CC BY
4
ЛИТЕРАТУРА. Голубева М. Т. В кн.: Санитарно-химический контроль в области охраны водоемов. М., 1964, с. 121. — Яже мекая В. Я. Там же, с. 147.
Поступила 16/IV 1974 г.
УДК 61 в. 154.95-074:543.544
М. Д. Швайкова, Г. В. Головкин, Б. Н. Изотов, Т. И. Алдошина
ПРИМЕНЕНИЕ МЕТОДА ГАЗОВОЙ ХРОМАТОГРАФИИ К ОПРЕДЕЛЕНИЮ МЕТИЛПАРАТИОНА В КРОВИ
I Московский медицинский институт им. И. М. Сеченова
Разработка методов анализа высокотоксичных соединений и определение их уровня в биологических жидкостях имеют большое значение для профилактики, своевременной диагностики и лечения интоксикаций.
В настоящей работе рассмотрены вопросы, связанные с обнаружением и количественным определением метилпаратиона (0,0-диметил-0-4-нитрофе-нилтиофосфата) в биологических жидкостях. Распределение метилпаратио-на в организме экспериментальных животных, как сообщают К. А. Гар и соавт., его метаболические превращения указывают на целесообразность выбора в качестве объекта химико-токсикологических исследований крови и промывных вод, а в ряде случаев и других биологических жидкостей. Среди рассмотренных в литературе способов обнаружения и определения метилпаратиона наибольшего внимания заслуживает метод газо-жидкост-ной хроматографии, который отличается экспрессностью, высокой чувствительностью, селективностью (Conlson и Cavanagh; Egan и Hammond).
Для исследований использовали хроматограф «Цвет-5» со стеклянной колонкой размером 100x0,4 см, твердый носитель хромосорб W (80— 100 маш), промытый кислотой, и силанизированный ГМДС. Неподвижная жидкая фаза >— метилсиликон (SE-30) в количестве 10 % веса твердого носителя. Температура термостата колонок 160°, температура термостата детектора по электронному захвату 210°, температура испарителя 190°. Газ-носитель азот особой очистки со скоростью 60 мл/мин. Детектор термоионный (ТИД) или электронного захвата (ДЭЗ). Самописец ЭПП-0,9, 0-—10 мВ, 1 с, 1 см/мин. Величина пробы Ь—5 мкл 0,68 раствора в гекса-не. Время выхода мелипаратиона 10 мин.
Минимально детектируемое количество метилпаратиона для ДЭЗ составляло 0,34-Ю-8 мг/с, для ТИД-—0,5 Ю-8 мг/с. При анализе экстрактов из крови на ДЭЗ на хроматограмме присутствовали дополнительные сигналы балластных веществ, экстрагируемых из крови вместе с метилпара-тионом, что могло создавать помехи при качественном и количественном анализе. Поэтому применение ДЭЗ при анализе экстрактов из крови нежелательно, хотя детектор и обладает достаточной чувствительностью.
Тармоионный детектор при той же чувствительности обладает большей селективностью, поэтому он был использован для анализа водных растворов экстрактов из биологического материала. Для количественной оценки был выбран метод сравнения сигнала от экстрактов с сигналами от стандартных растворов, что гарантировало от случайных ошибок, которые могли быть вызваны отклонением от заданного режима анализа.
Учитывая возможную концентрацию метилпаратиона при отравлениях, а также чувствительность ТИД и ДЭЗ, мы проводили исследования с 5 мл крови. Предварительные испытания проводили на образцах донорской крови с 20 И количеством консерванта (цитрат натрия 10%), затем крови кролика с добавлением гепарина в качестве консерванта. В качестве экст-рагента был выбран н-гексан марки ч. д. а., так как он извлекал минимальное количество балластных веществ, что подтверждается исследованиями Г. А. Пивоварова и К. Ф. Новиковой применительно к растительным объектам.
Количество метафоса, извлеченное из 5 мл крови (искусственные смеси)
Количество внесенного метилпаратиона (в мг/мл) Площадь пика метилпаратиона а анализируемом образце (в мы') Площадь пика метилпаратиона в стандартном растворе (в мм") Количество определенного метилпаратиона (в мг/мл) % определения
0,006 867 367,5 742,0 0,005 666 82,2
0,006 867 219,0 450,0 0,005 570 81,1
0,006 867 491,2 511,0 0,005 499 80,1
0,003 296 820,7 866,2 0,002 604 78,9
0,001 812 8 154,0 298,0 0,001 419 4 78,3
Средний процент определения 80,1 ±2,4%
Система гексан •— вода из мало растворимых друг в друге растворителей, как правило, обладает хорошей селективностью, и состав фаз не зависит от колебаний температуры, в результате чего процесс экстрагирования оказывается в достаточной степени воспроизводимым.
К 5 мл анализируемого образца, помещенного в делительную воронку на 50 мл, добавляли 10 мл ацетона и 10 мл гексана. Смесь гомогенизировали в течение 3 мин, затем добавляли 10 мл насыщенного раствора хлорида натрия для разрушения эмульсии, а также для частичного осаждения белков. Смесь встряхивали 3 мин. После разделения слоев водную фазу переносили в другую делительную воронку для повторного экстрагирования, а органическую помещали в коническую колбу на 100 мл. Экстракцию повторяли дважды. Делительную воронку промывали небольшим количеством гексана (~5 мл), который присоединяли к основному экстракту. Объединенный экстракт высушивали 5 г прокаленного сульфата натрия и фильтровали через бумажный фильтрат, смоченный гексаном. Оставшийся в колбе сульфат натрия и фильтрат тщательно промывали небольшими порциями гексана. Растворитель полностью удаляли на роторном испарителе при температуре водяной бани не выше 20°, так как при более высокой температуре в ряде случаев наблюдалось появление на хроматограммах сигнала, время удерживания которого было несколько большим, чем у метилпаратиона. Очевидно, при более высокой температуре метилпаратион изомеризоватся в свой тиоловый эфир. Нужно отметить, что при экстракции метилпаратиона из водных растворов этого явления не отмечалось. Появление дополнительного сигнала происходит при экстракции метилпаратиона из донорской крови и из крови кролика после перорального введения препарата.
Сухой остаток, полученный после удаления гексана и ацетона, растворяли в точном объеме гексана (в пределах 0,3—2 мл в зависимости от количества метилпаратиона). Аликвотную часть гексанового раствора (4 мкл) хроматографировали. Результаты приведены в таблице.
Таким образом, разработана газохроматографическая методика анализа метилпаратиона в биологических жидкостях. Установлено, что экстракцией гексаном удается выделить из крови 80% внесенного инсектицида. Термоионный детектор обладает большей селективностью по сравнению с детектором электронного захвата. В опытах на животных показана применимость данной методики.
ЛИТЕРАТУРА. Гар К. А., Сазонова Н. А., Фадеев Ю. Н. В кн.: Гигиена, токсикология и клиника новых инсектофунгицидов. М., 1959, с. 208. — Пивовар о в Г. А., Новикова К- Ф. Труды 2-го Всесоюзн. совещания по исследованию остатков пестицидов и профилактике загрязнения ими продуктов питания, кормов и внешней среды. Таллин, 1971, с. 85. — С о n 1 s о п D. М., С a v a n a g h L. A., Agricult. Food Chalm., 1959, p. 250. — E g a n H., Hammond E., Analyst, 1964, p. 175, v. 89.
Поступала 21/11 1974 г.
