CC BY
25
иммунология
ИММУНОЛОГИЯ
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2019
Амелина Е.А.1, Арсеньева В.А.1, Марданлы С.С.1,3, Марданлы С.Г.1,2
ПРИМЕНЕНИЕ НЕПРЯМОГО МЕТОДА ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКИХ IGM К ВИРУСУ ГЕРПЕСА ЧЕЛОВЕКА 6 ТИПА
1ЗАО «ЭКОлаб», г. Электрогорск Московской обл., Россия;
2ГОУВ Государственный гуманитарно-технологический университет «ГГТУ», г. Орехово-Зуево Московской обл., Россия; 3 Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. почетного акад. Н.Ф.Гамалеи Минздрава РФ», 123098, Москва, Россия
В последние годы особую актуальность приобрела своевременная диагностика герпесвирусной инфекции человека 6 типа (HHV6), особенно в педиатрии. В спектре серологической диагностики применен непрямой метод иммунофермент-ного анализа ИФА для выявления IgM к HHV-6 в исследовании образцов сывороток детей (198), условно здоровых пациентов (148) и доноров (145). Использование ИФА IgMHHV6 более значимо для расширения комплекса диагностического исследования заболевания, связанного с первичной инфекцией HHV6 или ее реактивацией.
Ключевые слова: герпесвирусные инфекции; вирус герпеса 6 типа; иммуноферментный анализ. Для цитирования: АмелинаЕ.А., АрсеньеваВ.А., Марданлы С.С., Марданлы С.Г. Применение непрямого метода имму-ноферментного анализа для выявления специфических IgM к вирусу герпеса человека 6 типа. Клиническая лабораторная диагностика. 2019; 64 (3): 158-163. DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0869-2084-2019-64-3-158-163
AMELINA E.A.1, ARSENYEVA V.A.1, MARDANLYS.S.13MARDANLYS.G.12
APPLICATION OF THE INDIRECT METHOD OF THE ENZYME IMMUNOASSAY FOR THE IDENTIFICATION OF SPECIFIC IGM TO HUMAN HERPES VIRUS 6 TYPE
1 CJSC "EKOlab'; Elektrogorsk, Moscow region;
2 State educational institution of higher education of the Moscow region State Humanitarian University of Technology "GGTU'; Orekhovo-Zuyevo, Moscow region;
3 State Research Institute of Epidemiology and Microbiology named after honorary academician N.F Gamaleya of the Ministry of Health of the Russian Federation, 123098, Moscow.
In recent years, timely diagnosis of human herpes virus infection of type 6 (HHV6), especially in pediatrics, has acquired particular relevance. In the .spectrum of serological diagnostics, an indirect ELISA method was used to detect IgM against HHV-6 in a study of samples of children sera (198), conditionally healthy patients (148) and donors (145). The use of ELISA IgM HHV6 is more significant for the expansion of the complex of the diagnostic study of the disease associated with primary HHV6 infection or its reactivation.
Key words: herpes virus infections; herpes virus type 6; enzyme immunoassay.
For citation: Amelina E.A, Arsenyeva V.A., Mardanly S.S., Mardanly S.G. Application of indirect enzyme immunoassay to detect specific IgM for human herpes virus type 6. Klinicheskaya Laboratornaya Diagnostika (Clinical Laboratory Diagnostics) 2019; 64 (3): 158-163 (in Russ.) D0I:http://dx.doi.org/10.18821/0869-2084-2019-64-3-158-163
For correspondence: Amelina E.A., Candidate of Biological Sciences, Head of Advanced Development Department; e-mail: ekolab-ferment@mail.ru
Conflict of interests. The authors declare the absence of conflict of interests. Acknowledgment. The study had no sponsor support.
Received 24.01.2019 Accepted 01.03.2019
Введение. В последние годы активно изучают различные аспекты эпидемиологии, клиники и диагностики инфекции, вызванной герпесвирусом человека 6 типа (ИИУ-6). [4, 6, 9, 14, 19]. Согласно международной классификации ИЙУ-6 — это ДНК-вирус подсемейства Betaherpesvirinae рода Roseolovirus, имеет два
Для корреспонденции: Амелина Елена Анатольевна, канд. биол. наук, нач. отд. перспективных разработок ЗАО «ЭКОлаб»; e-mail: ekolab-ferment@mail.ru
серологических подтипа — 6А и 6В [5]. Подтипы А и В, различаются по эпидемиологии, географическому распространению, свойствам роста, последовательности нуклеотидов, сероэпидемиологии и причастности к различным заболеваниям [6]. Вирус герпеса типа 6 подтипа А связывают с синдромом хронической усталости, рассеянным склерозом, угнетением иммунитета и про-грессированием ВИЧ-инфекции. Вирус герпеса типа 6 подтипа В вызывает внезапную экзантему и энцефалит у детей, фебрильные судороги и эпилепсию, пораже-
ние ЦНС (энцефалит, менингоэнцефалит, церебеллит); острые гепатиты, в том числе злокачественные формы с фульминантным течением.
Поэтому особую актуальность своевременная диагностика ННУ-бВ инфекции приобретает в современной педиатрии[1-3, 8]. Инфицирование герпес вирусом 6 типа происходит, как правило, в раннем детстве, чаще - от 6 до 18 месяцев. В большинстве случаев острая ННУ-6 не дает клинической картины, характерной для данного заболевания (внезапная экзантема), и инфицирование, и персистирование ННУ-6 могут проходить бессимптомно. Более того, НИУ-6 является наиболее распространенной среди герпесви-русных инфекций среди детей и представлена в большинстве случаев в виде микст-инфекций с другими герпесвирусами. При реактивации ННУ-6 или в сочетании его с вирусом Эпштейна-Барра и цитомега-ловирусом может наблюдаться клиническая картина инфекционного мононуклеоза [11, 15].
У детей с ОРВИ преобладают активные формы инфекции как первичной острой НН^6, так и реактивация хронической персистирующей инфекции [7, 11]. Неправильный диагноз в отношении герпес инфекции ведет к ошибкам в ведении больных (назначение антибиотиков, неправильный выбор противовирусных препаратов в случае осложнений), к неверному клиническому диагнозу. Активные формы ННУ-6 инфекции требуют проведение противовирусной терапии, поэтому необходимо проведение дополнительных методов лабораторного обследования [11, 14].
Реактивация ННУ-6 у взрослых обуславливает смертность и болезнь среди пациентов после пересадки органов и костного мозга, а также у больных СПИД. У лиц с иммунодефицитом ННУ-6 может быть причиной лихорадки, снижения функции и отторжения трансплантата, пневмонии, гепатитов, поражений ЦНС.
Диагноз острой ННУ-6 инфекции ставится на основании совокупности клинических данных и комплекса лабораторных методов (иммунохимических и молекулярно-биологических). В этом комплексе особое место среди иммунохимических методов занимает метод иммуноферментного анализа, ориентированный на выявление специфических антител класса М и G. Выявление ^М возможно с 4—7-го дня инфекционного процесса, титр антител достигает максимума ко 2—3-й неделе, через 2 месяца антитела уже не выявляются [9, 20].
По мнению некоторых авторов у некоторых детей с первичной инфекцией не развивается необходимый для определения уровень ^М. Кроме того, по некоторым данным специфические ^М не появляются при реактивации инфекции [19]. Некоторые исследования показали, что 4- 5% взрослых людей постоянно имеют антитела класса М [22]. В целом, коммерческие иммуноферментные тест-системы для выявления М антител широко не применяются для серологической диагностики ННУ-6, если не сказать, что вообще не используются.
Выявление антител G возможно с 7—10-го дня болезни, то есть практически одновременно с ^М, титр
immunology
достигает максимума ко 2—3-й нед и сохраняется на всю жизнь. Так как первичное заражение HHV-6 происходит в первые годы жизни, у малолетних детей наряду с выявлением IgM, и IgG против HHV-6 является хорошим маркером первичной инфекции HHV-6 при исследовании случаев внезапной экзантемы, фе-брильных приступов, лихорадки без очага инфекции и кожной сыпи [17]. Поскольку большинство людей старше двухлетнего возраста имеют антитела к вирусу герпеса типа 6 (около 95% взрослых), для диагноза необходимы парные сыворотки, взятые с интервалом в 2-4 нед, для установления диагностического нарастания антител G к HHV-6 [10,16]. Хотя повышение их титра не позволяет дифференцировать первичную инфекцию от реактивации, с большой долей вероятности у взрослых мы имеем дело с реактиваций инфекции.
Выявление специфических антител класса M априори является признаком первичной (или активной инфекции). Проведено много исследований по определению специфических IgM к HHV-6 иммуно-химическими методами среди разного контингента людей: детей и взрослых, доноров и лиц с клинически подтвержденным диагнозом [13,15,20,23]. Показано, что иммуноферментное выявление специфических антител М к HHV-6 кажется самым действительным для диагностики первичной инфекции HHV-6, отсутствие перекрестных реакций с ВЭБ или ЦМВ IgM-положительными сыворотками позволило декларировать специфичность метода до 98% [20], как и в другом исследовании образцов сывороток крови методом непрямого иммунофер-ментного анализа[13]. Исследования с использованием реакции иммунофлюоресценции выявили у 15 -53% здоровых лиц антитела М к HHV-6 [12, 18, 21]. Безусловно, процент выявляемых положительных реакций зависит и от метода исследования, и от его клинической чувствительности и специфичности [21]. Иногда высокой процент выявления специфических антител к HHV-6 связывают с ложноположи-тельными реакциями анализа, перекрестными взаимодействиями, но и подлинная реактивация HHV-6 у взрослых, в том числе и у здоровых доноров также, по-видимому, имеет место [17].
Цель исследования — применение метода непрямого ИФА для создания набора реагентов с целью выявления IgM к HHV-6 в исследовании образцов сывороток детей, условно здоровых пациентов и доноров.
Материал и методы. Набор реагентов для выявления IgM к HHV-6 методом непрямого иммунофлюо-ресцентного анализа - Human Herpesvirus 6 IgM assay, I-HV603M, SCIMEDX Corporation, США. Сыворотки исследовали в реакции непрямой иммунофлюорес-ценции, учет и анализ результатов проводили в соответствии с инструкцией производителя SCIMEDX Corporation, США.
Образцы сывороток здоровых доноров, детей и условно здоровых пациентов, проходивщих обследование в ЛПУ, предоставлены диагностическим центром ЗАО «Эколаб» «El Clinic».
Для приготовления иммуносорбента использовали рекомбинантный очищенный антиген HHV-6, содер-
иммунология
Рис. 2. Диаграмма распределения коэффициента позитивности 1р среди 145 образцов сыворотки крови доноров в ИФА при выявлении антител класса М.
По оси абсцисс - интервал оптической плотности (ОП) реакции ИФА; по оси ординат - количество образцов сыворотки крови, имеющих результат ИФА в данном интервале ОП.
жащий основной иммунодоминантный белок р101К генома ННУ-6 (ЗАО «ЭКОлаб», кат. № 41.44).
Разборные полистироловые планшеты для иммунологических реакций с плоским дном (Кипс, Дания, кат. № 446469).
Конъюгат: моноклональные антитела к ^М человека, связанные с пероксидазой («ЗАО «ЭКОлаб», кат. № 40.06).
Неспецифические реагенты для иммунофер-ментного анализа производства ЗАО «ЭКОлаб»: субстратно-индикаторный раствор, содержащий хромоген - тетраметилбензидин (кат. № 40.07), 25-кратный концентрата фосфатно-солевого буферного раствора с твином ФСБ-Т(х25), стоп-раствор 0,5 М серной кислоты.
Проведение ИФА. Очищенный рекомбинант-ный антиген (в концентрации 2,5 мкг/мл) в 100мМ карбонат-бикарбонатном буфере рН 9,6 вносили в лунки планшета объемом 100 мкл в каждую лунку,
инкубировали ночь при температуре 40С. На следующий день вносили блокирующий раствор для «закрытия» свободных зон пластика для неспецифической сорбции на этапах проведения ИФА -по 200 мкл в каждую лунку. Выдерживали 30 мин при комнатной температуре. Затем удаляли блокирующий раствор из лунок планшета, планшет высушивали. Сушку осуществляли при температуре 25-27°С и относительной влажности не более 60% в течение 2,5 - 3 часов. Планшеты запаивали с помощью устройства для вакуумной запайки в пакеты из алюминиевой фольги на полиэтиленовой основе.
В ИФА для разведения исследуемых образцов сывороток (плазмы), их титрования использовали фосфатный буфер, содержащий анти-IgG блокирующий раствор для исключения интервенции IgG антител за центры связывания антигена и влияния ревматоидного фактора. Антитела исследуемых образцов (при наличии) взаимодействовали с рекомбинантным
Таблица 1
Активность Ig G/M антителообразования в сыворотках острой и восстановительной фазы собранных у взрослых пациентов, проходивших обследование в ЛПУ и диагностическом центре «El Clinic»
Характеристика сыворотки по наличию Количество исследованных образцов на наличие Ig G/M к HHV-6
антител класса G Всего Нарастание титра IgG в парных Определено наличие IgM к HHV-6 в острой фазе
сыворотках. Сероконверсия ИФА РИФ
Определено наличие ^О к ННУ-6 148 3 3 3
Определено отсутствие ^О к ННУ-6 145 0 1 1
immunology
Таблица 2
Активность IgM антителообразования в сыворотках острой фазы цитомегаловирусной инфекции, собранных у взрослых пациентов, проходивших обследование в ЛПУ и диагностическом центре «El Clinic»
Характеристика сыворотки по нали- Количество исследуемых образцов на наличие Ig M к HHV-6
чию антител класса М Всего Определено отсутствие IgM Определено наличие IgM к HHV-6 в острой фазе
к HHV-6 ИФА РИФ
Определено наличие ^М к ЦМВ 15 14 1 1
IgG к HHV-6
0-18~| 16,1-18,0 14,1-16,0 12,1-14,0 10,1-12,0 8,1-10,0 6,1-8,0 4,1-6,0 2,1-4,0 0-2,0
0 20 40 60 80
■ IgG к HHV6
Рис. 3. Диаграмма распределения выявляемости антител класса G в образцах сывороток крови детей из ЛПУ Люберецкого района Московской области в возрасте от 0 до 18 лет.
антигеном, иммобилизованным в лунке планшета на первой стадии ИФА 30 мин при 370С. Во время второй инкубации (30 мин при 370С) антивидовой конъюгат связывается с образованием комплекса: / антиген иммуносорбента/-/антитела образца/ - анти IgM конъюгат. Наличие последнего выявляется по цветной реакции с ТМБ-субстратно-индикаторным раствором, интенсивность окрашивания реакционной смеси прямо пропорциональна концентрации антител к HHV-6 в образце. Результаты ИФА регистрировали спектрофотометрически, измеряя оптическую плотность реакции при - 450 нм и/или в двухволновом режиме при основной длине волны 450 нм и длине волны сравнения в диапазоне 620-650 нм.
В исследовании образцов сывороток были применены иммуноферментные тест-системы «ИФА-ЦМВ-IgG», «ИФА-ЦмВ-IgM», «ИФА-ВГЧб-IgG», разработанные и производимые ЗАО «Эколаб».
Результаты и обсуждение. У взрослых пациентов, проходящих обследование в диагностическом центре «El Clinic», были взяты образцы сывороток крови с интервалом в 2 недели. С использованием
ИФА на наборе реагентов ЗАО «Эколаб» «ИФА-ВГЧб-IgG» были отобраны 148 образцов сыворотки крови, содержащих специфические антитела класса G к вирусу герпеса 6 типа, причем три образца показывали увеличение титра IgG в динамике. Так как нарастание титра IgG и выявление антител IgM -признаки острой (активной инфекции), для образцов сывороток взрослых пациентов нарастание титра IgG косвенно может служить признаком возможной реактивации HHV-6. В реакции иммуно-флюоресценции «IFA Human Herpesvirus 6 (HHV-6) IgM Assay» производства фирмы SCIMEDX Corporation, США, установлено, что, выявленные ранее 3 образца, по результатам анализа содержат антитела класса М (рис.1 а, б, см.обложку).
В непрямом методе ИФА на твердофазном носителе с использованием рекомбинантного антигена эти сыворотки определены как положительные, то есть содержащие специфические IgM к HHV-6 в разных титрах (табл. 1).
Исследование 145 образцов сыворотки крови доноров в ИФА определило один образец с IgM анти
иммунология
HHV-6 (коэффициент позитивности 1,4), что было подтверждено реакцией иммунофлюоресценции в "IFA Human Herpesvirus 6 (HHV-6) IgM Assay" (табл. 1, рис.2). Недавняя реактивация HHV-6 может быть наиболее вероятным объяснением. Исключая лож-ноположительные реакции анализа, перекрестные взаимодействия с другими герпес вирусными инфекциями бета подсемейства, возможно мы имеем дело с истинной реактивацией HHV-6 в отсутствии клинических симптомов обострения.
Вирус герпеса типа 6 имеет биологическое и генетическое сродство с цитомегаловирусом. Для изучения возможности перекрестного взаимодействия антител класса М к ЦМВ с HHV-6, были отобраны 15 образцов сыворотки крови с высоким коэффициентом позитивности в «ИФА-ЦМВ-IgM» и исследованы в ИФА HHV-6.
Результаты анализа представлены в табл. 2. Один образец сыворотки был положителен, коэффициент позитивности составил 1,1, результат анализа был подтвержден в реакции иммунофлюоресценции. Вероятно, это случай микст-инфекции.
Часто причины реактивации HHV-6 остаются неопределенными, существует мнение, что первичные герпесвирусные инфекции могут являться триггером для реактивации HHV6. Выявление IgM-анти-HHV-6 следует интерпретировать осторожно. Сообщается о реактивации ЦМВ, сероконверсии HHV-6 IgG и выявлении HHV-6 IgM у пациента с первичной EBV-инфекцией [17].
Методом ИФА исследованы 198 образцов сывороток крови детей из ЛПУ Люберецкого района Московской области в возрасте от 0 до 18 лет на содержание антител к HHV6 (рис. 3). В возрасте от 0 до 1 года наличие в крови антител класса G к HHV6 можно отнести за счет материнских антител, в более старших группах детей наличие антител является показателем инфицированности. В младшей группе детей антитела класса М к HHV6 выявлены не были.
Диагностическая ценность метода ИФА выявления IgM к HHV-6 у детей раннего возраста более определенная. Хотя у большинства детей в возрасте 2-22 месяцев с клиническими признаками HHV-6 регистрировали ответ специфических IgM примерно в то же время, что и IgG-антител, в отдельных случаях наблюдается не классическая картина гуморального ответа на HHV-6, что требует проведения исследования образца сыворотки крови на антитела М и G класса [17].
Поэтому применение метода ИФА, позволяющего выявлять специфические антитела М класса к HHV-6, становится более значимо для расширения диагностического исследования спектра заболевания, связанного с первичной инфекцией HHV-6 или реактивацией.
Заключение. Применение метода ИФА, обладающего высокой чувствительностью и специфичностью, для выявления IgM анти HHV-6 расширяет возможности серологической диагностики первичной HHV-6 и ее реактивации. Без клинических признаков реактивация HHV-6 может определяться и у условно здоровых пациентов и доноров. ИФА позволит в дальнейшем
провести более масштабное исследование реактивации HHV-6 у взрослых пациентов и детей.
Благодарность. Авторы выражают благодарность сотрудникам отдела перспективных разработок ЗАО «ЭКОлаб» за оказанную помощь при проведении исследований.
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
ЛИТЕРАТУРА (пп. 12 -23 см. REFERENCES)
1. Абатуров А.Е., Шостакович-Корецкая Л.Р. HHV-6-инфекция у детей. Инфекции у детей. 2007; 3 (6): 18-24.
2. Демидова М.В., Кравченко Л.В., Левкович М.А., Афонин А.А. Современное состояние проблемы герпесвирусной инфекции 6 типа у детей. Детские инфекции. 2013; 3: 20-3.
3. Детская и перинатальная смертность в России: тенденции, структура, факторы риска. Социальные аспекты здоровья населения. 2008; 1: http://vestnik.mednet.ru/.
4. Калугина М.Ю., Каражас Н.В., Рыбалкина Т.Н. и др. Актуальность диагностики инфекции, вызванной вирусом герпеса человека 6-го типа. Детские инфекции. 2012; 1: 60-3.
5. Каражас Н.В., Малышев Н.А., Рыбалкина Т.Н., Калугина М.Ю. и др. Герпетические инфекции. Эпидемиология, клиника, диагностика, лечение и профилактика. Методические рекомендации. Правительство Москвы, Департамент здравоохранения; Спецкнига; 2012.
6. Мелёхина Е.В, Музыка А.Д., Калугина М.Ю. и др. Современные представления об инфекции, вызванной вирусом герпеса человека 6 типа. Архив внутренней медицины. 2016; 1(27): 13-9.
7. Мелёхина Е.В., Музыка А.Д., Петухова Е.В. и др. Методы этиологической диагностики инфекции вируса герпеса человека 6 типа у детей с острыми респираторными заболеваниями. Молекулярная диагностика. 2017; 1(1): 222-3.
8. Никольский М.А., Радыш М.В. Роль вирусов герпеса человека 6 и 7-го типов в возникновении фебрильных судорог у детей. Вопросы диагностики и педиатрии. 2012; 4(4): 46-8.
9. Никольский М.А. Инфекция, вызываемая вирусом герпеса человека 6 типа у детей: современное состояние проблемы. Российский вестник перинатологии и педиатрии. 2008; 2: 93-6.
10. Никольский М.А., Мессорош В.Г., Минченко С.И. Серокон-версия и нарастание концентрации IgG-антител при инфекции, вызванной вирусом герпеса 6-го типа у детей. Эпидемиология и инфекционные болезни. 2008; 4: 22-4.
11. Околышева Н.В., Климова Р. Р., Чичев Е.В., Кистенева Л.Б., Малышев Н.А., Куш А.А. Особенности течения инфекции, вызванной вирусом герпеса человека 6 типа у детей раннего возраста на фоне острой респираторной вирусной инфекции. Детские инфекции. 2014; 3: 19-23.
REFERENCES
1. Abaturov А.Е., Shostakovich-Koretskaya L.R. HHV-6 infection in children. Infektsii u detej. 2007; 3 (6): 18-24. (in Russian)
2. Demidova M.V., Kravchenko L.V., Levkovich М.А., АБэшп А.А. The current state of the problem of herpes infection 6 type in children. Detskie infektsii. 2013; 3. 20-3. (in Russian)
3. Child and perinatal mortality in Russia: trends, structure, risk factors. Sotsial'nye aspekty zdorov'ya naseleniya. 2008; 1: http:// vestnik.mednet.ru/. (in Russian)
4. Kalugina M.YU., Karazhas N.V., Rybalkina T.N. i dr. The relevance of diagnosis of infection caused by the human herpes virus 6th type. Detskie infektsii. 2012; 1: 60-3. (in Russian)
5. Karazhas N.V., Malyshev NA., Rybalkina T.N., Kalugina M.YU. et al. Herpetic infections. Epidemiology, clinic, diagnosis, treatment and prevention. [ Metodicheskiye rekomendatsii]. Moscow: Spetskniga; 2012. (in Russian)
6. Melokhina Ye.V., Muzyka A.D., Kalugina M.Yu. et al. Modern
ideas about infection caused by the human herpes virus type 6. Arkhiv vnutrenney meditsiny. 2016; 1(27): 13-9. (in Russian)
7. Melokhina Ye.V., Muzyka A.D., Petukhova Ye.V. et al. Methods for the etiological diagnosis of human herpes virus infection of type 6 in children with acute respiratory diseases. Molekulyarnaya diag-nostika. 2017; 1(1): 222-3. (in Russian)
8. Nikolsky M.A., Radysh M.V. The role of human herpes viruses 6 and 7 types in the occurrence of febrile seizures in children. Voprosy diagnostiki ipediatrii. 2012; 4(4): 46-8. (in Russian)
9. Nikolsky M.A. Infection caused by the human herpes virus type 6 in children: the current state of the problem. Rossiyskiy vestnik perinatologii i pediatrii. 2008; 2: 93-6. (in Russian)
10. Nikolsky M.A., Messorosh V.G., Minchenko S.I. Seroconversion and increase in the concentration of IgG-antibodies during infection caused by the herpes simplex virus type 6 in children. Epidemi-ologiya i infektsionnye bolezni. 2008; 4: 22-4. (in Russian) Okolysheva N.V., Klimova R R., Chichev E.V., Kisteneva L.B., Malyshev N.A., Kush A.A. et al. Features of the course of infection caused by the human herpes virus type 6 in young children against the background of acute respiratory viral infection. Detskiye infek-tsii. 2014; 3: 19-23. (in Russian)
11. Ablashi D.V., Eastman H.B., Owen C.B., Roman M.M., Friedman J, Zabriskie J.B. et al. Frequent HHV-6 reactivation in multiples clero-sis (MS) and chronic fatigue syndrome (CFS) patients. J.Clin. Virol. 2000; 16: 179-91.
12. Dahl H., Linde A., Sundqvis V.A, Wahren B. An enzyme-linked immunosorbent assay for IgG antibodies to human herpes virus 6. Journal of VirologicalMethods. 1990; 29: 313-24.
13. De Bolle L., Naesens L., De Clercq E. Update on human herpesvirus 6 biology, clinical features and therapy. Clinical Microbiology reviews. 2005; 18: 217-45.
14. Mary T. Caserta, M.D., Caroline Breese Hall, M.D., Kenneth
immunology
Schnabel, M.B.A., Geraldine Lofthus, Ph.D., Andrea Marino, M.S., Lynne Shelley, B.S. et al. Diagnostic Assays for Active Infection with Human Herpesvirus 6 (HHV-6). J. Clin. Virol. 2010; 48 (1): 55-7.
15. Ethel C.S., Dolores B., Patricia B. et al. Isotype immune response of IgG antibodies at the persistence and reactivation stages of human herpes virus 6 infection. J. Clin. Virol. 2004; 31: 266-9.
16. Fox J. D., Ward P., Briggs M. et al. Production of IgM antibody to HHV6 in reactivation and primary infection. Epidemiol. Infect. 1990; 104: 289-96.
17. Ghodratnama F, Wray D, Bagg J. Detection of serum antibodies against cytomegalovirus, varicella zoster virus and human herpesvirus 6 in patients with recurrent aphthous stomatitis. J. Oral. Pathol. Med.. 1999; 28: 12-5.
18. Overview on Testing for HHV-6 infection. https://hhv-6foundation. org/patients/hhv-6-testing-for-patients.
19. Nielsen L., Vestergaard B.F. A mu-capture immunoassay for detection of human herpes virus-6 (HHV-6) IgM antibodies in human serum. Journal of Clinical Virology. 2002; 25: 145-54.
20. Ranger-Rogez S, Vidal E, Liozon F, Denis F. Primary Sjogren's syndrome and antibodies to human herpesvirus type 6. Clin. Infect. Dis. 1994; 19: 59-60.
21. Suga S., Yoshikawa Т., Asano Y., Nakashima Т., Yazaki Т., Fukuda M. et al. IgM neutralizing antibody responses to human herpesvi-rus-6 in patients with exanthem subitum or organ transplantation. Microbiol. Immunol. 1992; 36: 495.
22. Ward K.N., Couto Parada X., Passas J., Thiruchelvam A.D. Evaluation of the specificity and sensitivity of indirect immunofluores-cence tests for IgG to human herpesviruses-6 and -7. Journal of VirologicalMethods. 2002; 106: 107-13.
Поступила 24.01.19 Принята к печати 01.03.19
