CC BY
3
Выводы
1. Разработан колориметрический метод определения трифторпро-пилметилдихлорсилана, основанный на образовании окрашенного продукта в результате взаимодействия с тетраметилдиаминобензофеноном (кетоном Михлера) в анилине. Чувствительность метода 0,05 мг в ко-лориметрируемом объеме, HCl определению не мешает.
2. Разработан групповой микрообъемный метод определения фтор-алкилхлорсиланов, основанный на гидролитическом расщеплении молекулы и определении образующейся соляной кислоты йодометри-чески.
3. Разработан метод, основанный на термическом разложении фторалкилхлорсиланов в кварцевой трубке и последующем определении образовавшегося тетрафторида кремния по синему кремнемолиб-деновому комплексу. Чувствительность метода 0,005 мкг в колоримет-рируемом объеме.
ЛИТЕРАТУРА
Голубев А. А., Люблина Е. И. В кн.: Материалы научной сессии Ленин-градск. ин-та гигиены труда и профзаболеваний, посвящ. итогам работы ин-та за 1959—1960 гг., 1961, стр. 107.—-К р е ш к о в А. П., Бор к В. А. Успехи химии, 1959, т. 28, в. 5, стр. 576.—Они же. Ж. аналит. химии, 1951, в. 2, стр. 78.—Криворуч-ко Ф. Д. Там же, 1957, в. 2, стр. 247.—М ы ш л я е в а Л. В. Труды Московск. химико-технологическ. ин-та, 1957, т. 25, стр. 29.—Перегуд Е. А., Бойки на Б. С. Ж. аналит. химии, >1953, в. 3, стр. 178.—Они же. Заводск. лабор., 1956, № 3, стр. 287.
Поступила 12/VII 1961 г.
Ъ Ъ it
ПРИМЕНЕНИЕ ПАНКРЕАТИНА ПРИ ИССЛЕДОВАНИИ СМЕШАННЫХ КУЛЬТУР НА НАЛИЧИЕ ТОКСИНА
CL. BOTULINUM
• ♦
JI. М. Шиигулина (Москва)
По данным Турнера и Родуэла (Turner, Rodwell, 1943), большинство протеолитических энзимов различного происхождения активирует токсгн Cl. perfringens типа D (Cl. Welchi)1. Значительное увеличение силы ботулинического токсина типа Е при активации панкреатином слаботоксичных фильтратов было получено К. И. Матвеевым и Т. И. Булатовой (1955—1956), А. А. Воробьевым, Л. М. Самородовым, И. В. Воронцовым (1959). Аналогичные результаты наблюдал Даф с сотрудниками (Duff, 1956) и Гордон с сотрудниками (Gordon, 1957) при активации ботулинического токсина типа Е трипсином.
В связи с этим мы попытались выяснить, можно ли при помощи панкреатнна при исследовании проб почвы и рыбы на наличие СЛ. botulinum повысить активность ботулинического токсина с целью его идентификации в первоначальных смешанных культурах, полученных при посеве исследуемого материала.
Исходная смешанная культура, полученная по методике, описанной в работе А. Т. Кравченко, Л. М. Шишулиной, Г. П. Галкиной и Л. В. Горецкой (i960), пересевалась на среду Китт—Тароцци во флаконе с добавлением 0,25%, раствора глюкозы. Культивирование посевов, которые содержали Cl. botulinum типов А, В, С, Cl. tetani, производили при температуре 34°, Cl. botulinum типа Е — при температуре 25°. Остальные посевы инкубировали при той температуре, при которой ис-
годные культуры были активными. На 5-е сутки роста проверяли активность культур. С этой целью в две пробирки отбирали по 1 мл куль-туральной жидкости. В одну из пробирок добавляли 0,05 мл (1:20) раствора панкреатина, разведенного 1:10, с протеиназной активностью 7000 шоу. Пробирку помещали в термостат при температуре 34° на
1 час 30 минут, после чего добавляли 1 мл пептонной воды. Полученное разведение культуральной жидкости вводили внутрибрюшинно двум белым мышам по 0,5 мл. Если проба оказывалась активной, то в последующие дни (6—8-й день роста) определяли титр токсина и его типоспецифичность. Разведение культуральной жидкости и постановку реакции нейтрализации со специфическими противоботулиническим и противостолбнячной сыворотками делали после добавления панкреатина к культуральной жидкости и Р/г-часовой инкубации при 34°.
Во вторую пробирку панкреатин не добавляли и определение активности, титра токсина и его идентификацию проводили по обычной методике (А. Т. Кравченко и др., 1960).
Всего нами исследовано 87 смешанных культур, из них 4 культуры содержали Cl. botulinum типа А, 5 культур — Cl. botulinum типа В,
2 культуры — Cl. botulinum типа С, 44 культуры — Cl. botulinum типа Е, 2 культуры — Cl. botulinum типа В совместно с Cl. tetani, 3 культуры— Cl. tetani, 23 культуры со слабой активностью и 4 культуры с неспецифической активностью,
К слабоактивным культурам мы относили такие, которые не всегда давали гибель белых мышей на 3—4-е сутки после введения им 0,5 мл культуральной жидкости, разведенной в отношении 1 :2 пептонной водой. Такие культуры при пересевах часто теряли активность.
К пробам с неспецифической активностью мы относили культуры, активность которых была обусловлена неспецифическим (по отношению к Cl. botulinum и Cl. tetani) токсином, что доказывалось отрицательной реакцией нейтрализации поливалентной противоботулинической и противостолбнячной сыворотками и клинической картиной заболевания мышей. Полученные результаты приведены в таблице.
Результаты исследования проб почвы
Проба Количество проб Активные пробы Количество проб с большей активностью Пробы с положительной реакцией нейтрализации
без панкреатина с панкреатином без панкреатина с панкреатином % без панкреатина с панкреатином
Cl. botulinum А..... 4 - 2 2 1 Одинаковые 1 1
Cl. botulinum В .... 5 4 4 » 3 3
Cl. botulinum С..... 2 2 2 » 2 2
Cl. botulinum Е..... 44 22 31 2 12 16 26
Cl. botulinum B-f- .... (в 10 раз) •
2 1 1 Одинаковые 1 1 •
Cl. tetani.......
Cl. tetani....... 3 2 2 1 - 1 1
Слабоактивная ...... 23 2 7 - 1 - 2 (тип Е)
С неспецифической актив- 9
ностью ........ 4 - - - - - Ф
87 35 49 3 13 CK botulinum
23 | 35
Cl. tetani
Из таблицы видно, что из 87 пересеянных смешанных культур 35 (40,2%) были активными без добавления панкреатина и 49 (56,6%) — с добавлением панкреатина. Токсин Cl. botulinum был обнаружен при исследовании проб обычным методом в 23 случаях (26,4%), с приме-
нением панкреатина — в 35 случаях (40,2%) При последнем способе удалось увеличить процент обнаружения только токсина С1. botulinum типа Е. При определении активности и типоспецифичности слабоактивных проб с добавлением панкреатина две пробы были идентифицированы, как содержащие токсин Cl. botulinum типа Е. Часть проб при
пересеве теряла активность.
Низкая степень активации (в случае Cl. botulinum типа Е) или отсутствие активации (в случае Cl. botulinum типа А, В и С) в наших опытах можно объяснить, по-видимому, отсутствием корригирования pH и влиянием смешанных культур.
4
Выводы -
1. Применение панкреатина при исследовании проб позволяет обнаружить токсин Cl. botulinum типа Е в большем количестве проб, чем при исследовании обычным методом.
2. При исследовании проб, содержащих Cl. botulinum типа А, В
и С, добавление панкреатина не повышает активности культуральной жидкости.
3. При исследовании проб, содержащих Cl. botulinum типа Е, добавление панкреатина у большинства проб повышает активность культуральной жидкости в 10 раз.
ЛИТЕРАТУРА
Воробьев А. А., Самородов Л. М., Воронцов И. В. Тезисы докл. симпозиума по вопросам бактериальных токсинов и анатоксинов. М., 1959, стр. 51.—Кравченко А. Т., Шишулина JI. АА., Галкина Г. П. и др. В кн.: Анаэробные инфекции. М., 1960, стр. 268.—Матвеев К. И. Ботулизм. М., 1959.—Duff J. F., "Wright G. G., Jarinsky A., J. Bad., 1956, v. 72, p. 455.—Gordon M., FiocxM. A., Yarinsky A et al., Ibid., 1957, v. 74, p. 533.—T u г n e г A. W., Rod- , well A. W., Aust. J. exp. Biol. Med., 1943, v. 21, p. 17.
Поступила 7/IX 1961 r.
