CC BY
54
клиническая лабораторная диагностика. 2016; 61(9) doi 10.18821/0869-2084-2016-61-9
6. Действие вторичных антиоксидантов - определение количества и активности антиоксидантов, попадающих в организм извне.
Таким образом, хемилюминесцентные методы предоставляют комплексный подход к диагностике протекающих в организме свободнорадикальных процессов.
Е.А. Карбовничая', Л.П. Евстигнеева2, С.В. Цвиренко3. Маркеры активации системы гемостаза в оценке развития хронического воспаления у больных с ревматоидным артритом. 'ООО Европейский медицинский центр «УГМК-Здоровье»; 2ГБУЗ СО «Областная клиническая больница № 1»; 3ГБОУ ВПО «Уральский государственный медицинский университет» Минздрава РФ, Екатеринбург
Локальные и системные изменения гемостаза при развитии воспаления связаны прежде всего с повреждением сосудистой стенки под влиянием биологически-активных веществ и определяют повышенный тромбогенный риск. У больных с системными заболеваниями соединительной ткани, в частности, ревматоидным артритом (РА), самым распространенным ревматическим заболеванием на планете, которым страдает 0,5-2% населения мира, отмечается раннее и быстро прогрессирующее развитие атеросклероза, на 60% более высокий уровень сердечно-сосудистой летальности по сравнению с общей популяцией (Н.Ю.Левшин и соавт., 2014). Венозный тромбо-эмболизм развивается у пациентов с РА также достоверно чаще и в более раннем возрасте, чем в среднем по популяции (Fox E.A., Kahn S.R., 2005). Этот риск максимален в первый год от развития заболевания, когда пациенту не подобрана эффективная базисная противовоспалительная терапия (Znller B., Li X., Sundquist J., Sundquist K., 2012).
С целью определить возможности объективной оценки хронического воспаления и тромбоэмболических рисков с помощью маркеров активации гемостаза обследовано 46 больных ревматоидным артритом: 34 женщины, 12 мужчин, средний возраст 52,7 лет, средний стаж болезни - 8,86 лет. Контролем служила группа пациентов, не имеющих клинических признаков воспаления.
У 96% больных РА отмечалась гиперфибриногенемия, повышенный уровень РФМК, определенный с помощью орто-фенантролинового теста. Концентрация комплексов тромбин-антитромбин (ТАТ) и Д-димеров значительно превышала аналогичные значения в контрольной группе. Концентрация растворимых фибрин-мономеров была выше, чем в контроле, но не выходила за пределы референсного интервала.
Выявлена прямая, статистически значимая корреляция между концентрацией острофазового белка фибриногена, маркеров активации (ТАТ, Д-димеров, РФМК методом ОФТ) и активности РА по шкале DAS28. Концентрация же растворимого фибрин-мономера (ФМ) имела обратную корреляционную связь с активностью РА по шкале DAS28 и превышала нормальный диапазон лишь у семи пациентов, пять из которых имели среднюю степень активности процесса.
Таким образом, маркеры активации - Д-димеры, ТАТ, ОФТ отражают степень воспаления при РА. Для оценки же риска тромботических состояний у данной группы пациентов целесообразно использовать только уровень растворимого ФМ.
И.А. Карбышев', А.П. Момот2, Я.Н. Шойхет3. D-димеры, фибринолитические и протеолитические (лейкоцитарные) реакции у пациентов с механической желтухой. 'КГБУЗ «Диагностический центр Алтайского края», Барнаул; 2Алтайский филиал ФГБУ «Гематологический научный центр», Барнаул; 3ГБОУ ВПО «Алтайский государственный медицинский университет», Барнаул
К основным известным эффекторам фибринолитических реакций крови относится плазмин. В то же время накоплено много данных о вкладе в процесс растворения стабилизированного фибрина протеолитических ферментов лейкоцитар-
ного происхождения, в частности эластазы полиморфноядер-ных нейтрофилов (эластаза PMN). Показано также, что разрушение фибринового сгустка эластазой PMN, как и в случае действия плазмина, приводит к образованию определяемых в современной клинической практике D-димеров, точнее -растворимых Х-связанных полимеров фибрина с неоантигенами D-димеров.
Целью работы явилось изучение роли фибринолитиче-ских и лейкоцитарных протеолитических реакций в метаболизме стабилизированного фибрина у пациентов с механической желтухой (МЖ). Оценка уровня ряда лабораторных маркеров воспалительных, гемостатических и фибриноли-тических реакций проведена у 37 пациентов с МЖ кальку-лезного генеза (средний возраст 62±2,8 лет), проходивших лечение в отделениях общей хирургии и реанимации КГБУЗ «Городская больница № 5» г. Барнаула. Показатели крови анализировались на 1-е, 3-5 и 12-14 сутки после госпитализации. В их число вошло определение количества нейтрофилов, тканевого активатора плазминогена (t-PA), ингибитора активатора плазминогена I типа (PAI-1), комплекса плазмин/ а2-антиплазмин (PAP), эндотелина-1, комплекса эластазы по-лиморфноядерных нейтрофилов с aj-антиплазмином («эластаза PMN-ajAÜ») и D-димеров. В целях диагностики тромбоза выполняли ультразвуковое ангиосканирование системы нижней полой вены и внутренних органов. Полученные данные сравнивались с результатами 39 условно здоровых лиц, сопоставимых по возрасту и полу (контрольная группа).
У больных с МЖ на всех сроках обследования зафиксирован резкий рост уровня D-димеров, превысивший среднее значение в контрольной группе в 9,76 раза (p < 0,01). При этом во всех случаях у пациентов отсутствовали клинические проявления венозного тромбоза. В ходе исследования показателей крови не выявлены изменения уровня t-PA, но установлены избыточные значения PAI-1, превышающие контрольные показатели в 2,3-2,4 раза на 1-5 сутки наблюдений (p < 0,01), что свидетельствует в пользу угнетения пристеночных вну-трисосудистых фибринолитических реакций. Наряду с этим зафиксирована активация фибринолиза в общей циркуляции крови с появлением следов плазмина в виде комплекса PAP, средний уровень которого превышал контрольные данные не менее чем на 56,7% (p < 0,01). Интересно отметить, что у больных с МЖ имело место сочетанное увеличение абсолютного количества нейтрофилов (6,36±0,44*109/л) и комплекса «эластаза PMN-ajAn» (390,4±30,3 нг/мл). Между этими показателями выявлена положительная зависимость средней силы (r = 0,34, p < 0,05).
Наличие высоких уровней D-димеров, комплекса PAP и комплекса «эластаза PMN-ajAn» у пациентов с механической желтухой позволяет сделать предположение о сочетан-ном вкладе плазмина и эластазы PMN в процесс деградации стабилизированного фибрина, находящегося в растворимом состоянии и не дошедшего до уровня сгустка (геля).
М.Ю. Карганов, И.Б. Алчинова, Е.Н. Яковенко, О.И. Ковалева, Ю.С. Медведева, М.В. Вялкина. Применение метода лазерной корреляционной спектроскопии в лабораторной медицине. ФГБНУ «НИИ общей патологии и патофизиологии», Москва
В настоящее время, наряду с традиционными способами лабораторной диагностики, активно развиваются ее интегральные методы. Эти подходы предполагают не механическое накопление показателей, а исследование их взаимных влияний, сочетаний, связи с клиническими симптомами и корреляции с другими показателями. Одним из способов исследования нативных биологических жидкостей, успешно зарекомендовавшим себя в клинике, является лазерная корреляционная спектроскопия (ЛКС). Суть метода заключается в определении спектральных характеристик квазиупруго
Russian clinical laboratory diagnostics. 2016; 61(9)
doi 10.18821/0869-2084-2016-61-9
рассеянного изучаемой системой света по спектру флуктуа-ций интенсивности регистрируемого излучения. Зарегистрированные спектры флуктуации интенсивности рассеянного света подвергаются математической обработке методом регуляризации при помощи специальной процедуры, входящей в комплект программного обеспечения спектрометра. Этот математический аппарат решения обратной спектральной задачи близок к тому, который с успехом применяется в современной рентгеновской и ЯМР-томографии.
Цель - анализ информативности метода ЛКС для оценки тяжести заболевания и эффективности лечения (при миастении, бронхиальной астме, гематологических и ряде других заболеваний) и выявления групп риска при массовых обследованиях.
Образец биологической жидкости в объеме 0,2 мл заливали в кювету ЛК-спектрометра «ЛКС-ОЗ-ИНТОКС» (рег. удостоверение № ФСР 2010/08619 от 11.08.2010 г.). Измерение проводили в частотном диапазоне 16 кГц (для сыворотки крови) и 8 кГц (для мочи) в количестве 2000 накоплений. Регуляризацию спектра проводили с использованием нелинейной шкалы (программы «Spectrometer», «Urine», «Blood», входящие в программное обеспечение спектрометра). Результатом расчета при таком способе обработки является гистограмма, по оси ординат которой отложен процентный вклад частиц в светорассеяние, а по оси абсцисс - их размер в нанометрах.
Для миастении не существует корреляции между содержанием антител к ацетилхолиновому рецептору и выраженностью процесса. В результате анализа спектров сыворотки крови пациентов с I, II и III степенью тяжести заболевания были выделены три информативные зоны, включающие в себя 75-84% общего светорассеяния: 6-15, 27-67 и 127-223 нм. У пациентов без нарушения витальных функций с нарастанием тяжести наблюдается достоверное увеличение вклада в светорассеяние частиц первой зоны при снижении этого показателя в третьей зоне. Таким образом, открывается перспектива для динамического отслеживания эффективности терапии. У пациентов с нарушениями витальных функций картина резко отличается, что является отражением существенных изменений в функционировании организма и свидетельствует об информативности примененного подхода. Существенные различия, достигающие уровня статистической значимости в зонах 4-6 и 20 нм, обнаружены в спектрах сыворотки крови больных миастенией одинаковой степени тяжести с тимомой и без опухоли. Преобладание крупных частиц у пациентов с тимомой, по-видимому, обусловлено пролиферативными процессами в организме.
По мере нарастания степени тяжести бронхиальной астмы возрастает вначале вклад в светорассеяние небольших иммуноглобулинов, а затем крупных иммунных комплексов. На основании данных, полученных при исследовании здоровых людей (без верифицированного диагноза), были построены усредненные гистограммы распределения светорассеиваю-щих частиц по размерам для крови и мочи - «нормальные» спектры. Исследование сыворотки крови методом ЛКС у лиц с бронхиальной астмой показало возрастание содержания частиц зоны 11-30 нм и двукратное снижение в области 2211500 нм по сравнению со здоровыми людьми. Тестирование мочи у тех же обследуемых выявило уменьшение более чем вдвое вклада в светорассеяние частиц размером 76-220 нм и увеличение в 6 раз - частиц 221-1500 нм.
Была осуществлена оценка распределения субклеточных компонентов биологических жидкостей пациентов с заболеваниями системы крови (железодефицитные и В12дефицитные анемии, лимфогрануломатоз, множественные миеломы, хронический лимфолейкоз, хронический миелолейкоз, тромбо-цитемии, полицитемии). Сопоставление полученных данных с результатами традиционных клинических исследований
продемонстрировало высокую степень информативности разработанного подхода и корреляцию между показателями, определенными различными методами. Так, например, коэффициент корреляции между содержанием иммуноглобулинов у больных с идиопатической тромбоцитопенической пурпурой и вкладом в светорассеяние соответствующей фракции, определенный методом ЛКС, составил 0,84 при достоверности 0,03. В результате при массовых обследованиях была выделена группа риска по заболеваниям системы крови (анемии, эритремии). Из 300 обследованных в эти группы вошло 11 и 5 человек соответственно. Достоверность выделения группы риска была подтверждена традиционными гематологическими исследованиями.
Метод лазерной корреляционной спектроскопии биологических жидкостей информативен для оценки тяжести исследованных заболеваний и эффективности их лечения, а также для выявления групп риска при массовых обследованиях.
О.И. Костылева1, Д.Н. Кушлинский2, Е.А. Короткова1, И.В. Терешкина1, Л.В. Адамян2. VEGF, его рецепторы и ма-триксные металлопротеиназы при раке яичников. 'ФГБУ «Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Бло-хина» Минздрава РФ, Москва; 2ФГБУ «Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. В.И. Кулакова» Минздрава РФ, Москва
Для более углубленного понимания базисных основ развития новообразований яичников в условиях свершившейся опухолевой трансформации клеток, важно изучение конкретных молекул в механизмах регуляции скорости роста, про-лиферативной активности, апоптоза, неоангиогенеза и инва-зивной способности. Одним из наиболее актуальных разделов клинической и экспериментальной онкологии является изучение механизмов неоангиогенеза при развитии опухолей Экспериментальные факты и клинические наблюдения подтверждают зависимость метастазирования ряда опухолей от активности неоангиогенеза и его ключевого активатора - фактора роста эндотелия сосудов (VEGF). Кроме того, показано, что процессы разрушения базальной мембраны опухоль-ассоциированными металлопротеиназами (ММР) также имеют тесную связь с процессами инвазии и метаста-зирования опухолей.Однако данные литературы по изучению изоформ VEGF, его рецепторов и ММР в опухолях больных новообразованиями яичников не однозначны.
Цель настоящего исследования - изучение содержания VEGF, его рецепторов VEGF-R1 и VEGF-R2, а также ММР-2 и ММР-7 в сыворотке крови и опухоли больных доброкачественными новообразованиями (ДНЯ), пограничными опухолями (ПОЯ) и раком яичников (РЯ), и их взаимосвязи с основными клинико-морфологическими характеристиками выше указанных заболеваний.
Обследовали 133 пациентки в возрасте от 17 до 82 лет (53,1±1,4 года): 100 больных РЯ, 9 - ПОЯ и 24 - ДНЯ. В группе контроля обследовали 35 практически здоровых женщин. Содержание VEGF, VEGF-R1, VEGF-R2, ММР-2, ММР-7 в сыворотке крови и экстрактах опухолей яичников определяли прямым иммуноферментным анализом реактивами фирмы «R&D» (США).
Обнаружено достоверное более высокое содержание VEGF в сыворотке крови и ткани опухоли больных РЯ по сравнению с аналогичными показателями при ДНЯ и ПОЯ, а сывороточный VEGF был выше во всех группах больных по сравнению с контролем. При этом обнаружено, что уровни VEGF в сыворотке крови больных РЯ зависели от стадии, гистологического строения и степени дифференцировки опухоли, а содержание его в опухолях связано с гистологическим строением новообразования. У больных РЯ сывороточный уровень VEGF-R1 был достоверно выше при III-IV стадиях и в эндометриоидных РЯ, чем в серозных и муциноз-
