CC BY
5
ЛИТЕРАТУРА
В а ш к о в В. И., Шнайдер Е. В. Ж. микробиол., 1961, № 4, с. 130. - Вы-легжанина Г. Ф. Гиг. и сан., 1965, № 12, с. 60.
Поступила 1/1У 1968 г.
УДК 543.544:[в1в-008.949.5:632.954
ПРИМЕНЕНИЕ МЕТОДА ХРОМАТОГРАФИИ В ТОНКОМ СЛОЕ
ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ГЕРБИЦИДОВ В БИОЛОГИЧЕСКИХ СРЕДАХ
Канд. хим. наук Л. С. Самосват
Всесоюзный научно-исследовательский институт гигиены и токсикологии пестицидов, полимерных и пластических масс, Киев
В практике сельского хозяйства для борьбы с сорняками все чаще применяются фенилмочевины (монурон, диурон, линурон и др.) ианилиды алифатических карбоновых кислот (пропанид, солан, дикрил). Для изучения процессов циркуляции этих препаратов во внешней среде, в частности в живом организме, для выяснения путей их выведения и степени превращения (метаболизма) необходимы специфические и высокочувствительные методы.
Метод, предлагаемый нами, основан на способности ароматических аминов, получаемых при разложении гербицидов, вступать в различные химические реакции с образованием окрашенных продуктов. Реакция азо-сочетания была использована нами при разработке колориметрического метода определения пропанида в воздухе и рисе; в качестве азссоставляющей был использован 1-нафтол. Колориметрическому определению сопутствуют различные методы очистки от природных веществ, содержащихся в пробе, или от продуктов превращения анализируемого препарата. Поэтому в дальнейшем мы перешли к разработке метода определения остаточных количеств гербицидов с помощью хроматографии в тонком слое, позволяющей в ряде случаев полностью исключить очистку. В основе предлагаемого нами метода лежит образование производных бензол-азо-1-нафтола, имеющего четко выраженную красную окраску. Во время изучения условий термического разложения фенилмочевин лучшие результаты получены при 160—170°. Экстракцию пробы крови и очистку производят следующим образом. Пробу крови (1—5 мл) помещают в пробирку с пришлифованной пробкой, заливают 10—15 мл эфира, взбалтывают и оставляют на час (или на ночь). Экстракт декантируют в колбу прибора для отгонки растворителя, пропуская его через коническую воронку, заполненную безводным сульфатом натрия. Экстракцию повторяют еще 2 раза по 30 мин. Общий экстракт выпаривают досуха.
Для экстракции пробы из печени, почек, желудка, селезенки, легких, рыбы навеску ее 1—5 г 1 тщательно растирают в ступке с 10—15 г сульфата натрия. Пробу заливают на 2 часа (или на ночь) 10—20 мл метилового или этилового спирта. Растворитель отфильтровывают и высушивают так же, как описано выше. Пробу трижды промывают по 5—7 мл, общий экстракт выпаривают досуха 2.
Экстрагированную пробу (1—5 г) из мозга, жира, сальника, рыбьего жира обрабатывают аналогичным образом. Для очистки от коэкстрактивных
1 В случае необходимости навеска может быть увеличена до 20 г.
2 При попадании в пробу жиров очистка аналогична описанной ниже.
веществ наиболее эффективно встряхивание экстрактов с концентрированной серной кислотой до полного ее обесцвечивания. В рассматриваемом нами случае этот метод неприменим, так'как исследуемые препараты хорошо растворимы в концентрированной серной кислоте. Поэтому после выпаривания общего экстракта досуха к остатку добавляют 1—3 мл концентрированной серной кислоты и оставляют на 20—30 мин. (или на ночь). Смесь разбавляют 20—30 мл воды, нейтрализуют и подщелачивают 50% раствором едкого натра. После охлаждения трижды экстрагируют по 10—15 мл м-гек-саном. Экстракт высушивают и выпаривают досуха.
Для хроматографирования применяют пластинки 9x12 см, покрытые слоем сорбента, представляющего смесь 50 г окиси алюминия, 5 г сернокислого кальция (оба компонента просеивают через сито с числом отверстий не более 100 меил) и 75 мл воды. На середину пластинки с помощью пипетки наносят исследуемую пробу, применяя в качестве растворителя эфир. Справа
и слева от пробы наносят стандартный раствор исследуемого препарата так, чтобы одно пятно содержало 5 мкг, а второе—10 мкг вещества. Стандартные растворы гербицидов готовят из химически чистых препаратов, растворяя их в метиловом или этиловом спирте в количестве 100 мкг!мл.
Для получения химически чистых веществ используют дусты с высоким содержанием препарата (80% и более). Навеску растворяют при нагревании в спирте или ацетоне, отфильтровывают и в случае необходимости обесцвечивают активированным углем, а затем снова отфильтровывают. Выпавший после охлаждения осадок отфильтровывают, высушивают и 1—2 раза перекристалл изовывают из спирта.
Пластинку с нанесенными пятнами помещают в камеру для хроматографирования (стеклянный сосуд с пришлифованной крышкой), куда налит подвижный растворитель, состав которого приведен в таблице. Потом пластинку высушивают на воздухе, помещают в сушильный шкаф, нагретый до 160—170°, и выдерживают при этой температуре в течение часа. Вынутую пластинку помещают горизонтально в камеру для опрыскивания и опрыскивают проявляющимся реактивом № 1 (раствор 4 мл концентрированной соляной кислоты в 46 мл воды с добавлением 1 г нитрата натрия) и реактивом № 2 (раствор 2,8 г едкого кали в 50 мл воды с добавлением 0,1 г 1-нафтола). Оба реактива применяют только свежеприготовленными. Если в пробе присутствует гербицид, то на пластинке появляется красное пятно, аналогичное по цвету пятнам стандартных растворов и расположенное на одинаковом уровне с ними.
Чувствительность метода 5—10 мкг препарата в пробе, процент определения 75—80. Величины Rf приведены в таблице. Метод специфичен при отсутствии веществ, дающих в процессе разложения ароматические амины, способные вступать в реакцию азосочетания. Не наблюдалось ни одного случая, когда посторонние вещества мешали бы определению.
Проведены исследования органов белых крыс, которым внутрижелу-дочно вводили различные препараты Найдено, что при введении фенил-мочевин в крови, кроме основного препарата, содержится метаболит. Пятно его, похожее по цвету на пятна стандартных растворов, расположено на пластинке ниже пятен стандартов. Так, если Rf линурона равняется
1 Работа проводилась с участием С. И. Авдюшкиной.
Состав подвижной фазы и величины Кг при анализе фенилмочевин и анилидов алифатических карбоновых кислот в биоматериале
Препарат Подвижная фаза
Монурон Эфир или СНС13 0,43±0,05
Диурон То же 0,41 + 0,05
Линурон Эфир : ССЦ(3:2) 0,42+ 0,04
Фалоран Эфир или СНС13 0,45+0,04
Пропанид Эфир : СС14(1:1) 0,35+0,03
Солан То же 0,65+0,03
Дикрил » » 0,44+0,03
0,42—0,45, то Rf метаболита составляет 0,17—0,23. Известно, что одним из продуктов превращения линурона, попадающего в растения, является 3,4-дихлоранилин. Для выяснения природы метаболита нами был получен 3,4-дихлоранилин при кислотном гидролизе линурона с последующей перекристаллизацией из петролейного эфира и спирта с температурой плавления 68—69°. На пластинку одновременно со стандартным раствором линурона мы наносили дихлоранилин в таком же количестве (5 и 10 мкг). Величина Rf, полученная при этом, составляла 0,39—0,41.
Характерно, что при анализе растений, обработанных монуроном, найден метаболит, расположенный выше пятен препарата: монурона равняется 0,41—0,43, ^ метаболита — 0,70—0,71. При нанесении на пластинку /г-хлоранилина, являющегося продуктом разложения монурона, его составляла 0,70—0,71. Отсюда можно заключить, что метаболитом, образующимся в растениях при попадании в них монурона, действительно является л-хлоранилин, тогда как в живом организме процесс разложения представлен иными реакциями.
Кроме этого метаболита, в крови обнаружен другой продукт превращения, расположенный в виде красного кольца на старте. При анализе печени найден только гербицид, а в почках, легких и селезенке не выявлено ни препарата, ни метаболитов.
При введении химически чистых препаратов пропанида и солана (доза составляла 1/3 ЬО50) через 3 часа в органах, кроме препаратов, определено несколько метаболитов. Предположив, как и раньше, что к продуктам превращения относится замещенный анилин — 3,4-дихлоранилин в случае пропанида и З-хлор-4-метиланилин в случае солана, — мы получили пос-следний амин при гидролизе солана с температурой плавления 23—24°. Нанесение на пластинки этих аминов одновременно со стандартами пропанида и солана показало, что ни один из них не является метаболитом, обнаруженным в живом организме.
Анализируя величины Rf, можно установить, что пропанид обнаруживается во всех органах, солан — во всех, за исключением мозга. Продукты превращения пропанида и солана представлены более полярными молекулами, чем дихлоранилин или хлорметиланилин, и расположены на пластинке ниже их или на старте. Поэтому не исключено, что метаболиты — это продукты конденсации замещенных анилинов с аминокислотами организма. Для пропанида характерно, что в печени и сальнике встречается по 2 метаболита, тогда как почки, легкие и кровь содержат по 1 метаболиту. При введении солана в печени и сальнике обнаружено по 3 метаболита, а в почках — два; легкие, сердце, селезенка и кровь их не содержат.
Поступила 27/11 1968 г.
УДК 613:311
К ВОПРОСУ о ПРИМЕНЕНИИ СРЕДНЕГО; КВАДРАТИЧЕСКОГО ОТКЛОНЕНИЯ МЕТОДА РАЗМАХА В ГИГИЕНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЯХ
М. X. Хачатурян
Московский научно-исследовательский институт гигиены им. Ф. Ф. Эрисмана
В гигиенических исследованиях часто прибегают к обработке результатов методом размаха (Н. А. Толоконцев; Р. Н. Бирюкова). Этот метод шиооко применяется при изучении действия токсических веществ, проводимом на одном объекте, например, при установлении максимально разо-
79
