правильности
Допуск содержания, В% Максимально допустимая неопределенность анализа (maxAAs) Критерий статистической незначимости 5 < (AZ/V9) Критерий практической незначимости 5 <0,32-maxAAs Вывод
± 5% 1,6% 0,24 < 0,39 0,24 < 0,51 Выполняются
Критерий прецизионности
Допуск содержания, В% Максимально допустимая неопределенность анализа (maxAAs) Требования критерия AZ < maxAAs Вывод
± 5% 1,6% 1,18 < 1,6 Выполняется
Выводы:
1. В результате проведенных исследований установлено, что использование второй производной спектра позволяет устранить поглощение вспомогательных веществ таблеток в ультрафиолетовой области и тем самым исключить систематические погрешности, обусловленные неучтённым фоном.
2. Разработана методика количественного определения нового биологически активного соединения но-отропного действия производного хиназолина в таблетках на основе расчета вторых производных его УФ-спектра.
3. Проведена валидационная оценка методики по характеристикам линейность, прецизионность, правильность и робастность.
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК
APPLICATION OF DERIVATIVE SPECTROPHOTOMETRY FOR DETERMINATION OF NEW BIOLOGICALLY ACTIVE COMPOUND OF DERIVATIVEQUINAZOLINE IN TABLETS
VolokitinaD.S., Lazaryan D.S., Volokitin S.V.
Pyatigorsk Medical and Pharmaceutical Institute, Pyatigorsk, Russian Federation.
Annotation. The possibility of using derivative spectrophotometry in the ultraviolet region to quantify the new biologically active compound of the quinazoline-4 (3H) -one derivative in tablets has been studied. The identification procedure was developed and validated.
Key words: biologically active compound, quinazoline, derivative spectrophotometry, validation, eligibility criteria
Nootropic Activity of Some Quinazoline Amides / I.N. Tyurenkov, A.A. Ozerov E.N. Shmatova and others // Pharmaceutical Chemistry Journal. - 2015-T. 49. № 2. pp. 8890.
Quinazoline derivatives, possessing nootropic and antihy-poxic activity: patent 2507198 Russian federation. № 2012138665/04; date of filing: 10.09.2012; date of publication: 20.02.2014 Bull. 5.- 12 pp.
Manual for the pharmaceutical industry / Methodological recommendations. -Moscow: Sport and Culture 2000, 2007. - 192 p.
[1] Булатов М.И. Практическое руководство по фотометрическим методам анализа - 5-е изд. / Булатов М.И., Калинкин И.П. - Л.: Химия, 1986. - 432 с.
[2] Государственная Фармакопея Российской Федерации. Изд. XIII. Т. 1. М., 2015. URL: http://feml.scsml.rssi.ru/feml.
[3] Ноотропная активность амидов хиназолинового ряда / И.Н. Тюренков, А.А. Озеров, Е.Н. Шматова и др. // Хим-фармац. журнал.-2015.-Т.49, № 2.- С. 18-20.
[4] Производные хиназолина, обладающие ноотропной и антигипоксической активностью: пат. 2507198 Рос. Федерация. № 2012138665/04; заявл. 10.09.2012; опубл. 20.02.2014. Бюл. № 5. - 12 с.
[5] Руководство для предприятий фармацевтической промышленности / Методические рекомендации. - М.: «Спорт и культура-2000», 2007. - 192 с.
REFERENCES
[1] Bulatov M.I. A practical guide to photometric methods of analysis - 5 th ed. / Bulatov MI, Kalinkin I.P. - L.: Chemistry, 1986. - 432 p.
[2] Gosudarstvennaja Farmakopeja Rossijskoj Federacii. Izd. XIII. Vol. 1. Moscow, 2015. Available at: http://feml.scsml.rssi.ru/feml.
[3]
[4]
[5]
