CC BY
145
Лечение и профилактика
УДК 619:616.995.1-085
ПРИМЕНЕНИЕ ПРЕПАРАТА ЭВЕЙ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ КОКЦИДИОЗОВ
Ю.В. БАХТИЯРОВА1 кандидат химических наук Н.А. ЛУТФУЛЛИНА2
ассистент В.В. АНДРИЯШИН1 аспирант С.Н. ЕГОРОВА3 доктор фармацевтических наук М.Х. ЛУТФУЛЛИН2 доктор ветеринарных наук И.В. ГАЛКИНА1 доктор химических наук 1 Химический институт им. А.М.Бутлерова КГУ, e-mail: [email protected] 2Казанская государственная академия ветеринарной медицины 3Казанский государственный медицинский университет
Изучена эффективность препарата эвей при эйме-риозе. Получена высокая эффективность препарата в дозе 10 мг/кг при эймериозе цыплят, кроликов и поросят. Острая токсичность препарата составила 160 мг/кг. Эвей относится к 3 классу умеренно опасных веществ.
Ключевые слова: эвей, лечение, эффективность, токсичность, эймериоз.
Эймериозы вызываются простейшими, паразитирующими преимущественно в эпителиальных клетках кишечника птиц и животных. В организме больных эймериозом происходит интоксикация продуктами обмена простейших и гнилостной микрофлоры, что ведет к нарушению функций нервной системы, угнетению животных, вплоть до коматозного состояния, тремора мышц и паралича конечностей. Птицы и животные теряют в массе тела; мясо переболевших животных имеет низкую питательную ценность и быстро портится при хранении. У птиц снижается яйценоскость. Хозяйства несут большие расходы на приобретение препаратов для лечения, профилактики и проведения дезинвазии помещений. При сильной степени инвазии эймериозы могут вызывать массовую гибель животных [1, 2].
Для лечения эймериозов животных и птиц предложены лекарственные препараты, обладающие антиэймериозной активностью: химкокцид, салино-мицин, байкокс, нитрофурановые (фуракриллин, фуразолан, фуразолидон) и сульфаниламидные препараты (сульфадимезин, сульфадиметоксин, сульфа-передозин, норсульфазол, фталазол), а также левомицетин, мономиецин и многие другие [3-9]. Несмотря на широкое использование лекарств в качестве средств лечения и профилактики эймериозов, получить 100%-ные показатели экстенс- и интесэффективности не удается.
Принцип использования антиэймериозных препаратов основан на многократном их применении, что неиндифферентно для любого организма. Многие из них обладают токсическим, раздражающим и иммунодепрессив-
ным действием. Кроме того, длительное применение одного кокцидиостатика приводит к появлению устойчивых штаммов эймерий, которые вызывают явления дисбактериоза, способствуют угнетению ферментативной активности пищеварительного тракта и могут быть причиной других функциональных изменений в организме животных. При применении сульфаниламидов могут возникнуть аллергические реакции и другие побочные явления: дерматиты, лейкопения, невриты. Вследствие плохой растворимости сульфаниламиды и особенно продукты их ацетилирования, образующиеся в организме путем замещения водорода аминогруппы остатком уксусной кислоты, могут выпадать в почках в виде кристаллов и закупоривать мочевыводящие пути [10].
Следовательно, изыскание новых препаратов и схем их применения для профилактики и лечения эймериоза животных и птиц, воздействующих на различные звенья патологического процесса, является актуальной задачей.
Одна из основных задач - поиск антипаразитарных лекарственных веществ, сочетающих высокую токсичность для паразитов и низкую - для человека.
Цель наших исследований - разработка и синтез отечественной субстанции, эффективной при кокцидиозе в маленькой дозе.
Материалы и методы
Изучена лечебная эффективность при эймериозе лекарственного средства эвей в виде крахмальных гранул с очень низкой концентрацией действующего вещества - четвертичной соли фосфония (трифенил-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибен-зил)фосфоний бромид) в условиях вивария кафедры паразитологии и радиобиологии ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины» в августе-сентябре 2011 г. на 30 цыплятах в возрасте 20 сут и 15 кроликах в возрасте 12 мес и в ООО «Агрофирма Сарсазы» в июне-июле 2011 г. на поросятах 3-4-месячного возраста.
В первом опыте для изучения эффективности препарата эвей подопытных цыплят заражали смешанной культурой спорулированных ооцист эйме-рий (Eimeria tenella, E. maxima, E. acervulina и др.) в дозе 10000 ооцист на голову, после чего их разделили на 3 группы по 10 голов в каждой с учетом пола и живой массы. Цыплят во время эксперимента содержали в клетках и кормили промышленным комбикормом. Через 8 сут после заражения цыплята первой группы получили препарат однократно в дозе 10 мг/кг массы тела (по ДВ). Цыплятам второй группы в корм добавляли ампролиум 30%-ный в дозе 240 мг/кг корма в течение 7 сут. Третья группа цыплят не получала лекарственных препаратов и являлась контрольной. Помет от каждого цыпленка во всех группах исследовали по методу Котельникова и Хренова [11-13] до лечения и на 3, 7 и 15-е сутки после.
Во втором опыте использовали 15 кроликов, свободных от кокцидий и гельминтов. Животных заражали смешанной культурой спорулированных ооцист эймерий (Е. stidae, E. perforans, E. magna и др.). Для этого неспорули-рованные ооцисты эймерий культивировали в чашках Петри в термостате при температуре 26-27 оС, периодически орошая дехлорированной водой. Суспензию ооцист отмывали два раза водопроводной водой центрифугированием и подсчитывали число ооцист в 1 мл. Каждому животному перорально вводили ооцисты эймерий в расчете 20000 на 1 кг массы тела. После заражения кроликов разделили на три группы.
Животным первой группы через 10 сут после заражения вместе с концентрированным кормом задавали эвей в дозе 10 мг/кг (по ДВ) однократно, второй - фуразолидон в дозе 20 мг/кг двумя пятидневными курсами с интервалом в 3 сут. Кроликов третьей группы не лечили и они служили в качестве контроля. Животные в течение опыта находились в одинаковых условиях содержания, предотвращающих спонтанное заражение. Кормление животных осуществляли в соответствии с зоотехническими нормами. Ежедневно про-
водили клинический осмотр поголовья. Пробы фекалий исследовали до заражения и введения препаратов и через 3, 7 и 15 сут после лечения.
Испытание препарата при кокцидиозе свиней проводили в ООО «Агрофирма Сарсазы» в июне-июле 2011 г. На основании копроскопических исследований были сформированы три группы спонтанно зараженных поросят по 20 голов в возрасте 65-70 сут. Поросята первой группы получали эвей в дозе 10 мг/кг однократно с кормом, второй - ампролиум в дозе 25 мг/кг 2 раза в сутки 4 дня подряд. 3-я группа поросят препарат не получала и служила контролем. Фекалии поросят всех групп исследовали до лечения и на 14-е сутки после.
Работу по изучению острой токсичности эвея проводили на базе кафедры паразитологии и радиобиологии КГАВМ им. Н.Э. Баумана в сентябре 2011 г. В опыте использовали 70 белых мышей обоего пола массой тела 18-21 г. Мышей с учетом пола, возраста и массы тела разделили на 7 групп: 6 подопытных и одну контрольную по 10 голов в каждой. Мышам 1, 2, 3, 4, 5 и 6-й подопытных групп вводили препарат в виде водной суспензии в желудок однократно с помощью зонда в возрастающих дозах 50, 100, 150, 200, 250 и 300 мг/кг массы тела по ДВ соответственно. Мышам контрольной группы в желудок вводили дистиллированную воду. За состоянием здоровья лабораторных животных наблюдали в течение 14 сут после введения, учитывая внешний вид, подвижность, прием корма. Случаи гибели регистрировали, павших животных вскрывали.
Расчет среднесмертельной дозы проводили по методу Кербера [16] с использованием формулы:
ЛД50 = ЛДюс - (I (2 х D))/m, где D - интервал между двумя смежными дозами; 2 - среднее арифметическое число животных, у которых наблюдали реакцию; т - число животных в группе.
Полученные результаты по изучению токсичности и эффективности препарата эвей обработаны статистически.
Результаты и обсуждение
В первом опыте через 7 сут после заражения у цыплят всех групп в пробах помета были выявлены ооцисты кокцидий и начали проявляться первые клинические признаки заболевания: угнетение, понижение аппетита. Данные по эффективности эвея при эймериозе цыплят приведены в таблице 1.
У цыплят, экспериментально зараженных эймериями, до лечения в поле зрения микроскопа (об. х 8, ок. х 10) обнаружили от 49±1,6 до 66±2,3 ооцист кокцидий. Через трое суток после лечения у цыплят первой группы число ооцист эймерий снизилось до 3±0,3 экз. Интенс- (ИЭ) и экстенсэффективность (ЭЭ) эвея составила 95,5 и 90 % соответственно. Через семь суток после лечения показатели ИЭ и ЭЭ существенно не изменились - 89,4 и 90 % соответственно.
Во второй группе ИЭ и ЭЭ препарата на третьи и седьмые сутки после начала лечения составила соответственно 63,3 и 60 %, 71,4 и 80 %.
В контрольной группе цыплят число ооцист эймерий в период опыта возросло с 53±1,2 до 150±2,3 экз.
Во время опыта не зафиксировано падежа цыплят в первой группе. Во второй группе пал один цыпленок, в контрольной - три цыпленка. Для освобождения цыплят второй группы от кокцидий потребовалось больше времени. При этом показатели ИЭ и ЭЭ были ниже, чем в первой группе.
Результаты изучения эффективности эвея при эймериозе кроликов приведены в таблице 2. До лечения все кролики были заражены эймериями при обнаружении от 103±2,1 до 129±2,7 ооцист кокцидий в поле зрения микроскопа. Через трое суток после лечения у кроликов первой группы число ооцист эймерий снизилось до 10±0,3 экз. ИЭ и ЭЭ составила соответственно 91,4 и 80 %. Через семь суток после лечения показатели ИЭ и ЭЭ существенно не изменились - 94 и 80 % соответственно.
№ группы Число птиц в группе Число ооцист эймерий до лечения Показатели эффективности, сутки после лечения
3 7 15
число ооцист эймерий ИЭ, % ЭЭ, % число ооцист эймерий ИЭ, % ЭЭ, % число ооцист эймерий ИЭ, % ЭЭ, %
1 10 66±2,3 3±0,3 95,5 90 7±0,1 89,4 90 14±0,5 78,8 90
2 10 49±1,6 18±2,3 63,3 60 14±2,1 71,4 80 25± 1,1 49 70
3 10 53±1,2 94±1,7 - 0 75±2,5 - 0 150±2,3 - 0
2. Сравнительная эффективность эвея и фуразолидона при лечении эймериоза кроликов
№ группы Число животных в группе Число ооцист эймерий до лечения Показатели эффективности, сутки после лечения
3 7 15
число ооцист эймерий ИЭ, % ЭЭ, % число ооцист эймерий ИЭ, % ЭЭ, % число ооцист эймерий ИЭ, % ЭЭ, %
1 5 116±1,4 10±0,3 91,4 80 7±0,1 94 80 9±0,1 92,2 80
2 5 129±2,7 38±2,5 70,5 60 44± 1,1 66 60 19±2,4 85,3 60
3 5 103±2,1 124±1,7 - 0 98±1,5 - 0 110±1,9 - 0
3. Сравнительная эффективность эвея и ампролиума при лечении эймериоза свиней
№ группы Число животных в группе Число ооцист эймерий до лечения Число ооцист эймерий на 14-е сутки после лечения ИЭ, % ЭЭ, %
1 20 97±1,9 13±1,6 86,6 90
2 20 82±2,5 37±1,2 54,9 70
3 20 108±1,3 130±2,6 - 0
Во второй группе ИЭ и ЭЭ препарата на третьи и седьмые сутки после начала лечения составила соответственно 70,5 и 60 %, 65,9 и 60 %.
У кроликов контрольной группы число ооцист эймерий в фекалиях в течение опыта не снижалось и составило через 3, 7 и 15 сут соответственно 124±1,7, 98±1,5 и 110±1,9 экз. в поле зрения микроскопа.
Таким образом, эффективность эвея при эймериозе кроликов на 3, 7 и 15-е сутки после лечения на 20,9 %, 28,0 и 6,9 % выше активности фуразолидона.
Результаты изучения эффективности эвея при эймериозе поросят приведены в таблице 3. До лечения все поросята были заражены эймериями при обнаружении от 82±2,5 до 108±1,3 ооцист в поле зрения микроскопа. Экстенсивность инвазии составила 100 % во всех группах. Через две недели после лечения у поросят первой и второй групп обнаружили соответственно 13±1,6 и 37±1,2 ооцист эймерий. ИЭ и ЭЭ составила соответственно 86,6 и 90 % эвея и 54,9 и 70 % ампролиума. В контрольной группе число ооцист эймерий в фекалиях поросят существенно не изменялось.
Результаты изучения острой токсичности эвея приведены в таблице 4.
4. Результаты изучения острой токсичности эвея на белых мышах
№ Доза пре- Число мы- Пало мы- Выжило Леталь-
группы парата, шей в шей, экз. мышей, ность, %
мг/кг группе, экз. экз.
1 50 10 0 10 0
2 100 10 3 7 30
3 150 10 4 6 40
4 200 10 7 3 70
5 250 10 9 1 90
6 300 10 10 0 100
Однократное пероральное введение препарата в дозе 50 мг/кг массы тела по ДВ не вызывало у мышей изменений в поведении и общем состоянии. Падежа животных в течение опыта не отмечали. Эту дозу определили как максимально переносимую.
При введении эвея в дозах 100 и 150 мг/кг в течение пяти суток наблюдали угнетение двигательной активности и аппетита животных. Три из десяти мышей второй группы пали на вторые и третьи сутки. В третьей группе погибли четыре из 10 мышей.
Доза эвея 200 мг/кг вызвала падеж семи из 10 мышей на 1-7-е сутки после введения. Доза эвея 250 мг/кг вызывала значительное ухудшение общего состояния животных, уменьшение двигательной активности и потребления корма. 9 из 10 мышей пали в течение первых пяти суток.
У мышей шестой группы, которым вводили препарат в дозе 300 мг/кг, наблюдали кратковременный период двигательной активности, сменяющийся периодом глубокого угнетения и отказом от корма. Все мыши погибли в течение первых двух суток после введения. При вскрытии у всех животных отмечали вздутие желудочно-кишечного тракта, застой содержимого в желудке, венозный застой в сосудах брюшной полости.
При пероральном введении ЛД50 препарата составила 160 мг/кг.
Таким образом, в соответствии с ГОСТ 121.007-76 [17] препарат эвей относится к III классу умеренно опасных веществ.
Литература
1. Акбаев М.Ш., Василевич Ф.И., Акбаев P.M. Паразитология и инвазионные болезни животных. - М.: Колос, 2008. - 756 с.
2. Васильева Д.В., Гадеева Г.М. Распространение эймериоза в хозяйствах Татарстана // Матер. докл. респуб. науч.-произв. конф. «Актуальные вопросы ветеринарии и зоотехнии». - Казань, 1992. - С. 12.
3. Акбаев М.Ш., Водянов А.А., Косминков Н.Е. Паразитология и инвазионные болезни животных. - М.: Колос, 2000. - 744 с.
4. Дондуков И.Ц. Сравнительная оценка некоторых препаратов при кокцидиозе кроликов // Вестник науки. - 1969. - № 2. - С. 32-33.
5. Бурлаков С.В. Ампролиум Мериал идеальный выбор // Ветеринария. -№ 4. - 2002. - С. 13.
6. Дондуков И.Ц. Эффективность сульфадиметоксина и норсульфазола с фталазолом при кокцидиозе кроликов // Ветеринария. - 1969. - № 1. - С. 2122.
7. Иргашев И.Х., Кабулов Б.Д., Сысоев И.В. Испытание пролонгированного химкокцида при эймериозах кур // Матер. докл. науч. конф. «Возбудители и переносчики паразитов и меры борьбы с ними». - 1988. - № 5. - С. 83.
8. Абуладзе К.И., Демидов Н.В., Непоклонов А.А. Паразитология и инвазионные болезни сельскохозяйственных животных. - М.: Агропромиздат, 1990. - 256 с.
9. Шевцов А.А., Колабский Н.А., Никольский С.Н. Паразитология. - М.: Колос, 1979. - 277 с.
10. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М.: Новая волна, 2010. -822 с.
11. Капитаненко А.М., Дочкин И.И. Клинический анализ лабораторных исследований. - М.: Воениздат, 1988. - 270 с.
12. Большой энциклопедический словарь. Ветеринария. Под ред. В.П. Шишкова. М.: Большая Российская энциклопедия, 1998. - 640 с.
13. Котельникова Г.А. Гельминтологические исследования животных и окружающей среды. - М.: Колос, 1984. - 207 с.
14. Starnes W.H., Lauff J.J. Reactions of a Quinone Methode with Tri-n-butylphosphosphine // J. Org. Chem. - 1970. - V. 35, № 6. - P. 1978-1986.
15. US Patent 2004/0138301 A1. B.S. Hansen, T.K. Hansen, S. Tullin, U. Colding-Jordensen. Chemical uncouplers for the treatment of obesity.
16. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. - Л.: Медгиз, 1962. - 180 с.
17. Измеров Н.Ф., Саноцкий И.В., Сидоров К.К. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном введении. - М.: Медицина, 1977. -С. 196-197.
Application of «away» for coccidiosis treatment
Yu.V. Bakhtiyarova, N.A. Lutfullina, V.V. Andriyashin, S.N. Egorova, M.H. Lutfullin, I.V. Galkina
Efficiency of «away» at eimeriosis is studied. It is received high efficiency of the drug in a dose of 10 mg/kg at eimeriosis of chickens, rabbits and pigs. Acute toxicity of the drug is 160 mg/kg. «Away» belongs to the third class of moderately dangerous substances.
Keywords: «away», treatment, efficiency, toxicity, eimeriosis.
